UNIVERSIDAD LOS ANGELES DE CHIMBOTE 1 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CURSO : BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

UNIDAD : TERCERA
TEMAS : BIOTECNOLOGIA MODERNA E INGENIERIA GENETICA
 Biotecnología moderna.
 Ingeniería genética.

BIOTECNOLOGÍA MODERNA
INTRODUCCION
Actividad científica y comercial en la que se usan agentes biológicos (organismos pluricelulares
o unicelulares, células vivas o muertas, enzimas) para la producción industrial.
La Biotecnología es actualmente una estrategia para aumentar la productividad y obtener
mayores ganancias; así el poder económico de empresas transnacionales de los países
desarrollados les permite liderar la industria de la biotecnología en el mundo. Empresas como
Mnsanto, Novartis y Dow; que dominan el mercado mundial de herbicidas, son también las que
monopolizan la oferta de semillas transgénicas. Con la expansión del cultivo transgénico, en
cuatro o cinco años el consumo de fertilizantes se quintuplicó, y el de agroquímicos se triplicó.
Dominando el mercado de semillas y herbicidas, estas empresas tienen en sus manos el
proceso agrícola.
La Biotecnología tiene como áreas de aplicación actividades productivas ya existentes, como la
agricultura, agro-industria, industria farmacéutica, salud humana, minería, industria química y
energética, protección del medio ambiente.
RESEÑA HISTORICA DE LA BIOTECNOLOGIA
 Los inicios de la transformación de alimentos
Hace 8 mil años, los sumerios y babilonios comenzaron a producir cerveza mientras que los
egipcios descubrieron la técnica para elaborar pan de levadura hace 6 mil años. Alrededor
de la misma época se desarrollaron otros procesos para la conservación de alimentos
(particularmente en China) como la fabricación de yogurt, queso, vinagre y vino. Muchos de
estos procesos son tan efectivos que aún hoy seguimos haciéndolos siguiendo el mismo
método básico. Así por ejemplo, la producción de cerveza se hace a partir granos
sometidos a un proceso de malteo (lo que aumenta su cantidad de enzimas) para convertir
el almidón de los granos en azúcar y después añadiendo levaduras específicas para
producir la cerveza al convertir los carbohidratos del grano en etanol. Aunque el proceso de
fermentación no se comprendió sino hasta los trabajos de Louis Pasteur en 1857, éste es el
primer uso de la biotecnología para convertir un alimento en otro.
 La protección contra las enfermedades
En muchas civilizaciones antiguas se emplearon combinaciones de plantas y otros
organismos como medicinas. Desde hace aproximadamente 2200 años la gente empezó a
utilizar agentes infecciosos inactivos o en muy pequeñas cantidades para inmunizarse
contra las infecciones. En 1701, Giacomo Pylarini comenzó a practicar en Constantinopla la
"inoculación", el infectar intencionalmente a niños con viruela para prevenir casos más
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graves más adelante en sus vidas. La inoculación competiría con la “vacunación” por casi
un siglo; en esta última técnica, desarrollada en 1798 por Edward Jenner, se infectaba a la
gente con viruela bovina para inducir resistencia a la viruela humana, lo que la convierte en
una técnica mucho más segura (vacuna viene de la palabra latina vaccinus que quiere decir
"a partir de vacas". Estos y otros procesos se fueron refinando a en la medicina moderna y
han llevado a muchos desarrollos tales como los antibióticos, vacunas y otros métodos para
combatir las enfermedades.
 La conservación de los alimentos
En 1799, Lazaro Spallanzani realizó experimentos en los que mostró que se podían
conservar “infusiones” (medios de cultivo líquidos) por mucho tiempo sin que se
descompusieran mediante el calentamiento en agua hirviendo de matraces herméticamente
sellados que contenían la infusión, ya que el calor mata los microbios. Antes de esto se
pensaba que la vida se generaba de manera espontánea. Para 1809, Nicolas Appert
desarrolló una técnica, también usando calor, para enlatar y esterilizar la comida, con lo
que ganó un premio de 12 mil francos ofrecido en 1795 por Napoleón. En la primera mitad
de la década de 1860, el químico francés Louis Pasteur desarrolló la técnica que lleva su
nombre (pasteurización) para preservar los alimentos calentándolos, con lo que se destruye
a los microbios dañinos, y manteniéndolos aislados del exterior. Esta técnica ayudó a
mejorar la calidad de vida de las personas pues permitió conservar muchos alimentos sin
cambiar su sabor, con esto se pudo por ejemplo transportar leche sin que se echara a
perder o evitar que el vino se convirtiera en vinagre (“vino agrio”).
 El nacimiento de la lucha moderna contra las enfermedades
Hacia 1850, Ignacio Felipe Semmelweis, un médico austro-húngaro utilizó observaciones
epidemiológicas para proponer la hipótesis que la fiebre puerperal se transmite de una
mujer a otra a través de los médicos. Probó su hipótesis haciendo que los médicos se
lavaran las manos después de examinar a cada paciente, sin embargo su propuesta fue tan
escandalosa en la época que hizo que el resto de la comunidad médica lo despreciara y
que perdiera su trabajo. En 1865, Joseph Lister comenzó a utilizar desinfectantes como el
fenol en el tratamiento de heridas y en cirugías al tiempo que Pasteur desarrollaba la teoría
de los gérmenes como causa de las enfermedades. Para 1882, Robert Koch, usando
cobayas como huéspedes alternativos, describió la bacteria que causa la tuberculosis en
los seres humanos. Koch fue el primero en descubrir la causa de una enfermedad
microbiana humana y estableció qué cada enfermedad es causada por un microorganismo
específico.
 El surgimiento de la genética
Hacia 1859, Charles Darwin propuso que las poblaciones animales adoptan formas
diferentes a lo largo del tiempo para aprovechar mejor el medio ambiente, un proceso al
cual llamó “selección natural”. Mientras viajaba por las Islas Galápagos, observó como los
picos de una clase particular de aves se habían adaptado en cada una de las islas a las
fuentes de alimentos disponibles y planteó que sólo las criaturas mejor adaptadas a su
medio ambiente son capaces de sobrevivir y reproducirse. El libro emblema de Darwin “El
Origen de las Especies”, opacó todas las otras voces científicas (incluyendo la de Mendel)
durante varias décadas. Unos años después, Gregor Mendel, un monje agustino, presentó
en 1865 sus leyes de la herencia a la Sociedad de Ciencias Naturales en Brunn, Austria. Su
trabajo con chícharos llevó a Mendel a proponer que había unidades internas de
información invisibles dentro de los organismos, las que eran responsables de los rasgos

