Elisa

Prueba de alta sensibilidad

Es una inmunoanálisis, enzimo- inmunoanálisis
Detecta la unión antígeno y anticuerpo
Tiene anticuerpos monoclonales y policlonales
Es necesario usar poliestireno, porque en una etapa de la prueba Elisa, se
debe fijar la molécula a la placa por medio de un enlace químico, (molécula-
placa) participa el enlace no covalente
Para hacer un enlace covalente se debe usar placas de acrilamida y celulosa
Se puede detectar antígeno o anticuerpo
Es una prueba cuantitativa y cualitativa que se basa en la reacción de un
inmunocomplejo ósea en la unión antígeno anticuerpo
Debe ser especifica
Para que ocurra un color se usa una enzima la cual puede estar unida a un
antígeno o un anticuerpo y esta unión de la enzima con una de las dos
moléculas se denomina conjugado
Una enzima necesita un sustrato especifico
Unido al sustrato se une al cromógeno: sustancia que cuando detecta una
reacción da cierto color
Tiene 4 pasos:
1. Formación del inmunocomplejo
2. Conjugado
3. Reacción de reconocimiento de enzima sustrato cromógeno
4. Presencia de color por espectrofotómetro
- Elisa competitiva

Directa
 1. Se debe usar un antígeno similar a la muestra problema, la diferencia
va a ser el antígeno que se encuentre en el laboratorio debe de estar
en una concentración bastante baja
2. Cuando se ponga el anticuerpo este puede escoger pegarse en la
muestra o en la competencia
3. Si hubo más antígenos y los anticuerpos se pegaron, los que se
quedan sueltos se van en el lavabo y no va a haber reacción cambio de
color leve. Entonces no se quedan todos los antígenos porque se van
al lavado, pocos anticuerpos se pegan al antígeno de competencia
siendo nulo o bajo, siendo positivo

Cuando los antígenos del paciente se encuentran en

mayor cantidad, el anticuerpo se pega al antígeno
como competencia, se quedan mas anticuerpos y
producen color dando negativo. Es baja la presencia
del antígeno del paciente siendo la prueba negativa

Es indirecta

Es inversamente proporcional

Materiales:
Las placas son importantes, tiene como están 96 pocillos de trabajo

Su material es importante
por las moléculas que se
sensibilicen en las bases
tiene que hacer un enlace
con el material de los
pocillos
Si es no covalente se puede
usar poliestireno
Si es covalente puede ser
de celulosa

- Antígenos o anticuerpo: que sensibilice la placa

- Anticuerpos monoclonales (reconocen un solo tipo de epítopo) y
policlonales (menos específicos, naces de varias células)
- Conjugado
 - Sustancia que sella los espacios entre las moléculas: suero fetal
bovino, por ejemplo
- Buffer: concentraciones mas especificas de la muestra, se hacen
diluciones con esto
- Sustancia stop: es un acido que ya no se produzca reacción
enzimática
- Micropipetas multicanal
- Espectrofotómetro

Elisa no competitiva:
La mas usada, siendo las mas usadas la directa y el
sándwich

Enzima

Anticuerpo

Antígeno

Antígeno y anticuerpo: inmunocomplejo

Inmunocomplejo+ el conjugado
El conjugado detecta a un anticuerpo primaria el cual reconoce el epítopo
del antígeno que tiene doble seguro de reacción. Esta es mas especifica y
mas sensible
- Resultados:
Es directamente proporcional
Mayor color, mayor cantidad de molécula problema: Positivo
Menor color, menor cantidad: Negativo
Elisa directa
El conjugado cumple dos funciones: lleva la enzima y
detecta que tenga el paratopo
especifico

Elisa sándwich Hadas

Conjugado:
Verde: un antígeno

Anticuerpo capturador
Tiene dos anticuerpos heterogéneos

Elisa sándwich DAS

Conjugado: lleva la enzima

Anticuerpo capturador