DESPROTEINIZADOS

Principios. Principales
Aplicaciones

03/04/16

T. Hayde Ziga Cceres

Desproteinizacin
Es la remocin o eliminacin de protenas
del plasma, suero sangre con el fin de
obtener un filtrado o sobrenadante libre de
protenas y poder cuantificar la sustancia
materia de anlisis sin interferencias.
Evita: la formacin de espuma, turbidez,
precipita-dos y que las protenas
interfieran reaccionando con los reactivos.

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Condiciones de un buen
desproteinizante :
1. No agregar ninguna sust. que pueda interferir
con las determs. posteriores.
2. No pptar ni retener por adsorcin la
sustancia a determinar, lo que se verifica por
mtodos de recuperacin (agregar al lq. a
desprot. una cant. conocida de la sust. a
valorar, la que debe recuperarse en cantidad
aproximadamente igual a la terica desp. de
desprot.)
3. Eliminar otras susts que puedan estar ptes. en
el fluido a desproteinizar y que interfieran con
las tcnicas que se aplicarn posteriormente.
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Mtodos de desproteinizacin:
A) M. Fsicos: No alteran las protenas q separan
1. Dilisis
2. Ultracentrifugacin
3. Ultrafiltracin
4. Adsorcin por susts particuladas.
B) M. Fsico Qumicos: Protenas se separan x
pptacin, q generalm. altera su estado fsico
inicial, y no puede ser retomado:
1. Desnaturalizacin x el calor
2. Deshidratacin
a) Deshid. con solventes miscibles con el
agua
b) Deshid. con
soluciones salinas
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C) M. Qumicos: Formacin de sales

insolubles:

1. Con cidos: TCA, tngstico,

perclrico, metafosfrico, molbdico,
fosfotngstico.
Se forman
sales proteicas insol. con las formas
catinicas de las molculas proteicas.
2. Con metales pesados: Zn, Hg, Cd,
Fe, Pb.
Se forman proteinatos insols.
con las formas aninicas de las molculas
proteicas.
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Desproteinizacin es necesaria p. la
determ. de diversos metabolitos y
conviene realizarla rpidam. despus de la
recoleccin de las muestras.
Puede realizarse utilizando diferentes
agentes que provocan la pptacin de las
protenas, que se separan por
centrifugacin filtracin, recogin-dose
un sobrenadante libre de protenas.
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Desprot. cidos ms utilizados:

1. CIDO TNGSTICO (Folin Wu)
Na2WO4 + H2SO4
H2WO4 + Na2SO4
1 vol. Sangre + 7 vol. de H2O + 1 vol Na2WO4
10 % + 1 Vol. H2SO4 0,66 N.
2. CIDO TRICLOROACTICO
1 vol sangre + 9 vol. c. TCA 10 %
3. CIDO PERCLRICO
1
vol
sangre
+
1
vol
H
2O + 2 vol HCLO4 6 N
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Desprot. alcalino ms utilizados:

1. SOMOGYI: Sulfato de Zinc en medio alcalino
SO4Zn + 2 NaOH
SO4Na2 + Zn(OH)2
SO4Zn + Ba(OH)2
SO4Ba + Zn(OH)2
TITULAR:
SO4Zn 5 %

Deben corresponderse

Ba(OH)2 0,3 N

vol a vol en pcia de

NaOH

fenolftalena 1% en etanol

Los desprots se pueden guardar en congeladores de

-20 -80 C, dependiendo de las susts que quieran
analizarse.
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Desproteinizante de Folin Wu cido Tngstico

7,0
8,0 mL
3,5 mL 100 mL
Agua
mL

Muestra

1,0
mL
sang
re

1,0 mL
plasma o
suero

1,0 mL
L.C.R.

Tg Na 10
%
H2SO4
0,66 N

1,0
mL

0,5 mL

0,25 mL

1,0
mL

0,5 mL

0,25 mL

1:10

1:5

1:10
DILUCIN:
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1,0 mL
de
Orina

1:100

Agua destilada

3.5 mL

3.5 mL

3.5 mL

Suero

0.5 mL
0.5 mL

0.5 mL

Sangre
Orina
ATC 5 %

3.5 mL
1 mL

Tungstato Na 10
%

0.5 mL

H2SO4 2/3 N

0.5 mL

ZnSO4

0.5 mL

Ba(OH) 2

0.5 mL

cido actico 2
%
Diluc. de

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1.5 mL
0.5:5

0.5:5

0.5:5

3.5:5 10

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Mtodos de cuantificacin
a) Mtodo qumico (M. de Caraway)
c. rico + H3PW12O40
Alantona +
CO2 + Azul de
Tungsteno
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CIDO RICO
Mtodo de Caraway
Fundamento:
El c. rico es oxidado a alantona y CO 2 por
el cido fosfotngstico en solucin alcalina.
El c. fosfotngstico es reducido a azul de
tungsteno que se mide a 710 m

c. rico + H3PW12O40
Alantona + CO2 +
Azul de Tungsteno
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+
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CIDO RICO

Mtodo de Caraway
REACTIVOS:
Tungstato Na 10 %
c. Sulfrico 2/3 N
Carbonato de Na 14 %
R. cido fosfotngstico
Stock c. rico 100 mg/dL
Sols Sts de 5, 10 y 15 mg/dL
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Desproteinizado:
0,5
4,0
0,25
0,25

mL
mL
mL
mL

de
de
de
de

suero
agua
H 2SO 4 0,66 N
Tungstato de Na

Mezclar x agitac. y centrif. o filtrar.

