DOCUMENTO LLUVIA DE IDEAS PARA LA REALIZACIÓN TRABAJO

SEMILLERO

PARTICIPANTES (2)
- Angelica Maria Quintero Peña
- Marly Soraya Reyes Tapasco

TÍTULO TRABAJO (Títulos propuestos el 4 de Marzo en reunión)

● Caracterización y evaluación del potencial antioxidante de flavonoides a través de la
técnica espectrofotométrica a micro escala

RESUMEN
Se analizarán las actividades antioxidantes de 5 flavonoides en microplacas por los métodos
DPPH con 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo como radical midiendo la disminución de absorbancia
y ORAC midiendo el retraso de la disminución de la fluorescencia, con el objetivo de
analizar su capacidad antioxidante verificando lo económico , efectivo y práctico que resulta
usar este tipo de metodologías.

PALABRAS CLAVES

Actividad antioxidante, flavonoides, microescala, microplacas, DPPH, ORAC.

PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN

¿Tener metodologías sencillas para análisis de compuestos fenólicos tipo flavonoide en

microplaca?

OBJETIVO GENERAL

Evaluar la actividad antioxidante de compuestos fenólicos tipo flavonoides mediante métodos

fotométricos a través de técnica de micro escala.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

● Establecer la metodología fotométrica de microplacas.

● Determinar la capacidad antioxidante de 5 tipos de flavonoides.
● Caracterizar la diversidad estructural de los diversos tipos de flavonoides.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El daño causado por la reacción en cadena de los radicales libres, además de diversos factores
que descompensan el equilibrio entre las sustancias prooxidantes y los mecanismos
antioxidantes pueden ser bloqueados naturalmente por vitaminas, minerales, enzimas y
múltiples compuestos que se encuentran en frutas y vegetales; entre la amplia gama de estos
últimos se encuentran los flavonoides.
Pero ¿Qué tan efectiva es la capacidad antioxidante de los flavonoides estudiados? ¿Cuales
son las metodologías más sencillas para analizar compuestos fenólicos tipo flavonoides en
microplaca?. Se evidencia la necesidad de usar metodologías sencillas, reproducibles y
esencialmente no destructivos.

REFERENTE TEÓRICO

La actividad antioxidante es la característica de una sustancia para inhibir la degradación

oxidativa, de tal manera un antioxidante es una molécula capaz de retardar o prevenir la
oxidación de otras moléculas, principalmente tienen como función el inhibir y disminuir la
expresión de las especies reactivas que destruyen la materia.
(​http://repository.lasallista.edu.co/dspace/handle/10567/133​)

Los flavonoides son compuestos naturales presentes en los vegetales y que protegen al
organismo del daño producido por agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la
polución ambiental, sustancias químicas presentes en los alimentos;​1 además de su poderosa
capacidad antioxidante los flavonoides tienen
características antiinflamatorias que refuerzan al
sistema inmunológico. Éstos son compuestos
fenólicos que estructuralmente consisten de dos
anillos bencénicos (anillos A y B) unidos por un
heterociclo piránico (anillo C), se han clasificado en
varias clases de acuerdo con las variantes
estructurales que presenta el anillo C. De acuerdo
con esto, los flavonoides se clasifican en varios
grupos: flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanoles,
antocianidinas, catequinas, epicatequinas, auronas e
isoflavonoides, entre otros.(​http://repository.lasallista.edu.co/dspace/handle/10567/133​)

Los flavonoides a estudiar en este proyecto se encuentran en gran abundancia en la

naturaleza, están presentes principalmente en frutas, verduras e hierbas medicinales.

Apigenina que pertenece al grupo de Quercetina que pertenece al grupo de

las flavonas. los flavonoles
Kaempferol que pertenece al Catequina que pertenece al grupo de
grupo de los flavonoles. los flavonoles

Hesperidina que pertenece al grupo de las flavanonas.

METODOLOGÍA

Para evaluar la actividad antioxidante de los 5 flavonoides se emplearán los siguientes

métodos:
-Método DPPH que consiste en emplear (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) como radical libre, el
cual es de color violeta, reactivo con el cual el antioxidante reacciona donando un átomo de
hidrógeno formando la (2,2-difenil-1-picrilhidrazina) provocando un cambio en el color de
violeta a amarillo. Se harán modificaciones como el método desarrollado por
BRAND-WILLAMS,
(​https://www.academia.edu/28455905/Use_of_a_Free_Radical_Method_to_Evaluate_Antiox
idant_Activity​) el cual se basa en la disminución de la absorbancia de
(2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) en una solución metanólica, el radical libre absorbe a 515nm ,
cuando reacciona con un antioxidante esta absorción disminuye.

