Biodeterioro y biodegradación internacional 65 (2011) 130 mi 134

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Biodeterioro y biodegradación internacional

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Mejora de la biodegradación de hidrocarburos totales de petróleo en lodos oleosos por

un modi fi estrategia de bioacumulación ed

Ragheb A. Tahhan una , * * , Tarek G. Ammari si , Saba J. Goussous C , Hend I. Al-Shdaifat una
una Departamento de Recursos Naturales y Medio Ambiente, Universidad de Ciencia y Tecnología de Jordania, apartado de correos 3030, Irbid 22110, Jordania
si Departamento de Recursos Hídricos y Gestión Ambiental, Facultad de Tecnología Agrícola, Al-Balqa ' Universidad Aplicada, Salt, Jordania
C Departamento de Producción Vegetal, Universidad de Ciencia y Tecnología de Jordania, apartado de correos 3030, Irbid 22110, Jordania

información del artículo resumen

Historia del articulo: En este estudio se investigó el efecto de la inoculación sucesiva con bacterias que degradan hidrocarburos en la dinámica de la degradación de
Recibido el 25 de julio de 2010 Recibido los hidrocarburos de petróleo en el suelo. El lodo aceitoso se utilizó como fuente de contaminantes de hidrocarburos mixtos. Se construyeron dos
en forma revisada el 27 de septiembre de
consorcios bacterianos compuestos por alcanos y degradadores de hidrocarburos aromáticos policíclicos a partir de bacterias aisladas del suelo y
2010
lodos oleosos. Estos consorcios se aplicaron a microcosmos incubados en una dosis al inicio de la incubación o en dos dosis al comienzo y al día
Aceptado el 27 de septiembre de 2010 Disponible en línea
62 del período de incubación, que duró 198 días. Durante este período, la mineralización de carbono se evaluó por respirometría, mientras que los
el 18 de noviembre de 2010
hidrocarburos totales de petróleo y sus fracciones se evaluaron gravimétricamente por extracción del suelo y fraccionamiento. La dosificación de
los consorcios bacterianos dio como resultado un aumento de más del 30% en la eliminación general de los hidrocarburos totales de petróleo del
Palabras claves:
suelo. Mientras que la eliminación de alcanos solo se mejoró ligeramente, la eliminación de la fracción de hidrocarburos asfálticos y aromáticos
Biodegradación
Bioaugmentación Lodos fue significativa fi mejorado notablemente mediante la adición del segundo consorcio. Los compuestos polares (resinas) se enriquecieron solo como
aceitosos TPH resultado de la utilización de compuestos aromáticos y asfaltenos. No obstante, su concentración disminuyó nuevamente al nivel original al final
del período de incubación.
Fracciones de TPH

