PRÁCTICA 09

EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DEL ADN Y GRANOS DE POLEN

OBJETIVOS:
Extraer el ADN de un fruto
Reconocer su presencia mediante una reacción coloreada específica
Confirmar la estructura fibrilar del ADN
Observar la morfología del polen de diversas flores, relacionándolas con distintos modos de
polinización.

FUNDAMENTO

El ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas las células, disperso y muy desplegado,
unido a proteínas para formar la cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a partir de
prácticamente cualquier material de origen biológico. Para ello es necesario homogenizar el
tejido disgregándolo y separando sus células y demás componentes, luego romper las células
para separar el núcleo y romper éste para liberar el ADN, separarlo de las proteínas y
precipitarlo para separarlo de la solución acuosa.

El ADN (y también algo de ARN) aparecerá entonces como un agregado de fibras blanquecinas
de aspecto mucoso que se adhieren a una varilla de vidrio o a la pipeta. Podemos añadir unas
gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo para teñirlo. Por último, se puede situar
sobre un porta objetos, teñirlo de la misma manera y observarlo al microscopio. También se
puede conservar dejándolo secar sobre papel de filtro o suspendido en alcohol al 50% o 70%.

Los granos de polen ayudan a la identificación de familias botánicas así como a determinar el
grado de evolución de las mismas

Los granos de polen son enviadas periódicamente como emisarios a cubrir una importante
misión en la reproducción de las plantas: la polinización. La morfología del polen es muy variada
y está relacionada con la forma en que se produce la polinización; en cada especie, el polen es
dispersado, mediante el viento o los animales, para alcanzar el primordio seminal y producir la
fecundación.

El saco polínico es la estructura que contiene los granos de polen, en los órganos masculinos de
la flor. El polen son los microgametofitos de las plantas con semilla (espermatófitos). El grano
de polen contiene un individuo masculino o gametofito masculino y corresponde a la fase
haploide en el ciclo de alternancia de generaciones característico de las plantas.

El grano de polen una vez llegado a la superficie receptiva en la planta de destino, es decir al
estigma, germina, del grano surge el tubo polínico, que es una emanación de citoplasma a través
de la cual migran los núcleos masculinos en dirección a la oósfera (el gameto femenino) y los
núcleos polares (en las angiospermas hay una fecundación doble) y con ello la polinización
El reconocimiento del grano aborda muchos aspectos, algunos de estos aspectos son los que se
mencionan a continuación:
MATERIAL NECESARIO

- Un plátano y fruto - Batidora de mano u otra - Matraz

comestible de un maquina para batir (uno por - Azul de metileno o verde de metilo
árbol (uno por grupo grupo)
- Filtro tipo cafetera - Embudo para filtrar - Alcohol 96º muy frío
(uno por grupo)
- Pipeta Pasteur - Tubo de ensayo - Gradilla
- Vaso de 500 ml a mas
para batir (uno por - Agua destilada - Espátula
grupo)
- Detergente tipo lava vajillas
- Vaso de precipitados - Un poco de sal común (5 gramos)
(5 gramos)
PROCEDIMIENTO

Para extracción y reconocimiento de ADN

El procedimiento descrito corresponde a varias páginas webb consultadas y consiste en lo

siguiente:

1. Batir un plátano en 250 ml de agua destilada (o mineral en su defecto, pero no del

grifo) durante 15 a 20 segundos hasta obtener una papilla homogénea.

2. Por otra parte, en un vaso de precipitados pequeño se mezcla una cucharada de champú o
lavavajillas líquido con dos pizcas de sal de mesa.

3. Añadir 20 ml de agua destilada a la mezcla de champú y sal.

4. Añadir ahora tres cucharaditas del puré de plátano en el interior del vaso que contiene la
mezcla anterior, revolver con la espátula durante 5 ó 10 minutos evitando formar espuma.
Durante este tiempo se pueden preparar los tubos de ensayo como se describe en el
siguiente punto y discutir la acción que desempeñan el detergente y la sal sobre el
plátano.
5. Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico por cada grupo y poner a enfriar lo máximo
que sea posible, por ejemplo en baño de agua con hielo. Mejor aún si se ha mantenido
refrigerado hasta el momento de realizar la práctica.

6. Con los pasos anteriores hemos conseguido liberar el ADN en la disolución acuosa, la cual
contendrá también diversos restos tisulares y celulares. Para eliminar esos restos
dejamos filtrar la solución durante varios minutos en papel de filtro, filtro de cafetera o
un paño de algodón suave, hasta obtener unos 5 ml de filtrado.
7. Para precipitar el ADN separándolo de la disolución, se toma una parte del filtrado con
una pipeta Pasteur y se añade suavemente al tubo de ensayo que contiene el alcohol muy
frío. El filtrado, más denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo.
Dejar reposar durante 2 ó 3 minutos sin moverlo en absoluto.

8. Veremos precipitar ADN de color blanco en la interfase con el alcohol y ascender

lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso.
9. Podemos teñirlo añadiendo unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo.
10. Se puede extraer ADN del tubo recogiéndolo cuidadosamente con una varilla de vidrio o
un instrumento similar que se hace girar lentamente.

11. Ahora se pone un poco de ese ADN sobre un porta objetos y se tiñe con azul de metileno
durante 3 minutos. Se limpia el porta objetos con un papel filtro y se lleva al microscopio
para su observación.

12. Otra posibilidad es conservar el ADN obtenido por uno de los siguientes métodos:
- En un frasco bien cerrado con alcohol etílico al 50% o 70%.

- Dejarlo secar al aire extendido sobre papel de filtro.

13. Pruebe extraer ADN de otros frutos y tejidos vegetales, siguiendo el mismo
procedimiento Pese el ADN extraído.
Para la observación de la morfología del polen
Observe las partes de la flor identificando cada una de sus estructuras, en especial las anteras
donde se producen los granos de polen
Sacuda la flor sobre una hoja en blanco.
Coloque los granos de polen sobre un porta objeto
Observe al microscopio, describa o tome fotos de él.
En una placa Petri coloque otros granos de polen y agregue un colorante
Lleve a un porta objeto, cúbralo con un cubre objeto y observe en el microscopio, descríbalo de
acuerdo a las imágenes de la introducción.

RESULTADOS.
Presente el dibujo o fotografía del ADN observado a través del microscopio.
Presente dibuje la fotografía de por lo menos tres granos de polen diferentes, relacionándolo
con la especie de la cual procede
DISCUSIÓN
Explique por qué se sigue cada uno de los pasos en la extracción y cuál es la finalidad de cada uno
de ellos.
Discuta sobre el procedimiento empleado y relacione con otros procedimientos que se mencionan
en la revisión bibliográfica que realizó.
Relacione forma del grano de polen con mecanismos de dispersión
CONCLUSIONES.
Concluya en base a los objetivos y la discusión que realizó
REFERENCIA
No se olvide de mencionar la bibliografía consultada.
ALGUNAS REFERENCIAS

Esau, K. (1976) Anatomía vegetal. Ed. Omega. Barcelona. 779 pp.

Esau, K. (1982). Anatomía de las plantas con semilla. Ed. Hemisferio Sur. Buenos Aires 512 pp.
Fahn, A. (1978). Anatomía vegetal. H. Blume. Ed. Rosario. 643 pp.