Vol. 5 (5), págs.

64-70, octubre de 2013 DOI:

10.5897 / IJGMB2013.0074 Revista Internacional de Genética y Molecular
ISSN 2006-9863 © 2013 Academic Journals
Biología
http://www.academicjournals.org/IJGMB

Documento de investigación completo

Efectos de los insecticidas orgánicos, Kingbo y Azdar 10 EC, sobre los cromosomas
mitóticos en las células de la punta de la raíz de Allium
cepa
Mona S. Al-Ahmadi

Departamento de Biología, Facultad de Ciencias para Niñas, Universidad de Dammam, Dammam, Arabia Saudita.

Aceptado el 26 de agosto de 2013

En este estudio, se investigaron dos insecticidas orgánicos (Kingbo y Azdar 10EC) extraídos de plantas y utilizados como pesticidas agrícolas
para determinar sus efectos citotóxicos y genotóxicos utilizando puntas de raíces de Allium cepa ensayo. Tres concentraciones diferentes
(0.625, 1.62 mL. L- 1 y 2,5 mL. L- 1) se utilizaron para diferentes períodos de tiempo (8, 16 y 24 h). Se utilizó un solo tratamiento de los efectos de
los dos insecticidas orgánicos. Las concentraciones probadas disminuyeron el índice mitótico en comparación con el control; 0,625 ml. L- 1 del
tratamiento con Kingbo fue estadísticamente significativo, mientras que el de 1,62 mL. 1 durante 16 hy 2,5 mL. L- 1 durante 8 y 16 h aumentan el
índice mitótico. Este aumento fue significativo. El tratamiento único de Azdar 10EC disminuyó el índice mitótico y su efecto no fue
significativo en comparación con el control, mientras que 2,5 ml. 1

el tratamiento durante 24 h aumentó el índice mitótico y fue estadísticamente significativo. Además, los diferentes tratamientos
provocaron diversos tipos de anomalías cromosómicas durante las etapas de metafase, anafase y telofase, y resultaron
estadísticamente significativas tras el tratamiento con 0,625 y 1,62 mL. 1 Kingbo para 8 y 16 hy 0.625 mL. L- 1 Azdar 10 EC durante 8 h.
Las anomalías cromosómicas eran pegajosidad, alteración, c-metafase, c-anafase, metafase fija, puentes cromosómicos en anafase
y telofase, cromosoma rezagado y micronúcleos que aparecen en células en interfase. El resultado indica que ambos insecticidas
orgánicos tenían actividades citotóxicas y genotóxicas sobre el índice mitótico y la aberración cromosómica.

Palabras clave: Orgánico insecticidas, cromosomas mitóticos, puntas de raíces, Allium cepa.

INTRODUCCIÓN

El uso de material vegetal o extractos de plantas crudos para la protección de cultivos y
productos almacenados de plagas de insectos es probablemente tan antiguo como la
protección de cultivos misma (Thacker,
2002). Los efectos citogenéticos de los productos químicos sintéticos utilizados para
la protección de las plantas han sido bien documentados e investigados previamente
por muchos autores (Qureshi et al., 1988; Vyuyan, 2002; Mekki, 2008). Casi todos los
estudios confirman los efectos nocivos de los productos químicos sintéticos utilizados
en la agricultura y el aumento de la contaminación ambiental, que es un problema
mundial (Soliman, 2010).
patógenos. Cuando se extraen de la planta y se aplican en cultivos infestados,
estos componentes se denominan pesticidas botánicos o productos botánicos
(Malkhan et al., 2012). Los compuestos secundarios de las plantas son un vasto
depósito de compuestos con una amplia gama de actividades biológicas. A
diferencia de los compuestos sintetizados en laboratorios, los compuestos
secundarios de las plantas están virtualmente garantizados para tener actividad
biológica y esa actividad funciona en gran medida para proteger a la planta
productora de un patógeno, herbívoro o competidor (Duke, 1990).

Algunas plantas contienen componentes que son tóxicos para Sin embargo, muchos informes revelan que las drogas de origen vegetal son

* Autor correspondiente Correo electrónico : dr.alahmdi2009@yahoo.com .