2010 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción
La extracción generalizada, re fi El procesamiento, el transporte y la utilización del petróleo son
un riesgo cada vez mayor de contaminación del suelo con hidrocarburos derivados del petróleo. Los
compuestos de hidrocarburos presentes en el lodo aceitoso se heredan de los hidrocarburos de
petróleo. Sin embargo, el lodo oleoso se somete a varios procesos de envejecimiento e intemperie
que eventualmente conducen a un mayor peso molecular promedio y cambios en las relaciones de
fracción de hidrocarburos de petróleo (TPH) totales. La biorremediación de suelos contaminados con
hidrocarburos de petróleo es ahora una tecnología bien desarrollada, particularmente como resultado
de una mejor comprensión de la naturaleza y el comportamiento de los microorganismos que
degradan los hidrocarburos. Las bacterias que degradan los hidrocarburos están presentes en casi
todos los suelos en fracciones que alcanzan el 50% o más del total de bacterias heterotróficas ( Pinholt
et al., 1979 ) Sin embargo, en suelos con contaminación crónica por hidrocarburos, las bacterias que
se degradan con hidrocarburos pueden estar en el mismo orden que las bacterias heterotróficas
totales ( Zucchi et al., 2003; Tahhan y Abu Atieh, 2009 ) La capacidad de los microorganismos
indígenas para utilizar hidrocarburos de petróleo y sus fracciones está bien documentada ( Frankenberger
1992 ) Sin embargo, en la mayoría de los estudios que tratan sobre la biodegradación de los
hidrocarburos de petróleo en el suelo utilizando microorganismos autóctonos del suelo, la eliminación
del contaminante está lejos de completarse. Además de los factores abióticos que generalmente no
son propicios para la eliminación completa de TPH, la comunidad microbiana existente generalmente
no posee el potencial genético para cubrir la utilización de todo el espectro de compuestos que
forman TPH. Por ejemplo, Cho y col. (1997) notó un relativo enriquecimiento de aromáticos, asfaltenos
y resinas sobre alcanos en ensayos de biorremediación de petróleo crudo en el suelo. Atribuyeron
eso a pequeñas poblaciones de degradadores aromáticos en ese suelo. Esa es probablemente la
razón por la cual la bioacumulación ayuda a mejorar la bioremediación de TPH en muchos casos. La
bioaugmentación generalmente implica la introducción de bacterias especializadas con potencial
genético que utilizarían un espectro más amplio de compuestos de TPH, superando así la atenuación
natural y la bioestimulación en la degradación de la TPH ( Bento et al., 2005 )
La degradación microbiana de los hidrocarburos en el suelo procede en un patrón de sucesión
en el que los compuestos más simples, menos tóxicos, más biodisponibles y de alto rendimiento
energético se degradan antes que sus contrapartes. Por lo tanto, cuando se agrega al suelo una
fuente mixta de hidrocarburos, como lodo oleoso, los alcanos generalmente se degradan

** Autor correspondiente. Tel .: þ 962 2 7201000x22050; fax: þ 962 2 7201078. fi Primero, independientemente de la presencia de capacidades intrínsecas para degradar los HAP, por

Dirección de correo electrónico: tahhan@just.edu.jo (RA Tahhan). ejemplo. Cuando el stock de alcanos fácilmente degradable se pone

0964-8305 / $ mi ver asunto delantero 2010 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados. doi: 10.1016 /
j.ibiod.2010.09.007
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Agotada, la comunidad microbiana se desplaza para consumir otros compuestos, como los HAP. La tabla 1
Características del suelo utilizado en este estudio.
aparición de actividad genética para HAP ' la degradación (como la catecol dioxigenasa) al inicio del
proceso de remediación es una respuesta amicrobiana a la presencia de estos compuestos en lugar Textura Marga

de una prueba de degradación activa que causa una reducción tangible en su concentración ( Zucchi pH 8,13 (0,04) una
CE (mS m 1) 3,22 (0,23)
et al., 2003 ) Sin embargo, en una etapa posterior, y cuando las condiciones son conductoras, los
Carbón orgánico% 1.12 (0.17)
HAP ' El consumo procede activamente. En estudios que dependen de períodos cortos de incubación,
Nitrógeno total% 0,057 (0,02)
es raro que las fracciones más recalcitrantes como los asfaltenos y las resinas muestren signos Densidad aparente (g cm 3) 1,50 (0,03)
significativos. fi no puede reducirse, e incluso cuando se informan altas tasas de eliminación, tales THBC (ufc g 1 suelo) 6.11 10 7 ( 2.11 10 6)

fracciones no se contabilizaron en el presupuesto total de TPH ( Röling et al., 2002 ) HCDBC (ufc g 1 suelo) 7.73 10 5 ( 1.23 10 5)
Recuento de hongos (propágulo g 1 suelo) 3.58 10 6 ( 7.55 10 5)

una Los números entre paréntesis son las desviaciones estándar.

