Ciencias AcadémicasRevista Asiática de Investigación Clínica y

Farmacéutica
Vol. 5, No. 1, 2012 ISSN - 0974-2441

Artículo de Investigación

ESTIMACIÓN CUANTITATIVA DEL CONTENIDO BIOQUÍMICO DE VARIOS

EXTRACTOS DE HOJAS DE STEVIA REBAUDIANA
PANDE SNEHAL*, KHETMALAS MADHUKAR

Instituto de Biotecnología y Bioinformática Dr. D. Y. Patil, Estudio No. 87/88, Mumbai-Pune Bypass
Express Way, Tathawade, Pune - 411033, Maharashtra, India, E-mail: kedarsnehal07@gmail.com

Recibido: 28 de Septiembre de 2011, Revisado y aceptado: 8 de Noviembre de 2011

Resumen

El objetivo del presente trabajo científico es la investigació n cuantitativa de carbohidratos

totales, azú cares reductores, proteínas y aminoá cidos en diversos extractos de hojas de
Stevia rebaudiana. Los extractos de hojas de Stevia fueron evaluados por su composició n
bioquímica. En los extractos de hojas frescas, el porcentaje de carbohidratos resultó mayor
que azú cares reductores y aminoá cidos y el menor contenido de proteína. En los extractos
de hojas secas, los azú cares reductores está n presentes en mayor porcentaje seguido de los
carbohidratos, las proteínas y los aminoá cidos, respectivamente. En el presente trabajo, la
concentració n de azú cares, proteínas, aminoá cidos resultó ser mayor en las hojas secas que
en las hojas frescas debido a la reducció n en el contenido de humedad y el aumento neto de
la masa seca. El má s alto contenido de proteínas y carbohidratos se encontró en el extracto
de hojas secas de Stevia, en comparació n con el extracto de la hoja fresca. La demanda de
Stevia está aumentando considerablemente debido a su naturaleza no caló rica y los usos
como sustituto natural del azú car. Este estudio ayudará a establecer ciertos protocolos
para la purificació n del extracto de Stevia.

Palabras claves: Stevia rebaudiana, Bioquímica, proteína, carbohidratos.

