Neisseria: Meningococo

NEISSERIA MENINGITIDIS
Estructura antigénica
Se han identificado por lo menos 13 serogrupos de meningococos mediante la
especificidad inmunológica de los polisacáridos capsulares. Los serogrupos más
importantes relacionados con enfermedad en el ser humano son A, B, C, X, Y y W-135.
El polisacárido del grupo A es un polímero de fosfato N-acetilmanosamina, y el del
grupo C es un polímero de ácido N-acetil-Oacetilneuramínico.
Se encuentran antígenos meningocócicos en la sangre y en el líquido cefalorraquídeo
de los pacientes con enfermedad activa. Los brotes epidémicos y los casos esporádicos
en el hemisferio occidental en el último decenio se han debido principalmente a
grupos B, C, W-135 y Y; los brotes epidémicos en el sur de Finlandia y en Sao Paulo,
Brasil, fueron causados por grupos A y C; los brotes epidémicos en Nueva Zelanda se
deben a una cepa B específica y los de África principalmente al grupo A. El grupo C y,
sobre todo el grupo A, se relacionan con enfermedad epidémica.
Las proteínas de la membrana externa de los meningococos se han dividido en clases
con base en su peso molecular. Todas las cepas tienen proteínas de clase 1, clase 2 o
clase 3; son análogas a las proteínas Por de los gonococos y a ellas se debe la
especificidad del serotipo de los meningococos. Ayudan a formar poros en la pared de
la célula del meningococo. Se han definido hasta 20 serotipos; los serotipos 2 y 15 se
han relacionado con enfermedad epidémica. La proteína Opa (clase 5) es equiparable a
la proteína Opa de los gonococos.
Los meningococos contienen pilosidades, pero a diferencia de los gonococos, no
forman tipos de colonia distintivos que indiquen bacterias con pilosidades.
El LPS del meningococo produce muchos de los efectos tóxicos que se observan en la
infección meningocócica. Se han observado las concentraciones más altas de
endotoxina en la septicemia de pacientes con meningococemia (50 a 100 veces mayor
que con otras infecciones por gramnegativos).
Patogenia, anatomía patológica y manifestaciones clínicas
Los seres humanos son los únicos hospedadores naturales en quienes los
meningococos son patógenos. La nasofaringe es la vía de entrada. Allí los
microorganismos se adhieren a las células epiteliales con la ayuda de las pilosidades;
pueden formar parte de la flora transitoria sin producir síntomas. Desde la
nasofaringe, los microorganismos llegan al torrente sanguíneo y producen bacteriemia;
los síntomas son parecidos a los de una infección respiratoria alta. La meningococemia
fulminante es más grave y se manifiesta por fiebre elevada y exantema hemorrágico;
puede haber coagulación intravascular diseminada y colapso circulatorio (síndrome de
Waterhouse-Friderichsen).
La meningitis es la complicación más frecuente de la meningococemia.
Por lo general comienza en forma brusca con cefalea intensa, vómito y rigidez del
cuello y evoluciona al estado de coma a las pocas horas.
Durante la meningococemia hay trombosis de diversos vasos sanguíneos pequeños en
muchos órganos con infiltración perivascular y hemorragias petequiales. Puede haber
miocarditis intersticial, artritis y lesiones de la piel.
En la meningitis, las meninges presentan una inflamación aguda con trombosis de los
vasos sanguíneos y exudación de leucocitos polimorfonucleares, de manera que la
superficie del cerebro está cubierta por un exudado purulento espeso.
No se sabe qué es lo que transforma una infección asintomática de la nasofaringe en
una meningococemia y una meningitis, pero ésta se puede evitar mediante
anticuerpos séricos bactericidas que son específicos contra el serotipo infectante. La
bacteriemia por Neisseria se favorece por la falta de anticuerpo bactericida (IgM e
IgG), la inhibición de la acción bactericida sérica por un anticuerpo IgA bloqueante o
una deficiencia de componentes del complemento (C5, C6, C7 o C8). Los meningococos
se fagocitan con facilidad en la presencia de una opsonina específica.
Pruebas diagnósticas de laboratorio
A. Muestras
Las muestras de la sangre se obtienen del cultivo y las muestras de líquido
cefalorraquídeo se obtienen de frotis, cultivo y mediante la determinación química. Los
cultivos de frotis de secreciones nasofaríngeas son adecuados para las evaluaciones de
portador. Puede obtenerse material punteado de las petequias para prótesis y cultivo.
B. Frotis
Los frotis de sedimento de líquido cefalorraquídeo centrifugadoo del aspirado
petequial teñido con tinción de Gram a menudo muestran los gonococos
característicos dentro de los leucocitos polimorfonucleares o extracelulares.
C. Cultivo
Los medios de cultivo sin sulfonato de polianetol sódico son útiles para cultivar
muestras sanguíneas. Las muestras de líquido cefalorraquídeo se colocan en placas con
agar “chocolate” y se incuban a una temperatura de 37°C en una atmósfera de CO2 a
5% (frasco con vela). El líquido cefalorraquídeo recién retirado se puede incubar
directamente a una temperatura de 37°C si no se dispone de inmediato de medios de
cultivo con agar.
Un medio de Thayer-Martin modificado con antibióticos (vancomicina, colistina,
anfotericina) favorece la multiplicación de gonococos, inhibe a muchas otras bacterias
y se utiliza para los cultivos nasofaríngeos. Las colonias presuntivas de los gonococos
en medios sólidos, sobre todo en cultivo mixto, se pueden identificar mediante tinción
de Gram y la prueba de la oxidasa.
El líquido cefalorraquídeo y la sangre por lo general producen cultivos puros que se
pueden identificar también mediante las reacciones oxidativas de carbohidratos y la
aglutinación con suero de tipo específico o polivalente.
Neisseria: Microscocopía y Pruebas Bioquímicas
Morfología e identificación

A. Microorganismos típicos

Las neisserias características son diplococos gramnegativos inmóviles de casi 0.8 μm de diámetro. Los
cocos individuales tienen forma de riñón; cuando los microorganismos están en pares, los lados planos o
cóncavos están adyacentes.