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observables (como por ejemplo el color, altura de la planta, tamaño de la vaina, etc.) y que
estos factores (que después serían conocidos como genes), se transmitían de una
generación a la siguiente, sin cambiar pero recombinándose. El trabajo de Mendel
permaneció desapercibido durante largos años a causa del mucho más sensacional
descubrimiento de Darwin, hasta 1900 cuando Hugo de Vries, Erich Von Tschermak y Carl
Correns publicaron sus investigaciones corroborando el mecanismo de la herencia de
Mendel.
 El papel del ADN en la herencia
En 1868, Fredrich Miescher, un biólogo suizo, aisló por primera vez un compuesto al que
llamó nucleína y que contenía ácido nucleico, sin embargo esto no se relacionó en su
tiempo con las leyes de la herencia. En 1882, Walther Flemming reportó su descubrimiento
de los cromosomas y la mitosis. Para 1902, Walter Stanborough Sutton estableció que los
cromosomas se encuentran en parejas y que pudieran ser los portadores de la herencia,
apoyando la teoría de Mendel y renombrando a sus “factores” con el nombre que los
conocemos el día de hoy: “genes”. En 1910 el biólogo estadounidense Thomas Hunt
Morgan, descubre que los genes se encuentran en los cromosomas. En 1935 Andrei
Nikolaevitch Belozersky logró aislar ADN en forma pura por primera vez y en 1941 George
Beadle y Edward Tatum desarrollan el postulado de “un gen una enzima”. En el año de
1944, Oswald Theodore Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty determinaron que el ADN
es el material hereditario, sin embargo su teoría tuvo poca aceptación pues se pensaba que
el ADN era una molécula demasiado simple para poder llevar a cabo esta función. Para
principios de los 1950, la científica británica Rosalind Franklin trabajaba en modelos
estructurales de ADN que más tarde perfeccionarían James Watson y Francis Crick y que
serían la base para su descubrimiento de la estructura del ADN, que publicaron en 1953 y
en la que proponían el modelo de doble hélice complementaria y antiparalela que hoy
conocemos, con lo que inauguraron un nuevo capítulo en el estudio de la genética. La
comprensión del ADN fue esencial para la exploración de la biotecnología. Las células son
las unidades básicas de la materia viva en todos los organismos y el ADN contienen la
información que determina las características que tendrá una célula. Desde el inicio los
científicos vislumbraron la posibilidad de nuevos medicamentos diseñados para ayudar al
cuerpo a hacer lo que no podía por su propia cuenta o de cultivos capaces de protegerse
por si solos de las enfermedades.
 Las fermentaciones industriales
A principios del siglo XX, los científicos ya habían adquirido una mejor comprensión de los
fenómenos microbiológicos y comenzaron a explorar nuevas formas de fabricar algunos
productos. Así, en 1917, Chaim Weizmann usó por primera vez un cultivo microbiano puro
en un proceso industrial para la fabricación de acetona a partir de almidón de maíz usando
Clostridium acetobutylicum; de esta manera el Reino Unido pudo fabricar a partir de
acetona el explosivo cordita durante la Primera Guerra Mundial. También en la misma
guerra, Alemania produjo glicerina por fermentación para la fabricación de nitroglicerina. Así
como la biotecnología ayudó a matar soldados, también contribuyó a curarlos. En 1928,
Alexander Fleming notó que todas las bacterias que crecían en una placa de cultivo
murieron alrededor de un moho que contaminaba al cultivo. Para 1938, Howard Florey y
Ernst Chain de la Universidad de Oxford en Inglaterra, aislaron el compuesto causante de
este efecto: la penicilina, pero fue hasta la década de 1940 que se logró la producción de
penicilina a gran escala, que probaría ser altamente exitosa en el tratamiento de heridos

