Espectrofotometría y la ley de Beer-Lambert: una

técnica analítica importante en química

Jon H. Hardesty, PhD y Bassam Attili, PhD

Collin College
Departamento de Química

Introducción:

En el último laboratorio, observó que la excitación térmica o eléctrica de los átomos hizo que los electrones se promovieran a niveles
de energía más altos. La relajación posterior de los electrones excitados a sus niveles de energía del estado fundamental fue
acompañada por la emisión de fotones en la región visible del espectro electromagnético. Los colores distintivos emitidos durante este
proceso de relajación se pueden utilizar en algunos casos para identificar el elemento responsable del espectro de emisión.

Durante los próximos dos periodos de laboratorio, cambiará este fenómeno y utilizará el espectro de absorción de un ion de metal de
transición en una solución acuosa. Los iones de metales de transición son conocidos por la amplia gama de colores que muestran. De
hecho, muchos iones de metales de transición son responsables de los pigmentos de colores en las pinturas, el color de las piedras
preciosas como rubíes o zafiros y los colores en las vidrieras.

Los espectros de absorción de especies químicas (átomos, moléculas o iones) se generan cuando un haz de energía
electromagnética (es decir, luz) pasa a través de una muestra y la especie química absorbe una parte de los fotones de energía
electromagnética que pasan a través de la muestra. Un ejemplo clásico de este fenómeno es el responsable de nuestra
percepción del color. Considere la situación en la que un rayo de luz blanca (es decir, la luz del sol) atraviesa una solución de
muestra que contiene clorofila (el compuesto responsable del color de las hojas). Las moléculas de clorofila absorben solo unos
pocos fotones seleccionados en las regiones azul y roja de la porción visible del espectro electromagnético. Las energías de estos
fotones absorbidos hacen que los electrones de la molécula de clorofila se exciten, y en la célula vegetal, la energía de estos
electrones excitados se utiliza para impulsar la conversión de dióxido de carbono y agua en glucosa. Más importante para
nuestros propósitos es el hecho de que cuando los fotones rojo y azul que absorbe la clorofila son restado de la luz blanca, el rayo
de luz resultante dejando la solucion parece verde a nuestros ojos, y es por eso que las hojas nos parecen verdes.

Si pudiéramos medir el número total de fotones de todos los colores que entran en la muestra y compararlo con el número total
de fotones de todos los colores que salen de la muestra, encontraríamos menos fotones saliendo de la muestra que entrando
en la muestra. Esto es consistente con el hecho de que las moléculas de clorofila absorbieron algunos de los fotones del haz
de luz blanca que ingresó a la solución.

Un espectrofotómetro es un instrumento diseñado para realizar esta medición. Utilizando algunos componentes electrónicos muy
bien conocidos, este dispositivo "cuenta" efectivamente la cantidad de fotones que ingresan a una muestra y la compara con la
cantidad de fotones que salen de una muestra. Además, el instrumento puede tomar la luz blanca y separarla en sus colores
constituyentes (es decir, algo así como

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un prisma), lo que permite al usuario examinar la absorción de luz de longitudes de onda individuales con una resolución de casi 1 nm.

En óptica, la parte de la física que se ocupa de las propiedades de la luz, la medición del número de fotones emitidos en un punto en
una unidad de tiempo determinada se llama Intensidad, I. (Una intensidad más alta podría considerarse como "más brillante" y la
intensidad más baja podría considerarse como "más tenue"; por lo tanto, la luz de alta intensidad será brillante y la luz de baja
intensidad será tenue.) Si medimos el
intensidad del haz de luz que entra en nuestra muestra (yo o) y compararlo con la intensidad del
haz de luz que sale de nuestra muestra (I) podemos tomar la relación I / I o para obtener una indicación de qué fracción de
la luz que entra en la muestra salió de la muestra. Esta relación se llama
Transmitancia:

yo
Transmitancia: T
yo o

Podemos convertir esta relación en un porcentaje multiplicando por 100 para obtener el porcentaje de transmitancia (% T):

yo
% De transmitancia:% T 100
yo o

Por lo tanto, si la intensidad de la luz que sale de nuestra muestra es 76 y la intensidad de la luz que entra en nuestra muestra es
100, entonces la transmitancia sería 0,76 y la %
La transmitancia sería del 76%, lo que indica que el 76% de los fotones que entran en nuestra muestra están saliendo de nuestra
muestra.