Figura 1. Estructura química de matrina “índice merck,
undécima edición”.
Figura 2. Estructura química de Azadirachtin ”índice merck, undécima edición”.
no libre de efectos tóxicos (Sousa et al., 2009). Se ha informado que
varios extractos de plantas tienen propiedades antimitóticas y dañinas
para los cromosomas. Yadav y Rathore (1984) investigan los extractos
acuosos de frutas de
Emblica offkinalis; Sobita y Bhagirath (2005) investigan el efecto de
extractos de Nerium odorum, Andrographis
peniculata, Nyctanthes arbortris-tis,
Phlogacanthus thyrsiflorus, Solanum indicum y
Kaempferia galangal; Mondal y col. (2006) investigaron el efecto de
diferentes Ipomosea especies; Adegbite y Sanyaolu (2009) investigaron
el efecto de Vernonia amygdalina Del. Leaf; Surendrajit y Bhagirath
(2011) investigaron el efecto acuoso de Croton caudatus
Hojas de geiseler; Tülay (2012) investiga el efecto de los extractos de
plantas; Al-Ahmadi (2013) investigó los efectos de los insecticidas
orgánicos (Baicao No.2 y Baicao No.3) extraídos de plantas.
En cuanto al bioensayo vegetal, Allium cepa, Lactus sativa, Zea mays y Vicia
faba han sido las especies más comúnmente utilizadas para la evaluación
de la citogenotoxicidad. Estas especies también muestran alta sensibilidad
a compuestos tóxicos y no tienen cromosomas pequeños (Singh y Das,
2002; Lubini et al., 2008; Sousa et al., 2009).
En este estudio, se investigaron dos insecticidas botánicos (Kingbo y
Azdar 10 EC) por su citotoxicidad y
Al-Ahmadi sesenta y cinco
genotoxicidad para medir sus efectos dañinos sobre los cromosomas durante las
fases M del ciclo celular que pueden conducir a la muerte de las células. Puntas de
raíz de A. cepa se utilizaron como material experimental.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales probados
Kingbo es un insecticida botánico, un producto de Beijing Kingbo Biotech Company
Limited., China. Se extrae de plantas medicinales silvestres, Sophora flavescens Ait y
aceites naturales. Es efectivo
ingrediente es 0,6% Matrine C 15 H 24 norte 2 O, con mol. peso de 248,36 (Figura 1). Se puede
utilizar en una amplia variedad de plantas como
hortalizas, árboles frutales, arbustos, uvas, pastos y flores, y su dosis recomendada es de
2 - 2.5 mL. L- 1. Azdar 10EC es también un insecticida botánico, un producto de T.Stanes &
Company Limited., India; es un tetranortriterpinoide aislado de las semillas del árbol de
neem, Azdirachta indica A. juss. Su ingrediente efectivo es
Azadiractina A (10 g / L) C 35 H 44 O dieciséis, con mol. peso de 720,73 (Figura 2). Se utiliza para mosca
blanca, trips, gusanos cortadores, pulgones, cochinillas, gusano de la cápsula, minador de hojas de
cítricos y tomate; su dosis recomendada es
2 - 2.5 mL. L- 1.
Preparaciones de muestra
El sistema de prueba de plantas se usa ampliamente para monitorear la genotoxicidad de
productos químicos debido a muchas ventajas, como bajo costo, disponibilidad durante todo el
año, facilidad de manejo, buen estado cromosómico para el estudio del daño cromosómico y
buena correlación con otros sistemas de prueba (Sobita y Bhagirath , 2005). En este estudio, A.
cepa ( 2N = 16) se utilizaron puntas de raíces como material experimental. Se obtuvieron bulbos
de cebolla saludables en los mercados locales. Las escamas exteriores sueltas y las raíces
viejas de la cebolla se rasparon y se suspendieron en un vaso pequeño con agua destilada.
Tratos
A. cepa se suspendió en un pequeño vaso de precipitados (50 ml) con agua destilada para
potenciar el crecimiento de las puntas de las raíces hasta que alcanzaran 0,5 - 1 cm de longitud;
luego se transfirió a otro vaso de precipitados que contenía una solución recién preparada de
insecticidas botánicos y se dejó durante diferentes períodos de tiempo. Se utilizaron tres
concentraciones diferentes para tres períodos de tiempo diferentes y se utilizó un bulbo de cebolla
para cada tratamiento.
Se utilizó el control negativo para cada tiempo; las puntas de la raíz de A. cepa
se trataron solo con agua destilada y se utilizaron como muestra comparativa de los efectos
de los inscticidas orgánicos probados.
Tres concentraciones diferentes (0.625, 1.62 y 2.5 mL. L- 1) se prepararon para
investigar el efecto de la dosis recomendada, la mitad y la cuarta parte de la dosis
recomendada para ambos insecticidas. Se examinó el efecto único de los insecticidas.
Preparación de diapositivas
Las raíces fueron tratadas con diferentes concentraciones (0.625, 1.62 y 2.5 mL. L- 1) durante
diferentes períodos de tiempo (8, 16, 24 h), luego se desprendieron las raíces, se fijaron en
etanol alcohol 3: 1 (v / v) recién preparado y ácido acético glacial durante 24 h. Puntas de raíz
de A. cepa se hidrolizaron en HCL 1 N a 60 grados centígrados durante 8 min; Las puntas de las
raíces se lavaron varias veces con agua destilada y se tiñeron con acetocarmina al 1%. Se
prepararon cinco portaobjetos temporales mediante la técnica del squash. Se examinaron dos
puntas de raíces en cada portaobjetos para determinar los efectos de los insecticidas botánicos
en el índice mitótico (IM). los
 66 En t. J. Genet. Mol. Biol.