INTRODUCCIÓN Astaraceae. Es un arbusto medicinal

La Stevia rebaudiana (Bertoni) es una
hierba nueva y versá til, con una increíble
dulzura que está ganando mucha
popularidad entre todos los tipos de
usuarios de edulcorantes como el sustituto
má s ideal para el azú car. Produce
glucó sidos de steviol dulces (Soejarta et al.,
1982 y Savita et al., 2004). Es la planta
medicinal antidiabética con mayor
demanda perteneciente a la familia
perenne y endémico (Sivaram y Mukundan,
2003). También se le conoce como planta
melífera, debido a su dulzor. Las hojas
frescas tienen un sabor de regaliz
agradable. Se recomienda para la diabetes y
ha sido ampliamente probada en animales y
utilizada por los seres humanos sin ningú n
efecto secundario (Megaji et al., 2005). Los
componentes obtenidos a partir de las
hojas de Stevia son los mejores
edulcorantes alternativos naturales para la
diabetes. Las hojas de Stevia contienen
compuestos edulcorantes como
Estevió sidos, Rebaudió sidos-A,
Rebaudió sidos-B, C y otros seis compuestos
que se dice tienen propiedades
equilibradoras de insulina (Farooqi y
Sreeramu, 2001). Los diabéticos con
hiperglucemia pueden utilizar Stevia como
edulcorante natural alternativo (Din et al.,
2006). La Stevia tiene usos medicinales
versá tiles, sin efectos secundarios que
centran el interés hacia la Stevia en todo el
mundo. Se utiliza para el tratamiento de
diversas condiciones tales como el cá ncer
(Yasukawa K. et al, 2002) la diabetes (N.
Lailerd et al., 2004), la obesidad, cavidades,
la hipertensió n (Dyrskog et al, 2004) la
fatiga, la depresió n, y en preparaciones
cosméticas y dentales. Posee propiedades
hipoglucemiantes, hipotensoras,
vasodilatadoras, mejoradoas del sabor,
edulcorantes, antifú ngicas, antivirales,
antiinflamatorios, antibacteriales (Ghosh,
2008) y aumenta la funció n urinaria del
cuerpo. Para los pacientes con diabetes,
hipoglucemia, hipertensió n arterial,
obesidad e infecciones cró nicas por
levaduras, la Stevia es el edulcorante ideal.
Puede ser utilizado con seguridad en
tó nicos medicinales herbales para los
pacientes diabéticos y también en los
productos de uso diario.
El propó sito de este trabajo científico es la
investigació n cuantitativa de sustancias
bioquímicas presentes en varios extractos
de hojas de S. Rebaudiana. La demanda de
Stevia está aumentando considerablemente
debido a su naturaleza no caló rica y sus
usos como sustituto natural para el azú car.
Las hojas tienen gran importancia
comercial debido a la presencia de
glucó sidos dulces diterpenos que son de
300 a 400 veces má s dulce que el azú car,
sin efectos secundarios. La planta fue
domesticada en la India en el pasado siglo
20. Así que hay una necesidad de establecer
ciertos protocolos para la purificació n del
extracto de Stevia mediante diversas
técnicas. Esta investigació n se llevó a cabo
para estudiar y comparar la presencia de
los componentes bioquímicos en varios
extractos de hoja de Stevia.
METODOLOGÍA
Las plantas de S. Rebaudiana se obtuvieron
de “Jamna Biotech” (Exportador,
procesador y proveedor de plantas de
Stevia), en Pune, India. Las hojas se
recolectaron y se secaron bajo sombra a
temperatura ambiente. Las hojas secas se
envasaron en bolsas de polietileno y se
almacenaron en el congelador hasta su uso.
Las hojas frescas y las hojas secas se
sometieron a procedimientos específicos
para la preparació n de los extractos.
Preparación de las muestras (A, B y C)
A) Extracto de hojas verdes: el extracto
metanó lico de las hojas de Stevia frescas
(5g) fue preparado por molienda vigorosa
en 80% de alcohol y agua destilada,
respectivamente, mediante el uso de un
mortero. La mezcla se centrifugó a 8000
rpm durante 20 min. El sobrenadante se
recogió y se utilizó para el aná lisis. B)
Extracto de hojas secas: Se llevó a cabo el
mismo procedimiento utilizando polvo de
hojas secas. C) Polvo Estevió sido: El polvo
estevió sido disponible comercialmente fue
tomado en una concentració n de 1mg/mL.
El extracto alcohó lico (metanol) de polvo
de estevió sido puro se preparó y se utilizó
para el aná lisis. Preparació n de la muestra
(D y E): 250 g de hojas secas finamente
pulverizadas de Stevia Rebaudiana se
extrajeron con agua caliente (1 litro)
durante dos horas a 70 ºC. El extracto se
filtró a través de papel de filtro Whatman #
1 y la solució n de color verde claro (800
mL) se concentró hasta 400 mL mediante
calentamiento. Se utilizaron dos métodos
para la purificació n parcial de los extractos.
D) El pH de extracto parcialmente
purificado se redujo a pH 3,5 con á cido
fumá rico (C4H4O4). Se volvió a filtrar y el pH
del filtrado se ajustó a 10,0 con hidró xido
de sodio (NaOH) diluido. Se separó una
masa pastosa. Se filtró y el pH del filtrado se
reajustó a 8,5 con la adició n de sulfato de
aluminio y potasio (alumbre). La solució n
era transparente y clarificada. Así, la Fig. 3. Concentración de proteínas (µg/mL) en
diferentes muestras.
solució n se purificó parcialmente. E) El pH
del extracto se ajustó a 11,5 con ó xido de
calcio (CaO) se filtró y el pH del filtrado se
ajustó a 6,5 con glucono-delta-lactona
(GDL) o E575. La solució n era transparente
y clarificada. Tanto los extractos D y E se
decantaron durante 4-5 horas y el
sobrenadante fue tomado. La solució n se
diluyó posteriormente 10 veces con agua
destilada y se utilizó para el aná lisis
(extracto 1 mL + 9 mL de agua destilada).
Fig. 4. Concentración de aminoácidos (µg/mL) en
diferentes muestras.

Análisis bioquímico

Los carbohidratos solubles totales se

Fig. 1. Concentración de carbohidratos (µg/mL)
en diferentes muestras.
Fig. 2. Concentración de azucares reductores
(µg/mL) en diferentes muestras.
estimaron cuantitativamente utilizando el
método de la Antrona. Los carbohidratos
solubles totales se calcularon con la ayuda
de una curva de calibració n utilizando D-
Glucosa como solució n está ndar. Se estimó
el contenido de azú cares reductores
siguiendo el método de Lindsay (1973).
Para la estimació n de los azú cares
reductores se utilizó el método DNS. La
estimació n cuantitativa de las proteínas se
realizó mediante el método de Lowry et al.
(1951). El método de Folin-Lowry es el má s
comú nmente utilizado para la
determinació n de las proteínas en el
extracto libre de células debido a su alta
sensibilidad. El método se describe por Lee
y Takahashi (1966). El método utilizado
para la estimació n de aminoá cidos fue la
prueba de ninhidrina.

