Protocolo de Laboratorio Bioquimica - Claudia - Isabel - Fuentes - Grupo - 3 PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
Protocolo de práctica para laboratorios simulado transitorio por

Pandemia COVID-19
151030 -23 Bioquímica
Claudia Isabel Fuentes
67025858
Marisol Villalobos Hernández

Directora Curso
16 de noviembre del 2020

Manual Laboratorio Virtual
BIOQUIMICA
PROTOCOLO DE PRÁCTICA: CURSO 151030
https://www.google.com/search?q=imagenes+laboratorio+quimica&rlz
PRACTICA No. 1 – Reconocimiento de materiales de laboratorio y normas de
seguridad de trabajo en el laboratorio
PROCEDIMIENTO.
PARTE I. MATERIAL DE LABORATORIO
1. El uso adecuado del laboratorio de química está sujeto al conocimiento de materiales,
equipos y reactivos que éste contenga. Por tal motivo, es imprescindible que usted lea y
ubique correctamente cada uno de estos materiales en el programa “Chemix-Draw Lab”,
accediendo mediante el enlace que se encuentra en la Figura 1 (si presenta dificultades para
cargar el simulador debido al Plug-in de flash player, consultar el siguiente enlace:
https://www.java.com/es/download/help/enable_browser.xml):
2. Tome un pantallazo de los materiales de laboratorio solicitados para completar la
Tabla 1 y consulte el grafico y uso de cada material de laboratorio identificado, se sugiere el
siguiente recurso: Material de laboratorio (disponible en línea:
http://147.96.70.122/manual_de_practicas/home.html?2__material_de_laboratorio.htm)
CLASIFICACI GRAFICO NOMBR USO

ON E
MATERIAL DE Suele
VIDRIO Erlenmeye
r utilizarse para calentar
sustancias a temperaturas
altas, aunque no
vigorosamente; la
segunda tarea suele
delegarse al balón de
destilación. El matraz
de Erlenmeyer no se
suele utilizar para la
medición de líquidos, ya
que sus medidas son
imprecisas, únicamente
es para contener líquidos
MATERIAL DE Vaso de Un vaso de

VIDRIO precipitad
os precipitado es un
recipiente cilíndrico de
vidrio borosilicatado fino
que se utiliza muy
comúnmente en el
laboratorio, sobre
todo, para preparar o
calentar sustancias,
medir o traspasar
líquidos
MATERIAL DE Matraz El matraz volumétrico es
VUDRIO O DE volumétric
PLASTICO o un recipiente de vidrio
de gran utilidad en los
laboratorios porque
permite determinar la
densidad o grosor de las
sustancias, también es un
equipo que impide que
los líquidos se derramen
fuera del envase.
MATERIAL DE Tubo de Los tubos de

VUDRIO O DE Centrífuga
PLASTICO centrífuga son
unos tubos de fondo
cónico con graduaciones
y paredes internas
planas para una
preparación de muestras
sencilla. Generalmente
se
utilizan para almacenami
ento de sustancias y en
etapas de
centrifugación para separ
ar fases que tienen
diferentes densidades.
MATERIAL DE Probeta La probeta permite

VIDRIO graduada
contener líquidos y
además se
emplea para medir
determinados
volúmenes de líquidos o
soluciones.
MATERIAL DE Tubo de Se utiliza mayormente

VIDRIO ensayo
como recipiente de
líquidos y sólidos, con
los cuales se realizan
mezclas o se les somete a
variaciones de
temperatura u otras
pruebas, algunos se
podrían
utilizar para medir
volúmenes de todo tipo
MATERIAL DE Cristalizad Es un recipiente de base

VIDRIO or
ancha y poca estatura y
cuya finalidad principal
es cristalizar el
soluto de una solución
mediante la evaporación
del solvente
MATERIAL DE Pinza pinzas para tubos de

SOPORTE para tubo
de ensayo ensayo sirven para sujeta
r los tubos de
ensayo mientras se
calientan o manipulan.
Esto permite, por
ejemplo, calentar el
contenido del tubo sin
sostener el tubo con la

mano (lo que podría dar
lugar a quemaduras).
MATERIAL DE Trípode La finalidad que cumple

SOPORTE DE
ACERO el trípode de laboratorio
INOXIDABLE
Y EL es solo una. Este es
ALUMINIO
utilizado principalmente
como una herramienta
que sostiene la rejilla de
asbesto. Con este
material es posible la
preparación de montajes
para calentar.
MATERIAL DE Espátula La espátula es una

METAL
lámina plana angosta que
se encuentra adherida a
un mango hecho de
madera, plástico o
metal. Es utilizada
principalmente para
tomar pequeñas
cantidades de
compuestos o sustancias
sólidas, especialmente
las granulares.
MATERIAL DE Aro Este dispositivo se utiliza

METAL O Metálico
HIERRO como un
soporte para sujetar
envases de vidrio sobre
un mechero bunsen. Se
emplea adaptado al
soporte
universal para utilizar
embudos de decantación,
los cuales nos permiten
separa mezclas
inmiscibles.
MATERIAL DE Mortero El mortero tiene como

PORCELANA
finalidad machacar o
triturar sustancias
sólidas. Características y
Formas El Mortero posee
un instrumento pequeño
creado del mismo
material llamado "Mano

o Pilón" y es el
encargado del triturado.
MATERIAL DE Crisol El crisol de porcelana es

