MATERIALES Y REACTIVOS:

 Cajas de petri estériles

 Beaker estéril
 Erlenmeyer estéril
 Agar XLD, Bismuto Sulfito, Hektoen
 Caldo lactoso
 conjunto de baterias bioquímicas completa
 Reactivo de griess

EQUIPOS:
 Incubadoras
 Contador de colonias
 Incubadora a 35ºC +/- 2ºC.
 Estufa

PROCEDIMIENTO:
ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO
 Mezclar muy bien la muestra (si es líquida) para asegurar su
homogenización.
 Desinfectar con alcohol al 75% el sitio por donde se vaya a extraer la
muestra.

 Abrir asépticamente (con el mechero en medio) y adecuadamente la

muestra.
 Si es sólida tomar porciones de diferentes sitios de la muestra.5.6.1.5.
Pesar 25 gramos de la muestra en balanza analítica si es sólida, sobre un
papel graff estéril o medir 25 mililitros si es líquida en recipiente estéril.
 Macerar, picar o triturar.
 Añadir al recipiente de dilución que contiene 225 ml de agua peptonada
 Cuando se analiza caldo lactoso, Incubar a 35º + / - 2ºC por 18 – 24 horas
 ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO5.6.2.1. Transferir 0.1 ml de cultivo
obtenido del enriquecido no selectivo en 10 ml de caldo Rappaport –
Vassiliadis
 Transferir 1ml para el Caldo Muller - Kauffmann
 Incubar el caldo Rappaport – Vassiliadis a 44.5°C por 18-24 horas y el
caldo Muller – Kauffmann a 37°C durante 18-24horas.
 SIEMBRA EN PLACAS CON MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES
 Se debe utilizar como minimo dos medios selectivos por cada caldo
deenriquecimiento no selectivo y selectivo para el aislamiento
de microorganismo, serecomienda el agar bismuto sulfito, al agar
verde verde brillante lactosa sacarosa connovobiocina y el agar
XLD.
A partir de cada uno de los cultivos obtenidos del enriquecimiento no selectivo y
selectivo, sembrar en superficie con asa por agotamiento placas con agar verde
brillante lactosa sacarosa, agar bismuto sulfito o agar XLD.
 Incubar las placas a 35ºC + / - 2ºC durante 24 – 48 horas5.6.3.3.
Escoger 3 colonias típicas sospechosas de Salmonella
 Aislarlas en Agar selectivo para garantizar su pureza.
 Proceder a su identificación teniendo en cuenta que las colonias
presuntivas desalmonella deben estar bajo este esquema:
Salmonella típica: TSI: K/A, H2S + ; LIA: K/ k, K/A, H2S +
Salmonella atípica: TSI K/A, H2S - ; LIA: : K/ k, K/A, H2S –
Salmonella grupo III: TSI: A/A , H2S + ; LIA: k/k, H2S +