Instructivo de Procesamiento de Inmunologia

Código
INS-DT-010
INSTRUCTIVO DE PROCESAMIENTO DE Versión 1

INMUNOLOGIA Fecha de Aprobación
Octubre de 2017
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CONTROL DE CAMBIOS
Versión Fecha de Aprobación Cambio Responsable
2 8 NOVIEMBRE DE 2018 ACTUALIZACIÒN AZIRYS

OGLIASTRI
3 24 ABRIL DE 2019 ACUALIZACION ANGELA ORJUELA
4 10 NOVIEMBRE DE ACTUALIZACION KAREN RINCON

2020
Elaborado Revisado Aprobado

Coordinación Laboratorio Clínico Profesional de Calidad Gerencia Científica
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1. OBJETIVO
Ofrecer al médico resultados confiables y oportunos que sean de ayuda en el diagnóstico

control y tratamiento de los pacientes.
2. ALCANCE
Este Procedimiento se inicia cuando se verifican las muestras en el área de inmunología

y termina cuando se entrega el resultado para su fase postanalítica.
3. RESPONSABLE
La bacterióloga es la encargada de llevar a cabo el control y desarrollo de las actividades.
4. CONDICIONES GENERALES
La orden debe estar bien diligenciada, con datos del paciente, con firma, sello del
médico, sello de autorizaciones y número de ingreso del paciente.
5.DESCRIPCION DE ACTIVIDADES
5.1. SEROLOGIA VDRL
Los anticuerpos producidos en respuesta a la invasión del cuerpo por el Treponema

pallidum se dividen en dos grupos: 1) una reagina biológicamente no específica y 2) por
lo menos cuatro anticuerpos específicos del T. Pallidum que producen aglutinación,
inmunoadherencia, fijación del complemento e inmovilización. Se cree que los anticuerpos
antitreponémicos tienden de manera general a igualar la inmunidad a la reinfección en la

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sífilis. Sin embargo, el título de la reagina se correlaciona con el número y extensión de

las lesiones activas.
La reagina no es un anticuerpo específico para el T. Padillum, sino un anticuerpo para

lípidos hísticos. Se ha sugerido que una infección con T. Padillum daña los tejidos del
huésped separando una fracción lipoidal, la que actuando como un hapteno se combina
con la fracción proteica de la espiroqueta y posteriormente estimula la producción de
reagina. Aunque la reagina no es un anticuerpo específico, es producida por casi todos
los pacientes infectados con T. Pallidum.
La prueba experimental señala que la reagina sifilítica tiene, aparentemente, dos
componentes. Uno es de peso molecular relativamente grande (bivalente) y toma parte en
la floculación. El otro es de peso molecular relativamente pequeño y reacciona en las
pruebas de fijación del complemento.
Los anticuerpos comienzan a aparecer por lo general de 4 a 6 semanas después de la

inoculación o una a tres semanas después de la aparición del chancro.
Principio del Método.
Las pruebas serológicas para el diagnóstico de Sífilis, tienen como objetivo detectar en el
suero del paciente, anticuerpos contra los antígenos presentes en el Treponema
Pallidum. Se emplean dos tipos de antígenos: Treponémicos y no Treponémicos.
En la prueba del V.D.R.L. se utilizan antígenos no treponémicos. Las reacciones son de

dos clases: Cualitativa, determina la presencia o presencia de anticuerpo en una muestra.
Cuantitativa: indica la mayor dilución de suero que contiene anticuerpos, determinado por
un reactivo a esa dilución.
Sueros humanos de pacientes sospechosos de haber sufrido una infección por T.

Pallidum, contienen anticuerpos contra componentes del microorganismo que pueden
investigarse utilizando un antígeno artificial conocido como USR, dando una aglutinación
microscópica en caso positivo.
Materiales.
Agitador de velocidad variable, graduado a 180 RPM.

Microscopio.

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Placa de vidrio transparente

Micorpipeta para medir los volúmenes indicados
Reactivo
Solución salina 0,9%.
Conservación.
El antígeno Serobacter USR listo para el uso y el control positivo del mismo son estables
hasta la fecha de expiración indicada en la etiqueta conservados a temperatura de 4°-
8°C.
Muestra.
La muestra para esta prueba debe ser de suero fresco no contaminado y límpido. Los
sueros hemolíticos o lipémicos deben evitarse pues deben proporcionar resultados de
dudosa interpretación. También se puede utilizar Líquido Cefalorraquideo y Plasma con
EDTA
Si la prueba no se realiza al momento de la toma, la muestra puede conservarse de 4°-
8°C. El plasma puede emplearse hasta 24 horas luego de la extracción.
Procedimiento para suero o plasma
Cualitativa
Tanto los reactivos como las muestra deben estar a temperatura ambiente antes de
realizar la prueba.
Marcar la placa con muestra y controles, Colocar con una micropipeta 50 ul de suero
problema y 50ul del control positivo y negativo en el círculo respectivo utilizando para
cada uno puntas individuales desechables.
Antes de agregar la solución de antígeno debe mezclarse varias veces con el gotero
provisto. Agregar una gota de la suspensión del antígeno
Rotar las láminas durante 4 minutos en agitador mecánico a 180 RPM.
Leer las pruebas microscópicamente con un ocular 10X y un objetivo 10X,
inmediatamente después de la rotación. Informar los resultados de la siguiente manera:

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Lectura Informe
Grumos grandes y medianos Reactivo (R)
Grumos pequeños Reactivo débil (RD)
No grumoso o formación
Ligeramente grumosa No reactivo (NR).
Ocasionalmente puede presentarse el fenómeno de pro- zona. Este fenómeno se

presenta cuando hay una completa o parcial inhibición de la reactividad en suero no
diluido en ocasiones dicho fenómeno es muy grande produciendo únicamente reacciones
débilmente reactivas o ligeramente grumosas (no reactivas) con suero no diluido. Es por
tanto recomendable que todo suero que presente reacción débil reactiva o ligeramente
grumosa en la prueba cualitativa debe someterse a prueba cuantitativa antes de dar el
informe. Si l aprueba da resultado reactivo en algunas diluciones debe informarse como
reactivo e informarse además el título de tal reactividad según normas que se describen
bajo el título de prueba cuantitativa.
Prueba Cuantitativa
Realizar la prueba cuantitativa a todos aquellos sueros que en la prueba cualitativa hayan
sido reactivos, reactivos débiles o no reactivos (grumosos) hasta una dilución en que no
sean reactivos.
Se debe proceder a hacer diluciones dobles progresivas de cada uno de ellos utilizando la
solución salina 0.85% para hacer las diluciones en tubo o directamente en la placa con
micropipeta de 50ul, procesar estas diluciones en la forma descrita para la prueba
cualitativa y leer los resultados microscópicamente.
Lectura Informe
Grumos grandes y medianos Reactivo (R)
Grumos pequeños Reactivo débil (RD)
No grumos o formación No reactivo (NR)
Ligeramente grumosa.
Si la prueba da reactiva en las diluciones posteriores debe informarse como reactiva,

reportando además el titulo de la dilución correspondiente, informando los resultados en

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términos de mayor dilución que producen un resultado reactivos según los siguientes
ejemplos:
Suero sin Diluciones

Informe
Diluir (1:1) 1:'2 1:4 1:8 1:16 1:32
R RD N N N N Reactivos sin diluir ó 1 Dils

R R RD N N N Reactivo 1:2 ó 2 Dils
R R R RD N N Reactivo 1:4 ó 4 Dils
RD RD RD R N N Reactivo 1:8 ú 8 Dils
N (grumoso) RD R R R N Reactivo 1:16 ó 16 Dils
RD N N N N N Reactivo débil ó 1 Dils
Si en todas las diluciones de los sueros se produce un resultado reactivo preparar una
dilución 1: 64 del suero en solución salina 0.85%, simplemente mezclando 0.1 ml de la
dilución 1:8 en 0.7 ml de solución salina. Mezclar bien y realizar la prueba con esta
dilución 1:64, haciendo tres diluciones progresivas en la misma forma realizada
originalmente con la dilución 1:8, esto equivaldrá a diluciones 1:64, 1:128, 1:256.
Procedimiento Cualitativo para LCR
Diluir el reactivo 1:2 con solución de cloruro de sodio 10 g/dl. Emplear dentro de las 2
horas de preparación. Agregar en la placa previamente marcada 50 ul de muestras y
controles positivos y negativos y 10 ul del reactivo diluido, mezclar bien y agitar
horizontalmente la placa durante 8 minutos a 189 rpm. Leer los resultados en el
microscopio según lo descrito anteriormente en el procedimiento para suero.
Limitaciones del Método.
La prueba se supone es positiva en caso de infección por T Pallidum y negativa en

ausencia de ella. Sin embargo existen algunas condiciones clínicas especiales en las
cuales la reacción puede ser positiva en ausencia de infección por T Pallidum lo que se
conoce como reacciones biológicas falsas positivas que el médico debe conocer y
evaluar.

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6. PRUEBAS DE EMBARAZO (GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA BHCG

CUALITATIVA)
La gonadotrofina coriónica se encuentra en los fluidos corporales sólo durante el

embarazo. También es producida en la mola hidatiforme, coriocarcinoma y teratomas
malignos de ovarios, testículos y retroperitoneo. Es producida por las células de Langhan
de la capa coriónica de la placenta en desarrollo y es una glucoproteína (peso molecular
alrededor de 80.000).
La gonadotrofina coriónica humana es detectable en la orina y suero alrededor del día

veinticuatro del período de gestación, presente a partir del séptimo día después de la
concepción, siendo éste convencionalmente calculado desde el primer día del último
período menstrual normal. La detección de la GCH ocurre entonces alrededor del décimo
día después de la ovulación. Para el día 40 después de la gestación, el nivel de GHC
alcanza alrededor de 5.000 U.I./24 horas.
Desde los días 60 al 70, el nivel aumenta en forma aguda y puede alcanzar hasta 500.000
U.I./24 horas. Este pico puede darse en cualquier momento entre los 50 y 90 días, dura
alrededor de 10 días y luego comienza a declinar rápidamente.
Después de 16 semanas de gestación (o una vez terminado el primer trimestre de

embarazo) el nivel de GCH puede ser no detectable por métodos de laboratorio. Para el
resto del embarazo el nivel varía entre 4.000 y 11.000 U.I./24 horas, pero puede llegar a
2.000 U.I./24 horas.
Después del parto, el nivel de GCH desciende rápidamente; ya que a las 24 horas este
nivel es muy bajo, y a las 72 horas no se encuentran GCH en la sangre u orina.
Aplicación de la prueba
Esta prueba cualitativa permite detectar el embarazo normal. Es más rápida pero menos
sensible ( sensible de 20 a 50 mUI/ml, la sensibilidad depende de la casa comercial) que
la prueba cuantitativa. Es positiva dentro de los primeros tres días de la implantación; sin
embargo, esto sucede tanto en un embarazo normal como en uno ectópico. Las