Tabla 1. Número total de células examinadas, índice mitótico y frecuencia de aberraciones después del tratamiento con diferentes concentraciones de insecticidas orgánicos durante diferentes períodos de tiempo en las
células de la punta de la raíz de Allium cepa.

Probado Concentración Tratamiento/ Número total Dividido El numero total de mitótico Cromosómico
material (Ml / l) hora células célula célula anormal índice Frecuencia de aberraciones

d. agua 8 2062 218 13 10 0,06

Controlar d. agua dieciséis 2316 215 4 9.3 0,04
d. agua 24 2217 302 5 13,6 0,02

0,625 8 2019 139 25 6,9 * 0,18 *

0,625 dieciséis 2156 157 13 7.3 0,08
0,625 24 2153 155 dieciséis 7.2 0,1
1,62 8 2430 208 28 8,6 0,13
Kingbo 1,62 dieciséis 2151 233 24 10,8 * 0,1 *
1,62 24 2234 171 30 7.7 0,18
2.5 8 2501 266 17 10,6 * 0,06
2.5 dieciséis 2151 230 24 10,7 * 0,1
2.5 24 2092 180 11 8,6 0,06

0,625 8 2146 190 21 8,9 0,11 *

0,625 dieciséis 2195 144 13 6.6 0,1
0,625 24 2114 114 21 5.4 0,2
1,62 8 2200 176 15 8 0,09
azdar 10 EC 1,62 dieciséis 2310 153 15 6.6 0,1
1,62 24 2077 235 20 11,3 0,09
2.5 8 2498 149 13 6 0,09
2.5 dieciséis 2100 279 33 13,3 0,12
2.5 24 2203 326 26 14,8 * 0,08

* Significativo al 0.05.

Se analizaron los mismos portaobjetos para determinar los tipos y frecuencias de anomalías El insecticida se comparó con el del control negativo utilizando el paquete estadístico
cromosómicas (CF) producidas por los insecticidas examinados. SPSS 16.0 para Windows. El análisis de varianza bidireccional fue el método estadístico
utilizado para determinar la significancia de la diferencia en P = 0,05.

Puntuación de diapositivas y análisis de datos

Los portaobjetos se observaron con un microscopio óptico (Phenix PH 50 DB047VU)

utilizando la inmersión de la lente objetivo 40X. Los más representativos para cada
aberración estructural se fotografiaron con el software Phenix micro Image analyzer 2008
En V2, 2.
RESULTADO Y DISCUSIÓN

Índice mitótico
Índice mitótico (MI)

