Aplicaciones

La HPTLC tiene aplicaciones como el control de calidad, los aditivos (por ejemplo, las
vitaminas), los plaguicidas, las pruebas de estabilidad (caducidad), etc. en alimentos y piensos.

3.1 Evaluación de la composición

3.1.1 Carbohidratos

La cromatografía en capa fina de alto rendimiento (HPTLC) ha seguido siendo un método

valioso y preferido para el análisis de los hidratos de carbono debido a la facilidad de manejo,
la idoneidad para el análisis rápido y simultáneo de múltiples muestras y el menor coste del
equipo que la HPLC estándar (Li et al., 2013; Robyt, 2000) [20, 34]. Para la separación de los
carbohidratos, el gel de sílice ha sido la principal fase estacionaria (Robyt, 2000) [34]. Con el fin
de mejorar la resolución de los analitos de azúcar, las placas de gel de sílice a menudo han sido
reportadas para ser pre-tratadas con tampones adecuados, como fosfato o borato mientras
que como acetonitrilo: agua (85:15 v/v) es frecuentemente la primera opción como disolvente
de desarrollo y con el fin de mejorar la resolución, a menudo se modifica mediante la adición
de disolventes orgánicos o ácidos Wua et al. (2015) [44] llevaron a cabo la caracterización y
comparación de polisacáridos de Lycium barbarum en China utilizando el mapeo de sacáridos
basado en PACE y HPTLC, sugirieron que el mapeo de sacáridos basado en PACE y el análisis
HPTLC podría ser un enfoque de rutina para el control de calidad de los polisacáridos.

3.1.2 Proteínas

La huella digital de los aminoácidos (tanto libres como unidos a proteínas) es necesaria para
evaluar la calidad, la estabilidad y la procedencia del producto. Tradicionalmente, la detección
y cuantificación de las proteínas en las placas de HPTLC puede realizarse con fuorescamina o
ninhidrina como reactivos de tinción (Hakanson, et al., 1974) [13]. Meisen et al. (2004) [22],
mostraron una detección basada en anticuerpos en placas HPTLC para analizar los
glicoesfingolípidos que se unen a la toxina Shiga. Además, ya hemos desarrollado un protocolo
de inmunotinción para la investigación de fosfopéptidos utilizando anticuerpos disponibles
comercialmente en un ensayo HPTLC.

3.2 Detección de toxinas

Scussel (2003) [35], ha comparado la TLC y la HPTLC para la determinación de la aflatoxina M1

en la leche y la B1 en los huevos e informó que la técnica HPTLC proporciona una mejor forma
de punto y un tamaño mucho más pequeño que la TLC, lo que conduce a una detección de
fluorescencia más precisa que la visual (el extracto se aplica manualmente en la placa). Los
estudios han indicado que la toxicidad de la AFM1 es del mismo orden de magnitud que la de
la AFB1 (Wogan y Paglialunga, 1974) [43] y que AFM1 es también un potente
hepatocarcinógeno en animales de laboratorio (Shih y Marth, 1971) [37]. El análisis de
muestras de alimentos de aflatoxina B1 se ha llevado a cabo mediante el método HPTLC y de
las 59 muestras de piensos analizadas por HPTLC, 47 muestras resultaron positivas para
Aflatoxina B1 que representan el 79,66% con una concentración de 25,53±5,31ppb (media±E) y
0,5 ppb de límite de detección (Ramesh et al., 2013) [28]. Dhand et al., (1998) [11] han
informado de que el 75% de las muestras de piensos (21 de 28) estaban contaminadas con
aflatoxina B1.

3.3 Control de calidad

La HPTLC se ha utilizado ampliamente en la autenticación y el control de calidad de las

sustancias vegetales (Reich y Schibli, 2007) [31].

3.3.1 Zumo de frutas

Se ha desarrollado un método cuantitativo rápido para el control de calidad del zumo de

arándanos utilizando la densitometría HPTLC (Boudesocque et al., 2013), que permite la
cuantificación rápida de los marcadores de calidad que son la catequina y las proantocianidinas
(PAC-A2 y PAC-B1) en un solo paso sin el tedioso acondicionamiento de la muestra como la
degradación tiolítica (Kimura et al., 2011) o la degradación ácida y la derivatización con
cloroglucinol (Hümmer & Schreier, 2008) [15].