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durante la guerra. Fleming obtuvo el Premio Nobel de Medicina en 1945 gracias a este
descubrimiento.
 Nuevas agriculturas
Trabajando sobre los conocimientos ya existentes, William James Beal desarrolló en 1879
el primer híbrido experimental de maíz, demostrando incrementos en el rendimiento de
entre el 21 y el 51 %. En 1918, un ingeniero agrícola húngaro, Karl Ereky, utiliza por
primera vez la palabra “biotecnología”. Para el periodo de 1920 a 1930, técnicas de
mejoramiento agrícola se emplean ampliamente en los Estados Unidos incrementando la
productividad del campo con lo que para la década de 1940 el país ya era un líder agrícola.
Entre esa década y la de los 1960 se conjuntaron una serie de avances tecnológicos en el
área agrícola que en conjunto se denominaron la “Revolución Verde” que implicaron el
poder tener una mayor disponibilidad de alimentos. La llegada de los híbridos implicó
además la creación de nuevos negocios como el de la industria de semillas. Los buenos
resultados de estas técnicas en los Estados Unidos llevaron a buscar el exportar la
Revolución Verde a otros países a través de la Fundación Rockefeller. Para esto se fundó
en México la “Oficina de Estudios Especiales” en 1943, antecesora del “Centro
Internacional de Mejoramiento de Maíz y Trigo” (CIMMYT) que se fundaría en 1963.
Gracias a estos esfuerzos y a la inversión del gobierno en el área, México se volvió
autosuficiente en trigo para 1957 y más tarde exportador. Esto también permitió que la
población alcanzara 103.3 millones de habitantes para 2005 cuando en 1900 apenas había
13.6 millones. El CIMMYT más tarde ayudaría a llevar la Revolución Verde a India y
después a Filipinas, Indonesia, Pakistán, Sri Lanka y otros países de Latinoamérica, Asia y
el norte de África. Gracias a sus contribuciones, uno de los investigadores del CIMMYT,
Norman E. Borlaug, ganó el Premio Nobel de la Paz en 1970, el único otorgado por
contribuciones a la agricultura.
 Plantas de laboratorio
Desde 1898, el botánico alemán G. Haberlandt pudo cultivar de manera exitosa células
vegetales individuales, completamente diferenciadas, aisladas de diferentes tejidos
vegetales de varias especies, en un medio de glucosa y peptona, aunque no puedo obtener
división celular. Por aproximadamente 35 años se lograron pocos avances en la
investigación del cultivo de tejidos, aunque se pudieron cultivar embriones, raíces y otros
tipos de tejidos. Fue hasta el periodo de 1934 a 1939 que tres científicos: Roger-Jean
Gautheret, Pierre Nobécourt y Philip White, pudieron establecer las bases del cultivo de
tejidos vegetales gracias al descubrimiento de la importancia de los distintos reguladores de
crecimiento y otros compuestos como las vitaminas B, lo que permitió obtener los primeros
cultivos permanentes de callos (masas indiferenciadas de células) de zanahoria y tabaco.
Durante los siguientes veinte años (de 1940 a 1960), se identificaron una gran variedad de
compuestos químicos (hormonas, vitaminas, etc.) con efectos sobre la división celular, el
crecimiento y la diferenciación, pudiéndose obtener tejidos y órganos distintos de los
originalmente cultivados. Skoog y Miller demostraron en 1958 que la relación de
concentraciones entre varios de estos reguladores controla la formación de raíces y brotes,
lo que abrió la puerta a la regeneración de plantas completas a partir de la década de 1960;
la aplicación de técnicas de crioconservación exitosas a partir de 1976 y la propagación
automatizada a partir de 1988.