En este estudio, agregamos un consorcio bacteriano que degrada la HAP, que metaboliza
Carewas tomadas para evitar la corteza formada en la superficie del lodo aceitoso. El contenido de
compuestos que pertenecen a fracciones aromáticas y de asfaltenos, en una etapa del proceso de
humedad del lodo aceitoso se determinó secando al horno las muestras de lodo aceitoso durante la
degradación cuando la actividad microbiana para degradar dichos compuestos se expresa al máximo
noche a 105 ° C ( Nikitina et al., 2003 ) El contenido de humedad fue del 11,86%.
según el progreso natural de la degradación de la TPH modelo. El momento de la adición del
segundo consorcio se seleccionó cuidadosamente para producir la máxima biodegradación de las
Los TPH se extrajeron del lodo aceitoso. Se secaron al aire tres gramos de lodo aceitoso hasta
fracciones aromáticas y de asfaltenos con base en un estudio preliminar previo. El objetivo de este
un peso constante en la campana extractora para extracción con TPH. Se extrajeron
estudio fue investigar el ef fi Cacy de bioaugmentación sucesiva en la degradación de TPH en el
consecutivamente muestras triples de 1 g del lodo aceitoso secado al aire con 100 ml de hexano,
suelo.
diclorometano y cloroformo. Los tres extractos se agruparon y se secaron hasta un peso constante a
temperatura ambiente evaporando los disolventes en una campana extractora. Después de la
evaporación del solvente, la cantidad de TPH recuperada se determinó gravimétricamente ( Mishra et
al., 2001 ) El lodo aceitoso contenía 86.2% de TPH y 1.88% de residuos que estaban compuestos
2. Materiales y métodos
principalmente de partículas de suelo y sedimentos.

