Cromatografía

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la

cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas basadas en el
principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

La Cromatografía cumple dos funciones básicas que se complementan:

 Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y usarlos posteriormente.
 Medir la proporción de los componentes de la mezclas.

Separación de componentes

Dejamos que se mueva la mezcla por un soporte y los componentes se separan por que se mueven a
diferentes velocidades, debido a las diferentes fuerzas de adsorción que ejerce el soporte sobre cada
elemento, así de fácil. No confundir el termino adsorción y absorción.

 Adsorción
 Absorción

Características

Las técnicas cromatografías son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en
el fluido (gas, liquido o fluido súper critico) que arrastra a la muestra atraves de una fase estacionaria
que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.

Fases de la cromatografía

Las cromatografías se hacen en dos fases principalmente. Una estática y otra móvil.

 En la fase estática o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo, por ejemplo un
papel. En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en nuestro ejemplo del papel.
 En la fase móvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya está sobre el soporte
de la fase estática. En la fase móvil empezará el proceso de separación de los componentes
de la mezcla al moverse a distintas velocidades por el líquido los distintos componentes de la
mezcla sobre el papel.
 Los componentes de la mezcla interaccionan en distintas formas con la fase estacionaria. De
este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van
separando.
 Después de que los componentes atraviesen la fase estacionaria, separándose pasan por un
detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de
compuesto.

El Cromatografo

Cromatografo es un instrumento utilizado para realizar las diferentes formas de cromatografía, este
detecta el cambio de conductividad eléctrica que produce la llegada de los distintos gases al final de
la columna convirtiéndolos en una señal grafica o cromática.

Análisis en el cromatografo

 Identificación Cualitativa.
Determina la presencia de un compuesto, de un componente cualquiera que se basa en el tiempo de
retención o tiempo que se tarda en aparecer al final de la columna, el que es específico para cada
elemento.

 Identificación Cuantitativa.

Determinar las cantidades en el que se encuentra la sustancia, es más complicado pues requiere el
cálculo del área de la señal, o pico, dejada por el gas, la cual será proporcional a la concentración del
componente.

PARTES DE CROMATOGRAFIA

 Gas de arrastre o acarreador

 Puerto de inyección
 Una columna
 Un detector
 Un registrador
 Cromatograma

Gas de arrastre o acarreador

Cumple básicamente 2 propósitos

 transportar los componentes de la muestra.

 Crear una matriz adecuada para el detector.

Debe reunir las siguientes condiciones:

 Debe ser inerte para evitar interacciones.

 Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa.
 Debe ser fácilmente disponible y puro.
 Debe ser económico.
 Debe ser adecuado al detector que se está por utilizar en un cromatrografo.

Puerto de inyección

 La inyección de la muestra es un apartado crítico, ya que se debe inyectar una cantidad

adecuada, y debe introducirse de tal forma como un tapón de vapor que sea rápida para
evitar el ensanchamiento de la sobandas de salida.
 El método más empleado es una micro jeringa (con capacidad de varios micro litros)
para introducir el analito en una cámara de vaporización instantánea .

Una columna

 Es la parte en la cual el analito es arrastrado por el gas portador para poder así ser separado.
 Se emplean 2 tipos de columnas: las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o
capilares.
 La longitud de estas columnas es variable, de 2 hasta 60 metros, y están constituidas por
acero inoxidable, vidrio, sílice fundida o teflón.

Un detector
 Es la parte del cromatografo que se encarga de determinar cuándo ha salido el analito por el
final de la columna.

Existen diversos tipos de detectores, los cuales son:

 Detector de ionización de llama.

 Detector termoiónico.
 Detector de captura de electrones.
 Detector de emisión atómica.

Un registrador y Cromatograma

 Esta es la parte final de un cromatografo y es el resultado grafico de la cromatografía.

 En el caso de la separación óptima de la mezcla, los diferentes picos o manchas en el
cromatograma se corresponden a los diversos componentes de la mezcla que ha sido
separada.

CLASIFICACION DE LAS TECNICAS CROMATOGRAFIAS

Las técnicas cromatografías se pueden dividir según como esté dispuesta la fase estacionaria.

 Cromatografía plana: la fase estacionaria se sitúa sobre una plana o sobre un papel. Las
principales técnicas son cromatografía en papel y cromatografía en capa fina.
 Cromatografía en columna: la fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el
fluido empleado como fase móvil se distinguen. Cromatografía de líquidos, cromatografía de
gases, cromatografía de fluidos supercríticos.
Entrada de Fase Móvil Columna Cromatografía Con Relleno Poroso Detector Señal

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

 Cromatografía en Papel Cromatografía de Capa Fina Cromatografía de Exclusión

Cromatografía de Gases Cromatografía en Columna Cromatografía Liquida Cromatografía de
Fluidos Supercríticos

Cromatografía en Papel Cromatografía

Es muy utilizado para análisis cualitativos en el laboratorio ya que no requiere de ningún tipo de
equipamiento. Su fase estacionaria es constituida por una tira de papel filtro.