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reacciones cruzadas con LH son escasas y las pruebas falsas positivas son raras. En
ocasiones alguna paciente con niveles muy elevados de LH tendrá una reacción limítrofe.
En la prueba cualitativa de hCG, la subunidad B se utiliza en la detección que no es
sistemática de hCG. Es sensible hasta 1-3 mUI/L. La prueba constituye el método más
sensible y específico para detectar un embarazo temprano, diagnosticar embarazo
ectópico o amenaza de aborto. También es útil, en el estudio de los tumores testiculares.
Se eleva en el coriocarcinoma, carcinoma de células embrionarias y en el embarazo
ectópico. La hCG es muy útil en el seguimiento de las neoplasias de células germinales
que producen hCG, especialmente de las neoplasias trofoblásticas. En las neoplasias de
células germinales en el varón, tanto la hCG B como la feto proteína alfa son útiles como
marcadores tumorales y se pueden utilizar para valorar las recurrencias.
Fundamento del método
Una vez depositada la muestra en el pocillo correspondiente, un anti-BhCG monoclonal

marcado con oro coloidal se solubiliza y se une a la hCG presente en la muestra. La
mezcla fluye por capilaridad a través de la tira. El complejo hCG-anticuerpo marcado se
une a un anti-BhCG monoclonal inmovilizado en la zona de reacción apareciendo una
banda de color. El anticuerpo marcado que no se ha unido genera una banda de color en
la zona control, indicando el correcto funcionamiento del ensayo.
Materiales
Reactivo (tiras o placas de reacción)

Sueros
Goteros
Conservación
Mantener las tiras o placas de reacción a una temperatura 2-30 ºC

Observe algún deterioro como roturas en el sobre, y presencia de líneas o manchas en la
tira antes de utilizar.
Muestras
Suero y orina recogido mediante procedimientos estándares. La orina no es necesario

filtrar ni centrifugar.
La hCG es estable en suero y orina durante 2 días a 2-8 ºC o hasta un mes si se congela
la muestra.

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Procedimiento
Dejar atemperar los materiales y las muestras a temperatura ambiente.

Mediante el gotero de muestra, depositar de 4-5 gotas de orina o suero en el pocillo de
muestra marcado como “S”.
Examinar los resultados después de 5-10 minutos de la adición de la muestra.
Lectura
Examinar la presencia de bandas coloreadas en las ventanas de la placa
Resultado positivo: aparecen dos bandas de color, una en la ventana de test “t” y la otra
en la ventana de control “C”.
Resultado negativo: aparece una banda de color únicamente en la ventana de control “C”;
lo que indica que el conjugado ha migrado correctamente a través de la zona de
reacción . En los sueros con elevada concentración de hCG, la banda en la ventana
control puede ser muy débil.
Resultado incorrecto: ausencia de bandas de color o presencia de una banda en la

ventana de test “T”, Si obtiene un resultado incorrecto volver a ensayar la muestra
utilizando una nueva placa.
NOTAS
Una orina diluida puede originar resultados negativos. Si a pesar del resultado negativo
se sospecha embarazo, es conveniente repetir la prueba 48 horas después utilizando
la primera orina de la mañana.
La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas. Se recomienda trabajar por
encima de los 10ºC.
Las lecturas efectuadas después de 10 minutos pueden conducir a resultados erróneos.
7. TRIAGE CARDIAC (troponina I)

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El diagnóstico de infarto agudo de miocardio (IAM) en un paciente que presenta dolor