Para nuestros propósitos, es matemáticamente conveniente definir un nuevo concepto, Absorbancia (A):

yo
Absorbancia: UN Iniciar sesión 10 yo o

La absorbancia es una medida directa de la cantidad de luz que absorbe nuestra muestra. Si juega con la fórmula en su calculadora,
encontrará que la absorbancia puede tomar valores entre 0 (al 100% de transmitancia) y aproximadamente 2.0 (al 1% de
transmitancia); por lo tanto, los valores grandes de absorbancia se asocian con muy poca luz que pasa por completo a través de la
muestra y los valores pequeños de absorbancia (es decir, los que se acercan a 0) están asociados con la mayor parte de la luz que
pasa completamente a través de la muestra.

La ley de Beer-Lambert:

Considere una solución de una especie química que absorbe luz de una longitud de onda particular. Podríamos imaginar dos
situaciones interesantes. Primero, si pasamos un haz de luz de la longitud de onda apropiada a través de una solución bastante
diluida, podríamos imaginar que los fotones encontrarán una pequeña cantidad de especies químicas absorbentes, por lo que
podríamos esperar un alto% de transmitancia y una baja absorbancia. Alternativamente, si pasamos el mismo haz de luz a través
de una solución altamente concentrada, podríamos imaginar que los fotones encontrarán una gran cantidad de

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absorbiendo especies químicas, y podríamos esperar un bajo% de transmitancia y una alta absorbancia. Por tanto, la absorbancia es
proporcional a la concentración de la muestra. En segundo lugar, podríamos imaginar que si permitimos que el haz de luz encuentre la
solución durante un largo período de tiempo, podríamos esperar ver un bajo% de transmitancia y una alta absorbancia; mientras que,
si se dejara que el rayo encontrara la solución durante un corto período de tiempo, podríamos esperar ver un alto% de transmitancia y
una baja absorbancia. Dado que la luz viaja a una velocidad constante, c = 3.0 x 10 8 m / s, esto implica que la absorbancia también
debe ser proporcional a la longitud de la trayectoria del haz a través de la muestra. Estas dos consideraciones nos permiten
establecer la siguiente proporcionalidad:

UN klc, donde, k = constante de proporcionalidad,

l = longitud del camino y
c = concentración del absorbente
especies quimicas

Cuando la longitud de la trayectoria se mide en centímetros, y la concentración de la especie absorbente se mide en Molaridad,
la constante de proporcionalidad se llama Absortividad Molar, que tiene unidades de M- 1 cm- 1, y nuestra proporcionalidad se
reduce al

Ley de Beer-Lambert:

UN lc

Esta técnica es utilizada no solo por químicos sino también por científicos de muchos campos. La ley de Beer-Lambert le
permite a usted, el científico, medir la absorbancia de una muestra en particular y deducir la concentración de la solución a
partir de esa medición. En efecto, puede medir la concentración de una determinada especie química en una solución siempre
que sepa que la especie absorbe luz de una determinada longitud de onda.

El problema:

Desafortunadamente, para determinar la concentración de una especie en solución, necesita conocer dos datos
clave:

1) ¿A qué longitud de onda las especies químicas de interés absorben la radiación electromagnética, y

2) ¿Cuál es el valor de la absortividad molar? ?

