Genética Molecular

CP #2 de Tema II: Mecanismos de estabilidad y variación del DNA

Curso: 2021
Ejercicios de autopreparación

Habilidad 1: Clasificar agentes mutagénicos (incluyendo causas naturales), los daños que estos
pueden provocar en la molécula de ADN y los mecanismos de reparación involucrados y las
mutaciones que se pueden generar.
Habilidad 2: Valore cómo la Recombinación Homóloga, la Recombinación Específica de Sitio
y la Transposición generan diversidad genética, y al mismo tiempo pueden contribuir a la
conservación de la identidad genética de las especies.

1. A partir del modo de acción de los siguientes mutágenos, mencione el daño que y el tipo de
mutación (a nivel molecular) que producen, y los mecanismos de reparación que pueden
neutralizarla:
a) Los análogos de bases, p. ej. el 5-bromouracilo, que es un análogo de T, pero que en su forma
enólica adquiere propiedades de apareamiento como las de C.
b) Los modificadores de bases, como los agentes alquilantes (p. ej. etilmetanosulfonato y
nitrosoguanidina), que alquilan preferentemente a G, confiriéndole propiedades de apareamiento
iguales a las de A.
c) Aflatoxina B1, modificador de bases muy especial, que forma un derivado de G, el cual es
eliminado enzimáticamente, generando un sitio apurínico.
d) Los agentes intercalantes entre bases, p. ej. proflavina, naranja de acridina, bromuro de etidio
(moléculas planas).
e) Las radiaciones ultravioleta
f) Los rayos X

2. En un laboratorio se tienen 2 cepas de E. coli, una cepa salvaje y una cepa mutante para uno
de los sistemas de reparación del ADN. Los investigadores están interesados en saber cuál de los
sistemas de reparación está afectado en dicha cepa para lo cual realizaron el siguiente
experimento: primeramente usaron un iRNA para bloquear la expresión de la proteína RecA y
luego los sometieron a diversos mutágenos en diferentes condiciones. Con todos los mutágenos
los resultados fueron similares excepto cuando los irradiaron con luz UV en condiciones de
oscuridad, que se obtuvieron los siguientes resultados:

Luz UV 
1

0,8

0,6
Abs

0,4 A
B
0,2

0
0 20 40 60 80 100
t (min)
a) Clasifique el agente mutagénico, diga los daños que puede provocar y las mutaciones que
puede generar.
b) ¿Cuál es la cepa mutante? Explique su respuesta teniendo en cuenta el sistema de reparación
involucrado y el hecho de que RecA está silenciado.
c) Luego los investigadores se enfocaron en analizar el efecto de la luz UV en el gen X de la
cepa mutante, que codifica para una proteína x. Para esto se realizó un Northern Blot, el cual
permite ver el mRNA y un Western blot para el análisis de la proteína, obteniéndose los siguientes
resultados.
Cepa salvaje Cepa mutante  
Gen tratado con UV

d) Explique las diferencias observadas en el patrón electroforético del producto génico,

teniendo en cuenta el efecto del agente mutagénico.
e) Una cepa mutante de E. coli defectuosa en el sistema de reparación SOS es resistente a la
mutagénesis por luz UV. Por otro lado, células de la piel de un paciente que padece Xeroderma
pigmentosum (deficiencia de una de las enzimas reparadoras por escisión) son extremadamente
propensas a morir (y desarrollar tumores) por exposición al sol. Intente explicar la aparente
contradicción.

3. En una explosión de un reactor nuclear los niveles de radiaciones ionizantes, como los rayos
X, partículas α, β, γ y los neutrinos, son sumamente elevados. Esto acarrea consigo que las
personas que viven en las cercanías de la explosión estén expuestas a altos niveles de radiación
lo cual provoca susceptibilidad a que aumente la frecuencia de mutaciones en esas poblaciones y
por tanto la posibilidad de sufrir cáncer.
a) ¿Cuál es el daño más común provocado por este tipo de agente mutagénico?
b) ¿Qué estrategias reparativas emplea la célula para reparar este tipo de daño? ¿Son las
mismas libres de errores? Explique su respuesta.

4. A un cultivo celular se le suministra una dosis de agente alquilante y se comprueba que al

aumentar la dosis de este agente las células del cultivo se vuelven más resistentes al daño.
Describa el mecanismo reparativo que responde a esta adaptación celular.