Fig. 5. Comparación del contenido bioquímico en
extractos de hojas frescas de Stevia.
Fig. 6. Comparación del contenido bioquímico en
extractos de hojas secas de Stevia.
Tabla 1. Contenido bioquímico en cinco
extractos de S. Rebaudiana
Fig. 7. Comparación del contenido bioquímico
(µg/mL) en todas las muestras.
DISCUSIÓN Y RESULTADOS
Análisis bioquímico
Se realizó la estimació n cuantitativa del
contenido bioquímico de la biomolécula
principal tales como carbohidratos,
azú cares reductores, proteínas y
aminoá cidos. La densidad ó ptica de cada
muestra se midió con la ayuda de
colorímetro y se representó grá ficamente
respecto a la solució n está ndar utilizada
particularmente para cada bioquímico. En
el grá fico, la concentració n del contenido
bioquímico presentes en 1 mL de muestra
se calculó y se presenta a continuació n en
forma tabulada (Tabla 1). La concentració n
de carbohidratos presentes en diferentes
muestras se comparó con la ayuda de la Fig.
1. La cantidad del contenido carbohidratos
fue mayor en las hojas secas que en las
hojas frescas. El polvo estevió sido puro
muestra un mayor contenido de
carbohidratos, seguido por la solució n A y
la solució n B. La concentració n de azú cares
reductores presentes en diferentes
muestras se comparó con la ayuda de la
grá fica 2. Las hojas secas muestran un
mayor contenido de azú cares reductores
que las hojas frescas. En el caso del polvo
de estevió sido puro no se observó
contenido de azú cares reductores en una
cantidad considerable. La solució n A y la
solució n B también contuvieron azú cares
reductores en altas proporciones. La
concentració n de proteínas presentes en las
diferentes muestras se comparó con la
ayuda de la grá fica 3. Las muestras de hojas
frescas mostraron menor contenido de
proteínas que las muestras de hojas secas,
mientras que la menor cantidad de
contenido de proteínas se observó en la
muestra de estevió sido puro. La solució n A
y la solució n B también mostraron una
mayor cantidad de contenido de proteínas.
La concentració n de aminoá cidos presentes
en diferentes muestras se comparó con la
ayuda de la grá fica 4. Las muestras de hojas
secas mostraron un contenido de
aminoá cidos libres ligeramente superior
que las muestras de hojas frescas. La menor
cantidad de contenido de aminoá cidos se
vio en el estevió sido puro. Mientras que se
observó la misma cantidad de contenido de
aminoá cidos en las soluciones A y B. La
comparació n de los carbohidratos,
proteínas, azú cares reductores y Los autores desean agradecer al Dr. D.Y.
aminoá cidos presentes en las hojas frescas
y secas de Stevia Rebaudiana se realizó
mediante los resultados obtenidos a partir
de los aná lisis de contenido bioquímico
estimados cuantitativamente. En los
extractos de hojas frescas, el porcentaje de
contenido de carbohidratos fue mayor que
el de azú cares reductores y aminoá cidos y
menor que el contenido de proteínas. En los
extractos de hojas secas, los azú cares
reductores está n presentes en mayor
porcentaje seguido de los carbohidratos,
proteínas y aminoá cidos, respectivamente.
Al realizar la comparació n, se puede
concluir que en general, la mayor cantidad
de contenido bioquímico presente en todas
las muestras fue el de carbohidratos,
seguido por el de azú cares reductores. De
igual manera, el contenido de proteínas
resultó ser mayor que el de aminoá cidos
pero menor que el de azú cares reductores.
En el presente trabajo se encontró que la
concentració n de azú cares, proteínas y
aminoá cidos fue mayor en las hojas secas
que en las hojas frescas debido a la
reducció n en el contenido de humedad y el
aumento neto de la masa seca. La
purificació n parcial de la muestra
utilizando ó xido de calcio y neutralizació n,
es responsable de mejorar el contenido de
carbohidratos, mas la cantidad de proteínas
no se ve afectada por ésta. En el caso de la
purificació n de la muestra de estevió sido
puro, se observó una disminució n en el
contenido de proteínas, aminoá cidos y
azú cares reductores en respuesta al
aumento del contenido de los
carbohidratos. La cantidad estimada de
carbohidratos totales y azú cares reductores
resultaron similares. La muestra que
presentó la menor cantidad de proteínas se
observó en la muestra de estevió sido puro,
al ser una cantidad insignificante.
Reconocimientos
Patil Vidyapeeth, Director del Instituto de
Biotecnología y Bioinformá tica Dr. D.Y.
Patil, en Pune, India, por el apoyo financiero
y el fomento de la investigació n.
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