PORCELANA
un material de
laboratorio utilizado
principalmente para
calentar, fundir, quemar,
y calcinar sustancias. La
porcelana le permite
resistir altas
temperaturas.
EQUIPOS Centrifug La centrífuga es un

a
equipo de laboratorio
que genera movimientos
de rotación, tiene el
objetivo de separar los
componentes que
constituyen una
sustancia.
EQUIPOS Placa se emplea para calentar
calefactora
recipientes con líquidos,
de forma controlada.
EQUIPOS Baño de El baño de agua se

agua
utiliza cuando no se
quiere calentar por
encima de los 100ºC o
cuando se desea tener un
calor húmedo. El baño
ha de contener siempre
una cantidad adecuada
de agua. Hay que tener
cuidado para que los
recipientes que se
introduzcan en el baño
estén bien asentados y
evitar que se produzca
un derrame de la
disolución que contienen
en el baño.
Tabla 1. Material de uso frecuente en el laboratorio identificado en el simulador “Chemix-

Draw Lab”.
3. Consulte los pictogramas y complete el siguiente cuadro.
Toxicidad aguda (Categorías 1, 2 y 3)

Toxicidad aguda:Es una advertencia, donde indica que el producto
donde esta este pigtograma, es un genedaror de diferentes efectos para
la salud, como los pueden ser:nauseas, vomito, dolor de cabeza,
perdida del conocimiento, en un caso extremo podria probocar la
muerte.
Explosivo (inestable, divisiones 1.1, 1.2, 1.3 y 1.4), auto reactivo
(Tipo A y B), peróxido orgánico (Tipo A y B) Explosivo: Es una
alerta donde indica que el contenido puede llegar a explotar con
cualquier tipo de contacto como lo es con una llama, electricidad, el
calor, hasta por en contacto con otros productos, entre otros más.
Toxicidad acuática aguda (Categoría 1), toxicidad acuática crónica
(Categorías 1 y 2)
Peligro para el medio ambiente acuático: Esto indica que este
producto ocasiona efectos nefastos para el medio acuático, ya que su
contenido en toxico, y en cierta parte puede dar afectación en lo
terrestre.
Comburente: Esto significa que es un compuesto oxidante el cual, si
se llega a tener algún tipo de contacto con otro producto o más que
todo con uno inflamable, puede llegar a agravar una explosión o un
incendio.
Protección obligatoria de la vista, para evitar con tacto o salpicadura
de algún liquito o elemento.
4. En cuanto accidentes en el laboratorio, Enumere las medidas que se toman en caso de
presentarse fuego en el laboratorio y realice un cuadro donde explique las categorías de
identificación de extintores.
Medidas que se toman en los casos de fuego en laboratorio:
1. En primer lugar, se debe avisar a la persona encargada del laboratorio, en este caso el
tutor.
2. Se debe hacer una evacuación del salón de laboratorio donde se encuentran, ya sea
muy grande o pequeño el fuego que se ocasiono.
3. Avisar a todos las personas que se encuentren en el laboratorio, siempre conservando
la calma y dirigirse a la salida o a la salida de emergencia dependiendo por cual se pueda.
4. Si e fuego es pequeño y se puede localizar, se puede apagar con un extintor, arena o
tapándolo con algún recipiente del tamaño de fugo para ahogarlo.
5. Tratar de retirar todos los líquidos inflamables que estén a su alrededor para evitar un
daño más grande, y por ningún motivo utilizar agua para apagarlo.
6. Si llegado al caso el fuego es muy grande que es difícil de controlar con un extintor,
es mejor activar la alarma de fuego, llamar a la línea de incendios somo lo son los bomberos
y en su caso hacer evacuar todo el edificio.
Categorías de extintores
Clase Tipo de fuego Característica
Clase A Fuego con algún tipo de Extintores de agua
combustibles sólidos Extintores de polvo
como puede ser la madera, Extintores de C02
cartón u plástico.
Clase B Fuego con un combustible Extintores de polvo
que es liquido como la Extintores de C02
gasolina, pintura o aceite.
Clase C Fuego ocasionado con Extintores de polvo
gases como puede ser Extintores de C02
propano, gas normal o
butano.
Clase D Fuego que es ocasionado Extintores para fuegos
por el metal, que puede ser especiales
el magnesio, aluminio en
polvo y magnesio.
PARTE II. NORMAS DE SEGURIDAD
5. Observe los siguientes videos sobre información sobre las normas de seguridad en el
laboratorio, esté atento a la información proporcionada y conteste las siguientes preguntas,
accediendo al enlace que se encuentra en la Figura 2.
6. Lea la Reglamentación Normas de Bioseguridad Laboratorios UNAD:
https://academia.unad.edu.co/laboratorios-normas-de-bioseguridad (Link consultado el 30
de abril del 2020) y de respuesta a las siguientes preguntas:
7. Enumere cuales son las normas básicas de bioseguridad que se deben tener en cuenta
de acuerdo con los videos.
➢ Si se presenta algún accidente, sea pequeño o grande se le debe comunicar al docente
o a la persona que esté a cargo.
➢ Debe tener un esquema de vacunación al día para evitar algún tipo de infección o
enfermedad.
➢ Todo aquel que entre al laboratorio debe llevar sus implementos de protección
básicos, guantes, gafas y bata, y tiene que llevan el cabello totalmente recogido.
➢ Siempre poner atención a las instrucciones que da el docente o persona encargada.
➢ Tener conocimiento de lo que se va a hacer, y donde esta los implementos de primeros
auxilios y los implementos de seguridad.