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 La llegada de la ingeniería genética

Desde antes del descubrimiento de la estructura del ADN, en 1941, el microbiólogo danés
A. Jost, acuñó el término “ingeniería genética” para designar la idea que, escribiendo
directamente la información en las células se podían modificar sus funciones. Más tarde,
entre 1945 y 1950, se lograron crecer cultivos de células animales aisladas en el
laboratorio, lo que permitiría su estudio y aprovechamiento industrial. En 1957, Francis
Crick y George Gamov trabajaron en lo que se conoce como el “dogma central” que explica
cómo el ADN fabrica proteínas, cómo su secuencia especifica la de los aminoácidos en
dichas proteínas y cómo fluye la información en una sola dirección, del ADN al ARN
mensajero y a las proteínas. Para 1966 el código genético pudo ser descifrado, Marshall
Nirenberg, Heinrich Mathaei y Severo Ochoa demostraron que una secuencia de tres bases
determina cada uno de los 20 aminoácidos. Más tarde, en 1972, Paul Berg aisló y empleó
una enzima de restricción para cortar ADN y después unirlo formando una molécula circular
híbrida: la primera molécula de ADN recombinante. Al año siguiente, Stanley Cohen, Annie
Chang y Herbert Boyer cortaron secciones de ADN viral y bacteriano para crear un
plásmido con resistencia dual a antibióticos y lo insertaron al ADN de una bacteria
produciendo el primer organismo con ADN recombinante.
 La primera compañía biotecnológica
En 1976, Herbert Boyer y Robert Swanson fundan Genentech, Inc., la primera compañía
biotecnológica, dedicada al desarrollo y comercialización de productos basados en el ADN
recombinante, y al año siguiente Genentech reporta la producción de la primera proteína
humana fabricada en una bacteria: la somatostatina. Por primera vez se usa un gen
sintético recombinante para producir una proteína por lo que muchos consideran a este
hecho como el inicio de la Era de la Biotecnología. En 1978 Genentech se convierte en la
primera empresa biotecnológica en entrar a la bolsa de valores de Nueva York, y ese
mismo año, junto con The City of Hope National Medical Center, anuncia la producción
exitosa en laboratorio de insulina human usando la tecnología del ADN recombinante; en
1982 Genentech recibe aprobación de la FDA para comercializarla, lo que la convierte en el
primer medicamento de origen recombinante aprobado.
 La biotecnología moderna y la industria
A partir del inicio de la Era de la Biotecnología, los avances en el campo han sucedido a
gran velocidad. Así, en 1980 la Suprema Corte de los Estados Unidos determinó que los
organismos modificados genéticamente podían ser patentados, lo que permitió a la
compañía Exxon patentar un microoganismo (derivado del género Pseudomonas) diseñado
para “comer” petróleo y utilizarse en derrames. Ese mismo año se consigue introducir
exitosamente un gen humano (el que codifica para la producción de interferón) en una
bacteria y al año siguiente Bill Rutter y Pablo Valenzuela publican un reporte en la revista
Nature sobre un sistema de expresión en levaduras para producir el antígeno de superficie
del virus de la hepatitis B y que llevaría más adelante a que la FDA aprobara a Chiron
Corp., en 1986, la producción de la primera vacuna recombinante: Recombivax HB.
También en 1981, un grupo de científicos de la Universidad de Ohio produjeron los
primeros animales transgénicos al transferir genes de otros animales a ratones y en 1988
los biólogos moleculares Philip Leder y Timothy Stewart recibieron la primera patente para
un animal genéticamente modificado, un ratón altamente susceptible a desarrollar cáncer.

