Metodos de Estudio de La Celula 1 Downloable

Metodos de estudio de la celula
33 pag.
Descargado por Arturo Montaño

(montanollanosarturo@gmail.com)
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ASOCIACION UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN
BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE MEDICINA HUMANA
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
PRE MEDICINA
MÉTODOS DE ESTUDIO DE
LA CÉLULA
Biología Celular y Molecular

UPSJB
MÉTODOS UTILIZADOS PARA EL ANÁLISIS
INSTRUMENTAL DE LA ESTRUCTURAS
BIOLOGICAS
- MICROSCOPIA
- CULTIVO CELULAR
-FRACCIONAMIENTO CELULAR.
-Tecnología ADN Recombinante

Cardiomiocito mus
estriado , citopatologia

OVOCITO HUMANO UN GLÓBULO ROJO
100 Micrómetros = 10-4 m 10 Micrómetros = 10-5 m

1 diez milésima de metro 1 cien milésima de metro
ÁTOMO DE HIDRÓGENO
VIRUS
1OO Nanómetros = 10-7 m
1 diez millonésima de metro
1 Angstrom = 10-10 m
1 billonésima de metro
La microscopía es la técnica de producir imágenes visibles
de estructuras o detalles demasiado pequeños para ser
percibidos a simple vista.
la microscopía generalmente implica la difracción, reflexión
o refracción de radiación incidente en el sujeto de estudio.

• Ópticos o luminosos
- Campo Claro: λ de ondas luminosas, luz
visible, luz natural :
- Campo oscuro o Ultramicroscopía. Luz
dispersada a nivel de interfases. Lentes de
condensador están modificadas. El objeto brillante
en fondo oscuro
- Contraste de fases e Interferencia : se
producen retrasos en las radiaciones que atraviesan el objeto y
aparece en tonos de gris que dependen del producto entre el
espesor del objeto y las diferencias entre los Índices de
refracción del objeto y del medio
células vivientes/tejidos . M. Interferencia efecto
notable del relieve en la estructura de la célula viviente

-Fluorescencia Descubierto en 1908 por Köhler y
Siedentopf, y se basa en que una sustancia natural en las células o
un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz
de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayos
luminosos

Microscopio Electrónico
Transmisión
Barrido

Preparación de las muestras
El proceso comienza con el tejido altamente
hidratado y termina con el tejido virtualmente libre de
agua y preservado en una matriz de resina.
Existen muchos caminos para la preparación de
tejidos para Microcopia electrónica de transmisión,
pero los métodos siguen básicamente ocho pasos:
1. Fijación primaria:
2. 2. Fijación secundaria

HERRAMIENTAS DE LA NANOTECNOLOGIA
Los microscopios ven cosas a través de lo que sienten con una punta
muy afilada que está puesta en algo que parece un alfiler.

Aplicaciones del cultivo celular.
• Actividad intracelular. Mecanismos implicados en los diferentes
procesos intracelulares, como transcripción de DNA, síntesis de
proteínas, metabolismo energético.
Flujo intracelular. Movimientos de sustancias y señales asociadas a los
diferentes procesos fisiológicos, como ensamblaje y desensamblaje
de componentes intracelulares, movimientos del RNA : núcleo-
citoplasma, movimiento de proteínas.
•Ecología celular. Estudio de las condiciones ambientales responsables

del mantenimiento de la funcionalidad celular, de su diferenciación,
cinética de la población celular.
•Interacciones celulares. Procesos de inducción embrionaria,

cooperación metabólica, inhibición por contacto o por adhesión,
interacciones célula-célula.

• LINEAS CELULARES
Estos son cultivos que se establecen a partir de la
selección de un clon especifico proveniente de un
cultivo primario tripsinado. De uso mas corriente son
las líneas establecidas las cuales se han adaptado
a un crecimiento prolongado in vitro por
transformación cancerosa. Estas células son
escogidas de acuerdo a características deseadas y
son mantenidas por un numero indeterminado de
generaciones e inclusive se les suele almacenar a
temperaturas de nitrógeno liquido
Una de las primeras líneas celulares humanas,
obtenida de Henrietta Lacks, quien falleció de cancer de útero a partir de cuál se
obtuvieron estas células. El cultivo de células HELA que se muestra en la imagen fue
teñido con Hoescht que se une al ADN coloreando de azul el nucleo