En un portaobjetos para cada tratamiento, se puntuaron un total de 2000 células. El índice

mitótico (MI) se expresó como el número de células en división por total de células puntuadas,
La Tabla 1 y las Figuras 3 y 4 muestran los datos del total de células contadas
como se ve en la siguiente ecuación: en observaciones microscópicas. El índice mitótico (IM) que mide la proporción
de células en la fase M de inhibición del ciclo celular podría considerarse como
muerte celular o retraso en la cinética de proliferación celular (Rojas et al.,
1993; frecuencia de aberración cromosómica (CF) que revela cromosomas Se
observaron aberraciones después del tratamiento con el material probado.
Citotoxicidad

Se comparó el índice mitótico de las células tratadas en cada dosis de cada insecticida El índice mitótico de las células de la punta de la raíz que fueron tratadas con
con el del grupo de control negativo. diferentes concentraciones de Kingbo y Azdar 10EC (0.625, 1.62 y 2.5 mL. L- 1) para
diferentes períodos de tiempo (8, 16 y 24 h) disminuyó en comparación con el
Prueba de genotoxicidad
control negativo (puntas de las raíces tratadas solo con agua destilada). Las puntas
Se examinaron las aberraciones cromosómicas por dosis de cada insecticida. Las células de las raíces tratadas con Kingbo muestran un aumento en (MI) después
con aberraciones de cada dosis para cada

Figura 3. Efecto de diferentes concentraciones de Kingbo sobre el índice mitótico en las células de la punta
de la raíz de A. cepa.
Figura 4. Efecto de diferentes concentraciones de Azdar 10 EC sobre el índice mitótico en las células de la
punta de la raíz de A. cepa.
tratando con 1,62 mL. L- 1 durante 16 h, y con la mayor concentración (2,5 mL.
L- 1) durante 8 y 16 h. Además, la disminución del índice mitótico fue
estadísticamente significativa después de tratar con 0,625 ml / L- 1 de Kingbo
durante 8 h.
El tratamiento con diferentes concentraciones de Azdar 10EC disminuyó
el (MI) con aumento en la concentración probada y el tiempo de exposición,
excepto para el tratamiento con la concentración más alta (2.5 mL. L- 1) durante
24 h lo que aumentó el índice mitótico en comparación con el control
negativo. La reducción del índice mitótico podría deberse a la inhibición de la
síntesis de ADN o al bloqueo de la célula para que no entre en la mitosis
(Sudhakar et al., 2001; Tülay y Ozlem, 2010), Yadav (1986) informó que el
índice mitótico se puede alterar de tres maneras: (1) inhibiendo el proceso
de división celular, (2) perturbando el funcionamiento normal del huso
mitótico y (3) produciendo anomalías cromosómicas que conducen a la
reducción del índice mitótico. Además, Vyuyan (2002) explica que la
disminución del índice mitótico debido al aumento del número de células en
interfase o muertas y la acumulación de células en interfase puede deberse
a la inhibición de la síntesis de ADN y este resultado de inhibición, según
Njagi y Gopalan (1980). ), muestra que los extractos de plantas pueden
interactuar con el ADN posterior a la presencia mitótica. Se observó un
resultado similar con Haff (1968),
Al-Ahmadi 67
Bruneri (1971), Sobita y Bhagirath (2005), Mondal et al. (2006) y Sazada
et al. (2010).
Estos efectos sobre el índice mitótico indican un potencial mitodepresivo que
conduce a efectos citotóxicos. Borah y Talukdar (2002) también informaron de
una inhibición similar de las células de la citocinesis.
El aumento del índice mitótico puede resultar de acortar la duración del ciclo
mitótico y permitir que las células en interfase ingresen a las etapas de división
posteriores. Haroun y Al Shehri (2001), Haroun (2010) y Abderrahman (1997)
descubrieron que el tratamiento con Peqonum harmala La extracción aumentó el
índice mitótico de las células de la punta de la raíz de A. cepa.
Aberración cromosómica (CA)
Allium cepa El ensayo es una prueba sensible y se ha demostrado que tiene
correlación con las pruebas de otros sistemas vivos y sirve como indicador
de la toxicidad del material probado (Fiskesjo, 1985). Las aberraciones
cromosómicas (AC) son cambios en la estructura cromosómica que resultan
de una ruptura o intercambio de material cromosómico (Swierenga et al.,
1991).
Sobita y Bhagirath (2005) informaron que las aberraciones cromosómicas que
resultaron de diferentes tratamientos indican un efecto clastogénico de los
materiales probados. La Tabla 2 y las Figuras 5 y 6 muestran el resultado de un
solo efecto de los dos insecticidas orgánicos en los cromosomas de las células de
la punta de la raíz de A. cepa.
Aunque el tratamiento de control no tenía concentraciones probadas de
insecticidas, el meristema apical mostró anomalías citológicas con baja
frecuencia. Esto podría deberse a la sustancia automutagénica (Dubinin y
Scerbako, 1962; Kaushik, 1996). Teas et al. (1965) sugirieron que a medida
que las raíces de las plántulas aumentan de longitud, es menos probable
que las aberraciones continúen en la mitosis y cuando la raíz alcanza de 2
a 3 cm de longitud, la aberración causada en la condición de control se
vuelve insignificante, lo que significa un aumento en el índice mitótico de
control. La observación citológica (Figura 7) indica que todas las
concentraciones probadas de los dos insecticidas orgánicos (0.625, 1.62 y
2.5 mL. L- 1) causan anomalías cromosómicas principalmente durante las
etapas de metafase, anafase y telofase. Fueron estadísticamente
significativos después de tratar con 0.625 y 1.62 mL. L- 1 Kingbo para 8 y 16
hy 0.625 mL. L- Azdar 10 EC 1 durante 8 h. La mayoría de los tipos de
aberraciones cromosómicas observadas en un alto porcentaje fueron
pegajosidad, alteración, c-metafase, puentes cromosómicos en anafase y
telofase, cromosomas rezagados y micronúcleos que aparecen en células
en interfase; mientras que se observó esmetafase, s-anafase y fragmentos
en bajo porcentaje.
Tratamiento con Kingbo (0,625 y 1,62 mL. L- 1) causó alta frecuencia
cromosómica después de 8 y 16 h de exposición; también tratamiento
con Azdar 10 EC (0,625 y 2,5
mL.L- 1) durante 8 y 16 h causó una alta frecuencia de aberraciones cromosómicas
en comparación con el control.
La pegajosidad cromosómica significa pérdida de apariencia normal.
 68 En t. J. Genet. Mol. Biol.