➢ Está prohibido tomar, fumar y comer dentro del laboratorio, tampoco es
recomendable comer chicle y tapar las vidas de acceso.
➢ No llevar manillas y anillos, tampoco falas pantalones cortos y zapatos abiertos.
➢ Siempre tener orden y limpieza en el área de trabajo.
➢ Trabajar siempre sobre la mesa, y así evitar derrames sobre nosotros y daños a los
materiales.
8. Describir cuales son los equipos de protección colectiva para situaciones de
accidentes o emergencias que se observan el en video de prevención, indicando su función.
• Ducha de seguridad: Para lavar el área afectada durante al menos 15 minutos o más,
donde se quedó con un producto peligroso.
• Lava ojos: Poner los ojos para lavarlos durante 15 a 20 minutos, tapar el ojo con una
gasa estéril y después acudir al médico.
• Extintores: Estos se usan para apagar algún incendio ocasionado por alguna sustancia,
cabe aclara que cada extintor tiene una clase diferente para apagar la llama, dependiendo de
que lo ocasiono.
9. Menciones posibles riesgos que representas las diferentes sustancias químicas para la
salud.
• Corrosividad: Es un residuo que es capaz de destruir los tejidos vivos, también daña
otro tipo de materiales.
• Reactividad: Este al ponerlo en contacto de otra sustancia puede generar gases
tóxicos muy grandes los cuales pueden hacer daño en la salud del ser humano o también del
ambiente, y también puede causar alguna especie de explosión causando daños.

• Explosividad: Son aquellas que, por una reacción química, trasmite un gas que puede
ocasionar daño a la salud humana, estas son explosivas al contacto del agua.
• Toxicidad: Estos provocan daños y efectos en la salude de la humanidad, ambiental
e incluso en la salud animal, ya que produce irritación en los ojos, falta de respiración y puede
causar daños en los organismos.
• Inflamabilidad: Este es muy delicado ya que puede responder de una manera
agresiva ante una llama, alguna chispa o un cambio de temperatura.
• Biológico-Infeccioso: Este se refiere a un contenido biológico, es decir tejidos u
órganos que son utilizados para examinarse, sea animales o algún cadáver, estos pueden traer
alguna infección o enfermedad.
PRACTICA No. 2 – IDENTIFICACIÓN CUALITATIVA DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
PROCEDIMIENTO.
PARTE I- CONOCIMIENTOS DE LAS PROPIEDADES BIOQUIMICAS
Para desarrollar la práctica y comprender los términos deben acceder al enlace que se
encuentran en la Figura 1 (si presenta dificultades para cargar el simulador debido al Plug-
in de flash player, consultar el siguiente enlace:
https://www.java.com/es/download/help/enable_browser.xml).
Figura 1. Aminoácidos y proteínas: identificación cualitativa. Universidad politécnica
de Valencia (UPV). Instituto de ciencias de la educación.
https://www.youtube.com/watch?v=xubq3xOssWU Link consultado el 30 de abril de
2020.
1. Acceder al video graduando la opción de volumen.
2. Observar el video detalladamente donde les indican conceptos básicos que permiten
comprobar la realización de diferentes pruebas para demostrar la presencia de aminoácidos
y proteínas.
PARTE II – IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS.
3. Observe el siguiente recurso virtual Figura 2, esté atento a la información
proporcionada y conteste las preguntas que se encuentran anexas.
Figura 2. Identificación de aminoácidos y proteínas: laboratorio UPV.
https://www.youtube.com/watch?v=V6TV6aeJQQA Link consultado el 30 de abril de
2020.
4. Preguntas para resolver:
a. Relacionar las pruebas bioquímicas descritas en el video y que fueron desarrolladas,
tanto para los aminoácidos como para las proteínas, realice un cuadro donde escribe
columnas de pruebas, descripción breve del procedimiento y explique la reacción química
que ocurre con cada una de las muestras y los reactivos.
➢ El procedimiento es el mismo con todos los test que se ensayan, se marcan los tubos
de ensayo con los nombres de las muestras, se introduce 1ml de cada disolución de
aminoácido y proteína a estudiar en el tubo de ensayo y se prepara un tubo de ensayo con
agua destilada como blanco

AL 1%: Tirosina, Valina, Leucina, Metionina y Prolina.
AL 2%: Caseína y Gelatina
b. ¿Cuáles pruebas están positivas (identificar color) y por qué?
La reacción serà positiva

Se añade 1ml de reactivo
en aquellas muestras en las
TEST DE BIURET de biuret y se agitan y
que aparezca el color
esperar 15 minutos
morado
Se añaden 7 gotas de la Aparición de un color
disolución de ninhidrina a purpura azulado indica la
los tubos de ensayo, se presencia de aminoácidos