torácico resulta difícil en muchos casos. Los tres criterios principales señalados por la
Organización Mundial de la Salud para la distinción entre el dolor torácico asociado a IAM
y el dolor torácico debido a otros motivos no cardiacos son los siguientes: 1) anamnesis
del paciente acompañada de una exploración física, 2) datos electrocardiográficos y 3)
cambios en los marcadores de proteína sérica asociados al infarto de miocardio. Para
realizar un diagnóstico adecuado de IAM, deben cumplirse al menos dos de estos
criterios.
Con frecuencia, la exploración física no permite distinguir entre IAM y otras anomalías
cardiacas. Aunque el electrocardiograma resulta útil para el diagnóstico de IAM, sus
posibilidades son limitadas, ya que sólo conduce al diagnóstico en aproximadamente un
50% de los pacientes con IAM. Por lo general, la formación de ondas Q y las alteraciones
en el segmento ST (elevación o depresión) representan indicios de IAM. No obstante, los
resultados del electrocardiograma deben analizarse teniendo en cuenta la exploración
física y la historia clínica del paciente. El electrocardiograma puede parecer normal en un
principio aun cuando el paciente esté sufriendo realmente un IAM.
Los marcadores de proteínas sanguíneas desempeñan un papel importante en el
diagnóstico diferencial de IAM cuando otros indicadores puedan ser negativos o
cuestionables. Los marcadores utilizados en el diagnóstico del infarto de miocardio son:
creatina-cinasa (CK), la isoenzima MB de la creatina-cinasa (CK-MB), mioglobina y las
proteínas estructurales del complejo troponina, es decir, troponina T y troponina I.
Después de un IAM, la aparición de marcadores de proteínas en la sangre se produce a
consecuencia de la necrosis celular iniciada por un episodio isquémico. Las proteínas
presentes en concentraciones más altas y las más solubles son las que primero aparecen
en la sangre, por ejemplo, la mioglobina. Las proteínas estructurales y mitocondriales de
los miocitos aparecen más tarde, como por ejemplo la CK-MB y las proteínas del complejo
troponina, incluida la troponina I.
La mioglobina es una hemoproteína citoplasmática soluble, con un peso molecular de
aproximadamente 17 kDa, presente en las células musculares. Considerando su tamaño
relativamente pequeño, su alta concentración celular y su localización citoplasmática
La mioglobina se libera antes que otros marcadores cardíacos después de una necrosis o
una lesión celulares. Las concentraciones sanguíneas de mioglobina aumentan por
encima del intervalo de referencia en las dos primeras horas después de la lesión, y
alcanzan el máximo entre seis y ocho horas después de la aparición de los síntomas. La
mioglobina vuelve a concentraciones iniciales o normales entre 20 y 36 horas después de
la lesión tisular. La mioglobina está presente en todos los tipos de células musculares. Por
lo tanto, su presencia en la sangre no se asocia necesariamente a lesión miocárdica. Las
concentraciones sanguíneas de mioglobina pueden aumentar como resultado de distintas
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situaciones que producen lesión muscular. Entre ellas están traumatismos, isquemia,
cirugía, ejercicio y una serie de enfermedades musculares degenerativas. Con respecto a
esto, la mioglobina tiene su mayor valor en la exclusión del infarto de miocardio en las
primeras horas después del dolor torácico. Debido al rápido aumento de las
concentraciones sanguíneas de mioglobina, seguido por un aclaramiento moderadamente
sostenido, la utilidad de la mioglobina está limitada a las 2-30 horas siguientes a la lesión
tisular. No obstante, la mioglobina es particularmente útil cuando se conocen los
antecedentes clínicos del paciente.
La creatina-cinasa MB (CK-MB) es una enzima citosólica de 82000 dalton presente en
concentraciones altas en el miocardio. Esta isoenzima de creatina-cinasa se utiliza a
menudo en el diagnóstico de infarto agudo de miocardio. Por lo general, las
concentraciones de CK-MB suben por encima de lo normal entre las cuatro y las ocho
horas siguientes al infarto agudo de miocardio, alcanzan concentraciones máximas entre
las 12 y las 24 horas y vuelven a sus valores normales en aproximadamente tres días. La
CK-MB, como la mioglobina, no se localiza específicamente en el músculo cardíaco. Las
concentraciones en sangre de CK-MB pueden aumentar a consecuencia de un daño
muscular agudo o crónico, como podría ser el provocado por un ejercicio extenuante o un
traumatismo. Aun así, la determinación de la concentración sanguínea de CK-MB es muy
fiable para el diagnóstico y tratamiento de los pacientes con IAM.
Las proteínas contráctiles de la miofibrilla han visto aumentada su popularidad como
marcadores cardiacos específicos para infarto agudo de miocardio y daño miocárdico.
Entre ellas están dos proteínas específicas del complejo regulador de la contracción: la
troponina I y la troponina T. La troponina I y la troponina T aisladas del músculo cardíaco
tienen secuencias específicas de aminoácidos que permiten el desarrollo de anticuerpos
específicos antiproteínas cardíacas.
La secuencia de aminoácidos amino terminal del isotipo cardíaco de la troponina I tiene
31 residuos aminoacídicos que no están presentes en ninguno de los dos isotipos de la
troponina I del músculo esquelético. Por lo tanto, los inmunoanálisis específicos para la
troponina I cardíaca se utilizan en la evaluación de pacientes que se sospecha que han
sufrido un IAM. Las concentraciones sanguíneas de troponina I se elevan entre las 4 y las
8 horas siguientes a un IAM, alcanzan su máximo entre las 12 y las 16 horas, y
permanecen elevadas de 5 a 9 días después de la lesión miocárdica. Las concentraciones
de troponina I cardíaca aumentan principalmente debido al infarto de miocardio. No
obstante, el aumento de la concentración de troponina I cardiaca puede deberse también
a lesiones cardiacas de menor importancia, entre las que se incluyen las siguientes:
angina inestable, traumatismos cardiacos, transplantes cardiacos, intervenciones
quirúrgicas de revascularización coronaria, traumatismos físicos en el corazón,
insuficiencia cardiaca congestiva y otros factores que puedan afectar al miocardio.
Además, la troponina I cardíaca no parece elevarse como resultado de lesiones del
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músculo esquelético. Debido al aumento de la especificidad analítica y a la prolongada

