Escalado y automatización

Hay dos aspectos para ampliar las actividades de cultivo celular (1) aumentar la
masa de células producidas y (2) aumentar el número de cultivos replicados para
la detección en ensayos basados en células. El primero implica aumentar el
volumen del cultivo, y las complejidades de la escala incluyen el suministro de
nutrientes, el intercambio de gases y el área de superficie para el crecimiento si
las células están unidas, pero el número de manipulaciones puede no aumentar,
incluso si el aumento de la escala requiere calidad cambios Generalmente se
requiere automatización en el área de transferencia de fluidos y control de
procesos durante un período de cultivo prolongado (días o incluso semanas). El
segundo implica un aumento numérico en el número de manipulaciones, en
función del número de muestras manejadas, poniendo énfasis en la
automatización a través de la robótica para replicar las manipulaciones requeridas,
con menos énfasis en el control del proceso, dado que la escala de tiempo suele
ser más corta (minutos o horas) La mayor parte de este capítulo tratará sobre el
volumen de la cultura y la geometría con una breve sección sobre automatización
y robótica al final. El significado del aumento de masa varía según el laboratorio.
Para un laboratorio de investigación básica, puede significar la diferencia entre 1 ×
106 y 1 × 107 células por cultivo, que se puede lograr fácilmente con material de
cultivo convencional, particularmente con la disponibilidad de matraces
multisuperficie (BD Biosciences, Corning, Nunc; ver Figs. 7.6, 26.9 ), y 1 × 109 a 1
× 1010 células que se pueden producir en cultivos agitadores simples de alrededor
de 1 a 10 L de capacidad (ver Sección 12.4.5). Los cultivos a mayor escala de 1 ×
1010 a 1 × 1012 células requerirán aparatos que van desde 10 a 100 L en un
fermentador de laboratorio o de piso (p. Ej., Bellco BCS-36, New Brunswick
Celligen o SartoriusWave Biorecator) y puede usarse para aplicaciones de
investigación o plantas piloto industriales que pueden aumentar a capacidades de
100 a 1000 L. La producción industrial a gran escala utiliza biorreactores de 5000
a 20,000 L, pero estos están más allá del alcance de este libro. Los términos
cultivo agitador o cultivo giratorio son sinónimos y tienden a usarse para sistemas
de cultivo simples en el extremo inferior de la gama de equipos de laboratorio. Los
términos fermentador y biorreactor, aunque no son sinónimos, tienen una
superposición considerable. El nombre fermentador deriva de los sistemas de
cultivo microbiológico, diseñados originalmente para bacterias y levaduras, y se
usó inicialmente para equipos de laboratorio de aproximadamente 50 a 100 L de
capacidad, pero el aumento de escala en línea con los desarrollos en la industria
de la biotecnología, junto con un La mayor diversidad en el diseño para hacer
frente a los cultivos en monocapa, así como la suspensión, ha llevado a la
introducción del nombre de biorreactor. En ingeniería de tejidos, el término incluye
cultivo agitado de construcciones en volúmenes relativamente pequeños. El
método empleado para aumentar la escala de un cultivo depende de si las células
proliferan en suspensión o si deben anclarse al sustrato. Los métodos para las
células en suspensión son generalmente más simples y se tratarán primero. Las
técnicas de monocapa, que dependen de una mayor provisión de superficie de
crecimiento, tienden a ser más complejas y se abordarán más adelante (ver
Sección 26.2). Muchas de las técnicas de monocapa también son aplicables a las
células en suspensión.
26.1 ESCALA EN SUSPENSIÓN
La ampliación de los cultivos en suspensión implica, principalmente, un aumento
en el volumen del medio de cultivo. La agitación del medio es necesaria cuando la
profundidad excede los 5 mm, para mejorar el intercambio de gases y evitar que
las células formen un sedimento denso; por encima de 5 a 10 cm (dependiendo de
la relación del área de superficie con el volumen), se requiere rociar con CO2 y
aire para mantener un intercambio de gases adecuado (Figs. 26.1, 26.2). La
agitación se realiza lentamente con un imán encerrado en un péndulo de vidrio
(Techne, Integra) o con una paleta de gran superficie (Bellco). La velocidad de
agitación debe estar entre 30 y 100 rpm, suficiente para evitar la sedimentación
celular, pero no tan rápida como para crear fuerzas de corte que dañen las
células. Se debe incluir Antiespumante (Dow Chemical Co.) o Pluronic F68
(Sigma), 0.01% a 0.1%, cuando la concentración sérica es superior al 2%,
particularmente si el medio es rociado. En ausencia de suero, puede ser necesario
aumentar la viscosidad del medio con carboximetilcelulosa (1–2%) (peso
molecular ∼105). En el siguiente análisis de protocolo se describe un biorreactor
simple a escala de laboratorio para establecer un cultivo de 4 L de células que
crecen en suspensión. Controle la tasa de crecimiento de las células diariamente.