TEST NINHIDRINA
calientan en un baño de y si aparece un color
agua a 100°C durante 10 amarillo indica la
minutos presencia de Prolina
Añadir 5 ò 6 gotas de
reactivo de millón en los
tubos de ensayo con las

aparición de una
TEST MILLON distintas muestras, se
coloración rojiza
mezclan y se ponen a
calentar en un baño de
agua a 30°C
La prueba da resultado
positivo en aquellas
proteínas con aminoácidos
Añadir 1ml de ácido nítrico portadores de grupos
TEST concentrado en los tubos aromáticos, especialmente
XANTOPROTEICO de ensayo, calentar en un en presencia de tirosina. Si
baño de agua una vez realizada la
prueba se neutraliza con
un álcali, se vuelve color
amarillo oscuro.
Defina los siguientes términos: aminoácidos, proteínas, análisis cualitativo y análisis
cuantitativo.
➢ Aminoácidos: Es la parte más pequeña de una proteína, son las piezas con las que se
componen estos nutrientes, se acomodan y forman una cadena para darle campo a moléculas
muy pequeñas,20 de estos aminoácidos se pueden acomodar para hacer las proteínas.
➢ Proteínas: Son moléculas importantes en nuestro organismo y es base de la
composición de las células, tiene varias funciones como la estructural, inmunológica como
los anticuerpos, otra estructura son las enzimas que tienen actividad en las reacciones
químicas, también están las proteínas contráctiles como lo es la miosina, tenemos otra que es
la protección donde está el fibrinógeno esta participa en la formación en la fibrina que es el
proceso donde se lastima y hace la cicatrización de la herida
➢ Análisis cualitativo: Es el que se encarga de la identificación de los elementos, los
iones o los compuestos en una muestra, estas pruebas se puedes hacer por reacciones
químicas selectivas o con el uso de instrumentos, y con esto podemos determinar si existe
alguna sustancia determinada o no.
➢ Análisis cuantitativo: Es el encargado de determinar qué cantidad tiene cada una de
esas muestras, con esta se puede ver qué clase de prueba se va hacer, las pruebas cualitativas
se hacen antes que las cuantitativas para determinarlo, las pruebas cualitativas son más fáciles
que los procedimientos cuantitativos.
PRACTICA No. 3 – IDENTIFICACION Y PROPIEDADES DE LIPIDOS
PROCEDIMIENTO.
PARTE I. IDENTIFICACION DE LIPIDOS.
1. Con base en el experimento y el video explicativo proporcionado, responda:
a. Indique lo que ocurre con la mezcla aceite – sudan III y agua y sudan III. Explique a
qué se debe la diferencia entre ambos resultados.
Solución:
• Al realizarse la muestra con agua destilada y agregarle el sudan III se podrá
observar que la coloración se torna en un tono rojizo que no presenta burbujas ni
amalgamas, lo cual lo hace característico de una muestra negativa
• Al realizarse con aceite vegetal y sudan III en esta se podrá observar que la muestra
no se torna en un rojo homogéneo ya que presenta burbujas o amalgamas indicadoras de
una reacción positiva
La diferencia en que al realizarse la muestra con el agua está por su composición al
mezcales con el sudan III se tornara homogénea y al realizar el mismo procedimiento con el
aceite se puede ver que este no se tornara homogéneo, sino que presentara amalgamadas o
burbujas gracias a sus moléculas que no tienen tanta densidad como las del agua.
b. ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?
➢ Solución: al transcurrir algún tiempo para esta emulsión se puede ver que el aceite
permanecerá en la superficie del agua, pero luego de un tiempo este se mezclara con el
agua por completo tras realizar un tratamiento mecánico y finalmente luego de un tiempo se
verán dos fases y grandes cantidades de micelas
c. ¿Y con la de los otros compuestos empleados? ¿A qué se deben las diferencias
observadas entre ambas emulsiones?
➢ Solución: al hablar industrialmente se menciona la mantequilla y margarina en las
cuales el proceso de emulsión estas la grasa rodea gotas de agua.
d. ¿Qué ocurre con la emulsión cuando se le añade detergente?
➢ Solución: al añadir detergente o jabón se podrá observar que en la emulsión este
formara burbujas o esferas de aceite que se quedaran suspendidas en el agua.

PARTE III-METODO DE SAPONIFICACION.
Se analizará el método de Saponificación mediante registro fotográfico de un grupo de
estudiantes de la UNAD que desarrolló el siguiente protocolo.
2. Para el procedimiento adicionaron a un tubo de ensayo 2mL de aceite vegetal y
2mL de una solución de hidróxido de sodio (NaOH) al 20%, agitaron vigorosamente y
llevaron a incubación en baño maría durante 30 minutos a 37°C, una vez terminado el
tiempo de incubación el resultado obtenido fue el que se muestra a continuación en la
Figura 3.
SUSTANCIA REACTIVO IMAGEN
Aceite Vegetal 3ml 3ml de NaOH