2.1. Recolección, preparación y caracterización de suelos.

Se usó una columna de cromatografía en gel de sílice para el fraccionamiento de TPH. Se usó
El suelo utilizado en este estudio se recogió del interior del petróleo. fi nery campus en Zarka,
una columna equipada con un disco de cerámica en la parte inferior y una llave de paso como
Jordania. Este suelo se recolectó de un área adyacente a lo que solía ser cuencas de recolección de
alojamiento para el gel de sílice. El gel de sílice se activó en el horno a 105ºC. C por 12 h. La columna
lodos oleosos. Sin embargo, las cuencas ' fl o aún contiene altos niveles de hidrocarburos. La muestra
se empaquetó con gel de sílice suspendido en hexano. TPH extraído (0.2 mi 0,5 g) se disolvió en norte-
de suelo contenía 357 mg kg. 1 hidrocarburos, que fue el resultado de una exposición accidental en
pentano para separar la fracción de asfaltenos, que es insoluble en norte- pentano Esta fracción fue
lugar de un vertido deliberado de hidrocarburos. El área de la cual se tomó la muestra no tenía
recolectada por fi filtrado
vegetación natural. La muestra de suelo se recogió de la siguiente manera: se recogió una capa
superficial de suelo (20 cm de profundidad) en bolsas de plástico. Una pequeña porción del suelo se
norte- pentano y la recogida de asfaltenos en el fi Papel de filtro. El restante fi Alícuota filtrada se
empaquetó en hielo para el análisis inmediato de las características microbiológicas. El suelo se llevó
mezcló con 3 g de gel de sílice y se cargó en la columna. Tres gramos de Na anhidro 2 ENTONCES 4 4 se
al laboratorio, se mezcló a fondo y se pasó a través de un tamiz de 6,3 mm para eliminar raíces
colocaron sobre la muestra para evitar la mezcla de la muestra con solventes. Fracciones alifáticas,
grandes y residuos de plantas. Esta preparación estaba destinada para su uso en el experimento de
aromáticas y NSO ( norte- fracciones solubles de pentano) se eluyeron sucesivamente con volúmenes
biodegradación. Sin embargo, para análisis físicos y químicos, el suelo se secó al aire y se pasó a
de 120 ml de hexano, benceno y cloroformo mi metanol (1: 1 vol: vol), respectivamente ( Dibble y
través de un tamiz de 2 mm ( Vasudevan y Rajaram, 2001 ) La materia orgánica del suelo fue
Bartha, 1979 ) Los diferentes volúmenes de elución se recogieron en vasos de precipitados
cuantitativa fi ed midiendo el carbono orgánico, utilizando el método Walkley Black ( Nelson y
separados y los solventes se volatilizaron a temperatura ambiente en la campana extractora. Las
Sommers, 1982 ) El pH se midió en una mezcla suelo: agua 1: 1 por métodos estándar de análisis de
fracciones se determinaron luego gravimétricamente. TPH estaba compuesto por: alcanos, 65.24
suelo ( Thomas, 1996 ) La textura del suelo se determinó por el método del hidrómetro ( Gee y Bauder,
1986 ) Los recuentos bacterianos heterotróficos totales (THBC) y los recuentos bacterianos
degradantes de hidrocarburos (HCDBC) en el suelo se determinaron mediante el método de
3,03%;
enchapado extendido ( Zubber, 1994 ) Para enumerar microorganismos heterotróficos, placas de agar
aromáticos, 14.88 1,55%; resinas, 7.66 2,41%; y asfaltenos,
R2A ( Margesin y Schinner, 2001 ) fueron usados. Las placas se incubaron durante 48 ha 28 C. Las
12,18 1,82%.
bacterias que utilizan hidrocarburos fueron cuanti fi ed en MSM ( Herman et al., 1997 ) placas de agar.
Las placas de MSM se extendieron con la dilución apropiada y luego se rociaron con lodo aceitoso
disuelto en éter dietílico como fuente de carbono. Las placas se incubaron durante dos semanas a 2.3. Aislamiento y caracterización de aislamientos bacterianos y construcción de
los 28 años. C. Todas las mediciones se realizaron por triplicado. Las características físicas, químicas consorcios bacterianos.
y biológicas se muestran en tabla 1 .
Se recogieron aislamientos bacterianos de fi nery suelo (RS), de lodos oleosos (OS), y de un
suelo de reserva natural boscosa en el área de Kufur Khal de Jordania (KS). Este último suelo está
cubierto por pinos y se descubrió que es una buena fuente de bacterias con la capacidad de
degradar los HAP. Se recolectó un total de 128 aislamientos capaces de crecer en placas MSM
suministradas con hexadecano o fenantreno como fuente de carbono. Para probar sus especi fi c
características del metabolismo de hidrocarburos, los aislamientos se cultivaron en caldo MSM
suministrado con 0.1% de hexadecano, octadecano, naftaleno, fenantreno, antraceno, pireno o lodo
aceitoso de la siguiente manera: octadecano, naftaleno, fenantreno y antraceno se disolvieron cada
uno en dietil éter y se agrega al fondo de un tubo esterilizado vacío para formar un gránulo después
2.2. Recolección y análisis de lodos oleosos. de evaporar el solvente. Se agregaron hexadecano y lodo oleoso sin éter dietílico.

La muestra de lodo aceitoso se recogió de un recipiente de recogida de lodo aceitoso dentro del
aceite. fi nery campus. La muestra fue recolectada a 50 mi Distancia de 100 cm desde el borde de la
cuenca.
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Tabla 2 la incubación þ C2 aplicado en el día 62 del período de incubación. Se preparó un grupo de 80

Identidades y pro metabólicos fi archivos de los aislados bacterianos seleccionados para construir los consorcios utilizados en el
microcosmos similares para el muestreo periódico para determinar el TPH residual y sus fracciones.
estudio.
Todos estos fueron inoculados con C1 al comienzo de la incubación, y 40 de ellos fueron inoculados
Identidad Fuente de carbono C16 una con C2 en el día 62 del período de incubación. Se prepararon otros 10 microcosmos que contienen

C18 Naph Phen Anth Pyr OS lodo aceitoso sin inoculación para el control periódico de la eliminación de TPH por microorganismos