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 La biotecnología moderna entra a nuestras vidas

En el año de 1984, Alec Jeffreys introduce la técnica de caracterización de ADN para la
identificación de personas y al año siguiente comienza a usarse como una herramienta
legal en las cortes de los Estados Unidos. En 1985, la compañía belga Plant Genetic
Systems fue la primera en desarrollar plantas genéticamente modificadas con resistencia al
ataque de insectos. Esta compañía desarrolló plantas de tabaco que expresaban genes
que codifican proteínas insecticidas de la bacteria Bacillus thuringiensis (Bt). En 1987,
Calgene, Inc. recibe una patente para la secuencia de ADN de la poligalacturonasa del
jitomate, usada para producir una secuencia antisentido de ARN que permite alargar la vida
de anaquel de este fruto. En 1993 la FDA declara que los alimentos genéticamente
modificados “no son inherentemente peligrosos” y por lo tanto no requieren de una
regulación específica, lo que permite que estos jitomates obtuvieran el permiso de la FDA
para ser comercializados, lo que ocurriría bajo el nombre “Flavi Savr”. En 1988, Genencor
International, Inc. recibe una patente para el proceso de fabricación de enzimas resistentes
a cloro para su uso en detergentes. Para el año 2000, se anuncia la creación del “Arroz
Dorado” (Golden Rice), una variedad de arroz modificada para producir vitamina A, que se
espera ayude a mejorar la salud en los países en desarrollo y a prevenir algunas formas de
ceguera. Todos estos avances llevan en 2004 a que la FAO apoye el uso de los cultivos
obtenidos por técnicas de ingeniería genética como una herramienta complementaria a las
técnicas agrícolas tradicionales para ayudar a los campesinos y consumidores en los
países en vías de desarrollo.
 Pasos hacia la medicina del futuro
En 1989 se crea el Centro Nacional de los Estados Unidos para la Investigación del
Genoma Humano (National Center for Human Genome Research), dirigido por James
Watson para supervisar el proyecto elaborar el mapa y la secuencia del ADN humano para
2005. Al año siguiente se inauguró de manera formal el Proyecto Internacional del Genoma
Humano (International Human Genome Project). La meta de este proyecto era identificar y
secuenciar todos los genes del genoma humano. En 1990 se lleva a cabo la primera terapia
génica en una niña de cuatro años con una enfermedad del sistema inmune llamada
“deficiencia ADA”; aparentemente la terapia funcionó, pero desató una serie de debates
sobre los aspectos éticos de la misma. En 1998, dos grupos de investigación tuvieron éxito
en el cultivo de células troncales embrionarias, lo que abriría nuevas perspectivas para el
tratamiento de enfermedades. Como resultado del proyecto del Genoma Humano, se
publica en 2001 la secuencia de dicho genoma en las revistas Science y Nature, haciendo
posible el que investigadores de todo el mundo comiencen a desarrollar tratamientos
genéticos a enfermedades. La secuencia se completó para el 2003, dos años antes de lo
planeado y con un gasto menor al estimado. Un grupo de investigadores anuncia en 2002
sus resultados exitosos en la obtención de una vacuna contra el cáncer cérvico, la primera
vacuna preventiva para algún tipo de cáncer. En 2003, se encuentra un gen relacionado
con la depresión y se avanza en la detección de lazos genéticos con esquizofrenia y
desorden bipolar. Ese mismo año, el gobierno de China aprueba el uso del primer producto
de terapia génica (Gendicine), desarrollado por la compañía Shenzhen SiBiono GenTech
para el tratamiento de cáncer de cabeza y cuello.
 Más avances en genética
Para 1996, un grupo de científicos reportó la primera secuencia completa de un organismo
complejo: la levadura de pan Saccharomyces cerevisiae. El año siguiente pasaría a la

