BIOENSAYO DE ALLIUM CEPA

PRESENTADO POR:

VIRNE KALICA SINISTERRA

PAOLA CORREA MIDEROS

CLAUDIO FERNANDO ORTIZ ARIZALA

KATHERIN AMPARO REYES

FERNANDO CASTRO

OSCAR DAVID TORRES

EVA MARIA VALENCIA

KAREN LOPEZ

ALEJANDRA CAMACHO

ANYELA PEREZ

PRESENTADO A:

DIANA MUÑOZ

CORPORACION UNIVERSITARIA AUTONOMA DEL CAUCA

1-B

2015

Introducción:

Una de las necesidades más relevantes en el manejo y la gestión ambiental, es el

desarrollo de métodos de monitoreo para la evaluación de los efectos tóxicos sobre los
seres vivos como consecuencia del uso y el vertido de contaminantes provenientes de
la actividad agro-industrial y del desarrollo de grandes centros urbanos. Entre la
metodología existente, la aplicación de bioensayos de toxicidad con cebolla, se
emplean bioensayos para determinar el grado de contaminación vertido por el
plaguicidas lacnate tal efecto se evaluó en diferentes concentraciones (1.5%, 1.0% y
0.5%) con el objetivo de observar la reacción que tiene el allium cepa.

abstract

One of the most important needs in the management and environmental management,
is the development of monitoring methods for the evaluation of toxic effects on living
organisms as a result of the use and discharge of pollutants from agro-industrial activity
and development of large urban centers. Among the existing methodology, applying
onion toxicity bioassays, bioassays were used to determine the degree of
contamination by pouring lacnate pesticides such effect was evaluated at different
concentrations (1.5%, 1.0% and 0.5%) in order to observe the reaction that has the
allium cepa.
OBJETIVOS Tubo H2O CONCENTRACIÓ
s Destilad N DE PLAGUICIDA
OBJETIVO GENERAL a
1A 19.7ml 1.5ml
El objetivo del trabajo se fundamentó 2A 19.7ml 1.0ml
en utilizar una metodología con la 3A 19.7ml 0.5ml
cebolla empleada al plaguicida 4A 19.7ml 0
“LACNATE” para ello se analizó el 5A 19.7ml 0.3ml
posible efecto que puede causar en ella 6A 19.7ml 0.2ml
y el desarrollo de las raíces. 7A 19.7ml 0.1ml
8A 19.7ml 0
OBJETIVOS ESPECIFICOS

1. Determinar las fases de la

mitosis y meiosis que se
observan mediante muestras
realizadas.
2. Determinar daños a nivel del
allium test.
3. Analizar el índice mitótico
(Profase y Metafase)

Metodología

Se realizó el bioensayo con Allium tat

con el fin de evaluar efecto citotoxicos y
genotoxicos de plaguicida lacnate en
células milimétricas de allium cepa:

1 Día Procedimiento
20 de marzo Se hizo el montaje
2015 tomando 8 tubos de
ensayo organizada
de la siguiente
manera:
2.
24 de Marzo del 2015
Se observó el crecimiento de la raíz y
las concentraciones de plaguicidas al
allium tet y asi mismo se tomaron
medidas de las ramas.
3.
26 de Marzo del 2015
El crecimiento de raíces estaba más
avanzado, se cortaron las raíces y se
cortaron, en algunas se sacó muestras
en plaquetas, se le volvió agregar agua
destilada porque parte había sido
absorbido por la cebolla.
 5.

17 de abril del 2015

Se hizo el proceso nuevamente de

corta las raíces se midieron y se
sacaron nuevas plaquetas ya que eran
el resultado final.
4.

14 de abril del 2015

Se fue a revisar el avance y

observamos que el tallo de la cebolla
estaba muy grande y se le agrego más
agua destilada, se cortaron los tallos y
se votó las cebollas que estaban
podridas, teniendo en cuenta que se
habían descompuesto por la mayor
concentración de plaguicida.

