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Loja - Ecuador
2012
i
“DIAGNÓSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA (AIE) MEDIANTE
EL TEST DE COGGINS EN HATOS CABALLARES DE LA HOYA DE
LOJA”
APROBACIÓN
Médico Veterinario Zootecnista
Aprobada:
ii
CERTIFICACIÓN
CERTIFICA:
Director de Tesis
iii
AUTORÍA
iv
AGRADECIMIENTO
El Autor
v
DEDICATORIA
Juan Javier
vi
ÍNDICE GENERAL
Pág.
Aprobación ................................................................................................ii
Certificación................................................................................................iii
Autoría........................................................................................................iv
Agradecimiento...........................................................................................v
Dedicatoria..................................................................................................vi
Índice general.............................................................................................vii
Índice de cuadros........................................................................................xi
Índice de figuras..........................................................................................xi
Resumen.....................................................................................................1
Summary.....................................................................................................2
1. Introducción......................................................................................3
2. Revisión de literatura........................................................................5
2.1. Definición..............................................................................................5
2.2. Sinónimos.............................................................................................5
2.7.1. Tábanos...........................................................................................14
vii
2.7.2. stomoxyscalcitrans..........................................................................15
2.10. Patogenia.........................................................................................18
2.15. Diagnóstico......................................................................................25
2.20.1. Hemograma...................................................................................33
2.20.2. Hematocrito...................................................................................34
3. Materiales y métodos......................................................................39
3.1. Materiales...........................................................................................39
viii
3.1.4. Materiales de oficina........................................................................40
3.2. Metodología........................................................................................40
4. Resultados.............................................................................................49
4.1. Prevalencia........................................................................................49
5. Discusión...............................................................................................53
6. Conclusiones.........................................................................................54
7. Recomendaciones.................................................................................56
8. Bibliografía.............................................................................................58
9. Anexos...................................................................................................60
ix
ÍNDICE DE CUADROS
Pág.
Loja............................................................................................................49
x
ÍNDICE DE FIGURAS
Pág.
xi
RESUMEN
1
SUMMARY
2
1. INTRODUCCIÓN
3
Con un propósito de determinar la prevalencia del virus causante de la
anemia infecciosa equina (AIE) mediante la prueba de Inmunodifusión en
Agar de Gel (AGID) o test de coggins.
4
2. REVISIÓN DE LITERATURA
2.1. DEFINICIÓN
2.2. SINÓNIMOS
5
diagnóstica en el año de 1970 y que el Gobierno de los Estados Unidos
de América, en Noviembre de 1972 la reconoció como la prueba oficial
para la detección de animales portadores del virus de la enfermedad, se
ha reducido la cantidad de brotes clínicos y fue de importancia económica,
ya que también redujo el costo del diagnóstico y el tiempo en procesar la
muestra. (Fig. 1)
2.4. ETIOLOGÍA
6
Recientemente, el virus de la Anemia Infecciosa Equina ha sido
reconocido como un tipo de lentivirus que causa enfermedades
progresivas y mortales. (Fig. 2)
7
haya serotipos no identificados. El virus puede cultivarse en leucocitos,
células fibroblásticas de equinos y solamente se multiplica en macrófagos
de equinos. (Fig. 3)
Algunas de las características físicas que este virus presenta son las
siguientes: posee un tamaño de 80 a 130 nm, la simetría de la cápside es
icosaédrica, presentando envoltura y el genoma es linear diploide de
sentido +, RNA de 10 kb, el lugar de replicación del genoma es el núcleo y
el lugar del ensamblaje viral es el citoplasma. El RNA viral es protegido y
rodeado por varias proteínas como la nucleoproteína, nucleocápside,
matriz y cubierta, con un número bajo de copias de la transcriptasa
reversa en el centro de cada partícula.
8
virales específicas. El genoma del retrovirus está compuesto de dos
hileras de codones RNA y varios genes accesorios.
9
- Los lentivirus persisten durante toda la vida del animal, esta
característica depende de la habilidad de los virus para
integrarse en los cromosomas del huésped, así como la de
evadir la inmunidad del huésped, esto lo logran gracias al alto
grado de mutación, llegando a infectar las células del sistema
inmune.