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historia por el anuncio de investigadores del Instituto Rosalin de Escocia sobre la clonación
de una oveja, a la que llamaron Dolly, a partir de una célula adulta. A partir de la
secuenciación del primer organismo complejo, comienza la carrera por obtener el genoma
de más organismos, así en 1998 se obtuvo la secuencia del gusano Caenorhabditis
elegans, el primer genoma completo de un animal; en 2000 la primera planta, Arabidopsis
thaliana; en 2002 la primera planta usada como alimento, el arroz, así como el parásito que
causa la malaria y la especie de mosquito que lo transmite; en 2004 el pollo, la rata de
laboratorio y el chimpancé, el primate más cercano al hombre; en 2005 el perro; en 2006 la
abeja y de manera parcial el Neandertal; y en 2007 el caballo. En el año 2002, un grupo de
investigadores logra obtener un virus sintético (de poliomielitis) partiendo únicamente de su
genoma; este logro despierta muchas preguntas éticas y de seguridad. Ya en 2005, se
logra sintetizar parcialmente al virus de la influenza causante de la muerte de al menos 20
millones de personas en todo el mundo de 1918 a 1919. En 2003 se logra clonar por
primera vez una especie en peligro de extinción (el banteng) y otras especies como el
caballo, venados y mulas; al año siguiente se lleva a cabo la clonación de la primera
mascota: un gato; un año más tarde, en 2005, se logra la clonación de una vaca a partir de
células de un animal muerto. En el año 2005, científicos de la Universidad de Harvard
reportan haber tenido éxito en convertir células de piel en células troncales embrionarias al
fusionarlas con células troncales embrionarias existentes.
TIPOS DE BIOTECNOLOGIA
De acuerdo a la técnica, la Biotecnología puede ser dividida en dos categorías: tradicional y
moderna.
A. Biotecnología tradicional
Utiliza técnicas tradicionales y sus principales productos son alimentos tales como el
pan, el yogur, las leches agrias, los quesos; saborizantes como el sillao, los
sazonadores; alcohol industrial, antibióticos y ácido cítrico.
B. Biotecnología moderna
Emplea técnicas novedosas de ingeniería genética para obtener organismos capaces
de formar productos útiles en el campo de la industria, salud y medio ambiente. En este
campo sobresale el cultivo de células y tejidos, la hibridación, la transgenia, la
clonación, la terapia génica y el estudio de genomas.

INGENIERÍA GENÉTICA
La ingeniería genética es la tecnología o más concretamente la biotecnología de la
manipulación y transferencia de ADN de un organismo a otro, que posibilita la creación de
nuevas especies, la corrección de defectos genéticos y la fabricación de numerosos
compuestos.
Actualmente la Ingeniería Genética está trabajando en la creación de técnicas que permitan
solucionar problemas frecuentes de la humanidad como, por ejemplo, la escasez de donantes
para la urgencia de trasplantes. En este campo se están intentando realizar cerdos
transgénicos que posean órganos compatibles con los del hombre.
El ADN es una base fundamental de información que poseen todos los organismos vivos, hasta
el más simple y pequeño. Esta información está a su vez dividida en determinada cantidad
espacios llamado loci (plural) o locus (singular); que es donde se encuentra insertado los
genes, que varían dependiendo de la especie.

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La ingeniería genética que mediante la manipulación de la información genética ayuda al

ser humano
Entre los procesos biotecnológicos destacan la reproducción asistida, que involucra
conservación de espermatozoides y óvulos en nitrógeno líquido, la inseminación artificial,
fecundación “in Vitro”, conservación de embriones por congelación, y transferencia e
implantación de embriones en el útero de la hembra. La ingeniería genética ha alcanzado en
los últimos tiempos un alto grado de desarrollo. Entre las técnicas más usadas y conocidas
tenemos:
o La tecnología del ADN recombinante.
o La reacción en cadena de la polimerasa.
o El cultivo de células y tejidos.
o La hibridación.
o La transgenia.
o La terapia génica.
o La clonación.
o Elaboración de bibliotecas genómicas.
o El secuenciamiento de genomas.
La ingeniería genética puede definirse como un conjunto de técnicas, nacidas de la Biología
molecular, que permiten manipular el genoma de un ser vivo.

TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE

Esta tecnología nos permite obtener fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas, que llevará
además el gen o los genes que se desee. Este ADN puede incorporarse a las células de otros
organismos (vegetales, animales, bacterias...) en los que se podrá "expresar" la información de
dichos genes. (De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano y se
lo "pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula la fabricación de
insulina, lo que haríamos al ponérselo a una bacteria es "obligar" a ésta a que fabrique la
insulina). Por lo tanto en la tecnología del ADN recombinante podemos diferenciar cuatro
etapas básicas:

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1. Corte específico del ADN en fragmentos pequeños y manejables mediante la utilización de

un tipo de enzimas conocidas como enzimas de restricción que pueden considerarse como
las "tijeras moleculares". Estas enzimas se aislaron en bacterias y se identifican con
distintos nombres, siendo lo característico de ellas estos dos principios:
o Cada enzima de restricción reconoce una secuencia específica de nucleótidos y corta
en ese punto cada una de las cadenas de ADN.
o Los extremos libres que quedan se llaman extremos pegajosos, porque pueden unirse a
otros fragmentos de ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de restricción.

