Objetivo general

Aplicar los métodos convencionales para el diagnóstico microbiológico de infecciones

del tracto urinario (ITU).

Objetivos específicos
1. Describir las condiciones adecuadas para la toma y transporte de la muestra de orina.
2. Cuantificar la carga bacteriana.
4. Identificar el (los) microorganismo(s) aislado(s).
5. Determinar la susceptibilidad antimicrobiana del (los) microorganismo(s) aislado(s).
6. Analizar los resultados obtenidos.
7. Reportar los resultados
El término ITU define la presencia de microorganismos en las vías urinarias, siendo las
patologías más frecuentes cistitis (infección de la vejiga) y pielonefritis (infección del
riñón y su pelvis).
Las ITU son de las enfermedades más frecuentes, en particular en mujeres.
Su prevalencia es dependiente de la edad y el género. Casi 1% de los niños, muchos
con anomalías funcionales o anatómicas del aparato urinario, presenta infección
durante el período neonatal.

Se calcula que 20% o más de la población femenina sufre alguna forma de ITU en su
vida.
La infección en la población masculina es rara hasta el quinto decenio de la vida,
cuando el crecimiento de la próstata empieza a obstaculizar el vaciamiento de la
vejiga.

En los ancianos de ambos sexos las intervenciones quirúrgicas ginecológicas o

prostáticas, la incontinencia, la instrumentación y el sondeo uretral crónico favorecen
tasas de ITU de 30 a 40%.
Un solo sondeo vesical conlleva riesgo de infección del 1% y al menos 10% de los
individuos con sondas a permanencia se infecta.
 Muestra de orina Coloración Gram Aislamiento primario

Agar MacConkey

Bacilos Gram Negativos

Antibiograma

bioquímica primaria
Agar TSI

Identificación
Agar LIA

Sensibilidad frente a Medio SIM

Los quimioterápicos Agar Citrato de Simon’s
Agar (caldo) nitrato
Caldo Peptonado (indol)
Agar Mueller Hinton
El UROCULTIVO es el proceso a través del cual se verifica un diagnóstico presuntivo hecho a base de síntomas y
está orientado al aislamiento, identificación y sensibilidad a los antimicrobianos de bacilos Gram negativos
PROCEDIMIENTO.
a. Inoculación directa con asa calibrada.
1. Introducir verticalmente un asa calibrada descartable de 0.001 ml (1 μl) estéril
justamente por debajo de la superficie de la muestra de orina (bien mezclada y sin
centrifugar).
2. Inocular por estría y agotamiento sobre toda la superficie del medio de cultivo
3. Sin flamear el asa, repetir el procedimiento para el siguiente medio de cultivo a ……utilizar (agar
sangre, agar Mac Conkey, agar CLED y el agar cromogénico).

4. Incubar las placas de los medios de cultivos inoculados a 35 ± 2ºC por 18-24 horas. Las placas de
agar sangre pueden ser incubadas en jarra con vela.
5. Usar asa calibrada de 0.01 ml (10 μl) para muestra obtenidas por punción Suprapúbica y por
catéter.
1. Examinar las placas que han sido incubadas a 35 ± 2ºC por 18-24 horas, luego del
período de incubación determinar el número de colonias en la superficie del medio
de cultivo. El número de UFC/ml se obtiene multiplicando el número de colonias por
el factor de dilución (103 para un inóculo de 0,001 ml [una colonia representa 1,000
UFC/ml]).

2. Si no se observa crecimiento y la muestra ha sido recolectada por chorro medio,

reportar:

- “No se observa crecimiento 103 UFC/ml”, si se inocularon las placas con asa
calibrada de 0.001ml. (1 µl).

- “No se observa crecimiento 102 UFC/ml”, si se inocularon las placas con asa
calibrada de 0.01ml. (10 µl).
Recomendaciones para la inoculación e incubación de las placas.

• Se recomienda utilizar para cada una de las muestras de orina una placa de agar sangre
y una placa de agar MacConkey (Se puede utilizar alternativamente solamente el agar
CLED o el agar cromogénico).

• No se deben inocular dos o más muestras en una misma placa por el riesgo de provocar
una contaminación cruzada de las muestras, particularmente por el fenómeno de
swarming provocado por especies de Proteus (excepto si se ha cortado el agar o la placa
tiene divisiones)

• La superficie del medio de cultivo debe estar libre de humedad evidente, por lo que se
recomienda incubar los medios a 35 ± 2ºC por 1-2 horas antes de ser inoculados.
Coloración de Gram.
1. Con un asa calibrada descartable colocar 10 μl de la muestra de orina, bien mezclada
pero sin centrifugar, sobre un portaobjeto.
2. Permitir secar al aire sin esparcir sobre la superficie del portaobjetos.
3. Fijar la lámina con metanol por 2 minutos (se puede también utilizar el calor).
4. Teñir con la coloración de Gram.
5. Secar la lámina y leer 10 campos como mínimo con objetivo de inmersión.
6. Determinar y reportar el número de microorganismos por campo de inmersión. La
presencia de uno o más microorganismos por campo de inmersión correlaciona con un
recuento de colonias de ≥ 105 UFC/ml.
7. La presencia de abundantes células escamosas y diferentes morfotipos microbianos
(especialmente bacilos Gram positivos) son indicativos de que la muestra ha sido
probablemente contaminada durante la recolección. Solicitar una 2da muestra.