0.5 mL de suero
5 mL de
filtrado
X V.R.
1.5 mL
X = 0.75 = 0.15 = V.R.
5
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Procedimiento:

Agua
Suero desprot. (1:10)
u Orina (1:100)
Estndar 0,5, 1,0, 1,5
%
Carbonato Na 14 %

Bl M.P. St.
1,5

1,5

1,5

0,5

0,5

0,5

Agit., reposo 5 min.

c. Fosfotngstico
0,5 0,5

0,5

Agit., reposo 15
min.
Leer a 710 m vs16
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Stock cido rico 100 mg/dL

de agua

Sols Sts de:

1.5 mg/dL

0.5

1.0
de agua

En 1.5 mL de
c/St. hay:
0.0075
0.015
0.0225 mg c.
rico
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[CST]

100

AMP
VR
AST
1-10
0.0075-0.15mLsuero
0.15-1.5
x-100mLsuero

=0.0075x100=5mg/dLsuero

0.15
=0.015x100=10mg/dLsuero

0.15
=0.0225x100=15mg/dLsuero

0.15
cido ricomg/dL =

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CST AST
X AMP
CST x AMP
AST

cido ricomg/dL =

Factor 1 . +
Factor 2
Factor 3 .
/ 3

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Fp %

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cido ricomg/dL =

1-100
0.015-1.5

[CST]

100

AMP
VR
AST
0.0075-0.015
x-100mLorina
x

=0.0075x100=50mg/dLorina

0.015
=0.015x100=100mg/dLorina

0.015
=0.0225x100=150mg/dLorina

0.015
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21

03/04/16

22

03/04/16

23

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CIDO RICO

Mtodo enzimtico
Fundamento:
c. rico + 2H 2O + O 2 Uricasa Alantona +
H 2O 2 +
CO 2
H 2O 2 + 4 AF + Clorofenol POD Quinona
coloreada +
H 2O
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b) Mtodos enzimticos
c. rico + 2H 2O + O 2

Uricasa

Alantona +

H 2O 2 + CO 2
1. Por espectrofotometra diferencial:
c. rico abs a 283 m a pH<7
y de 290 a 293 m a pH>7
Se mide Abs a las longs de onda
mencionadas antes y despus de la
incubacin del c. rico con la Uricasa
pte. en suero, plasma u orina.
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Procedimiento:
Bl

M.P. St.
Estndar

Suero 20 uL
u Orina (1:100)

R. 1 800
800
800 L

20 L

Mezcl suav. e incub. 5 min a 37 C

20 min a temp. amb.
Enfriar y leer a 505 m
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2. El H2O2 producido en la reaccin con la

uricasa se puede cuantificar as:
H2O2 + Etanol

Catalasa

Acetaldehdo + H2O

Acetaldehdo + NAD Acetaldehido DH

Acetato +
NADH + H2O Se mide la aparicin de NADH a
340 m
H2O2 se det. midiendo el cromgeno

formado x su accin oxidante sobre la

o-dianisidina a 530 m .
H2O2 se oxida a 3-metil-2-benzotiazolinona

y N,N-dimetilanilina en pcia de
peroxidasa dando un col. azul de
indamina, que abs a 600 m
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H2O2 reacciona con 3,5 dicloro-2hidroxibenceno-sulfnico y 4

aminofenazona p formar un col.
rojo de quinonimina, que abs a
520 nm y es proporcional a la
cantidad de H2O2 y por ende del
c. rico pte en la muestra.

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 El c. rico aum. en plasma se asocia

epidemiolgicamente a enfs. cardiovasculares como el infarto de miocardio,
accidente cerebrovascular, hipertensin e
insufic. cardiaca.
Se ha propuesto tomar la conc. en plasma
de cido rico >4 mg/dL como un signo
de alerta.
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TABLA DE CONTENIDO DE PURINAS EN

ALIMENTOS
ALIMENTOS
RECOMENDABLES
0-50 mg./100 g.

ALIMENTOS A
LIMITAR
50-150 mg./100 g.

Fruta
Zumos de fruta
Verduras
(excepto del
grupo de
alimentos a
limitar)
Nueces
Cereales
Pan (excepto
integral)
Bebidas (caf, t,
)
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Grasas

Guisantes
Legumbres secas
Coliflor
Esprragos
Espinacas
Setas
Productos
integrales
Aves (pollo, pato,
)
Carne (ternera,
cordero, cerdo)
Pescado
(excepto
T. Hayde Ziga
Cceres
los de G3)

ALIMENTOS A
EVITAR
150-1000
mg./100 g.

Vsceras
(hgado,
riones,
sesos)
Extracto de
carne
Anchoas
Arenque
Sardina
Caballa
Moluscos
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cido rico:
Componente del riesgo
cardiovascular en el Sndrome
Metablico

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