ESTUDIOS SIMLARES
En esta observación es un poco
similar ya que se trabajó con:
(COLORANTE: ORCEÍNA
ACÉTICA)
Es una sustancia que se utiliza para
teñir y ver las distintas fases de los
cromosomas en división celular.
Con esta técnica de tinción se
pueden ver los cromosomas
impregnados por la orcina acética
en color morado y de esta manera
poder observar las diferentes etapas
de la mitosis; esto facilita la
visualización de las etapas del ciclo
celular. Su composición no está
muy clara actualmente.
A diferencia. Del plaguicida que
estamos trabajando nos hemos
dado cuenta que si existen estudios
similares a los colorantes llamados
orcinas acéticas. Nos da a entender
que un plaguicida en un video
ensayo de cebolla es similar a
colorantes porque tiene algunos
procesos mitótico igual.
Materiales y métodos Para el
montaje de la prueba se siguieron
los lineamientos de los protocolos
descritos (9-13). Los bulbos de
Allium cepa (2n = 16) limpios y
sanos, previamente sumergidos en
el agua destilada, se secaron con
papel toalla y se colocaron
directamente en los tubos de
ensayo llenos con la sustancia a
evaluar. Los bulbos eran libres de
raíces que previamente hayan
germinado. Para la evaluación
genotóxica se cortaron las raíces y
se sumergieron por 15 min. en HCl
6N. Una vez transcurrido el tiempo
de exposición al ácido, se lavaron
cuidadosamente tres veces con
agua destilada para eliminar el
ácido, se cortaron los últimos 2 o 3
mm de las puntas (de color más
blanco) y se conservaron en tintura
de orceína por 10 min. para su
coloración. Finalmente, para la
observación microscópica se utilizó
un microscopio marca Zeizz modelo
Axiostar plus con adaptador para
microfotografía; las puntas de las
raíces coloreadas fueron colocadas
en láminas porta objetos, cubiertas
con una laminilla y, con la
protección de una servilleta, fueron
presionadas fuertemente sobre ellas
con el dedo pulgar (“Squash”), de tal
manera que la punta de la raíz
exponga una capa fina del tejido
vegetal.
Para la evaluación genotóxica se
cortaron las raíces y se sumergieron
por 15 min. en HCl 6N. Una vez
transcurrido el tiempo de exposición
al ácido, se lavaron cuidadosamente
tres veces con agua destilada para
eliminar el ácido, se cortaron los
últimos 2 o 3 mm de las puntas (de
color más blanco) y se conservaron
en tintura de orceína por 10 min.
para su coloración. Finalmente, para
la observación microscópica se
utilizó un microscopio marca Zeizz
modelo Axiostar plus con adaptador
para microfotografía; las puntas de
las raíces coloreadas fueron
colocadas en láminas porta objetos,
cubiertas con una laminilla y, con la
protección de una servilleta, fueron
presionadas fuertemente sobre ellas
con el dedo pulgar (“Squash”), de tal
manera que la punta de la raíz
exponga una capa fina del tejido
vegetal.
BIBLIOGRAFIA
http://www.scielo.org.co/pdf/unsc/v1
7n3/v17n3a01.pdf
http://lascienciasenlaweb.blogspot.c
om/2014/03/laboratorio-de-mitosis-
en-raiz-de.html
RESULTADOS

Inicio

Fecha 20 de marzo del 2015

1.

C1= 100%

V1=?

C2= 1,5

V2= 20ml

C1 V1= C2 V2

100% V1= 1.5% x 20ml

V1= 1.5% x 20ml/ 100%

V1= 0.3ml plaguicida + 19.7ml H2O = 20ml

2.

100% V1= 1.0% x 20ml

V1= 1.0 x 20ml / 100%

V1= 0.2ml plaguicida + 19.7ml H2O = 19.9ml

3.

100% V1= 0.5% x 20ml

V1= 0.5 x 20ml / 100%

V1= 0.1ml plaguicida + 19.7ml H2O = 19.8ml

 utilizamos 8 tubos de ensayo con 19.7 H2O y plaguicida lacnate

 Control A y control B

 Concentraciones 0.3 → 1A y 1B

0.2 → 2A y 2B

0.1 → 3A y 3B

24 DE MARZO DEL 2015

4 días después de iniciar el procedimiento

Control A

15 raíces= 18.21

1 1 4 2.6 7 1.3 10 0.3 13 0.1

2 0.8 5 3.2 8 1.9 11 0.5 14 0.4
3 0.5 6 2.9 9 2.5 12 0.2 15 0.01
promedi 1.2
o

Control B

2 raíces 3.1

1 0.1
2 3
Promedio 1.5
1A no se desarrolló raíces

1B no presenta raíces por mayor concentración

2A

19 raíces 26.88

1 0.5 5 0.9 9 2.1 13 2.5 17 0.02

2 1.3 6 1 10 1.6 14 0.5 18 0.02
3 0.6 7 2.7 11 2.9 15 3 19 0.03
4 0.3 8 1.8 12 2.3 16 2.8 promedio 1.4