Factores que influyen para una cromatografía eficaz:

 Elección del disolvente.

 Elección del papel filtro.

Cromatografía de capa fina

Está basada en la preparación de una capa uniforme de un absorbente contenido sobre una placa la
cual puede ser de aluminio, vidrio, u otro soporte.

 Un absorbente, placas, un dispositivo que contenga las placas durante la extensión, otro
para aplicar la capa absorbente, y una cámara a la que se desarrollan las placas cubiertas.
 Su fase móvil es líquida y su fase estacionaria consiste en un sólido.

Cromatografía de exclusión
Cromatografía de columna
La cromatografía en columna es quizás el método más general, utilizado para la separación, a la
vez que para la purificación, de diferentes compuestos orgánicos que se encuentren en estado sólido
o líquido.
En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en el
interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al
exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente
la mezcla orgánica que nos interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase
estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema.

Cromatografía fluidos supercríticos

Cromatografía liquida

No debe confundirse con la técnica cualitativa y cuantitativa de análisis. Permite separar

físicamente los distintos componentes de una solución por absorción selectiva de los
constituyentes de una muestra.

Su fase estacionaria puede ser alúmina, sílice, o resina de intercambio iónico.

 Dependiendo del tamaño de los constituyentes de la muestra sean retenidos por el soporte
solido unos más que otros, lo que provocara su separación. Las sustancias que permanecen
libre en la fase móvil avanzan más fácilmente con el fluir de la muestra y las que quedan más
unidas a la fase estacionaria quedan retenidas por lo que avanzan más lento y tardan más en
salir y fluir.

Cromatografía de gases Técnica cromatografía en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la

cabeza de una columna cromatografía

Existen 2 tipos:

 Cromatografía gas-solido. Su fase estacionaria es sólida y la retención de los analitos en ella

se producen mediante el proceso de absorción.
 Cromatografía gas-liquido. Mayor utilidad, utiliza como fase estacionaria moléculas de
liquido inmovilizada sobre la superficie de un sólido inerte.

Importancia de la cromatografía

Es la técnica más desarrollada en los últimos años, empleada en la química analítica. Su empleo
presenta notables ventajas:

1. Es sencilla, rápida y no requiere aparatos complicados.

2. Abarca escalas microanalíticas hasta escalas industriales.

3. Es una técnica poco o nada destructiva que puede aplicarse a sustancias lábiles.

Constituye una metodología imprescindible en estudios bioquímicos, toxicológicos, estructurales,

etc. No solo utilizando como técnica de separación e identificación, sino como método preparatorio,
incluso a escalas industriales.

Aplicaciones en la industria

1. Determinación de concentración y porcentaje de solvente en un producto agroquímico

terminado.
2. Control de calidad de pureza de solventes, como alcohol etílico anhidro, tolueno, xileno,
benceno, que entran como materias primas a una planta.
3. Determinación del contenido de principio activo de un antitóxico en una planta de
medicamentos.
4. Control de calidad de la pureza de materias primas entrantes a bodega de una fábrica de
productos medicinales, tales como: alcohol etílico al 95%, glicerina, alcohol isopropilico, o-
toluidina, paracetamol, butanol, acetato de etilo, alcanfor, y muchos otros.
5. Control de calidad de producto terminado en una fabrica de cosméticos, como por ejemplo,
porcentaje de alcohol en una laca para el cabello, acetona en un esmalte de unas, colorantes
en casi todos los productos elaborados, porcentaje de control, en las esencias que se utilizan
para la confección de perfumes, allí es muy importante, realizar esta prueba.
6. En fábricas de adhesivos, pegamentos, pinturas, para controlar que el producto terminado
lleve las cantidades indicadas de solventes, humectantes, colorantes, gomas, resinas,
poliuretanos, secantes, re llenantes, esponjan tés, suspensores, emulsificantes.
7. En fabricas de alimentos, para control de calidad de producto terminado y materias primas,
tales como: proteínas, sabores, sustancias que dan el olor, o sea aromatizantes, pues
algunos son sintéticos, como el olor a pollo, y solo este tiene variantes, como pollo con
barbacoa, pollo frito, pollo asado, determinación de colorantes.
8. En la industria petrolera, es un método indispensable, para analizar las composiciones de
casi todos los productos que van saliendo, del cracking, los tipos de gasolinas, los
compuestos orgánicos destinados a síntesis.
9. En el control de la producción vinícola, tiene infinidad de usos, desde usarse como una nariz
electrónica, para caracterización de vinos, de acuerdo a parámetros previamente
establecidos por expertos, concentración de componentes, análisis de aminas, como
etanolamina, metilamina, agmatin.
10. En la actualidad la cromatografía es una técnica ampliamente utilizada en la resolución de
macromoléculas de interés en la industria, biotecnológica, biológica y bioquímica.