duración de su elevación, la troponina I cardíaca se ha convertido en un importante
marcador en el diagnóstico y evaluación de los pacientes que se sospecha que han
sufrido un IAM. La cuantificación simultánea de las concentraciones de mioglobina, CK-
MB y troponina I cardíaca después de un IAM puede ser de gran ayuda para el médico en
el diagnóstico y tratamiento de los pacientes que se sospecha que han sufrido un IAM.
Según la literatura científica, las concentraciones de troponina I también proporcionan
información de pronóstico relacionada con el riesgo de futuros episodios cardiacos y
mortalidad en pacientes con síndrome coronario agudo. Más recientemente, se ha
demostrado que los análisis de varios marcadores, entre ellos troponina I, CK-MB y
mioglobina, ofrecen una mejor estratificación del riesgo que los de un solo marcador.
Fundamento del método
La prueba de encimas cardíacas Triage® Cardiac Panel de Alere es un dispositivo de

fluoroinmunoanálisis de un solo uso que se utiliza para determinar la concentración de
CK-MB, mioglobina y troponina en muestras de plasma o sangre completa con ácido
edético (EDTA) como anticoagulante.
El procedimiento de la prueba incluye la adición de varias gotas de una muestra de
sangre completa o plasma recogida con ácido edético (EDTA) en el orificio del dispositivo
de prueba. Tras la adición de la muestra, las células de sangre completa se separan del
plasma mediante un filtro situado en el dispositivo de prueba. La muestra reacciona con
conjugados de anticuerpos fluorescentes y pasa por el dispositivo de prueba por acción
capilar. Los complejos de cada conjugado de anticuerpo fluorescente se depositan en
zonas diferenciadas específicas para cada analito.
El dispositivo de prueba se introduce en el medidor Triage® de Alere (de aquí en
adelante, el medidor). El medidor se programa para realizar el análisis después de que la
muestra haya reaccionado con los reactivos en el dispositivo de prueba. El análisis se
basa en el nivel de fluorescencia detectado por el medidor en una zona de medición del
dispositivo de prueba. La concentración de analitos en la muestra es directamente
proporcional a la fluorescencia detectada. Los resultados se muestran en la pantalla del
medidor en un tiempo aproximado de 20 minutos desde la adición de la muestra. Todos
los resultados se almacenan en la memoria del medidor, por lo que se podrán imprimir y
visualizar cuando sea necesario.
Materiales

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El dispositivo de prueba contiene todos los reactivos necesarios para la cuantificación

simultánea de CK-MB, mioglobina y troponina I en muestras de plasma y sangre completa
a las que se ha añadido ácido edético (EDTA) como anticoagulante.
Muestras
Para realizar análisis con este producto se requieren muestras de sangre completa o
plasma venosos recogidas con ácido edético (EDTA) como anticoagulante. No se han
evaluado otros tipos de muestras de sangre, métodos de extracción ni anticoagulantes
Si utiliza sangre completa, analice la muestra antes de 4 horas de su obtención. Si no
pudiera completarse el análisis antes de 4 horas, el plasma debe separarse y
almacenarse a -20°C hasta que pueda analizarse.
Siempre que sea posible, evite utilizar muestras altamente hemolizadas. Si piensa que
una muestra está altamente hemolizada, deberá obtener otra muestra para la prueba.
Procedimiento
Calibración de lotes mediante el CODE CHIP™ del reactivo
Al abrir un lote nuevo de dispositivos de prueba, debe transferirse la información sobre
calibración y caducidad de ese lote de tarjetas al medidor antes del análisis del paciente.
Utilice el CODE CHIP™ del reactivo suministrado con el lote nuevo de dispositivos de
prueba para transferir la información al medidor.

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Hágalo una vez con cada nuevo lote de dispositivos de prueba.

1. En la pantalla principal, escoja Instalar nuevo Code Chip. Pulse Intro.
2. Inserte el CODE CHIP™ del reactivo en la esquina frontal inferior izquierda del medidor
y siga las indicaciones que aparecen en pantalla.
3. Cuando haya terminado la transferencia de datos, retire el CODE CHIP™ del reactivo
del medidor.
4. Vuelva a colocar el CODE CHIP™ del reactivo en su envase original para guardarlo.
Análisis de muestras de pacientes
Notas de procedimiento
• Realice la prueba del dispositivo de CC cada día que se lleven a cabo pruebas de
pacientes..
• Antes del análisis, las muestras de plasma congelado y las de sangre completa o
plasma refrigeradas deben reservarse hasta que hayan alcanzado la temperatura
ambiente y mezclarse bien.
• Mezcle las muestras de sangre completa invirtiendo suavemente el tubo varias
veces.
• Mezcle las muestras de plasma por completo agitándolas o invirtiéndolas.
PASO 1 - Adición de la muestra de paciente
1. Abra la bolsa y rotule el dispositivo de prueba con el número de identificación del
paciente.
2. Coloque el dispositivo de prueba en una superficie horizontal lisa.
3. Utilizando la pipeta de transferencia, oprima completamente el bulbo mayor (superior) e
introduzca la punta en la muestra.
4. Suelte la perilla lentamente. El cilindro de la pipeta de transferencia deberá llenarse por
completo y parte del líquido deberá entrar en la perilla de menor tamaño (inferior).
5. Introduzca la punta de la pipeta de transferencia en el orificio de la tarjeta y oprima por
completo el bulbo mayor. La totalidad del volumen del líquido del cilindro de la pipeta
de transferencia debería entrar en el puerto de muestreo. La muestra contenida en la
perilla de menor tamaño (inferior) no se expulsará.
6. Retire la punta de la pipeta de transferencia del puerto de muestreo y, a continuación,
suelte la perilla de mayor tamaño (superior).
7. Deseche la pipeta de transferencia.
8. Antes de mover el dispositivo de prueba, deje que la muestra se absorba por
completo.© 2012 Alere. Reservados todos los derechos. 7

