UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BUCARAMANGA - UNAB

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE MEDICINA

CURSO PROCESOS FARMACOLÓGICOS

GUÍA PARA EL TALLER SOBRE BINDING

1. Defina los siguientes conceptos:

a) Receptor: es una macromolécula proteína diana, que es capaz de interactuar con un fármaco
agonista exógeno o endógeno para iniciar una respuesta celular.
Hay 4 tipos:
- Receptor activado por ligando
- Receptor unido a enzimas
- Receptor acoplado a proteína G
- Receptores intracelulares

b) Ligando: se puede definir como una molécula capaz de ser reconocida por otra provocando
una respuesta celular.
Las moléculas (p. ej., fármacos, hormonas, neurotransmisores) que se unen a un receptor se
denominan ligandos. La unión puede ser específica y reversible. Un ligando puede activar o
inactivar al receptor; a su vez, la activación puede incrementar o reducir la actividad de una
determinada función celular.

c) Afinidad: La afinidad se conoce como la capacidad que posee un fármaco para unirse con
el receptor específico y formar el complejo fármaco-receptor.

d) Constante de Afinidad (KA): indica que tanta es la afinidad de un determinado fármaco por
su receptor.

e) ¿Qué es IC50?: es la concentración en la que se tiene la mitad de los receptores de la célula

ocupados.

f) ¿Qué es pIC50 y para que se calcula?: Una medida de IC50 nos indica la concentración a
la que un fármaco es capaz de inhibir un proceso biológico concreto en un 50%. Por ejemplo,
si el compuesto A puede inhibir el 50% de la unión de un ligando a un receptor concreto a
una concentración de 5 nM, tendría un valor IC50 de 5 nM. Un concepto estrechamente
relacionado es el valor EC50, que es la potencia de un fármaco para inducir un proceso
biológico.
Entonces, ¿qué es un pIC50? Es simplemente el logaritmo negativo del valor IC50 en molar.

g) ¿Qué es KD?: es la constante de disociación, indica la concentración de ligando que produce

un 50% de la Bmax (unión máxima). Es inversamente proporcional a la afinidad.

h) ¿Qué es Ki?: constante de inhibición. Cuando se están estudiando ligandos diferentes,

endógeno vs exógeno, se calcula la constante de inhibición, la del estudio inhibe a la
endógena.

i) ¿Qué es Bmáx?: es unión máxima (significa que haya alcanzado a saturar todos los
receptores). Es la máxima saturación de los receptores, porque no hay más para el fármaco.
 2. Explique por lo menos 3 experimentos diferentes que se utilizen para calcular la afinidad de un
ligando por un receptor.
ENSAYO DE SATURACIÓN:

Se mide la cantidad de ligando unida al variar la cantidad total añadida, para

una cantidad fina de receptor. El ligando está marcado y se mide el resultado
cuando se alcanza el equilibrio. Permite determinar la constante de afinidad y
la concentración del receptor en la célula.

Para marcar el ligando se le coloca una molécula radioactiva, normalmente

se marca el ligando (droga) endógena.
Entonces al estudiar el receptor de un fármaco, se marca la droga endógena.
Se tiene la célula con sus receptores, se le coloco el ligando marcado 5M, y
después de determinado tiempo cuando alcance el equilibrio la reacción, se
retira lo que quede por fuera y se mide; el ligando que quedo pegado a la célula, indica que tan afín es.

ENSAYO DE COMPETENCIA:
Se mide la cantidad de ligando unida al variar la cantidad de ligando
competidor, que puede ser el mismo ligando sin marcar o otra molécula
diferente al ligando endógeno que también se una al recetor en el mismo
sitio.
La cantidad de receptores se mantiene constante. También se mide el
equilibrio. Permite determinar la constante de afinidad y la concentración
de receptor, alternativamente estudia la potencia de los competidores,
determinar si un compuesto se une al receptor, o investigar las
interacciones de ligando con baja afinidad.

ENSAYOS DE CINÉTICA DE UNIÓN:

(asociación o disociación): en este caso no se espera a que se alcance el equilibrio. No lo estudiaremos aquí.
Se utiliza para caracterizar la interacción, confirmar que se cumple la ley de acción de masas o ayudar en el diseño del
protocolo experimental de un ensayo a equilibrio.

3. El ensayo de binding es un ensayo bioquímico que permite evaluar la afinidad de las drogas por su
respectivo receptor. Consiste en la competición de dos drogas por el sitio de ligación, una de ellas
marcada radioactivamente para su posterior lectura.

El experimento consiste en la incubación de las dos drogas en competición en células transfectadas con el
receptor de estudio, después de una incubación de 16 horas a 4°C, se procede a la lisis de las células y su
posterior adición del líquido de cintilación y la lectura en el contador β.