Tabla 2. Tipo de aberraciones cromosómicas en las células de la punta de la raíz de A. cepa después del tratamiento con diferentes concentraciones de los insecticidas orgánicos probados durante diferentes períodos de tiempo.

Metafase

Telofase
Anafase
duración del tiempo (h)
Pesticida

Cone / ml

cromosoma

cromosoma
s- Metafase
c-Metafase

Binucleat
Fragmento

Fragmento
Pegajoso

Pegajoso

mic-nucli
S-anafase

Rezagado
Rezagado
Rezagado
Molestar

Molestar

AF (%)
Puente

Puente
8 0,01 0,01 0,01 0,01 6
Distell
Controlar dieciséis 0,3 0,004 0,004 4
agua
24 0,01 0,003 0,003 2

8 0,04 0,04 0,03 0,02 0,007 0,007 0,04 18

0,625 dieciséis 0,04 0,01 0,01 0,01 0,006 8

24 0,03 0,03 0,03 0,02 10

8 0,04 0,03 0,02 0,005 0,01 0,02 1

Kingbo 1,62 dieciséis 0,03 0,03 0,004 0,04 10

24 0,09 0,04 0,02 0,006 0,02 0,006 0,006 18

8 0,004 0,004 0,004 0,05 0,008 7

2.5 dieciséis 0,02 0,03 0,02 0,03 0,007 10

24 0,006 0,04 0,006 0,01 6

8 0,01 0,06 0,005 0,03 0,005 11

0,625 dieciséis 0,02 0,03 0,02 0,01 10

24 0,05 0,05 0,03 0,04 20

8 0,02 0,02 0,02 0,02 0,006 0,006 9

Azdar 10
1,62 dieciséis 0,01 0,04 0,007 0,01 0,007 0,007 0,01 9
CE
24 0,02 0,03 0,004 0,004 0,03 9