(1N)
Saponificación NaOH
Aceite Vegetal 3ml 3ml de KOH
Saponificación KOH
Figura 3. Saponificación muestra de Aceite de oliva Fuente: Laboratorio Bioquímica
CEAD Acacías 16-04 2019
3. Observe y resuelva.
a. ¿Qué tipo de reacción química ocurre con los lípidos cuando se realiza el proceso de
saponificación?
➢ Solución: producirá reacciones tales como el jabón sales del ácido graso y glicerol
en forma libre
b. Identifique las tres fases hidróxido de sodio, aceite y lípido saponificado en la
imagen resultado del proceso de saponificación.
➢ Solución
En la primera imagen podemos observar como el NaOH queda en la parte inferior del tubo
de ensayo junto con la glicerina sobrante, en la parte intermedia se puede ver la formación
del jabón y una superior formada por el aceite.
En la segunda imagen podemos observar el mismo proceso, pero podemos darnos de cuenta
de que en este hay una mayor solubilidad convirtiéndose en un jabón suave
c. ¿Qué son los jabones? ¿Cómo se pueden obtener los jabones?
➢ Solución: los jabones son un producto que sirve para realizar la higiene personal y
para el uso en determinados objetos y se obtienen por el resultado de una reacción entre una
sustancia grasa con otra alcalina como NaOH o con KOH.
d. ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa?
➢ Solución: porque en este proceso se utilizan grasas (ácidos grasos) y glicerina y
todo está da como resultado una fase semisólida (el jabón). Por todo esto en la fase acuosa
quedara el alcohol (glicerina) como un subproducto de la elaboración del jabón

e. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?
➢ Solución: la enzima que logra que el aparato digestivo realice la hidrólisis de las
grasas se conoce como hidrolasa
PRACTICA No 4 – FACTORES FISICOS Y QUIMICOS EN LA ACTIVIDAD

ENZIMATICA
PROCEDIMIENTO:
1. Ingresar al simulador de ensayo de actividad enzimática, mediante el enlace de la
Figura 1.
2. Antes de iniciar el desarrollo de la práctica da clic en el fundamento del ensayo. Figura
2, parte inferior derecha de la pantalla (recuadro rosado en la imagen).
Figura 1. Simulador de ensayo de actividad enzimática disponible en línea
Consultado el 13 de abril de 2020 y disponible en línea:
http://biomodel.uah.es/lab/abs/activ_enz.htm
Figura 2. Simulador de ensayo de actividad enzimática disponible en línea
Consultado el 13 de abril de 2020 y disponible en línea:
http://biomodel.uah.es/lab/abs/activ_enz.htm
3. Construya una tabla en Excel o en un libro de notas como la tabla que se observa en
la parte derecha del simulador, si desea puede utilizar esta tabla e ir agregando filas durante
la simulación del experimento.
4. Seleccionar 3 temperaturas en un rango de 30◦C a 80◦C y seleccionar 3 pH en el rango
de 3 a 11, en lo posible buscar que tanto las temperaturas como los pH tengan representantes
en toda la amplitud de los rangos. Para seleccionar el pH o la temperatura debe desplazar los
controles hacia arriba o hacia abajo.
PH T( C ) A540
1 3 30 0,003
2 5 50 0,027
3 11 80 0,045
Título del gráfico
0,0 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 60,0 70,0 80,0 90,0
A540 T( C ) PH
5. Construir una tabla donde realice las combinaciones de cada temperatura con cada
pH como se indica en la tabla 1, si no la construye {o antes de iniciar el experimento y no
va a usar la tabla del simulador). Al final deberá tener 9 combinaciones entre las dos
condiciones a evaluar (reemplace las temperaturas 1 a 3 y pH 1 a 3 seleccionados por usted
en el punto 1), y registre la absorbancia obtenida al realizar la simulación.
6. ,,.
7. ,,
COMBINACION TEMPERATURA pH ABSORBANCIA
1 35 4 0,003
2 35 8 0,05
3 35 11 0,002
4 60 4 0,052
5 60 8 0,848
6 60 11 0,04
7 75 4 0,072
8 75 8 1,168
9 75 11 0,055
8. Una vez realizados todos los ensayos simulados grafique la absorbancia en función
de la temperatura o del pH (debe tener presente que deberá realizar 6 gráficas, ya que por
ejemplo, con cada uno de los pH siempre tendrá 3 datos te temperatura donde variará la
absorbancia y lo mismo sucederá cuando grafique siendo constante la temperatura por cada
temperatura tendrá 3 pH con absorbancia variable).
pH ABSORBANCIA
pH ensayo No 1
4 0,003
8 0,05 3
11 0,002 1
0 2 4 6 8 10 12
ABSORBANCIA pH
pH ABSORBANCIA
pH ensayo No 2
4 0,052
8 0,848 3
11 0,04 2
1
0 5 10 15
ABSORBANCIA pH
pH ABSORBANCIA
4 0,072
pH ensayo No 3
8 1,168 3
11 0,055 2
1
0 2 4 6 8 10 12
ABSORBANCIA pH
TEMPERATURA ABSORBANCIA
Temperatura ensayo No 1
35 0,003
35 0,05 3
35 0,002 2
1
0 10 20 30 40
ABSORBANCIA TEMPERATURA
TEMPERATURA ABSORBANCIA
Temperatura ensayo No 2
60 0,052
60 0,848 3
60 0,04 2
1
0 20 40 60 80
TEMPERATURA ABSORBANCIA Temperatura ensayo No 3

75 0,072
75 1,168 3
2
75 0,055
1
0 20 40 60 80
9. A partir de estas gráficas determine la temperatura y el pH óptimo para la actividad
de la enzima 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidasa, justifique la respuesta.
Respuesta: Según estas enzimáticas en función es de vital importancia en la industria
alimenticia como también para la salud ya que tiene un papel de suma importancia en el
hidrolisis y sus enlaces glicosidicos, siendo uno más de los empleados en los procesos de
jugos y demás bebidas en el área de la salud generan efectos secundarios como los
flavonoides que poseen antioxidantes con efectos positivos en el organismo.

