Introducción:
El laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para trabajar con microorganismos. Se
requiere un ambiente limpio y ordenado, así como una técnica aséptica.
Al manejar cualquier tipo de muestra se debe evitar que microorganismos presentes en el
ambiente se introduzcan en los cultivos contaminandolos, o que los microorganismos de la
muestra nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar siempre en condiciones de
esterilidad.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaución por su potencial patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que
deben ser esterilizados posteriormente.
Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura común sin
haber sido esterilizado previamente.
No debe olvidarse cumplir dos requisitos básicos: Restringir la presencia de
microorganismos en estudio a recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de
contaminarse uno mismo o a un compañero, y evitar que los microorganismos ambientales
(presentes en piel, pelo, aire, ropa, etc) contaminan nuestras muestras. El equipo necesario
para el crecimiento de microorganismos de la cavidad oral es:
1. Estufa de incubación. Este equipo sirve para cultivo microbiológico, usan
principalmente en el crecimiento y almacenamiento de cultivos a temperaturas
entre 35 y 37 °C
2. Refrigerador. Diseñados para tener un correcto almacenamiento y preservación de
materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos a una temperatura
fija de 4 °C.
3. Autoclave. Dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando
vapor de agua a alta presión y temperatura, inactiva todos los virus y bacterias,
aunque se ha llegado a saber que algunos microorganismos.
4. Jarra de anaerobiosis.Se usan para conseguir una atmósfera libre de oxígeno para el
cultivo de microorganismos anaerobios. Tiene unos tubos en donde se conectan a
una máquina que succiona el aire. La tapa tiene un catalizador para facilitar el
proceso.
5. Cuenta colonias.Aparato que mediante la iluminación de la placa y una lupa, nos
permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.
6. Espectrofotómetro. Aparato óptico que permite hacer atravesar una muestra
traslúcida por un haz de luz monocromática, la que luego es detectada y
cuantificada por un sensor y una electrónica adecuada, la frecuencia de la luz puede
ser variada ya que dispone de una red de difracción.
7. Microscopio Primo Star HD (Carl Zeiss).Microscopio digital óptico, con cámara HD
integrada. Se utiliza para observar una muestra y que la imagen de alta definición
que nos proporciona la cámara digital, pueda ser observada de diversos dispositivos
con posibilidad de conectarse a múltiples ipad. Para iniciar el uso de cualquier
microscopio, es indispensable realizar el ajuste de iluminación. La iluminación Köhler
elimina la iluminación dispareja en el campo de observación para que todas las
partes de la fuente de luz contribuyan a la iluminación del espécimen. Existen dos
tipos de iluminación Köhler, un método en el cual la luz es transmitida a través del
espécimertes del microscopio.
8. Micropipeta.Empleado para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos y
permitir su manejo en las distintas técnicas científicas, permite emplear distintos
líquidos sin tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de
plástico, que habitualmente son estériles.
Hipótesis:
El laboratorio debe de tener todos los materiales y muestras de cultivo descontaminados
antes de eliminarlos o de limpiarlos para volver a utilizar. Estará estrictamente prohibido
pipetear con la boca.Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de
la basura común sin haber sido esterilizado previamente. Deberá tener por lo menos un
frigorífico, se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como
microorganismos.
Generalmente están a una temperatura fija de 4ºC. Se usarán en todo momento gorros,
batas o uniformes especiales para la realización de las prácticas. Se usarán guantes para
todos los procedimientos, después se retirarán de forma aséptica y a continuación se
lavarán las manos.
Materiales
● Uniforme para la entrada al laboratorio de Microbiología: gorro, bata, pantalones y
zapatos cerrados.
-1 Pipeteador 1000μl
-1 Pipeteador 200μl
-4 tubos eppendorf
-Agua bidestilada en vaso de precipitado.
Procedimiento:
A. Recorrido del Laboratorio.
B.Práctica de pipeteo
1. Asegurarse de usar la pipeta correcta para el volumen que se necesita.
2. No tratar de colocar la micropipeta para volúmenes mayores que el máximo o
menores del cero, esto solo hará que se descalibre y se dañe.
3. Utilizar puntas desechables.
4. La temperatura de líquidos debe ser entre 15 y 40 °
5.
6. Al poner la punta, asegurarse que la punta sea del tipo correcto y que esté
correctamente ajustada.