8 0,03 0,02 0,007 0,02 0,007 0,007 9

2.5 dieciséis 0,02 0,02 0,004 0,01 0,05 0,007 0,004 0,007 12

24 0,009 0,04 0,003 0,003 0,02 0,003 0,003 8

rancia, y se ve con una superficie pegajosa, lo que provoca la enlaces cruzados intracromátidas (Shahin y ElAmoodi, 1991; (1983). La perturbación durante la metafase y anafase, metafase
aglomeración de los cromosomas (Babich et al., Turkogul, 2007; Tülay y Ozlem, en estrella, anafase en estrella surge debido al efecto del
1997). Puede deberse al efecto de contaminantes y compuestos 2010). También la pegajosidad podría deberse a la tratamiento en el huso que conduce a la falla del mecanismo del
químicos sobre las propiedades físico-químicas del ADN, de las deploymerización y disolución parcial de nucleoproteínas, la rotura huso (Yadav, 1986). Khakdan y Piri (2012) sugirieron que los
proteínas o de ambos, la formación de complejos con el grupo e intercambio de las unidades plegadas básicas de las cromátidas extractos de plantas actúan como un agente tóxico sobre la
fosfato en el ADN, la condensación del ADN o la formación de y el desprendimiento de la cubierta proteica del ADN en los formación del huso mitótico, con la acción química
inter y cromosomas Onyenwe

Figura 5. Efecto de diferentes concentraciones de Kingbo sobre las aberreciones cromosómicas en
las células de la punta de la raíz de A. cepa.
Figura 6. Efecto de diferentes concentraciones de Azdar 10 EC sobre las aberraciones cromosómicas en
las células de la punta de la raíz de A. cepa.
Figura 7. Tipo de aberraciones cromosómicas después del tratamiento con diferente
concentración de dos insecticidas orgánicos en las células de la punta de la raíz de A. cepa ( ae:
tipo de aberración cromosómica después del tratamiento con kingbo, f –j: tipo de aberración
cromosómica después del tratamiento con Azdar-10EC): a- C- metafase. b- puente sobre la
telofase. metafase pegajosa. d- micronúcleos. e- telofase pegajosa. f- perturbar la metafase.
g- perturbar la anafase. h- puente sobre anafase. i- cromosoma rezagado en metafase. j-
perturbar la metafase.
en el ADN o en el complejo ADN-proteína. También Ndubuisi y Bosa
(2010) informaron que, los extractos de raíz de
Al-Ahmadi 69
Boerhaavia diffusa tenía una acción nucleotóxica. Los cromosomas se unen
durante la anafase y la telofase aumenta cuando los cromosomas no se
separan debido a la adherencia de los cromosomas. Yadav (1986). El
fragmento de cromosoma es una indicación de rotura de cromosoma y puede
ser una consecuencia de puentes anafase / telofase (Singh,
2003). Además, Darlington (1942) informó que la adherencia puede resultar
en la fragmentación de los cromosomas por el estrés del movimiento de la
anafase o en la formación de puentes cuando los cromosomas no se
separan.
La metafase C (metafase de colchicina) apareció debido a la
inactivación del huso seguida de una dispersión aleatoria de los
cromosomas sobre la célula (Levan, 1938; Auti et al., 2010). Los
micronúcleos (MN) a menudo resultan de los fragmentos acéntricos o
cromosomas rezagados que no se incorporan a los núcleos hijos
durante la telofase de las células mitóticas y pueden causar muerte
celular debido a la deleción de genes primarios (Albertini et al., 2000;
Krishna y Hayashi, 2000; Tülay y Ozlem,
2010).
Conclusión
El resultado de este estudio indica que el tratamiento único de estos
dos insecticidas orgánicos (Kingbo y Azdar 10 EC) disminuyó el índice
mitótico y fue estadísticamente significativo. Aún así, algunas
concentraciones examinadas de los insecticidas investigados
causaron un aumento en el índice mitótico. Además, los diferentes
tratamientos de los insecticidas orgánicos provocaron anomalías
cromosómicas como pegajosidad, alteración, puentes cromosómicos
en la etapa anafase y telofase, rezagos y fragmentos. La disminución
del índice mitótico y el aumento de la frecuencia de aberraciones
cromosómicas indican que tuvieron un efecto citotóxico sobre la
división celular; Las anomalías cromosómicas indican que los dos
insecticidas tienen una propiedad clastogénica que conduce a efectos
genotóxicos. Adicionalmente,
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