Bacilo sp. RS8 þþþ si þþ mi mi mi mi þþ

autóctonos del suelo. El microcosmos individual se preparó de la siguiente manera: se mezclaron
Pseudomonas sp. RS3 þþþ þþþ þ þ mi mi þþ 100 g de tierra (secado al horno) con 2 g de lodo oleoso, equivalente a 17,96 g de TPH kg. 1 tierra, y
Micrococo sp. RS7 þþ þþ þ þ mi mi þþ se coloca en una jarra de 1,5 l. Se suministró agua al microcosmos para aumentar el contenido de
Pseudomonas sp. OS12 þþþ þþþ mi þ mi mi þþ
agua al 60% de la capacidad de retención de agua. Junto con el agua, se agregaron nitrato de
Pseudomonas sp. OS7 þþ þþ þ þ mi mi þþ
amonio y dihidrógeno fosfato de potasio para lograr una relación C: N: P de 100: 1: 1 ( Tahhan et al.,
Pseudomonas sp. KS8 þþ þ þþþ þþþ þ þ þþ
Consorcio 1 C þþþ þþþ þþþ þþþ þ þ þþþ En prensa ) El agua se controló gravimétricamente y se mantuvo durante el período de incubación. El
Consorcio 2 C þþ þþ þþþ þþþ þ þ þþ suelo dentro del microcosmos se volteó periódicamente para asegurar suf fi distribución de aire de
una C16: hexadecano, C18: octadecano, Naph: naftaleno, Phen: fenantreno, Anth: antraceno, Pyr: pireno, OS: lodo cient.
aceitoso.
si
: Sin aumento notable, þ: un aumento de 0.2 mi 0.4, þþ: un aumento de
0.4 0.4 mi 0.6, þþþ: un aumento de 0.6 o más en OD 400 de la cultura
C Consortium1 está compuesto por todos los aislamientos anteriores. Consortium2 está compuesto por

Pseudomonas sp. OS7 y Pseudomonas sp. KS8.

