ANTIBIOGRAMA

PRUEBA DE DIFUSIÓN EN MEDIO

SÓLIDO
• Consiste en depositar discos impregnados de antimicrobiano sobre
cultivos de m.o. en placa. La difusión del mismo a través del medio
produce un halo de inhibición del crecimiento, cuyo diámetro será
proporcional a la potencia del antimicrobiano.
• Material: - Placas Petri de 9 cm. de diámetro.
- Pinzas metálicas estériles o dispensador automático de
discos.
- Regla o pie de rey.
- Mechero.
- Tabla de valores de los halos de inhibición.
• Reactivos: - Agar Mueller-Hinton
- Discos de antimicrobiano
- Agua destilada estéril
 TÉCNICA
• Preparación de medio Mueller-Hinton: gran reproducibilidad de
fabricación (composición homogénea de todos los lotes), permite el
crecimiento de la mayoría de m.o. y no presenta efectos
antagónicos con los antibióticos.
• Vertido en placas: espesor del medio 4 mm.
• Preparación del inóculo: se coge con el asa una colonia y se
introduce en 5 ml. de agua destilada estéril.
• Siembra-inoculación: Kirby-Bauer, Barry o inundación.
• Elección de los antimicrobianos más adecuados: según las
características tintoriales del m.o., lugar de infección, m.o.
investigado…
Los discos tienen un diámetro de 6 mm. y van impregnados con
una concentración perfectamente estandarizada de antimicrobiano.
Los discos se deben conservar en nevera a 4ºC.
 TÉCNICA (2)
• Implantación de los discos:
- Implantación manual→ se extrae cada disco de su tubo con unas pinzas estériles y
se depositan sobre el medio, teniendo en cuenta que:
· La distancia mínima entre los discos debe ser de 24 mm (para evitar la
superposición de halos).
· Se situarán a un mínimo de 15 mm del borde de la placa.
· Placas de 9 cm de diámetro→ 6 discos
· Presionar ligeramente cada disco con la punta de las pinzas para que queden
fijados en el agar.
- Implantación automática→ se utilizan dispensadores automáticos, de plástico del
tamaño de una placa Petri, con unos orificios que permiten la colocación
simultánea de todos los discos en el lugar adecuado.
- Sistemas multidisco→ consiste en un soporte central al que van unidos los discos
de diferentes antimicrobianos a la distancia y concentración adecuadas.
• Incubación: 24 horas a 37ºC.
 RESULTADOS E INTERPRETACIÓN
• Los resultados se expresan según el halo de inhibición que aparece
alrededor de cada disco.
• Se mide con una regla calibrada o un pie de rey el diámetro de los
halos.
• Los ø de los halos clasifican al m.o. como sensible (S), intermedio (I)
o resistente (R) a cada antimicrobiano, según las normas
recomendadas por los organismos oficiales, que incluyen tablas que
relacionan dicho ø con la susceptibilidad del m.o.
• La nomenclatura más utilizada para expresar los resultados
corresponde al empleo de las siglas S, R o I:
- Sensible: a las dosis habituales, el antimicrobiano es eficaz.
- Intermedio: necesita un incremento de las dosis habituales.
- Resistente: es ineficaz.
 OBSERVACIONES
• Puesto que la difusión del antimicrobiano es casi
instantánea, no debe moverse ningún disco una
vez se ha puesto en contacto con el agar.
• Si se detectan colonias dentro de un halo de
inhibición, debe comprobarse la pureza del
cultivo y repetir la prueba.
• Para m.o. exigentes se emplean medios
enriquecidos (agar sangre, agar chocolate, etc.)
• Existen métodos automatizados.