10
2.5. RESERVORIOS DEL VIRUS
11
Debido a que el virus se elimina por las excreciones y secreciones de los
animales infectados, se considera una posible fuente de contagio el agua
y el pienso contaminado; aunque sería relevante, sí el animal presentara
microlesiones en el tracto digestivo, constituyéndose así la puerta de
entrada de dosis infectantes suficientes. (Fig. 4)
El caballo A y B se infectan del virus por medio de insectos y jeringas con aguja que
tienen el virus de Anemia Infecciosa Equina, juntos transmiten el virus al caballo C (éste
también se contagia por medio de insectos hematófagos y jeringas con aguja
contaminada con sangre del caballo H). El caballo C le transmite el virus al caballo D, el
cual se vuelve portador y es eliminador del virus, este al ser picado por insectos y tener
contacto con instrumentos quirúrgicos transmite el virus al caballo F, el caballo E es
positivo al igual que el caballo G, estos dos transmiten el virus al caballo F, y el F
transmite el virus al caballo H, el que termina el ciclo de transmisión al caballo C.
12
medio de abrasiones en la piel y de mucosas intestinales, éstas tienen
que estar lesionadas para que el virus tenga contacto con el endotelio y
se disemine hacía el torrente sanguíneo.
13
El piquete de los tábanos estimula un movimiento defensivo del caballo, el
que usualmente resulta en la interrupción de la succión de sangre. Por lo
que la mosca es motivada a completar el proceso de alimentación lo antes
posible, y es cuando se da el ataque al mismo, o a otro hospedero, hasta
quedar repleta. De esta manera cualquier material infectivo que provenga
de la sangre del primer hospedero puede ser transmitido mecánicamente
hacía el segundo.
2.7.1. Tábanos
14
las menores 300. Las larvas eclosionan de cuatro a siete días y entran en
el agua o en el fango desapareciendo en su interior durante dos o tres
meses y a continuación pupan, este estado dura aproximadamente de 10
a 14 días. El ciclo biológico completo tiene lugar entre 4 y 5 meses en
condiciones favorables, pero las bajas temperaturas prolongan el
desarrollo. Los adultos se observan en verano y especialmente cuando el
día presenta bastante luz solar. Son sumamente activos en los días
calurosos. Las hembras son las hematófagas, y los machos se alimentan
de la liga dulce de las plantas y de jugos florales, como también las
hembras, si no disponen de un hospedador adecuado como los équidos y
bóvidos. Los insectos se alimentan sobre la cara interior del abdomen,
ombligo o sobre las patas, cuello y cruces de los hospedadores. Pican
unas cuantas veces en varios lugares antes de saciarse.
2.7.2. Stomoxyscalcitrans
15
para realizar una toma, a menudo cambian de posición o vuelan hacia
otro animal para seguir alimentándose.
16
los brotes naturales se observa la propagación lenta de la enfermedad a
caballos susceptibles después de la incorporación de un animal infectado.
17
2.10. PATOGENIA
18
en los órganos parenquimatosos, sobre todo el hígado. Se producen
cambios similares en el tejido nervioso desencadenándose ataxia,
leptomeningitis espinal y encefalomielitis, signos característicos en la
presentación clínica de la enfermedad.
19
eritrocitos. Hay un acortamiento del lapso de vida de los eritrocitos hasta
un 20 a 65% del período normal. La hemólisis es intracelular, aunque en
la enfermedad aguda hay fragmentación de los eritrocitos debido al daño
microvascular y a los niveles de haptoglobina disminuidos. La médula
ósea se muestra al principio con una respuesta muy elevada, presentando
una desviación hacia arriba en el volumen celular medio y anisocitosis
marcada. Luego la médula se vuelve hipoproliferativa.
20
muy amplio y la viremia disminuye hasta alcanzar un nivel muy bajo. Es
entonces cuando se examina una gran cantidad de tejidos para aislar el
virus.
Los signos que se presentan en las fases aguda y subaguda son de grado
variable, generalmente es raro observarlas en situaciones naturales y son
las formas de la enfermedad que más daño causan debido a que los
signos aparecen rápidamente; como regla general se observa depresión
inicial, debilidad intensa y deterioro del estado general. La ataxia es un
signo importante en muchos de los casos y en algunos es la única
anormalidad clínica observada.