7. Generalmente para P1000 las puntas son azules para P200 amarillas.
8. Para llenar la pipeta colocar el pulgar sobre el mando o émbolo pipeteado.
9. Oprimir el émbolo, se sentirá un punto de resistencia, oprimir hasta el primer tope y
colocar la punta dentro del líquido hasta una profundidad de 2-3 mm. De manera
lenta disminuir la presión del émbolo para permitir que se desplace hacia arriba.
10. Para la expulsión llevar la pipeta al envase donde se añadirá el líquido. Oprima el
émbolo hasta el primer tope y luego hasta el segundo tope a velocidad moderada
haciéndolo rápido para que no queden gotas en la pipeta.
Resultados:
Recorrido del Laboratorio: Conocimos todos los equipos con los que cuenta la facultad y la
función que tiene cada uno dentro del laboratorio de Ecología oral.
A continuación se explica cada uno de ellos:
1.Estufa de incubación:
Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura óptima de
crecimiento. (35-37)
http://www.grupo-selecta.com/notasdeaplicaciones/wp-content/uploads/2011/04/s4002628.jpg
2-Refrigerador: Se utiliza para conservar tanto materiales como microorganismos.
http://www.royerodistrilab.com/nelsonroyero/images/nelsonroyero/lab_industrial/Camara-climatica.jpg
3-Autoclave: Sirve para esterilizar el instrumental y los materiales de uso y de desecho del
laboratorio. Tiempo 15 libras de presión 121°C durante 15-20 min para el material y 2 horas
para desechos microbiológicos.
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/cc/Autoclave%281%29.JPG/220px-Autoclave%281%29.JPG
4-Jarra de anaerobiosis:
Se emplea para el desarrollo de los microorganismos anaerobios estrictos, microaerofílicos y
anaerobios facultativos.
http://b2x-files.clavei.es/vidrafoc/documentos/image385.jpg
5- Cuenta colonias:
Para poder realizar el conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC´s) en placas de
agar.
http://www.felisa.com.mx/2014/images/felisa/productos/cotador-de-colonias.jpg
6-Espectrofotómetro:
Sirve para cuantificar células suspendidas en medios líquidos o proteínas.
http://www.ansam.mx/wp-content/uploads/2014/04/Espectrofot%C3%B3metro-Programable-de-amplia-gama-acepta-hasta-200-curvas-
del-usuario-en-la-memoria.jpg
7.Micropipetas: Es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir
pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en distintas tecnicas analiticas,
existen 2 tipos de micropipetas; unicanal y multicanal.
https://www.laboratorioescolar.com/productos/big/MICROPIPETA-1000-5000ul-VOLUMEN-VARIABLE-605714.jpg
Resultados del pipeteo:
A los cuatro equipos que conforman nuestra fila se nos dio una micropipeta con la cual
teníamos que medir cierta cantidad de agua destilada para después vaciarla en un tubo
eppendorf . El agua tenía que quedar con los microlitros exactos que nos indicó la Doctora,
para que después cuando comparamos el agua con los demás integrantes de los otros
equipos diera como resultado la misma medida, ya que si lo hacíamos correctamente no
debía haber ninguna variación.
Discusión de resultados
La micropipeta que utilizamos para esta práctica fue una micropipeta automática que utiliza
una puntilla y sirve para medir volúmenes demasiado pequeños, esto con solo ingresar la
cantidad a pipetear y apretar un lóbulo que absorbe el líquido.
Cada alumno aprendió a manejar las pipetas de laboratorio ya que se utilizaron tres pipetas
de diferente graduación y capacidad, esto con la finalidad de medir en volúmenes llevando a
cabo la técnica correcta de pipeteo.
El alumno debió utilizar su destreza al realizar el pipeteo y desenvolverse de la mejor
manera posible como equipo e individualmente, ya que las parejas debían tener la misma
cantidad de agua asignada por el docente y si no era así no era correcto. La práctica ayudó a
utilizar correctamente un material del laboratorio con el que trabajaremos con frecuencia
en las próximas prácticas del Módulo.
Referencias
-Prácticas de microbiología [Internet] Consultado el 23 de septiembre del 2017 Disponible en:
http://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf
-Microbiología General y Bucal [Internet] Consultado el 23 de septiembre del 2017. Disponible en:
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/practica1.html
-Equipos de laboratorio de Colombia. [Internet] Consultado el 23 de septiembre del 2017. Disponible en:
http://equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1031
-Manual de Bioseguridad en el laboratorio. Tercera edición. [Internet] Consultado el 23 de septiembre del
2017. Disponible en: https://goo.gl/izBWvi
www.who.int/topics/medical_waste/manual_bioseguridad_laboratorio.pdf