B. Cultivo

Los gonococos y meningococos forman colonias convexas, brillantes, elevadas y mucoides de 1 a 5 mm

de diámetro, en medios enriquecidos (p. ej., de Martin Thayer modificado, de Martin-Lewis, GC-Lect y
New York City) en 48 h. Las colonias son transparentes u opacas, no pigmentadas y no hemolíticas.
Neisseria flavescens, Neisseria cinerea, Neisseria subflava y Neisseria lactamicapueden tener una
pigmentación amarilla. Neisseria sicca produce colonias opacas, frágiles y arrugadas. M. catarrhalis
produce colonias no pigmentadas o de color gris a rosado opaco.

C. Características de crecimiento

Las neisserias crecen mejor en condiciones aeróbicas, pero algunas lo hacen en un medio anaeróbico.
Necesitan sustancias complejas para crecer. La mayor parte de las neisserias oxidan hidratos de
carbono, produciendo ácido pero no gas y sus tipos de hidratos de carbono son un medio para
distinguirlas (cuadro 20-1). Los gonococos oxidan sólo glucosa

Las neisserias producen oxidasa y son oxidasa positivas; la prueba de oxidasa es clave para su
identificación. Cuando se colocan las bacterias en un papel filtro empapado con clorhidrato de
tetrametilparafenilenediamina (oxidasa), las neisserias adoptan un color púrpura oscuro con rapidez.

Los meningococos y los gonococos crecen mejor en medios que contienen sustancias orgánicas
complejas como sangre calentada, hemina y proteínas animales y en una atmósfera que contiene CO2 al
5% (p. ej., frasco con vela).

Su crecimiento se inhibe por algunos componentes tóxicos presentes en el medio, por ejemplo, ácidos
grasos o sales. Los microorganismos se destruyen con rapidez por el secamiento, la luz solar, el calor
húmedo y muchos desinfectantes. Producen enzimas autolíticas que dan por resultado hinchazón rápida
y lisis in vitro a una temperatura de 25°C y con un pH alcalino.
P

Prueba de la oxidasa
Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la
oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación
del citocromo que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido
de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor
final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el
sistema citocromooxidasa sólo se encuentra en los organismos aerobios, algunos
anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo (Vibrio fetus),
pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.
Asímismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta
degrada el peróxido de hidrógeno (ver prueba de la catalasa) que se produce como
consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es tóxica.
La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para
* Identificar todas las especies de Neisseria (+)
* Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las enterobacterias.
El reactivo de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato
de tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más
sensible que el correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod),
pero es más caro. Este reactivo tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda que
vira gradualmente a púrpura-negruzco intenso.
Realización de la prueba:
1. Método en placa directa
* Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda la
placa y no invertirla.
* Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reacción se produce en
unos 10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de los 10-30
minutos.

2. Método indirecto sobre papel

* Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente en una placa de
Petri.
* Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel.
* Extender con el asa de siembra una colonia sobre el papel impregnado.
* La reacción de color positiva se produce a los 5-10 segundos.
• Cuando se colocan las bacterias en un papel filtro empapado con clorhidrato de
tetrametilparafenilenediamina (oxidasa), las neisserias adoptan un color
púrpura oscuro con rapidez.
Utilización de los carbohidratos por Neisserias: método de agar cistina tripticasa
Las pruebas de utilización de los carbohidratos se utilizan en futuras validaciones para
la identificación de una cepa como N. meningitidis. Se añaden varios carbohidratos a la
base de agar cistina tripticasa (ACT) hasta lograr una concentración final de 1%. Para
confirmar un cultivo como N. meningitidis, se utiliza un juego de cuatro tubos donde
cada uno contenga un azúcar (glucosa [dextrosa], maltosa, lactosa y sacarosa). Los
miembros de las especies de Neisseria producen ácido de los carbohidratos por
oxidación, no por fermentación.
N. meningitidis oxida la glucosa y la maltosa, pero no la lactosa ni la sacarosa.
Se añade al medio un indicador de rojo fenol, que es un indicador sensible que toma
un color amarillo en presencia de ácido, a un pH de 6,8 o menor.
a) Tome una pequeña cantidad de crecimiento de un cultivo de N. meningitidis de toda
la noche en agar sangre o en agar chocolate utilizando una aguja de inoculación.
b) Inocule pinchando varias veces los 10 mm superiores del medio. Use otra aguja
estéril, o flamee la misma aguja, antes de inocular cada uno de los cuatro
carbohidratos que se van a probar.
c) Cierre bien las tapas de los tubos y póngalos en una incubadora a 35°C (sin CO2).
Incube por lo menos 72 horas (y hasta 5 días) antes de descartarlos como negativos.
d) Si se genera una turbidez visible y un color amarillo en la porción superior del
medio, es indicación de crecimiento y la producción de ácido se interpreta como una
prueba positiva (véase la Figura 12). Si bien puede haber reacciones tempranas en un
plazo de 24 horas después de la inoculación, también hay algunas reacciones
demoradas. Si solo reacciona la glucosa o la maltosa, o si ninguno de los azúcares
reacciona, continúe la incubación hasta 5 días antes de descartarlos. En algunas
ocasiones, se encuentran cepas de N. Meningitidis que utilizan solamente dextrosa o
maltosa, pero no ambas