3. Resultados

debido a su naturaleza semi-líquida. Se añadió MSM a los tubos y se agitó durante 3 semanas para
alcanzar la solubilidad de equilibrio. Para la preparación del inoculu, cada aislado se cultivó en MSM
suministrado con glucosa al 1% durante la noche. Los cultivos se centrifugaron y se lavaron tres
veces con agua estéril y se resuspendieron en MSM a una concentración equivalente a OD 1. Los
tubos se inocularon con 1% (v / v) de la suspensión celular y se incubaron en un agitador giratorio a
200 rpm y 28ºC. C por un máximo de 4 semanas. La densidad óptica de los cultivos se registró en el
tiempo cero y se monitoreó durante el curso del crecimiento a 400 nm ( Al-Tahhan et al., 2000 )
Basado en su pro metabolismo fi Es decir, se seleccionaron seis aislamientos para construir el
consorcio 1 (C1). De ellos, se seleccionaron dos aislamientos para construir el consorcio 2 (C2). El
C2 estaba compuesto por los dos aislados con capacidad para utilizar HAP: los componentes
principales de las resinas y las fracciones de asfaltenos, que generalmente se degradan en una
etapa posterior del proceso de biodegradación. Los aislamientos elegidos para construir los
consorcios bacterianos se caracterizaron además por sus propiedades bioquímicas para
identificarlos ( Holt et al., 1994 ) Las identidades y actividades metabólicas de los aislados y los
consorcios construidos se muestran en Tabla 2 . Para preparar los consorcios degradantes para el
experimento de biodegradación, los miembros C1 se cultivaron en caldo MSM con 1% de
hexadecano, mientras que los miembros C2 se cultivaron en caldo MSM con fenantreno durante 4
días ( Rahman et al., 2002 ) Las células fueron cosechadas por centrifugación, lavadas dos veces con
agua estéril y resuspendidas a un fi número final de 10 7 7 células ml 1) Se usó una mezcla de 1 ml cada
uno de todos los miembros del consorcio.
2.4. Experimento de biodegradación
3.1. Mineralización de carbono y eliminación de TPH
Las pruebas de extracción de TPH del suelo mostraron una recuperación de más del 98% con
poco carbono proveniente de otros orígenes. La tasa y el grado de degradación de TPH se evaluaron
midiendo la producción de dióxido de carbono a lo largo del tiempo y el contenido de TPH en los
microcosmos hasta el final del período de incubación (198 días). Mientras que el HgCl 2-
el control tratado (esterilizado) no mostró mineralización de carbono, el tratamiento de control no
esterilizado mostró un CO pequeño y constante 2
evolución a lo largo del período de incubación debido al bajo contenido de carbono orgánico del
suelo. Al final del período de incubación, solo 310 mg C kg 1 el suelo había evolucionado en forma de
CO 2 ( Figura 1 una). Por otro lado, los tratamientos suministrados con lodo aceitoso mostraron
actividad activa de mineralización de carbono. El suministro de lodo aceitoso sin bioaugmentación
mostró la utilización de hidrocarburos por las poblaciones indígenas que utilizan hidrocarburos. La
utilización tomó un patrón sigmoidal ( r 2 ¼ 0,99) con una fase de retraso de aproximadamente 20 días
y una C acumulativa mi CO 2 evolución de 1.82 g C kg 1 suelo al final de la fase exponencial. La tasa de
mineralización durante el período de incubación fue
15,5 mg kg 1 dia del suelo 1)
La bioaugmentación con C1 al comienzo de la incubación contribuyó a un aumento en la tasa de
mineralización de carbono para
44.5 mg C kg 1 día 1 hasta el final de la fase exponencial tardía. Además, el período de adaptación
también se redujo (5 días). La adición de C2 al día 62 tuvo un significado fi No puede tener un efecto
positivo sobre la mineralización de hidrocarburos. Este efecto se manifestó como la aparición de una
segunda fase exponencial de CO 2 evolución a partir del día 82. De hecho, la adición de C2 en una
etapa posterior contribuyó a aumentar la actividad de mineralización de carbono y disminuir el
contenido de TPH en el suelo en más del 30% ( Figura 1 si).

La mineralización de carbono y la eliminación de TPH del suelo se realizaron en microcosmos

paralelos e idénticos. Para el ensayo de mineralización de carbono, 20 microcosmos con 5
tratamientos. Las 4 réplicas consistieron en 100 g de tierra (secado al horno) con la concentración
adecuada de lodo aceitoso, inóculo y nutrientes en un frasco sellado. El dióxido de carbono se
recogió periódicamente en álcali (NaOH) y el álcali se volvió a valorar con HCl ( Zibilski, 1994 ) Los
tratamientos incluyeron dos controles negativos: (1) suelo sin lodo aceitoso pero provisto de
nutrientes para evaluar la mineralización de la materia orgánica del suelo, y (2) suelo con lodo
aceitoso y nutrientes y 1% de HgCl 2 ( Chaineau et al., 1995 ) para tener en cuenta la mineralización
abiótica. Los tratamientos positivos fueron: (1) suelo þ lodo aceitoso þ nutrientes (control positivo sin
inoculación), (2) suelo þ lodo aceitoso þ
nutrientes þ C1 aplicado al comienzo de la incubación, y (3) suelo þ lodo aceitoso þ nutrientes þ C1
aplicado al comienzo de
3.2. Fracciones de TPH ' dinámica durante la biodegradación
Figura 2 muestra cambios en las cantidades de fracciones de TPH en el transcurso de la
incubación. En el tratamiento de control, la eliminación de alcanos comenzó después de 12 días
desde el inicio de la incubación, después de lo cual la eliminación asumió un patrón constante y lineal
hasta el día 120. La fracción total de alcanos eliminada durante todo el período de incubación fue
3,426 g kg 1 suelo. La eliminación aromática comenzó después de que la eliminación del alcano cesó
aproximadamente a los 120 días con una ligera eliminación de 332 mg kg. 1 de suelo durante todo el
período de incubación. Ni los asfaltenos ni las resinas mostraron ninguna eliminación tangible en el
tratamiento de control.
La degradación de la fracción de alcanos en los tratamientos bioaugulados fue activa en el fi primera
etapa (80 días) de incubación ( Figura 2 ) De hecho, la mayor parte de la disminución de TPH en esta
etapa fue un resultado
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Figura 1. Mineralización de TPH a partir de lodos aceitosos y eliminación de TPH del suelo. (A) CO 2
evolución desde el suelo. Símbolos:, control; 6, 2% de lodo aceitoso sin bioaugmentación;
- , Lodos oleosos al 2% inoculados con C1 al comienzo de la incubación; ,, Lodos oleosos al 2% inoculados con C1