3.3.2 Leche

Rani et al. (2014) [30], desarrollaron un método basado en HPTLC-MS (espectroscopia de

masas) para la cuantificación de la melamina utilizando en placas HPTLC Silica gel 60 F254s y
una fase móvil optimizada (iso-propanol/diclorometano/agua, 5:2,5:3, v/v/v) en una cámara
de doble cubeta saturada (5 min) a pH 6,8 (Fig. 3). El barrido densitométrico a 200 nm dio
como resultado un único pico de melamina estándar con un valor Rf de 0,57± 0,02. La
visualización se llevó a cabo a 254 nm y se registró la imagen. Después de la optimización, se
cargaron muestras de ensayo adulteradas de 15 μL en la misma placa y se cuantificaron para
comprobar su exactitud. La coincidencia de los espectros UV de la melamina estándar entre los
picos observados en las muestras de ensayo adulteradas se consideró una base para la
presencia de la adulteración de la melamina (Fig. 3).

melamina (2, 4, 6-triamino1, 3, 5-triazina, C3H6N6) se utiliza en la fabricación de plásticos,

fertilizantes, resinas de melamina-formaldehído para revestimientos superficiales, laminados,
retardantes del fuego y adhesivos (Wen et al. 2010). Como la melamina es rica en nitrógeno
(66,7%), a veces se añade a los alimentos para aumentar el contenido de proteínas, que no se
puede medir por el método Kjeldahl o Dumas (Chan et al., 2008) [7] y se asocia a varios
problemas de salud como la urolitiasis, las lesiones de los tejidos e incluso el cáncer de vejiga
(Newton y Utley, 1978) [23].

3.4 Separación, identificación y cuantificación de componentes bioactivos

Muchos investigadores han utilizado la HPTLC para la separación, identificación y

cuantificación de los componentes bioactivos. Kruger et al. (2013) desarrollaron la HPTLC para
la determinación de antocianinas de orujo, zumo y vino. El método HPTLC se ha utilizado para
estimar la piperina en formulaciones ayurvédicas que contienen ingredientes vegetales de la
familia Piperaceae y se ha informado que se ha empleado con éxito para la estandarización y el
análisis cuantitativo de la piperina en formulaciones ayurvédicas (Hazra et al., 2014). Reim y
Rohn, (2015) [33] llevaron a cabo la caracterización por HPTLC (acoplada a la espectrometría
de masas) de guisantes e informaron de la presencia de saponinas en las muestras de
guisantes. Alphonso y Saraf (2012) [1] también han utilizado la HPTLC para estudiar el perfil
químico de los metabolitos secundarios de la planta de importancia medicinal Zanthoxylum
rhetsa (Roxb.). También se ha utilizado la cromatografía en capa fina de alto rendimiento
(HPLTC) para identificar los compuestos responsables de las actividades antioxidante,
antiinflamatoria y xantina oxidasa de los extractos de ajo, utilizando una fase móvil de acetato
de etilo: ácido fórmico: agua, 85:5:10 (v/v/v) y placas de secado por aspersión con reactivo de
anisaldehído. Informaron de la absorbencia máxima a 254 nm y revelaron la presencia
cualitativa de gingerol (6G), 6-shogaol (6S) y 6-paradol (6P) en las placas HPTLC bajo el escáner
CAMAGTLC (Nile y Park, 2015). La HPTLC también se ha utilizado para determinar el Pas
oligomérico (proantocianidind), los alcaloides y las antocianinas a lo largo de toda la cadena de
valor (desde los granos de cacao frescos, pasando por el cacao tostado, la masa de cacao y
hasta las barras de chocolate moldeadas) y el método establecido ha demostrado ser una
herramienta adecuada para el análisis integral de compuestos en laboratorios con un alto
rendimiento de muestras (Pedan et al., 2018).

3.5 Detección de residuos de medicamentos en los alimentos

La HPTLC permite la detección cualitativa y cuantitativa de multirresiduos en la carne (Shankar

et al., 2010) [36]. Los usos reportados de la HPTLC aplicada a la carne incluyen la detección de
residuos como el clembuterol y otros agonistas en los tejidos de la carne (Degroodt et al.,
1991) [10], el nitroimidazol en la carne de cerdo y aves de corral (Gaugain y Abjean, 1996) [12],
las sulfonamidas (Bukanski, 1988) [6] y los fármacos tireostáticos en los tejidos animales.
Argekar et al. (1996) [2] desarrollaron un método para la determinación por HPTLC de seis
fluoroquinolonas (ciprofloxacina, enrofloxacina, lomefloxicina, norfloxacina, ofloxacina y
perfloxacina) en sílice con butanol-etanol-amoníaco 20:5:11 e informaron que el rango de
linealidad era de 10-150 ng, los valores de Rf en el rango de 0,35 a 0,40 y encontraron el
método comparable con otros métodos oficiales. La HPTLC también se ha aplicado para la
detección de flumequina en la leche (Choma et al., 2002) [8], el análisis de corticosteroides
(Hoebus et al., 1993; Vanoosthuyze et al., 1993) [40] y de antibióticos en la leche (Choma et al.,
1999) [9].

Ramírez et al. (2003) desarrollaron un método analítico para identificar y cuantificar múltiples
residuos de antibióticos en la leche de vaca mediante la aplicación combinada de HPTLC con
bioautografía. Oka et al. (2000) [25] han diseñado un método mejorado de HPTLC para el
análisis de tetraciclinas.
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