Durante el primer laboratorio período de este experimento, se le pedirá que haga lo siguiente;

Prepare 100 ml de solución acuosa de una de estas sales; CoCl 2. 6H 2 O o NiCl 2. 6H 2 O (no prepare ambas
soluciones, pídale a su instructor solo una sal). Prepare una solución teniendo
concentración entre 0.05 y 0.25M.
Utilice el espectrofotómetro Spectronic-20D (consulte las instrucciones de funcionamiento en el apéndice adjunto) para
registrar el espectro de absorbancia UV visible de la solución preparada
entre 400 y 950 nm. Para obtener la mejor absorbancia, registre la absorbancia cada 10 nm entre 400 y 950 nm.

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 Utilice Microsoft Excel en la computadora de su estación para registrar la absorbancia de su solución a intervalos regulares.
En la región donde la absorbancia es particularmente alta, se recomienda encarecidamente que registre la absorbancia a
intervalos relativamente pequeños (por ejemplo, cada 5 nm) para determinar con precisión la longitud de onda a la que se
produce la absorbancia máxima.
( máx.).
Trace el espectro con absorbancia en el eje y (variable dependiente) y la longitud de onda en
nm en el eje x (variable independiente, o la que usted controla) y determine ( máx.) para ser utilizado en el próximo período de
laboratorio.

Imprima dos copias del diagrama de espectro, una para cada socio.

Durante el segundo período de laboratorio de este experimento determinarás la respuesta a dos

preguntas;

1. ¿Cuál es el valor del coeficiente de extinción molar o absortividad molar, Para el

ion metálico que usó en la semana uno.
2. ¿Cuál es la concentración de un ion de metal de transición en una solución desconocida proporcionada por
tu instructor? La respuesta a la primera pregunta le permitirá responder a la segunda pregunta.

Para determinar su ion metálico, deberá construir una curva de calibración preparando primero una serie de cuatro soluciones
del ion. Sugerimos que mantenga sus concentraciones de iones metálicos entre 0.05 y 0.25M. (Si se equivoca en un lado o en
el otro de este rango, le sugerimos que tiende más alto en lugar de más bajo). Dado que solo necesita una pequeña muestra de
cada solución, digamos 10-15 ml, podría tener sentido para usted utilice el concepto de dilución en serie para preparar estas
soluciones. Prepare 100 ml de la solución más concentrada que necesite del rango de concentraciones dado (solución madre).
Para la siguiente solución más concentrada (solución n. ° 2), use la primera solución como solución madre y utilice la fórmula de
dilución para calcular qué volumen de la primera solución necesita para obtener la cantidad deseada de solución n. Asegúrese
de mostrarle a su instructor sus cálculos antes de continuar. Luego use la solución # 2 como solución madre para preparar una
solución menos concentrada; solución # 3 de la misma manera. Repita una vez más usando la solución n. ° 3 como solución
madre para preparar la solución n. ° 4. (Consulte el final del capítulo 6 del libro de texto de McMurry-Fay para revisar el proceso
de dilución).

En cada etapa, asegúrese de registrar todas las masas y / o volúmenes para poder calcular concentraciones
precisas del ión metálico en las cuatro soluciones. Los valores precisos aquí son críticos, ya que determinarán la
precisión de la medición de concentración que realice en la solución desconocida. Informe sus cálculos en detalle.

Una vez preparadas las soluciones, registre la absorbancia de las cuatro soluciones en una única longitud de onda adecuada. Para
elegir una longitud de onda adecuada, examine el espectro de absorbancia que creó en el último laboratorio y pregúntese: "¿Qué
longitud de onda exhibirá la mayor sensibilidad a los cambios de concentración (es decir, qué longitud de onda mostrará el mayor
cambio de absorbancia para un cambio dado de concentración)? ”? Vaya a su último gráfico de datos de longitud de onda frente a
absorbancia y determine la longitud de onda adecuada que se utilizará.