PRACTICA No 5 – CUANTIFICACION DE PROTEINAS
PROCEDIMIENTO.
PARTE I – Cuantificación de proteínas.
Se realizará un reconocimiento donde se explica los fundamentos de la cuantificación de
proteínas, accediendo al enlace de la Figura 1.
Figura 1. Cuantificación de proteínas Peñaranda L. 2020. Link:

https://youtu.be/NH7BBGUXqos Consultado 2 de mayo de 2020
PARTE II-Comprobación de la cuantificación de Proteínas
1. Visualizar el siguiente video donde se explican las instrucciones para poder acceder
al simulador. Figura 2.
Figura 2. Explicación del funcionamiento de simulador. Bioquímica UNAD. 2020.
Práctica 5. Disponible en el link: https://youtu.be/sTdNFBhE9eA. Consultado 3 de mayo
de 2020
ACTIVIDAD No 1.
2. La cuantificación de proteínas se realizará empleando el simulador de
espectrofotometría UV-VIS de biomodel, al que se podrá acceder en la Figura 3.
Figura 3. Simulador de espectrofotómetro UV-VIS disponible en línea

http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm
3. Leer atentamente las instrucciones y proceder a realizar las Actividades, siguiendo
paso a paso las instrucciones dadas por el simulador: Actividad 1. Relación entre absorbancia
y concentración Actividad 2 y 2A. Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas
Actividad 3. Espectro de absorción de la hemoglobina
Nota: Recuerde tomar capturas de los datos y espectros en cada fase del proceso en cada
actividad.
ANALISIS DE RESULTADOS.
Responder los interrogantes que encuentra en cada actividad en los ítems Análisis cualitativo
de resultados y Análisis cuantitativo de resultados. Consignar su respuesta en el informe de
la práctica.
RELACION ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACION
Materiales: Utilizaremos una disolución de para-nitrofenol (pNF), que es un compuesto con
color amarillo en medio alcalino.
Calibración: Primeramente, llena una cubeta con 3 ml de agua, introdúcela en el
espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 405 nm y pulsa el botón “A=O. Saca la cubeta
y vacíala.
Diseño del experimento: Utilizando el para-nitrofenol (pNF) y agua, prepara 3 muestras en
sendas cubetas, que contengan distintos volúmenes de pNF y siempre un volumen total de
3ml.
Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente tabla (o mejor, una que hagas en tu cuaderno de
laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:
CUBETA 1 2 3
Volumen de pNF 1 ml
Volumen de agua 2 ml
CUBETA 1 2 3
Volumen de pNF 2 ml
CUBETA 1 2 3
Volumen de pNF 3 ml
Una vez preparada las 3 mezclas en las 3 cubetas, introdúcelas de una en una al
espectrofotómetro y anota sus medidas de absorbancia.
CUBETA 1 2 3
A405= 0.533 1.068 1.619
Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las cubetas y el
valor de absorbancia. Comparando las 3 medidas, ¿observas alguna dependencia entre el
valor de absorbancia y la mayor o menor concentración de pNF en la cubeta?
Respuesta: En la cubeta No 1 es de color transparente ya que tiene mayor cantidad de agua
y menor pNF obtuvo la menor medida de absorbancia. La cubeta No 2 es de color amarillo
pálido por tener mayor cantidad de pNF y menor cantidad de agua obtuvo una medida más
alta que la primera absorbancia, la cubeta No 3 solo con pNF obtuvo la medida más alta
que las dos anteriores.
Por lo que observo es que a mayor cantidad de pNF usada, la medida de absorbancia es
directamente proporcional.
Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de pNF en la mezcla final
de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 80 µM pNF Prepara una

tabla con los datos y traza una gráfica representando A frente a C. ¿cómo puedes describir
lo que observas?
CUBETA C (µM) A405

1 26.6 0.533
2 53.3 1.068
3 80 1.619
Consentracón vs Absorbancia
1,8
y = 0,0203x - 0,0106
1,6 R² = 0,9999
1,4
1,2
Absorbancia
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Consentración µM
➢ ¿cómo puedes describir lo que observas?
Respuesta: Se observa una tendencia lineal lo que corrobora que la concentración y la
absorbancia son directamente proporcionales.
➢ A partir de la gráfica, resuelve esta pregunta:
➢ Se mezcla 1 ml de una muestra problema con 2 ml de agua. Calcula la
concentración de pNF en la muestra de partida si el ensayo ha proporcionado un valor A405
= 1.462 descubrir el valor. Escribe tu resultado: C= 71,49753695 µM.