A continuación, están los datos obtenidos de un experimento de binding donde evaluamos la afinidad de 3
análogos de Bradicinina.
 Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3
[M] Lectura [M] Lectura [M] Lectura [M] Lectura
10-12 106,173900 10-14 101,204600 10-12 93,17104 10-12 94,82138
10-11 92,884830 10-13 97,877620 10-11 86,06204 10-11 107,76790
10-10 91,777400 10-12 86,405350 10-10 110,40500 10-10 90,74562
10-9 61,533780 10-11 44,531550 10-9 110,18960 10-9 114,24120
10-8 25,885930 10-10 22,810710 10-8 102,00340 10-8 104,65120
10-7 2,353267 10-9 19,560230 10-7 67,75097 10-7 88,58787
10-6 2,076412 10-8 5,602295 10-6 33,28307 10-6 107,28840
10-5 0,000000 10-7 1,395794 10-5 0,00000 10-5 100,38469
10-6 0,000000

Datos necesarios para la resolución del problema:

 La concentración del ligando radiactivo fue de 1nM.

 Los valores de IC50 obtenidos después de la correspondiente regresión no linear fueron:
Control: 1.9 nM
Análogo 1: 0.0072 nM
Análogo 2: 311.6 nM
Análogo 3: No converge
 KD= IC50 – [L]
 Ki = IC50/(1+[L]/KD)
 Bmáx: Bo * IC50/[L]

Pasar de nanomolar a Molar el IC50.

nM M
Control: 1.9 nM 1,9 x 10-9 M
Análogo 1: 0.0072 nM 7,2 x 10-12 M
Análogo 2: 311.6 nM 3.116 x 10-7 M
Análogo 3: No converge No converge

a) Teniendo en cuenta los valores de IC50, realizar las curvas concentración-respuesta de cada uno de
los análogos en comparación a la droga control.
 b) Calcular el pIC50 de cada una de las drogas

Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3

1,9 x 10-9 M 7,2 x 10-12 M 3.116 x 10-7 M No converge
pIC50= -log IC50 pIC50= -log IC50 pIC50= -log IC50
pIC50= -log (1,9 x 10-9 M) pIC50= -log (7,2 x 10-12 M) pIC50= -log (3.116 x 10-7 M)
pIC50= 8,72 M pIC50= 11,14 M pIC50= 6,50 M

c) Calcular el Ki de cada una de las drogas

KD= IC50 – [L]
Ki = IC50/(1+[L]/KD)
KD Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3
KD= IC50 – [L] Ki = IC50/(1+[L]/KD) Ki = IC50/(1+[L]/KD) No converge
KD= 1,9 nM – 1 nM Ki = 0.0072 nM /(1+1 nM/0,9 nM) Ki = 311.6 nM /(1+1 nM/0,9 nM)
KD= 0,9 nM Ki = 0,0034 nM Ki = 147,6 nM

d) Calcular el Bmáx de cada una de las drogas

Bmáx: Bo * IC50/[L]
KD Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3
Bo=106,173900-0,000000 Bo=93,17104– 0,00000 Bo=94,82138– 100,38469
Bo= 106,1739 Bo=101,204600 – 0,000000 Bo= 93,17104 Bo= -5,56331
Bo= 101,2046
Bmáx: Bo * IC50/[L] Bmáx: Bo * IC50/[L] Bmáx: Bo * IC50/[L]
Bmáx: 106,1739 * 1,9 nM/1 nM Bmáx: 101,2046* 0.0072 nM/1 nM Bmáx: 93,17104* 311.6 nM/1 nM
Bmáx: 201,73041 Bmáx: 0,72867312 Bmáx: 29032,09606

e) ¿Definir que es Bmáx?

Es la unión máxima (significa que haya alcanzado a saturar todos los receptores). Es la máxima saturación de los
receptores, porque no hay más para el fármaco.

Bibliografía:
 https://www.msdmanuals.com/es-co/professional/farmacolog%C3%ADa-
cl%C3%ADnica/farmacodin%C3%A1mica/interacciones-
f%C3%A1rmaco%E2%80%93receptor
 http://biomodel.uah.es/tecnicas/union/inicio.htm
 https://www.collaborativedrug.com/es/why-using-pic50-instead-of-ic50-will-change-your-
life/#:~:text=Un%20concepto%20estrechamente%20relacionado%20es,del%20valor%2
0IC50%20en%20molar.
 Clase de farmacodinámica I del Dr. Gustavo Bruges
 Clase de farmacodinámica III de la Dra Deisy Y. Rodriguez Sarmiento
 Libro Farmacología de Rang y Dale