Se hará en una microplaca de 96 pozos, en donde para cada uno de los antioxidantes se usará
DPPH en solución metanólica de 1.18 mg de DPPH 300 mM en 10 ml de metanol al 96%
usando diluciones sucesivas de compuestos de prueba a una máxima concentración de 0.2 ml,
con blancos de dilución de compuestos de prueba en metanol al 96% y usando como control
positivo a-tocoferol (vitamina E). La mezcla se dejará reposar a temperatura ambiente, en la
foscuridad por 25 minutos monitoreando la disminución de absorbancia a 515 nm , haciendo
mediciones por triplicado.

-Método ORAC (Capacidad de Absorción de Radicales de Oxígeno) El método consiste en

evaluar la degradación oxidativa de una molécula fluorescente (fluoresceína) en presencia de
iniciadores de radicales libres como los azocompuestos (AAPH). El AAPH se utiliza como
radial iniciador, que por descomposición térmica origina radicales peroxilo que causan daño a
las moléculas fluorescentes. Las especies antioxidantes son capaces de bloquear estos
radicales libres por donación de un átomo de hidrógeno. En este método, los radicales
peroxilo oxidan a la fluoresceína de forma que ésta pierde su fluorescencia. En presencia de
un antioxidante, los ROO· captan preferiblemente un átomo de hidrógeno de este, de forma
que disminuye dicha pérdida de fluorescencia. El método ORAC mide por tanto el retraso, en
presencia de compuestos antioxidantes, de la disminución de la fluorescencia debido a la
acción de radicales peroxilo. (Lopes-Mendez P. Determinación de la capacidad antioxidante
de SAMBUCUS EBULUS L. utilizando el método ORAC. Universidad complutense, 2015).

Se prepararán 3 ml de la siguiente solución: 21 μL de una solución de fluoresceína 10 μM,

2899 μL de buffer fosfato 75 mM (pH 7.4), 50 μL de AAPH 600 mM y 30 μL de muestra o
Trolox 500 μM (estándar).

http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0124-41082014000100003

RESULTADOS ESPERADOS

Se espera que la practicidad y economía de la metodología aplicada en este proyecto arroje

resultados que sean reproducibles y confiables de manera que se pueda aplicar o dado el
caso adaptar el análisis de otro tipo de compuestos.
IMPACTOS

La realización del presente proyecto busca contribuir a la optimización de la metodología

aplicada al análisis de la capacidad antioxidante de compuestos fenólicos; específicamente,
Flavonoides. El logro de esto conlleva a repensar el proceso, tantear errores y, por lo tanto,
mejorar la manera en que se lleva a cabo. A su vez, permitirá automatizar, monitorear y
aportar un verdadero valor a la profundización en la investigación del área.Tal tema resulta
de vital importancia para los campos que se apoyan de la Biotecnología, puesto que, el hecho
de volver eficaces los procesos, aporta en gran medida en la reducción de tiempos, recursos y
gastos implicados.

Cabe aclarar que en un principio, el estudio de los flavonoides resultaba casi impensable,
puesto que, no se dimensionaban sus beneficios; no obstante, en la actualidad resulta ser un
tema de gran valor. Además de encontrarse aproximadamente más de 5000 flavonoides
diferentes, investigaciones han demostrado los múltiples impactos biológicos que éstos
presentan, entre ellos, el tema a desarrollar: su capacidad antioxidante, propiedad de la cual
se derivan efectos antiinflamatorios, antivirales y el papel protector en enfermedades del
corazón.

(​https://www.mendeley.com/catalogue/ca087164-f64b-3db3-b113-17c6f6490eff/​ )Es así

como el simplificar especialmente el proceso mediante el cual se estudia la actividad
antioxidante de dichos compuestos, aumentará la eficacia en obtención de resultados claros y
consecuentemente en la innovación de productos naturales en donde los flavonoides
cumplirán un papel esencial, potenciando al máximo sus capacidades y siendo una
herramienta esencial para el beneficio del ser humano.

BIBLIOGRAFÍA​: ​Martínez-Flórez, S., González-Gallego, J., Culebras, JM, y Tuñón, Ma. J.

(2002). Flavonoides: propiedades y acción antioxidante | Los flavonoides: Propiedades y
acciones antioxidantes. ​Nutrición Hospitalaria​ , ​17​ (6).

BIBLIOGRAFÍA
1. Martínez-Flórez, S., González-Gallego, J., Culebras, J. M., Tuñón, M. J. &
Jesús Tuñón, M. Los flavonoides: propiedades y acciones antioxidantes
Correspondencia. ​Nutr. Hosp​ 271–278 (2002).
2. Miles, S. Compuestos fenólicos. Un análisis de sus beneficios para la salud. in
xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference vol. 23 1–6 (Elsevier Inc.,
2007).
3. (​http://repository.lasallista.edu.co/dspace/handle/10567/133​)