Absorbancia 1,462
Pendiente 0,0203
Interceptor 0,0106
Concentración = (1,462-0,0106)/0,0203 da
igual 71,4975369
ACTIVIDAD No 2.
FUNDAMENTO DE UN ENSAYO DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
El que se conoce como metodo de Bradford es un ensayo habitual para medir la
concentración de proteínas en una muestra. Se basa en que la unión del colorante azul de
Coomassie (Coomassie Brilliant Blue G250) a las proteínas modifica el espectro visible de
aquel.
Materiales: Se dispone de
➢ Reactivo de Bradford, que contiene azul de Coomassie, metanol o isopropanol, y
acido fosfórico
➢ Proteínas disueltas en el reactivo
Diseño del experimento: Prepara una cubeta solo con reactivo de Bradford y otras dos
cubetas (o mas) con catidades diferentes de la disolucion de proteína. Añade a todas las
cubetas la cantidad de reactivo necesaria para un volumen total de 3 ml en cada una.
Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente esta tabla (o mejor, una que hagas en tu
cuaderno de laboratorio) con los volumenes que piensas poner en cada cubeta:
CUBETA 1 2 3
Volumen de 0 ml
Proteína
Volumen de 3 ml
reactivo
CUBETA 1 2 3
Volumen de 1 ml
Proteína
Volumen de 2 ml
reactivo
CUBETA 1 2 3
Volumen de 2 ml
Proteína
Volumen de 1 ml
reactivo
Medida: A continuación, introduce el resto de
las cubetas, de una en una, en el espectrofotómetro y anota sus medidas de absorbancia.
CUBETA 1 2 3
A595 = 0,385 0,279 0,615
valor de absorbancia. Comparando entre si las medidas, ¿observas alguna dependencia
entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de proteínas en la cubeta?
Respuesta: La cubeta No 2 que contenía 1 ml de proteína tuvo menor absorbancia en
comparación a la cubeta No 3 que tuvo mayor absorbancia. A menor concentración, menor
absorbancia.
Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la mezcla
final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 800mg/l. Prepara una
tabla con los datos y traza una gráfica representando A frente a C.
CUBETA C (mg/l) A595

1 0 0,385
2 266,66 0,279
3 533,33 0,615
y = 0,0004x + 0,3113
R² = 0,4482
Absorvancia vs Concentración
0,7
0,6
0,5
Absorbancia
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 100 200 300 400 500 600
Concentracion mg/ml
➢ ¿Cómo puedes describir lo que observas?
Respuesta: Al traficar observamos una línea lineal y los puntos están alejados de esta
A partir de la gráfica, resuelve esta pregunta:
➢ Se mezcla un ml de muestra problema con reactivo Bradford, para un volumen total
de ml. Calcula la concentración de proteínas en la muestra de partida si el ensayo ha
proporcionado un valor A595=0,329
➢ Escribe tu resultado: C= -0,38291038 mg/l
ACTIVIDAD No 2A
FUNDAMENTO DE UN ENSAYO DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS:
El que se conoce como método de Bradford es un ensayo habitual para medir la
concentración de proteínas en una muestra. Se basa en que la unión del colorante azul de
Coomassie (Coomassie Brilliant Blues G 250) a las proteínas modifica el espectro visible
de aquél.
Materiales: Se dispone de
➢ Reactivo de Bradford (concentrado X 3), que contiene azul de Coomassie, metanol
o isopropanol, y ácido fosfórico
➢ Proteínas disueltas en agua
Diseño del experimento: Todas las cubetas deben contener 1 ml del reactivo de Bradford
concentrado y un volumen total de 3 ml. En la primera cubeta no se pondrá proteína,
mientras que otras dos cubetas llevaran cantidades diferentes de la disolución de proteína.
Utiliza agua para completar el volumen.
cuaderno de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:
CUBETA 1 2 3
Volumen de proteína 0 ml
Volumen de reactivo 1 ml
CUBETA 1 2 3
CUBETA 1 2 3
Medida: A continuación, introduce el resto de las cubetas, de una en una, en el
espectrofotómetro y anota sus medidas de absorbancia.
CUBETA 1 2 3
A595 = -0,098 0,238 0,568
valor de absorbancia. Comparando entre si las medidas, ¿observas alguna dependencia
entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de proteínas en la cubeta?
Respuesta: Se puede observar que, a mayor concentración de proteínas, mayor
absorbancia.
Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la mezcla
final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 800 mg/l. Prepara
una tabla con los datos y traza una gráfica representando A frente C.
CUBETA C (mg/l) A595

1 0 -0,098
2 266,66 0,238
3 533,33 0,568
y = 0,0012x - 0,097
R² = 1 Absorvancia vs Concentración
0,7
0,6
0,5
0,4
Absorvancia
0,3
0,2
0,1
0
0 100 200 300 400 500 600
-0,1
-0,2
Concentración mg/ml
➢ ¿Cómo puedes escribir lo que observas?
Respuesta: Es un ajuste lineal y se observa que la absorbancia es directamente
proporcional a la concentración de proteínas.

ACTIVIDAD No HB 1
ESPECTRO DE ABSORCION DE LA HEMOGLOBINA
El color rojo de la hemoglobina se debe a que absorbe radiación visible, aunque también
presenta pico de absorción en y cerca de la región ultravioleta.
Diseño del experimento: Utilizando agua y la disolución de hemoglobina, prepara distintas
diluciones y analiza su espectro UV-VIS completo. Para ello, llena una cubeta con
hemoglobina y en las otras dos cubetas prepara sendas mezclas diferentes de hemoglobina
con agua. Todas las cubetas deben tener un volumen total de 3 ml.
cuaderno de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:
CUBETA 1 2 3
Volumen de 3 2 1 ml
hemoglobina
Volumen de agua 0 1 2 ml
Medida: A continuación,
introduce al espectrofotómetro las cubetas, de una en una, y pulsa el botón para registrar el
espectro entre 200 y 800 nm. Pulsa en el icono de cámara de fotos y copia la imagen
resultante para poderlas comparar todas al terminar el experimento.
Análisis cualitativo de resultados: Compara los 3 espectros. ¿qué efecto se observa al
diluir la hemoglobina de partida? ¿cambia la posición (λ) de los picos de absorción
máximo? Describe lo que observas.
Respuesta: Al comparar los 3 espectros podemos observar que al disminuir la
concentración de hemoglobina y aumentando agua, los picos máximos se encuentran en los
400 nm, pero el tamaño se reduce mientras menos hemoglobina hay. A menor
concentración, menor absorbancia.
2da Medida: Observando el espectrómetro, anota dos longitudes de onda (de la región
visible, no ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción). A
continuación, mide y anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas dos
longitudes de onda. Representa tus resultados en una gráfica, considerando que la
concentración de partida de hemoglobina (en la botella) es de 200 mg/l