al comienzo de la incubación y C2 en el día 62 (mostrado por la flecha vertical) del período de incubación. (B) La
concentración de TPH que permanece en el suelo durante el período de incubación. Símbolos: C, inoculado con C1 al
comienzo de la incubación; SI, inoculado con C1 al comienzo de la incubación y C2 al día 62 del período de incubación.
Las barras de error representan la desviación estándar de cuatro réplicas.

Figura 2. Cambios en la concentración de fracciones de TPH durante el período de incubación. Símbolos:

;, control no inoculado; C, inoculado con C1 al comienzo de la incubación;

SI, inoculado con C1 al comienzo de la incubación y C2 en el día 62 (mostrado por la flecha vertical) del período de
de la utilización de alcanos, ya que las tendencias de eliminación de alcanos y eliminación de TPH incubación.

fueron similares. La fracción de alcanos disminuyó de 11.247 a

4.108 g kg 1 suelo dentro de este fi primera etapa Disminución adicional de la fracción de alcanos a
fue menos profundo Al final del período de incubación, la tasa general de eliminación de asfaltenos
1.331 g kg 1 el suelo tuvo lugar solo en el tratamiento que recibió C2, mientras que disminuyó solo
fue de solo 4.56 mg kg 1 dia del suelo 1,
ligeramente a 3.056 g kg 1 suelo en el tratamiento que no recibió mayor aumento.
en comparación con 8,14 mg kg 1 dia del suelo 1 eliminación de la fracción aromática. Las resinas
experimentaron un ligero enriquecimiento de 1.320 a
Los hidrocarburos aromáticos generalmente fueron ligeramente biodegradables en los
1.523 g kg 1 suelo cuando el tratamiento se inoculó solo con C1 ( Figura 2 re). Sin embargo, cuando se
tratamientos que recibieron solo C1 al comienzo de la incubación ( Figura 2 ) La biodegradación
aplicó C2 en el día 62, las resinas mostraron un mayor significado. fi enriquecimiento constante y
asumió un patrón lineal ( r 2 ¼ 0,993) durante todo el período de incubación, con una tasa de
constante hasta un máximo de
eliminación promedio de 1,54 mg kg 1 dia del suelo 1) Sin embargo, en los tratamientos que reciben C2,
1.769 g kg 1 suelo en el día 151. Después de eso, su concentración disminuyó a 1.511 g kg 1 suelo.
la tasa de biodegradación de los aromáticos aumentó a partir del día