FRACCIONAMIENTO CELULAR

El fraccionamiento celular es un conjunto de
métodos y técnicas que tienen por objetivo
obtener fracciones puras o enriquecidas de
un determinado componente celular, ya sea
éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos,
peroxisomas, etc.) una fracción de
membrana (membrana total, plasmática,
dominio basolateral, etc. complejos)
multiproteicos (citoesqueleto, poros
nucleares, etc), etc.
Tipos de centrifugación
• Centrifugación diferencial
Se basa en la diferencia de densidad entre las

partículas en suspensión y el medio que las
contiene, de modo que al aplicar un campo
centrifugo estas precipiten. Una muestra en la que
existen varios tipos de partículas, puede separarse
por centrifugaciones sucesivas ya que las partículas
mayores y/o más densas precipitaran primero y
cuando el sobrenadante de esta primera etapa es
recentrifugado en condiciones de más tiempo y
aceleración sedimentaran las nuevas partículas
más densas presentes, y así sucesivamente.
obteniéndose sedimentos o fracciones de partículas
de diferente tamaño y/o densidad.
BIOTECNOLOGÍA
MÉTODOS MOLECULARES
Es la aplicación de la ciencia y la ingeniería

en el uso directo o indirecto de organismos
vivos o partes de ellos, en sus formas
naturales o modificadas para la producción
de bienes y servicios o para la mejora de
procesos industriales.
Biotecnología
• El uso de microorganismos, células o
componentes celulares para hacer un
producto:
– Comida
– Vacunas
– Antibióticos
– Vitaminas
– Biodegradación
– Cruces selectivos
Recombinant DNA
• Combining
DNA from
two different
organisms

TÉCNICAS DEL ADN
RECOMBINANTE (ADNr)
TÉCNICA PROPÓSITO
Enzimas de Restricción Cortan ADN en puntos específicos, hacen fragmentos de ADN
ADN Ligasa Une fragmentos de ADN
Vectores Virus o fagos: llevan ADN a las células y aseguran replicación
Plasmidos Clase común de vector
Marcadores Genéticos Identifican a las células que han sido transformadas
PCR Amplifica la cantidad de ADN de muestras pequeñas
ADNc Hace una copia de ADN de ARN mensajero
Sondas de ADN Para identificar y marcar una pieza de ADN conteniendo cierta
secuencia
Síntesis Génica Para hacer un gen de una base de datos
Gel Electroforésis Para separar fragmentos de ADN
Secuenciación de ADN Para leer la secuencia de bases de un segmento de ADN
ENZIMAS PARA LA
MANIPULACIÓN DEL ADN
• Enzimas
de restricción
• ADN polimerasas
• ARN polimerasas
• Nucleasa
• ADN ligasa
• Kinasa
• Fosfatasa
• Transcriptasa reversa
Especificidad de los cortes
• Las enzimas de restricción cortan el

ADN en una secuencia específica
• El número de cortes hecho en el ADN

dependerá del número de veces en que
la secuencia de reconocimiento existe
en ese genoma
Vector de clonación
Hospedador: bacteria, levadura, células de

mamíferos.
Principales metas de la
biotecnología del ADN
recombinante
• Entender mejor los procesos de la herencia
y su expresión genética.
• Proporcionar un avance en el conocimiento y
tratamiento de diversas enfermedades,
especialmente enfermedades genéticas.
• Generar beneficios económicos, creando
plantas y animales mejorados y para la
producción eficaz de moléculas biológicas
valiosas.

INGIENERIA GENÉTICA
• Manipulación de un organismo
para:
–Alterar microbios, plantas y
animales para nuestros
beneficio.
–Corregir defectos genéticos en
las enfermedades humanas
TERAPIA GÉNICA UN
EJEMPLO

Hipercolesterolemia Familiar
• Un gen codifica una proteina que sirve
como receptor celular para LDL
• Dos alelos normales para el gen
mantienen bajos los niveles sanguíneos
de LDLs.
• Dos alelos mutados producen niveles de
colesterol anormalmente altos y
enfermedad del corazón.
Vector de
transferencia génica

Resultados de la terapia génica
• Las células modificadas vivieron en el hígado

de la mujer
• Los niveles sanguíneos de LDLs bajaron en
un 20%
• No presentó evidencias de aterosclerosis
• Los niveles de colesterol permanecieron altos
• Falta todavía saber si el procedimiento
prolongará su vida. Descargado por Arturo Montaño

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Se basa en la diferencia de densidad entre las

Es la aplicación de la ciencia y la ingeniería

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• Las enzimas de restricción cortan el

• El número de cortes hecho en el ADN

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