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PASO 2 - Realización de la prueba

1. En la pantalla principal, escoja Ejecutar prueba y pulse Intro.
2. Seleccione Muestra de paciente y pulse Intro.
3. Introduzca el número de identificación del paciente y pulse Intro.
4. Confirme que el número introducido es correcto seleccionando Confirmar ID del
paciente y pulsando Intro. Si el número no fue introducido correctamente, seleccione
Corregir ID del paciente, pulse Intro y repita el paso anterior.
5. Sujetando el dispositivo de prueba por los bordes, introdúzcalo en el medidor y pulse
Intro. Los resultados se mostrarán cuando el análisis haya finalizado.
Nota: el dispositivo de prueba debe introducirse en el medidor en los 30 minutos
siguientes a la adición de la muestra del paciente. Un retraso de más de 30 minutos
podría producir resultados incorrectos y que éstos aparezcan sombreados en negro en la
copia impresa.
PASO 3 - Lectura de los resultados
1. Los resultados se imprimen pulsando el botón Print.
2. Deseche el dispositivo de prueba después de que el medidor lo expulse.
3. Un resultado sin lectura indica que el resultado no es válido y que debería repetirse la
prueba
4. Se trascriben al software datalab.
Valores de referencia
CK-MB <4,3 ng/ml

Mioglobina <107 ng/ml
Troponina I <0,05 ng/ml <0,05 ng/ml <0,05 ng/ml
8. VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA I Y II (VIH I – II)
Prueba inmunocromatografica para la detección cualitativa de anticuerpos de todos los

isótopos (Ig G, Ig M, Ig A) específicos para HIV 1 y HIV 2 simultáneamente, en suero,
plasma o sangre total humana.
PRINCIPIO
La prueba contiene una tira membrana, que está prerecubierta con antígeno de captura
recombinante HIV-1 (gp41 y p24) en la región de la banda de prueba y con el anfígeno de
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captura HIV-2 recombinante (gp36) en la región 2 de la banda de prueba,

respectivamente.
El antígeno HIV 1/2 recombinante (gp41, p24 y gp 36), con el conjugado coloidal dorado y
la muestra de suero se desplazan a lo largo de la membrana cromatograficamente hasta
llegar a la región de prueba (T) y forman una línea visible del complejo antígeno-
anticuerpo- anfígeno complejo coloidal dorado con un alto grado de sensibilidad y
especificidad.
MUESTRA
1. Sangre total
 Recolectar la sangre total en un tubo de recolección (utilizando el

anticoagulante adecuado como heparina, EDTA, o Citrato de Sodio) por
punción venosa.
 Si las muestras no se someten de inmediato a prueba deberán refrigerarse
a 2 – 8 ºC.
 Cuando están almacenadas de 2 – 8 ºC, las muestras de sangre deben ser
usadas hasta por 3 días.
 Para períodos de almacenamiento mayores de 3 días, se recomienda la
congelación. Las muestras deben alcanzar temperatura ambiente (1-30 ºC)
antes de uso.
 El uso de muestras de sangre almacenadas por periodos largos de tiempo
mayores a 3 días pueden causar reacción no específica.
2. Plasma o suero
 (Plasma) Recolectar la sangre total en un tubo de recolección (utilizando el

punción venosa y luego centrifugar la sangre para obtener plasma.
 (Suero) Recolectar la sangre total en un tubo de recolección (que NO contenga
anticoagulantes como heparina, EDTA o Citrato de Sodio) por punción venosa,
dejar que la sangre coagule y luego centrifugue la sangre para obtener la
muestra de suero sobrenadante.
 Si las muestras de plasma o suero no son analizadas inmediatamente, deben
ser refrigeradas de 2-8 ºC
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 Las muestras de suero o plasma que contienen precipitado pueden arrojar

resultados de prueba inconsistentes. Estas muestras deben ser aclaradas
antes del análisis.
PROCEDIMIENTO
1. Retirar el dispositivo de prueba de la bolsa que contiene el papel de aluminio y

colocarla sobre una superficie plana y seca.
2. (Usando una pipeta capilar) Adicionar 20 ul de la muestra de sangre extraída dentro
del pozo de muestra (S) o usando una micropipeta agregar 10 ul de muestra de
plasma o suero dentro del pozo de muestra (S).
3. Agregar 4 gotas (aproximadamente 120 ul) de diluyente de ensayo dentro del pozo
de muestra (S).
4. En la medida en que empieza la prueba a funcionar, se observará que el color
púrpura se desplaza a través de la ventana de resultados en el centro del dispositivo
de prueba.
5. Interpretar los resultados de prueba al cabo de 5-20 minutos.
Precaución: no hacer ninguna interpretación después de 20 minutos. Lecturas muy