En este esquema se indica el lugar en el que corta la enzima de restricción. Se aprecia la actuación en
ambas hebras.

En este esquema se ve el resultado de la actuación de la enzima de restricción. Ha quedado rota la

molécula de ADN, quedando unos bordes pegajosos por donde puede unirse este ADN, con otro
aunque sea de una especie diferente.

2. Inserción de los fragmentos de ADN. Esta inserción se realiza en vectores de clonado, que
son los agentes transportadores capaces de introducirlos en las células hospedadoras. Los
vectores de clonación son pequeñas moléculas de ADN, que tienen capacidad para
autorreplicarse dentro de las células hospedadoras. Se utilizan con frecuencia dos tipos de
vectores de clonación: plásmidos y virus de introducirlos en las células hospedadoras.
Plásmidos. Son moléculas de ADN
circular, con un tamaño menor que el del
cromosoma. Se replican con
independencia del cromosoma bacteriano
ya que tienen su propio origen de
replicación.
En esta secuencia de dibujos se puede
ver como se realiza la inserción de un gen
en un plásmido. En la figura a tenemos un
gen (color rojo) que interesa insertar en un
plásmido (color turquesa).

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En la figura b, vemos como una enzima de

restricción ha cortado el gen y el plásmido,
quedando unos bordes cohesivos o
pegajosos.

La unión del ADN que contiene el gen que se desea

clonar con el vector de clonación, se realiza por medio de
otras enzimas, denominadas ADN-ligasas (figura c), que
unen ambos trozos de ADN. El resultado es una
molécula de ADN recombinante, ya que contiene
fragmentos de ADN de distinta procedencia.

Bacteriófagos. El proceso es similar, se trata de insertar el gen deseado en un fragmento

de ADN vírico (figura d) Posteriormente se ensamblarán las distintas partes del virus (figura
e). Así quedará el virus completo (figura f). En el siguiente paso se insertará este ADN por
el proceso de la TRANSDUCCIÓN.

Cósmidos. Son plasmidos que contienen el fragmento de ADN deseado que posee un
borde cohesivo procedente del genoma del fago lambda (extremo cos) y se empaqueta en
el interior de un fago. Se construye el cosmido uniendo los tres elementos génicos, y el
resultado final es poder introducir en la célula receptora fragmentos largos de ADN.

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Además del origen de replicación, los vectores de clonación deben llevar otros genes
denominados “marcadores”, que sirven para identificar las células que contienen el vector de
clonación. Se suelen utilizar como marcadores, genes de resistencia a antibióticos y genes de
bioluminiscencia.
o Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para identificar bacterias que contienen el
vector de clonación, porque estas bacterias serán resistentes al antibiótico del gen
marcador.
o Genes de luminiscencia. En este caso, la célula que contenga el gen que se quiere
clonar, tendrá la propiedad de emitir luz, ya que el marcador que se le incorpora
determina que se exprese esa característica. Este sistema se emplea cuando la célula
hospedadora es una célula eucariota.
Métodos de introducción del vector
El siguiente paso será introducir el vector de clonación que contiene el gen que se quiere clonar
en la célula hospedadora, para que ésta, al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el
gen concreto. Existen varios métodos que dependerán del tipo de célula fundamentalmente. En
bacterias (células procariotas), mediante estos procesos:
o Transformación. Ocurre espontáneamente en ciertos tipos de bacterias y se consigue
artificialmente sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos físicos y químicos. La
célula capta moléculas de ADN que se encuentran en el medio externo, las introduce en
su interior y las incorpora a su genoma.
o Transducción. Este método consiste en introducir el ADN en la célula hospedadora
mediante un virus, utilizando como vector de clonación el genoma del virus. En la
siguiente figura puede verse el proceso en tres etapas. El número 1 corresponde al

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virus aproximándose a una bacteria. Se puede observar como lleva un genoma ya con
el gen que interesa
clonar. El siguiente
momento 2,
corresponde al
contacto entre el
virus y la pared
bacteriana, en cuya
zona de contacto
se produce un poro
por donde como
vemos en la etapa
3, el virus inyecta
su ADN al interior
de la célula
bacteriana.