21
La esplenomegalia es tan intensa que frecuentemente se palpa por
exploración rectal. En las yeguas gestantes se puede presentar aborto.
Muchos animales se recuperan de esta etapa aguda después de un curso
de 3 días a 3 semanas. Otros se debilitan progresivamente, caen en
decúbito dorsal y mueren después de 10 a 14 días de iniciados los signos
clínicos de la enfermedad.
22
constante durante los períodos febriles, lo que constituye la base de las
petequias. En las etapas tempranas de la enfermedad hay anisocitosis,
con poquilocitosis moderada, característicamente ningún policromático.
Los eritrocitos nucleados no están presentes en la sangre periférica. En la
etapa temprana de un ataque agudo hay macrocitosis, a veces hasta un
volumen celular medio de 60fl. Más tarde la enfermedad se vuelve
normocromática, normocítica y no hay respuesta. Hay leucopenia y
neutropenia, desviación mínima a la izquierda, linfopenia y una
monocitosis relativa. Los monocitos con frecuencia contienen glóbulos
rojos ingeridos (sideroleucocitos). Los niveles de 4 por 10,000
sideroleucocitos constituyen un diagnóstico positivo de la enfermedad.
23
2.14. HALLAZGOS A LA NECROPSIA
24
2.15. DIAGNÓSTICO
25
positivos. La prueba de C-ELISA da los resultados el mismo día en que se
procesan las muestras, por el contrario de la prueba de Coggins en la cual
se puede saber los resultados 24 horas después de procesadas las
muestras. Una de las desventajas que presenta la prueba de ELISA, es
que debido a su alta sensibilidad puede arrojar resultados falsos positivos.
En Chile la tendencia actual es reemplazar la prueba de Coggins por la
prueba de ELISA.
26
pueden estar expuestas a una enfermedad y al agente etiológico de la
misma. El principal componente del suero que se analiza es la actividad
de las globulinas como anticuerpos específicos. Los anticuerpos
sanguíneos son una evidencia de la exposición actual o anterior a los
agentes infecciosos.
27
2.16. Obtención De Muestras Y Preparación Para El Análisis
28
la conservación ininterrumpida a 20°C es un procedimiento satisfactorio,
existiendo una disminución muy escasa de la actividad específica durante,
al menos 2 años (27). Las muestras antes de analizarse deben ser
almacenadas a temperatura de refrigeración entre 2°C a 8°C hasta por 5
días y si se almacena por más tiempo la temperatura deberá estar a –
20°C.
29
Es una prueba de unión secundaria en la cual la reacción entre antígeno y
anticuerpo va seguida de una segunda reacción, en este caso la
precipitación de los complejos antígenos y anticuerpo.
Los resultados que emite esta prueba de diagnóstico son los siguientes:
30
- Sí el suero es débilmente positivo, las líneas de precipitina de
control se topan con el pocillo de muestra pero se curvan en
sentido opuesto de los pocillos de control, las unas con las otras, Y
31
Para obtener un antígeno satisfactorio a partir del bazo, debe infectarse
un caballo con una cepa muy virulenta del virus de la AIE. El período de
incubación debería durar entre 5 y 7 días, el bazo se debe extraer 9 días
después de la inoculación, cuando más alto es el título del virus y antes
de que se produzcan anticuerpos. La pulpa del bazo, sin diluir, se utiliza
como antígeno en la prueba de Inmunodifusión (Coggins L. 1973).
La extracción del antígeno del bazo con una solución salina y una
concentración con sulfato amónico, no proporciona un antígeno tan
satisfactorio como una selección de bazos con un título alto del antígeno
de la AIE. (Manual OIE, 2004) Alternativamente, se infectan células de
riñón fetal equino, células dérmicas o células del timo canino con una
cepa del virus de la AIE adaptado para crecer en cultivo de tejido. El virus
se recoge de los cultivos por precipitación con polietilenglicol al 8%, por
confección en pellets o por ultra centrifugación.