tardías pueden arrojar resultados falsos.
INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA
1. Tan pronto como empiece a funcionar el kit de prueba, se observará una banda de
color en la sección izquierda de la ventana de resultados que muestra que la
prueba está funcionando debidamente. Esta banda se denomina “línea control”.
2. Las bandas de color aparecerán en la mitad y sección derecha de la ventana de
resultados. Estas bandas son la línea de prueba 2 y línea 1 (2,1)
Resultado negativo:
La presencia de una banda de control (C) dentro de la ventana de resultados indicativos
de un resultado negativo.
Resultado positivo:
1. La presencia de dos líneas tanto línea control (C) y la línea de prueba 1 (1) dentro
de la ventana de resultados indica un resultado positivo para HIV-1.
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2. La presencia de dos líneas tanto línea control (C) y la línea de prueba 2 (2) entro
de la ventana de resultados indica un resultado positivo para HIV-2.
3. La presencia de tres líneas tanto línea control (C), la línea de prueba 1(1) y la línea
de prueba 2 (2) dentro de la ventana de resultados indica un resultado positivo
para HIV-1 y/o HIV-2.
-
Si la intensidad del color de la línea de prueba 1 es más oscura que la
línea de prueba 2, este resultado se puede interpretar como positivo
para HIV-1.
- Si la intensidad del color de la línea de prueba 2 es mas oscura que la
línea de prueba 1, este resultado se puede interpretar como positivo
para HIV-2.
IMPORTANTE: Todo resultado positivo deberá ser confirmado con el Laboratorio de
Referencia antes de su reporte.
Precaución: aunque un resultado positivo para HIV-1 y HIV-2 en un paciente es un

Caso raro, es posible debido a una homología en la secuencia de aminoácidos entre
HIV-1 y HIV-2.Para determinar el diagnóstico del tipo de virus o diagnóstico de Co-
Infección con exactitud, se debe realizar una prueba confirmatoria como Western
Blot.
Resultados no válidos:
La ausencia de la línea de control (C) dentro de la ventana después de realizar la prueba,
el resultado se considerará como no válido. Es posible que no se hayan puesto en
práctica las instrucciones correctamente, o que la prueba se hubiese deteriorado.
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
1. Aun cuando un resultado positivo indique infección con virus HIV1 o HIV2, se
puede hacer un diagnóstico de SIDA solo en forma clínica, es decir si el individuo
satisface la definición de caso para el SIDA según criterio de los centros para el
control de la enfermedad. Para muestras con resultados positivos en repetidas
oportunidades, deben realizarse pruebas complementarias más específicas.
2. La prueba inmunocromatográfica por si sola no se puede utilizar para diagnosticar
SIDA incluso si hay presencia de anticuerpos contra HIV1/HIV2 en la muestra del
paciente.

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3. Un resultado negativo en un momento dado no descarta la posibilidad de infección

por HIV1/HIV2. La muestra puede contener niveles bajos de anticuerpos para HIV-
1 y/o HIV-2.
4.2. ANTIGENO DE SUPERFICIE DE HEPATITIS B
Prueba inmunocromatografica para la detección cualitativa de la presencia de Antígeno de

superficie de la Hepatitis B en suero, plasma.
PRINCIPIO
Es un inmunoensayo cualitativo de membrana para la detección de HBsAg en suero o

plasma. La membrana precubierta por Anticuerpos anti- HBsAg en la región de la banda
de la prueba. Durante el examen la muetra reacciona con la partícula cubierta con
anticuerpos anti- HBsAg. La mezcla migra a lo largo de la membrana
cromatográficamente por acción capilar para reaccionar con los anticuerpos anti- HBsAg
en la membrana generando una línea de color. La presencia en la región de la banda del
examen indica un resultado positivo, mientras su ausencia indica un resultado negativo.
MUESTRA
3. Plasma o suero


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PROCEDIMIENTO
6. Permita que la muestra alcance la temperatura ambiente antes del ensayo.

7. Extraiga el material (cassette y Gotero) del empaque de aluminio. Identifíquelo de
acuerdo con el número consecutivo asignado y las iníciales del Nombre y el Apellido.
8. Coloque 1 gota (45-55ul) en el orificio absorbente del cassette. Inmediatamente
adiciones 2 gotas (35-50 ul) del diluyente en el orificio absorbente del cassette.
9. El resultado debe ser leído a los 15 minutos. NO interprete resultados después de 20
minutos
Resultado negativo:
Resultado positivo:
La presencia de dos líneas tanto línea control (C) y la línea de prueba (T) dentro de la
ventana de resultados indica que se ha detectado una concentración mayor o igual a 0.5
ng/dl de Antígeno de superficie de Hepatitis B en la muestra.

El dispositivo de detección de Hepatitis B Antígenos de superficie, indica únicamente la
presencia de Antígeno de superficie en la muestra y no debe ser usado como único
diagnóstico, todos los resultados deben ser valorados contra la información clínica y con
criterio médico. Son indispensables otras pruebas confirmatorias.

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Si el resultadlo es negativo y los síntomas clínicos persisten se recomienda confirmar con

otros métodos.
4.3. ANTICUERPOS HEPATITIS C
Prueba inmunocromatografica para la detección cualitativa de anticuerpos específicos

para Virus de la Hepatitis C, en suero, plasma o sangre total humana.
PRINCIPIO
La prueba es una prueba inmunocromatográfica de Ag de flujo lateral doble. La pureba

consta de :
Un conjugado de color borgoña, esta almohadilla contiene
Ag recombinante s de HVC conjugados con oro coloidal e IgG de conejo conjugados con
oro.
Tira de nitrocelulosa que contiene una banda de prueba T y un control C. La banda T
cubierta con AG del HCV recombinante y la banda C es precubierta con AC de cabra Anti
IgG de conejo. Al colocar el volumen adecuado de muestra en el pocillo el cassette la
muestra migra por capilaridad. Los Ac IGG, IgM, IgA frente al HCV, si están presentes en
la muestras se unirán a los conjugados de HCV, formando una banda en la zona de
prueba T, indicando que el resultado es positivo. La ausencia de esta banda me indica
que el resultado es Negativo. La prueba tiene un control interno que debe aparecer para
que la prueba sea válida.
MUESTRA
4. Sangre total
 Recolectar la sangre total en un tubo de recolección (utilizando el

punción venosa.