ENZIMAS DE RESTRICCION
¿Cómo cortar y pegar el ADN? Tijeras moleculares: enzimas de restricción
En 1975 Daniel Nathans y Hamilton O. Smith descubrieron un tipo de proteínas –las enzimas
endonucleasas o enzimas de restricción- que actúan como “tijeras moleculares”, cortando la
doble cadena de ADN a través del esqueleto de fosfatos sin dañar las bases. El descubrimiento
de estas enzimas condujo a dichos microbiólogos al Nobel en 1978 y dio origen a la ingeniería
genética.
Las enzimas de restricción son producidas por bacterias como método de defensa contra virus
y degradan el ADN extraño.
A su vez, el propio genoma bacteriano está protegido contra sus enzimas de restricción
mediante metilaciones (es decir, el agregado de un grupo metilo [-CH3)]) en un átomo
específico de ciertos nucleótidos.
Estas moléculas son indispensables para la ingeniería genética, ya que producen fragmentos
que se pueden unir entre sí fácilmente (con la ayuda de un “pegamento molecular”: la enzima
ligasa).
Las enzimas de restricción cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los extremos
cohesivos son generados cuando la enzima corta las dos hebras asimétricamente, dejando los
extremos de cada hebra de simples cadenas complementarias entre sí. Por otro lado, los
extremos romos son generados cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar,
generando dos extremos doble cadena.

Figura 1. Enzimas de restricción. Este tipo de endonucleasas puede dejar dos

tipos de extremos. En el primer caso, el corte genera nucléotidos de simple cadena
llamados extremos cohesivos. Estos extremos se pueden unir por medio de otra
enzima, la ADN ligasa. En el segundo caso, se generan extremos doble cadena
(extremos romos). Estos extremos también pueden ser unidos con la ayuda de una
enzima ligasa pero, como no los extremos no son complementarios, la unión será
más inespecífica.

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Las enzimas de restricción permiten cortar el genoma de cualquier organismo en pequeños

fragmentos llamados fragmentos de restricción. La colección de miles o millones de estos
fragmentos se llama biblioteca génica.
Actualmente se conocen unas 200 enzimas de restricción (las más conocidas se muestran en
la tabla 1), las cuales se nombran de acuerdo al organismo del cual se extraen, como por
ejemplo EcoRI y EcoRII, que se extraen de Escherichia coli o HaeIII que se extrae de
Haemophilus aegyptius.
Tabla 1: Algunas de las principales enzimas de restricción conocidas y su origen (en base a
Griffiths et al. 1998).

Enzima de Organismo de donde

restricción se extrae
EcoRI Escherichia coli
EcoRII Escherichia coli
HindII Haemophilus
influenzae
HindII Haemophilus
influenzae
HaeIII Haemophilus aegyptius
HpaII Haemophilus
parainfluenzae
PstI Providencia stuartii
SmaI Serratia marcesens
BamI Bacillus
amyloliquefaciens
BglII Bacillus globiggi

Las enzimas de restricción trabajan únicamente sobre secuencias específicas de bases

nitrogenadas, el lugar donde se produce el corte se denomina sitio de restricción y producen
dos tipos de corte: (1) corte con extremos cohesivos y (2) corte con extremos romos (ver Fig. 1)
(Griffiths et al. 1998). Los extremos cohesivos dejan porciones lineales a ambos lados del

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fragmento, es decir, quedan pequeñas secuencias de bases sin aparear a cada lado, siendo
éstas complementarias entre sí, mientras que los extremos romos son aquellos en los que no
queda una porción lineal
a ninguno de los lados.
De acuerdo a la
especificidad de las
enzimas de restricción,
se conocen dos tipos:
las enzimas de tipo I
cortan en un sitio
cercano al sitio de
restricción, a una
distancia que varía
aleatoriamente, y por
ello no se suelen
emplear para DNA
recombinante. Las de
tipo II reconocen y
cortan en la secuencia
específica, y son las más
empleadas en este tipo
de protocolos por su alta
precisión. Las enzimas
de restricción de tipo III
son similares a las de
tipo II en cuanto a la
precisión del lugar de
corte, pero se
diferencian de éstas en
que sólo cortan entre
nucleótidos del mismo tipo, por ejemplo entre dos adeninas.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1.1. De Robertis, E. y E. De Robertis 1997. Biología Celular y Molecular. 12ava edición.
Editorial El Ateneo. Buenos Aires – Argentina.
1.2. Alberts, B.; Bray, D. ; Lewis, J. ; Raff, M. ; Roberts, K. y J. Watson. 1983. Biología
Molecular de la Célula. 2da edición. ediciones Omega, S.A. Barcelona – España.
1.3. Karp, G. 2003. Biología Celular y Molecular. McGraw – Hill Interamericana. México D. F.

ULADECH : ENERO 2008 : VERSIÓN 01.

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