CITOMETRÍA DE FLUJO

Es una técnica de análisis que nos permite identificar a diferentes poblaciones

celulares simultáneamente, así́ como obtener gran información de ellas
dependiendo de las proteínas que se expresen, permitiendo diferenciar
características que otras técnicas de microscopía no logran. También nos da
las medidas y la granularidad de la célula, así como la fluorescencia relativa de
la misma usando un sistema óptico acoplado a un procedimiento electrónico
que graba la manera en que la célula dispersa el haz de luz y emite
fluorescencia.
Está conformado por 3 sistemas principales:
 Sistema de fluidos: Alinea y transporta a las células dentro de una
cámara de flujo de haz de luz y manteniendo suspendida la muestra,
luego se le aplica la propiedad hidrodinámica que consiste en la
inyección de la muestra en el centro de una corriente de fluido, que
puede ser agua o buffer de fosfato.
 Sistema óptico: Está compuesto por láseres y detectores que registran
la luz emitida por la célula. Al ser incididas por el láser, tendrán la
capacidad de dispersar la luz de acuerdo con su tamaño y su
granularidad.
 Sistema electrónico: Se encarga de recibir las señales luminosas y las
codifica en gráficos.
Los anticuerpos monoclonales acoplados a fluorocromos nos permitirán
detectar y etiquetar poblaciones específicas de células. El anticuerpo se une a
una estructura específica (antígeno), y se expresa en el tipo celular que se
requiere identificar. Además, el anticuerpo debe contener una unión covalente
a un fluorocromo, que emitirá luz fluorescente (ya sea verde, naranja, azul, roja
o amarilla) cuando sea excitado por el láser; de este modo, la célula se “tiñe” y
facilitará la identificación de las células que se unieron al anticuerpo o
marcador.
Los resultados serán representados:
 Gráficos de puntos: muestra la relación de dos marcadores diferentes
cada uno con eventos independientes, el desplazamiento de cada uno
hacia la derecha indica un marcador al eje de las “x”, mientras que el
desplazamiento hacia arriba, expresa el marcador “y”.
 Gráficos de densidad: Representa a las poblaciones con expresión de
dos marcadores, mostrando la densidad. Mientras mayor sea el evento se
representarán de diferentes gráficos. como el gráfico zebra, pseudocolor o
de contornos.
 Histogramas: Se encargan de comparar la intensidad de expresión de un
marcador frente al número de eventos. Si la curva es desplazada hacia la
derecha indica mayor expresión del marcador, en tanto, que la altura del
pico nos brinda la frecuencia de las células que se encuentran atrapadas.
 Gráfico 3D: Compara a las poblaciones de manera tridimensional a través
de:
 Histograma tridimensional: Identifica las poblaciones de linfocitos T
cooperadores y Citotóxicos, tanto CD4 como CD8 así mismo la altura
de los picos indica el número de células registradas.
 Dot plot tridimensional: Muestra a las poblaciones de linfocitos B
(por exclusión), linfocitos T Cooperadores / Citotóxicos tanto CD3,
CD4 y CD8.
Dentro de las aplicaciones de la citometría de flujo, nos va a facilitar el
diagnóstico o seguimientos de patologías como a los pacientes con VIH,
células cancerosas o tumorales; permitiendo así el análisis de las funciones
celulares (proliferación, fagocitosis y apoptosis), como la identificación, las
características y la separación de la población celular. En la clínica, tiene una
importante función en la purificación de células que posteriormente serán
trasplantadas a pacientes con ciertas patologías. No se limita al estudio de las
células, también da a conocer la cantidad de ADN o ARN que posee la célula.
Es una poderosa herramienta para diagnosticar, clasificar y la determinación
del pronóstico de diversas enfermedades.