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 Si las muestras no se someten de inmediato a prueba deberán refrigerarse

a 2 – 8 ºC.
 Cuando están almacenadas de 2 – 8 ºC, las muestras de sangre deben ser
usadas hasta por 3 días.
 Para períodos de almacenamiento mayores de 3 días, se recomienda la
congelación. Las muestras deben alcanzar temperatura ambiente (1-30 ºC)
antes de uso.
 El uso de muestras de sangre almacenadas por periodos largos de tiempo
mayores a 3 días pueden causar reacción no específica.
5. Plasma o suero

PROCEDIMIENTO
-Permita que la muestra alcance la temperatura ambiente antes del ensayo.

-Extraiga el material (cassette y Gotero) del empaque de aluminio. Identifíquelo de
acuerdo con el número consecutivo asignado y las iniciales del Nombre y el Apellido.
-Coloque 1 gota (45-55ul) en el orificio absorbente del cassette. Inmediatamente adiciones
2 gotas (35-50 ul) del diluyente en el orificio absorbente del cassette.
-El resultado debe ser leído a los 15 minutos. NO interprete resultados después de este
tiempo.

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Resultado negativo:
Resultado positivo:
La presencia de dos líneas tanto línea control (C) y la línea de prueba (T) dentro de la
ventana de resultados indica un resultado positivo para Anticuerpo contra la Hepatitis C
en la muestra

El dispositivo de detección de Anti HCV, indica únicamente la presencia de anticuerpos
anti HCV y no debe ser usado como único diagnóstico de la infección viral por hepatitis C,
todos los resultados deben ser valorados contra la información clínica y con criterio
médico.
Si el resultadlo es negativo y los síntomas clínicos persisten se recomienda confirmar con

otros métodos.


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Versión Fecha de Aprobación Cambio Responsable

2 8 NOVIEMBRE DE 2018 ACTUALIZACIÒN AZIRYS

3 24 ABRIL DE 2019 ACUALIZACION ANGELA ORJUELA

4 10 NOVIEMBRE DE ACTUALIZACION KAREN RINCON

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Ofrecer al médico resultados confiables y oportunos que sean de ayuda en el diagnóstico

Este Procedimiento se inicia cuando se verifican las muestras en el área de inmunología

La bacterióloga es la encargada de llevar a cabo el control y desarrollo de las actividades.

5.1. SEROLOGIA VDRL

Los anticuerpos producidos en respuesta a la invasión del cuerpo por el Treponema

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sífilis. Sin embargo, el título de la reagina se correlaciona con el número y extensión de

La reagina no es un anticuerpo específico para el T. Padillum, sino un anticuerpo para

Los anticuerpos comienzan a aparecer por lo general de 4 a 6 semanas después de la

Principio del Método.

En la prueba del V.D.R.L. se utilizan antígenos no treponémicos. Las reacciones son de

Sueros humanos de pacientes sospechosos de haber sufrido una infección por T.

Agitador de velocidad variable, graduado a 180 RPM.

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Placa de vidrio transparente

Procedimiento para suero o plasma

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Ocasionalmente puede presentarse el fenómeno de pro- zona. Este fenómeno se

Si la prueba da reactiva en las diluciones posteriores debe informarse como reactiva,

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Suero sin Diluciones

R RD N N N N Reactivos sin diluir ó 1 Dils

Procedimiento Cualitativo para LCR

Limitaciones del Método.

La prueba se supone es positiva en caso de infección por T Pallidum y negativa en

Elaborado Revisado Aprobado

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6. PRUEBAS DE EMBARAZO (GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA BHCG

La gonadotrofina coriónica se encuentra en los fluidos corporales sólo durante el

La gonadotrofina coriónica humana es detectable en la orina y suero alrededor del día

Después de 16 semanas de gestación (o una vez terminado el primer trimestre de

Elaborado Revisado Aprobado

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Fundamento del método

Una vez depositada la muestra en el pocillo correspondiente, un anti-BhCG monoclonal

Reactivo (tiras o placas de reacción)

Mantener las tiras o placas de reacción a una temperatura 2-30 ºC

Suero y orina recogido mediante procedimientos estándares. La orina no es necesario

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Dejar atemperar los materiales y las muestras a temperatura ambiente.

Examinar la presencia de bandas coloreadas en las ventanas de la placa

Resultado incorrecto: ausencia de bandas de color o presencia de una banda en la

7. TRIAGE CARDIAC (troponina I)

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El diagnóstico de infarto agudo de miocardio (IAM) en un paciente que presenta dolor

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músculo esquelético. Debido al aumento de la especificidad analítica y a la prolongada

Fundamento del método

La prueba de encimas cardíacas Triage® Cardiac Panel de Alere es un dispositivo de