La p26 es una proteína estructural interna del virus que está codificada
por el gen gag. Este gen es estable y no se han encontrado variaciones
entre las cepas (Montelaro, 1984).
32
2.19. PREPARACIÓN DEL ANTISUERO ESTÁNDAR
2.20.1. Hemograma
33
Equina; tal prueba se ha abandonado como diagnóstico para la
enfermedad (Figueroa, 1984).
2.20.2. Hematocrito
34
Esta prueba como las anteriores, tampoco permite la diferenciación de
anemias producidas por hematozoarios u otras causas (Figueroa, 1984).
a) Técnica de Césari
35
El otro dato que suministra la técnica de Césari es el índice volumétrico,
que de una idea casi precisa del número de hematíes por milímetro cúbico
y al mismo tiempo el grado de anemia presente. Este dato es de 0.30 a
0.50 para caballos sanos y en los enfermos de Anemia Infecciosa Equina
está por debajo de 0.30, puede llegar hasta 0.15 o menos (Chamorro,
1979).
c) Técnica de Westergreen
36
a 30 mm, en 10 minutos y de 70 a 90 mm, en 20 minutos (Chamorro,
1979).
37
En el animal sano se encuentran muy poco de estos elementos, pero en
anemias de tipo hemolítico, se aumenta el número de sideroleucocitos. La
hemosiderosis (inclusiones de hierro) que llega a ser característica en el
hígado y el bazo se debe a la acumulación de sideroleucocitos que han
sido fagocitados (Chamorro, 1979).
Una prueba positiva solamente sirve para tener una idea de la presencia
de la enfermedad, porque entre la crisis el número de siderocitos
disminuye lentamente hasta llegar a desaparecer por completo, por tanto
estas células no se encuentran en enfermos latentes. (Chamorro, 1979).
38
3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. MATERIALES
- Centrífuga
- Tubos de centrífuga
- Kit de reactivos para la prueba de coggins
- Pipeta de 10 y 20 cm
- Micro pipeta
- Puntas para pipeta
- Cajas Petri
- Saca bocados
39
- Incubadora
- Gradillas
- Computadora
- Calculadora
- Bolígrafos
- hojas
- Impresora
- Cuaderno
3.2. METODOLOGÍA
40
3.2.2. Tamaño de la muestra
Z= Constante (1.96)
41
Barrios Equinos Asnos Mulares Muestra
Jipiro 7 1 0 8
Amable María 1 3 1 5
Zalapa 2 3 1 6
Yanacocha 1 1 1 3
Carigán 3 2 1 6
Motupe 2 3 2 7
La Banda 2 2 1 5
San Cayetano 1 2 0 3
Los Molinos 0 0 0 0
La Paz 2 3 1 6
Zhucos 1 0 1 2
Las Pitas 1 2 0 3
Cochas 0 0 1 1
Total 55
42
Barrios Equinos Asnos Mulares Muestra
Tierras
2 3 2 7
Coloradas
Chontacruz 1 2 0 3
Menfis 1 0 0 1
La victoria 0 1 1 2
Obrapía 2 2 0 4
Payanchi 0 1 0 1
Bolonia 0 1 0 1
Daniel Álvarez 3 2 0 5
Belén 5 3 2 10
Tenería 0 2 1 3
La urna 0 0 1 1
Las palmas 0 1 0 1
La Palmera 0 0 0 0
Total 39
43
3.2.3. Toma de muestras
Se usó solo suero proveniente de equinos asnos y mulas para analizar las
muestras. Se analizaron sueros con 5 días máximo de almacenamiento, y
se congelaron los sueros a - 2º C. Fueron descartadas las muestras con
presencia de turbidez, hemólisis o indicios visibles de crecimiento
bacteriano ya que podían interferir con el rendimiento y la exactitud del
análisis.