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Una vez que se conoce la absorbancia de cada una de las cuatro soluciones, utilice Microsoft Excel para trazar la absorbancia
en el eje y y la concentración en el eje x. Examinando la forma matemática de
la ley de Beer-Lambert, el coeficiente de extinción molar o absortividad molar, es una constante para un ion de metal de transición dado, y la
longitud de la trayectoria (l) es una constante siempre y cuando el mismo tubo de ensayo

o cubeta se utiliza para hacer cada medición de absorbancia. En efecto, cuando se multiplica por
l, el resultado es una constante y la única diferencia que puede dar lugar a un cambio en la absorbancia es la
concentración de las especies absorbentes. Así, la Ley de Beer-Lambert establece una relación lineal entre absorbancia y
concentración:

UN l C

A=k C
metro X

y= mx + b

Esto indica que la absorbancia cambia proporcionalmente con la concentración, haciendo que la absorbancia sea la variable
dependiente y la concentración la variable independiente. Si traza la absorbancia frente a la concentración (en molaridad), debe
obtener una línea recta con una pendiente igual al coeficiente de extinción molar multiplicado por la longitud de la trayectoria. Con
una regla, mida la longitud del camino midiendo el diámetro interior del tubo de ensayo o la cubeta que utilizó para hacer sus
medidas. Divida la pendiente de su línea por la longitud medida del camino (en cm) para calcular el coeficiente de extinción molar
de su ion de metal de transición. La gráfica de absorbancia versus concentración se llama

curva de calibración, y se utiliza para correlacionar la absorbancia con la concentración molar de la especie absorbente (el ión de
metal de transición en este experimento).

Finalmente, obtenga una muestra de una concentración desconocida del ion de metal de transición con el que ha estado
trabajando (Co 2+, o Ni 2+) de su instructor. Mida y registre la absorbancia de esta solución. Una vez que se mide la absorbancia,
determine la concentración del ión del metal de transición en lo desconocido. Tiene dos métodos disponibles para tomar esta
determinación. Primero, puede usar su curva de calibración para determinar la concentración leyendo qué concentración
debería dar la lectura de absorbancia que midió. (Es posible que deba extrapolar su curva de calibración más allá de los
valores medidos que registró. Si es así, indique que lo hizo en su informe de laboratorio). En segundo lugar, puede calcular la
concentración algebraicamente sustituyendo (1) el valor medido

absorbancia, (2) el valor del coeficiente de extinción molar, que calculó a partir de su curva de calibración y (3) la longitud de
trayectoria medida (en cm) del tubo de ensayo que utilizó para medir la absorbancia de la muestra desconocida en la
cerveza -Ley Lambert. Después de determinar la concentración de su ion de metal de transición utilizando ambos métodos,
compare y establezca qué método cree que es más preciso.

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Datos críticos para incluir en su informe de laboratorio:

Desde la semana 1:

Especifique qué compuesto se utilizó

Muestre todos los cálculos y describa con precisión cómo preparó su solución de CoCl 2. 6H 2 O o NiCl 2. 6H
2 O

Describe sucintamente cómo max estaba determinado

Incluya una cifra de su espectro de absorción de 400-950 nm e informe max

De la semana 2:

Muestre todos los cálculos y describa con precisión cómo preparó las soluciones del ion de metal de transición elegido que
se utilizó para construir la curva de calibración
Describa sucintamente el procedimiento para construir la curva de calibración.
Incluya un gráfico de su curva de calibración que incluya el ajuste lineal y la ecuación Informe el valor de
para su ion metálico en unidades de M- 1 cm- 1 y mostrar cálculos
Informe la concentración medida del ion de metal de transición en la solución desconocida que le proporcionó su
instructor de laboratorio. Asegúrese de incluir la concentración de ambos
técnicas que utilizó para determinar la concentración desconocida.
Discusión comparando los dos valores de concentración obtenidos y cuál cree que es más preciso / confiable

Referencias.

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