5. En un laboratorio se está trabajando con 2 cepas bacterianas de E.coli, A y B. Una de estas

es deficiente a la proteína Ada pero los investigadores no saben cuál es porque los rótulos se
borraron. Para aclarar esta duda sometieron ambas cepas a un agente genotóxico (EMS,
Etilmetano sulfonato) en concentraciones moderadas, midieron la expresión de la proteína Alk A
y obtuvieron el siguiente gráfico:
 Expresión Alk A
0,3

EMS 
0,2
Abs

Cepa A
0,1
Cepa B

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8
t (min)

a) Clasifique el agente genotóxico.

b) Diga que daños puede causar en el ADN este compuesto, a que mutaciones puede conllevar
y clasifique las mismas atendiendo al número de bases que daña y a su origen.
c) ¿Cuál es la cepa mutante? Explique su elección desde el punto de vista molecular teniendo
en cuenta la función de la proteína Ada.
d) ¿Por qué usted cree que la expresión de la proteína Alk A en la Cepa B nunca es 0?
e) ¿Cree usted que el crecimiento celular de la cepa mutante llegue a 0 tras la exposición al
agente genotóxico antes mencionado? Represéntelo y explique su respuesta.

6. Compare la generación de mutaciones debido a la acción de un análogo de base (5BU) con

la de un agente alquilante (etilmetanosulfonato) teniendo en cuenta el mecanismo por el que
ocurren y el producto final que se origina.

7. En un laboratorio se estudia una cepa bacteriana de E. coli, que después de varias

generaciones se le ha afectado un mecanismo de reparación. Esto fue detectado luego de tratar
esta cepa y la que le dio origen con varios agentes mutagénicos. Los resultados de dicho
experimento se resumen en la siguiente tabla. Donde el signo – significa que las mutaciones
fueron nulas o casi nulas, el signo + indica alta tasa de mutaciones en esa cepa.

Mutágeno Luz UV EMS H2O2 Análogo de Bases RX Control negativo

Cepa original - - - - - -
Cepa mutante ++ ++ ++ ++ ++ +
Clasificación
del mutágeno
Daños
generados
Mutaciones
generadas
Dato adicional: Ya se determinó que el mecanismo SOS de la célula funcionaba correctamente.

a) Complete la tabla de los resultados.

 b) Diga cuál es el mecanismo de reparación afectado. Plantee una hipótesis que explique
molecularmente su afirmación.

8. En una persona afectada de talasemia se encuentra que,

aproximadamente, el 50% del RNAm correspondiente a la cadena
beta de la hemoglobina es normal, pero el otro 50% es mutante.
La comparación de las secuencias 5´y 3´de ambos RNAm son
iguales.
Cuando se corta el gen de la beta-hemoglobina de las personas
normales con la enzima de restricción Ode I se obtienen dos
fragmentos de DNA de 201 y 175 pb que se separan por
electroforesis (carril A). Si se somete a digestión con esta enzima el gen beta de la hemoglobina
de personas afectadas, sólo se obtiene un fragmento de DNA de 376 pb (carril B). Explique a qué
es debido esto.
¿Qué tipo de mutación ha ocurrido en el gen beta de la hemoglobina de esta persona?

9. Teniendo en cuenta los diferentes eventos de recombinación relacione los elementos de la

columna A con la columna B. Especifique en cada caso el organismo en que ocurre.
Columna A Columna B
Homóloga meiótica alélica a) Asociada con la estructura proteica: complejo sinaptonémico
Vía Rec BCD b) Correcta disyunción de los cromosomas
Homóloga mitótica alélica c) Función reparativa
Transposición d) Involucra ruptura, intercambio y reunión de cadenas de DNA
Ilegítima e) Maquinaria enzimática constitutiva
Homóloga mitótica no f) Maquinaria enzimática inducible
alélica g) No requiere de Rec A
Sitio-específica h) No requiere grandes regiones de homología
Homóloga meiótica no i) Ocurre en células somáticas
alélica j) Ocurre solo en células sexuales
Vía Rec F k) Permite la formación de nuevas combinaciones de alelos
Recombinación homóloga l) Propicia reordenamientos del genoma
m) Requiere de Rec A
n) Requiere grandes regiones de homología

10. Complete los espacios en blanco:

a) Las _________ son cambios o alteraciones en la información genética que se transmiten a la
descendencia.
b) Un __________es una región del gen donde la frecuencia de mutaciones es mayor.
c) Las mutaciones ______________ se generan por un cambio de base que da lugar a la
formación de un aminoácido con estructura química diferente.
d) Las ____________ pueden ser deleciones, duplicaciones y redisposiciones e implican un gran
número de bases.
e) Los tautómeros son isómeros en los que cambia la posición de los dobles enlaces, lo que puede
provocar ____________.
f) La recombinación ___________ consta de cuatro etapas químicamente diferentes que son:
iniciación, apareamiento e intercambio de cadena, extensión del heteroduplex y resolución.
g) La recombinación ___________ puede operar por tres vías: unión de extremos romos,
extremos protuberantes y extremos con microhomología.
h) Los elementos móviles pueden ser de clase I si tienen un intermediario _______________ o
de clase II si el intermediario es __________________.
i) Los elementos de _______________ pueden ser conservativos o replicativos.
j) En cepas de E. coli irradiadas con luz UV y luego sometidas a las luz visible las lesiones al
DNA pueden repararse por __________________y _________________.
k) Los mecanismos de reparación pueden ser clasificados como: _______________ y
________________.