44
3.2.5. Procedimiento de análisis y preparación de las cajas de petri
(agid)
45
3.2.6. Llenado de los círculos de incubación de las placas (Fig.13)
46
3.3.1.1. Resultado negativo (fig. 14)
47
3.4.1. Diseño experimental
48
4. RESULTADOS
4.1. PREVALENCIA
Menor a 1 10 6,7 0 0
1a3 36 24 0 0
4a6 34 22,7 0 0
7a9 29 19,3 0 0
10 a 12 9 6 0 0
Mayor a 12 32 21,3 0 0
Total 150 100 0 0
49
El cuadro seis podemos observar que existen diferentes edades de los
animales en estudio, tomando en cuenta la edad todas las muestras
dieron como resultado negativo a anemia infecciosa equina (AIE), no se
encuentra una diferencia estadística con respecto a la edad.
Sexo No % Positivos
No %
Caballos 32 21,3 0,0 0,0
Yeguas 54 36,0 0,0 0,0
Burros 16 10,7 0,0 0,0
Burras 23 15,3 0,0 0,0
Mulos 8 5,3 0,0 0,0
Mulas 17 11,3 0,0 0,0
Total 150 100,0 0,0 0,0
50
4.4. PREVALENCIA DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA (AIE) EN LA
HOYA DE LOJA POR VARIEDAD
Positivos
Variedad No %
No %
Caballos 86 57,3 0 0
Asnos 39 26 0 0
Mulas 25 16,7 0 0
Total 150 100 0 0
El cuadro ocho nos indica que ochenta y seis caballos, treinta y nueve
asnos y veinticinco mulas, se muestrearon para este estudio, dando como
resultado tanto caballos, asnos y mulas resultaron negativos al
diagnóstico de anemia infecciosa equina (AIE) por el método de Coogins,
no encontrando diferencia estadística entre variedades.
Positivos
Sector No %
NO %
Norte 55 36,7 0 0
Sur 46 30,7 0 0
Este 39 26 0 0
Oeste 10 6,7 0 0
Total 150 100 0 0
51
El cuadro nueve nos muestra que para la realización de este estudio se
procedió a dividir a la hoya de Loja en cuatro sectores: Norte, sur, Este y
Oeste, los resultados obtenidos en estos cuatro sectores fueron negativos
con un porcentaje del 0,0%.
52
5. DISCUSIÓN
53
6. CONCLUSIONES
54
- No existe registro de la población equina en la hoya de Loja en los
archivos de la Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la
Calidad del Agro. AGROCALIDAD LOJA.
55
7. RECOMENDACIONES
56
- Incrementar las medidas de higiene, tales como adecuada
desinfección de agujas y enseres de manejo, el adecuado manejo
de las excretas y un control de vectores ayudarán a disminuir la
difusión de esta importante enfermedad.
57
8. BIBLIOGRAFÍA
http://www.idexx.com/view/xhtml/en_us/livestock-poultry/equine/equine-
infectious-anemia.jsf
OIE. 2004. Anemia infecciosa equina (en línea). Manual de la OIE sobre
animales terrestres.
58
P. SARMIENTO, M. QUIJANO-PINZÓN. Prevalencia del virus de la anemia
infecciosa Equina (Aie) en dos poblaciones de caballos de Trabajo de los
departamentos del chocó y la Guajira.
ANEXOS
59
60
ANEXO 1. Fotografías del trabajo de campo
61
Fotografía: 3 – 4.Manejo de la muestra de sangre
62
Fotografía: 5 – 6.Preparaciónde la solución tampón
63
Fotografía: 7 – 8.Preparación de las cajas de petri (AGID)
64
Figura 8: Llenado de los círculos de incubación de las placas
Equina.
65
Figura 9: Resultado negativo
66
Fotografía: 10. Perforación de los pocillos con el saca bocados
67
Fotografía: 12. Colocación del antígeno
68
Fotografía: 14 – 15 Incubación de las placas a 24 – 26 Co
69
Fotografía: 16 – 17. Lectura de resultados
70
Fotografía: 19. Supervisión del trabajo en el laboratorio Director, Asesora
y Responsable de la investigación
71
ANEXO 2.
Nº Sexo Variedad
---
---
---
150
72
ANEXO 3.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
Propietario
Provincia:……………………………………………..
Parroquia:…………barrió………..
73
ANEXO 4.
74
ANEXO 5.
75
ANEXO 6.
76
ANEXO 7.
77
ANEXO 8.
78
ANEXO 9.
79