82. Esta nueva fase siguió otra tendencia lineal ( r 2 ¼ 0.983) con un signi fi no puede aumentar P < 0,01)
en la concentración total eliminada. Se observó una tendencia similar para los asfaltenos ( Figura 2 C). 4. Discusión
Los asfaltenos fueron generalmente más biodegradables que los aromáticos cuando se aplicó C1
solo con una tasa de eliminación promedio de Las tendencias de la mineralización de hidrocarburos en el transcurso de la incubación
mostraron que la bioacumulación por etapas es más efectiva para eliminar la TPH que la aplicación
1.89 mg kg 1 dia del suelo 1) Sin embargo, el efecto de C2 en su eliminación de todo el inóculo en el
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inicio del período de incubación. A pesar de la disponibilidad de microorganismos autóctonos que
degradan los hidrocarburos en el suelo, las bacterias añadidas mostraron un signo fi no puede
aumentar p < 0.01) en TPHmineralización ( Figura 1 a) y eliminación ( Figura 1 si). Además de la mayor
densidad del inóculo, las bacterias añadidas son más especializadas y se aclimataron a la utilización
de hidrocarburos. La biomasa inicial de bacterias que degradan los hidrocarburos y la actividad inicial
de mineralización de hidrocarburos se correlacionan positiva y fuertemente con el resultado general
del proceso de eliminación de hidrocarburos ( Kim et al., 2005 ) Por lo tanto, suministrando mayores
degradadores ' La densidad al comienzo del período de incubación ayuda a aumentar la tasa de
eliminación y la cantidad de hidrocarburos del suelo.
Si bien la degradación de los alcanos comienza casi inmediatamente después de la incubación
en el suelo, los compuestos aromáticos se degradan activamente en una etapa posterior en una
mezcla de hidrocarburos. ' escenario de degradación ( Ringelberg et al., 2001 ), probablemente porque
los alcanos son fuentes de carbono preferidas incluso a los microorganismos capaces de utilizar
tanto alcanos como compuestos aromáticos. Además, los aromáticos se absorben más fuertemente
al suelo y a los sedimentos que los alcanos, lo que hace que su degradación sea aún más lenta ( Gamerdinger
et al., 1997 ) Junto con la sorción, la baja solubilidad y, por lo tanto, la baja biodisponibilidad,
constituyen un paso limitante crítico en los HAP ' biodegradación, que da como resultado un patrón de
eliminación lineal de esta fracción.
El fenómeno del enriquecimiento de la resina como resultado de la degradación parcial de
hidrocarburos fue fi primero sugerido por Dibble y Bartha (1979) . Desde entonces, el fenómeno
también fue descrito por otros ( Chaineau et al., 2005 ) En este estudio, sugerimos que las resinas o
compuestos polares se enriquecen principalmente como resultado de la degradación parcial de las
fracciones de hidrocarburos aromáticos y asfaltenos en lugar de la fracción de alcanos, ya que el
nivel de aumento en la concentración de resinas se asocia con una disminución de los compuestos
aromáticos y asfaltenos en lugar de alcanos. Notamos un aumento constante y pequeño en la
concentración de resinas durante todo el período de incubación para los tratamientos que reciben C1
solo de 1.320 a 1.523 g kg 1 suelo. En los tratamientos que reciben ambos consorcios, sin embargo,
un fuerte y significativo fi No puede aumentar las resinas hasta 1.769 g kg 1 el suelo tuvo lugar cuando
los aromáticos y los asfaltenos mostraron el máximo de eliminación a partir del día 82 durante la
incubación. La concentración total de resinas disminuyó nuevamente a un nivel basal de 1.511 g kg. 1) En
este punto, no podemos decidir si la disminución en la concentración de resina fue el resultado de la
mineralización de resinas biogénicas o de los hidrocarburos de petróleo originales. Por lo tanto, se
necesitan más estudios para resolver este problema.
En conclusión, los resultados de este estudio sugieren que la bioaugmentación sucesiva
conduce a una mayor eliminación de TPH que solo la bioaugmentación inicial. Tanto las fracciones
aromáticas como las de asfaltenos de TPH contenidas en el lodo aceitoso experimentaron una
eliminación tangible solo cuando se introdujeron aislamientos bacterianos especializados,
aclimatados, en el momento apropiado durante el proceso de biodegradación.
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