A410
1,5
y = 0,0139x - 1,7242
R² = 0,7391
1
Absorbancia A 410
0,5
0
0 50 100 150 200 250
-0,5
-1
C(mg/l)
A590
0,1
0
0 50 100 150 200 250
Absrobancia A 590
-0,1
-0,2
-0,3
-0,4
y = -0,0031x + 0,2633
-0,5 R² = 0,732
C( mg/dl)
Análisis cuantitativo de resultados: ¿Cómo puedes describir las conclusiones de lo
observado? ¿Cuál de las longitudes de onda sería útil para determinar la concentración de
muestras problema de hemoglobina?
Respuesta: La posición de longitud de onda no cambia y los máximos locales disminuyen
conformen la concentración disminuye. En las muestras muy diluidas hay pocas moléculas
que absorban luz entonces la absorbancia es menor. La longitud de onda más útil seria
alrededor de 400 – 600 nm.

Bibliografía
• Seguridad en Laboratorios de Prácticas. (s. f.). Ernesto de Jesús Alcañiz.
http://www3.uah.es/edejesus/seguridad.htm
• Tabu Comunicacion. (2015, 9 febrero). PREVENCIÓN EN EL LABORATORIO.
YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=KwpVi8yfroY
• User, S. (s. f.). Normas de bioseguridad. UNAD - Universidad Nacional Abierta y a
Distancia. https://academia.unad.edu.co/laboratorios-normas-de-bioseguridad
• Universitat Politècnica de València - UPV. (2011, 22 septiembre). Aminoácidos y
proteínas: identificación cualitativa | | UPV. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=xubq3xOssWU
• menjasa. (2020, 29 junio). Los AMINOÁCIDOS ¿Para qué sirven? [DEFINICIÓN,
FUNCIONES y LISTADO]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=5BhFOvkAUfk&ab_channel=menjasa
• Educatina. (2011, 19 julio). Qué son las proteínas - Educatina. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=Q03JCbEH2QQ&ab_channel=Educatina
• Matescultor. (2020, 8 agosto). Definición | Análisis cualitativo | Análisis
cuantitativo | Química analítica 2020. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=ZeiN49--MBk&ab_channel=Matescultor
• Guia de prácticas. (2013). Proyectos de Innovación y Mejora de la Calidad
Docente.
http://147.96.70.122/manual_de_practicas/home.html?2__material_de_laboratorio.h
tm

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD

Protocolo de práctica para laboratorios simulado transitorio por

Marisol Villalobos Hernández

16 de noviembre del 2020

seguridad de trabajo en el laboratorio

PARTE I. MATERIAL DE LABORATORIO

1. El uso adecuado del laboratorio de química está sujeto al conocimiento de materiales,

ubique correctamente cada uno de estos materiales en el programa “Chemix-Draw Lab”,

cargar el simulador debido al Plug-in de flash player, consultar el siguiente enlace:

2. Tome un pantallazo de los materiales de laboratorio solicitados para completar la

Tabla 1 y consulte el grafico y uso de cada material de laboratorio identificado, se sugiere el

siguiente recurso: Material de laboratorio (disponible en línea:

CLASIFICACI GRAFICO NOMBR USO

segunda tarea suele

suele utilizar para la

que sus medidas son

es para contener líquidos

MATERIAL DE Vaso de Un vaso de

vidrio borosilicatado fino

que se utiliza muy

todo, para preparar o

de gran utilidad en los

densidad o grosor de las

equipo que impide que

los líquidos se derramen

fuera del envase.

MATERIAL DE Tubo de Los tubos de

unos tubos de fondo

cónico con graduaciones

planas para una

centrifugación para separ

ar fases que tienen

MATERIAL DE Probeta La probeta permite

emplea para medir

MATERIAL DE Tubo de Se utiliza mayormente

líquidos y sólidos, con

los cuales se realizan

mezclas o se les somete a

volúmenes de todo tipo

MATERIAL DE Cristalizad Es un recipiente de base

cuya finalidad principal

soluto de una solución

MATERIAL DE Pinza pinzas para tubos de

Esto permite, por

contenido del tubo sin

sostener el tubo con la

MATERIAL DE Trípode La finalidad que cumple

como una herramienta

que sostiene la rejilla de

asbesto. Con este

MATERIAL DE Espátula La espátula es una

MATERIAL DE Aro Este dispositivo se utiliza

soporte para sujetar

envases de vidrio sobre

universal para utilizar

los cuales nos permiten

MATERIAL DE Mortero El mortero tiene como

Formas El Mortero posee

creado del mismo

material llamado "Mano

encargado del triturado.