2B

5 raíces 2.2

1 1.1
2 0.3
3 0.2
4 0.6
5 0.03
promedio 0.4

3A

13 raíces 5.42

1 1 5 0.3 9 0.1 13 0.05

2 0.4 6 0.7 10 0.8
3 1.1 7 0.2 11 0.09
4 0.5 8 0.1 12 0.08 promedio 0.4

3B no tiene raíces

26 DE MARZO DEL 2015

Control A 25 RAICES

1 2.3 6 3.3 11 1.7 16 0.1 21 0.1

2 0.2 7 2.4 12 2.1 17 0.1 22 0.1
3 1.1 8 0.3 13 0.3 18 0.1 23 0.1
4 2.4 9 3.9 14 0.7 19 0.1 24 0.1
5 2.3 10 0.6 15 0.5 20 0.1 25 0.1
promedi 0.5
o

Control B

6 raíces

1 4.1 3 0.1 5 0.1

2 0.1 4 0.1 6 0.1
promedio 0.7

1A

11 raíces

1 1.5 4 1.3 7 0.5 10 0.9

2 0.1 5 0.3 8 0.3 11 1
3 0.5 6 0.9 9 0.6 promedi 0.7
o

1B no tiene raíces

2A 20 raíces

1 1.8 5 0.4 9 0.1 13 0 17 0.9

2 1.2 6 0.7 10 0.1 14 0.8 18 0.7
3 2.9 7 0.2 11 0.4 15 1.1 19 0.1
4 3.2 8 0.3 12 0.4 16 2.4 20 0.1
promedi 0.8
o

2B 6 raíces

1 0.1 3 0.8 5 0.2

2 0.1 4 0.4 6 0.1
promedio 0.2

3A 5 raíces

1 1.1
2 0.1
3 0.1
4 0.2
5 0.5
promedio 0.4
3B 3 raíces

1 1.0
2 2.0
3 2.0
promedio 1.6

14 DE ABRIL DEL 2015

1B- 2B- 3B ↔ están totalmente podridas y sin raíces debido a la alta concentración

Control A ↔ tenían raíces y tallos largos

1A ↔ tenían raíces pequeñas y tallo largo

2A ↔ tenían raíces medianas y tallo largo

1B 2B 3A Control B
 debido a la alta Se deterioró Se pudrió Tuvo el
concentración rápidamente por crecimiento más
del plaguicida su la altas de la raíz debido
concentraciones a que no fue
deterioro fue
expuesto al
más rápido plaguicida

17 DE ABRIL DEL 2015

Control A → 9 raíces

1 0.1 4 1.1 7 0.5

2 0.8 5 1.6 8 0.5
3 6.6 6 1.4 9 0.5
promedio 1.4

1A → 16 raíces

1 3.0 5 1.0 9 1.0 13 2.0

2 2.0 6 1.0 10 1.0 14 0.5
3 1.0 7 1.0 11 1.0 15 0.5
4 1.0 8 1.0 12 2.0 16 0.3
Promedi 1.2
o

2A → 18 raíces

1 4.1 5 0.5 9 0.7 13 0.5 17 1.2

2 0.5 6 0.5 10 4.4 14 0.5 18 0.3
3 0.3 7 0.5 11 2.7 15 0.5
4 0.5 8 2.1 12 0.8 16 0.5 promedio 1.1

3A → 15 raíces

1 0.3 6 9.1 11 9.2

2 0.4 7 9.9 12 9.2
3 1.0 8 0.9 13 9.2
4 8.2 9 2.7 14 3.3
5 4.8 10 9.2 15 1.5
promedio 5.3