Para obtener los mejores resultados, las células no deben mostrar un período de
retraso de más de 24 h y aún deben tener un crecimiento exponencial cuando se
cosechan. Grafique los recuentos de células diariamente y coseche las células a
aproximadamente 1 × 106 células / ml. Los cultivos en suspensión tienden a entrar
en apoptosis si se excede esta concentración. Variaciones Adición de medio. Los
siguientes procedimientos son alternativas para agregar medio a recipientes de
más de 5 L:
(1) Compre el medio en bolsas de medios (consulte el Apéndice II) que se puede
conectar junto al matraz agitador, calentar a 37 ° C y dejar correr sin supervisión.
(2) Esterilice el matraz agitador con un volumen previamente medido de UPW y
prepare el medio a partir de concentrados in situ. Marque el costado del matraz
para indicar el nivel de agua, de modo que pueda recuperarse el agua perdida por
evaporación durante el autoclavado.
(3) Use un medio esterilizable en autoclave (vea el Apéndice II) y esterilice en
autoclave in situ (nuevamente restaurando el volumen con UPW estéril para
compensar la evaporación). Cosecha. Verter desde un matraz agitador grande
puede ser difícil, a menos que haya una salida inferior. Sin embargo, las salidas de
fondo tienden a obstruirse con células muertas y es mejor evitarlas. La recolección
se realiza mejor mediante bombeo o desplazamiento:
(1) Retire el filtro en línea de la línea de gas y agregue un tubo de silicona y
extraiga las células o use una bomba peristáltica, inclinando el recipiente cuando
el fluido esté cerca del fondo.
(2) Alternativamente, desconecte el suministro de CO2 al 5%, reemplace el filtro
de microporos con un tubo flexible, conecte el suministro de CO2 al 5% al otro
puerto y sople las células a través de la línea de gas. (Nota. Esto requiere que la
línea de gas esté abierta, es decir, sin una salida de vidrio sinterizado, como en la
figura 26.2.)
26.1.1 Cultivo continuo Si se requiere que las células se mantengan a una
concentración establecida, el cultivo se puede mantener como un quimiostato o
biostato. En este tipo de sistema de cultivo, las células crecen hasta la fase de
registro medio (monitorizadas por recuentos celulares diarios); Se extrae un
volumen medido de células cada día y se reemplaza con un volumen igual de
medio. Alternativamente, las células se pueden ejecutar continuamente, a una
velocidad constante, en la fase de registro medio, y se puede agregar medio a la
misma velocidad. Este último requerirá un recipiente agitador con cuatro puertos,
dos para la entrada y salida de CO2, uno para la entrada del medio y uno para la
salida del medio gastado, que se recoge en un depósito (Fig. 26.3). La velocidad
de flujo del medio puede calcularse a partir de la velocidad de crecimiento del
cultivo [Griffiths, 2000], pero se determina mejor experimentalmente mediante el
recuento de células en serie a diferentes velocidades de flujo del medio. Los
recuentos de células se pueden realizar en el biorreactor desconectando la
entrada de CO2 y extrayendo una muestra con una jeringa con un adaptador
doble hembra Luer. El caudal puede ser regulado por una bomba peristáltica
variable en la línea de entrada. La producción de células a granel, en el rango de 1
a 20 L, se realiza mejor por el método por lotes descrito en el Protocolo 26.1. Se
requiere un estado estable para monitorear los cambios metabólicos relacionados
con la densidad celular, pero es más costoso en el medio y es más probable que
conduzca a la contaminación. Sin embargo, si la operación está en el rango de 50
a 1000 L, se invierte más tiempo y tiempo en generar el cultivo, y el método por
lotes se vuelve más costoso en tiempo, materiales y tiempo de inactividad. El
cultivo continuo puede ser mejor en algunos casos, pero, con la disponibilidad de
biorreactores desechables (Sartorius Stedim; Xcellerex), donde la preparación y el
tiempo de inactividad se reducen significativamente, ahora se pone mayor énfasis
en los procesos del reactor de tanque agitado (STR) alimentado por lotes. Los
cultivos en suspensión también se pueden ampliar mezclando botellas rotativas en
un estante de rodillos (ver Fig. 26.13), como para los cultivos en monocapa (ver
Protocolo 26.3). Células adherentes. Las células dependientes del anclaje no
pueden crecer en suspensión líquida, excepto en microportadores (véase el
Protocolo 26.4), pero las células transformadas (por ejemplo, líneas celulares
continuas transformadas viralmente o espontáneamente, como CHO o HeLa-S3)
sí pueden. Debido a que estas células todavía son capaces de unirse, los
recipientes de cultivo deberán estar recubiertos con una silicona repelente al agua
(por ejemplo, Repelcote), y la concentración de calcio puede necesitar reducirse.
El medio S-MEM (Invitrogen, Sigma) es una variación del MEM de Eagle sin calcio
en la formulación y se ha utilizado para el cultivo de HeLa-S3 y otras células en
suspensión. RPMI 160, que tampoco tiene calcio y una baja concentración de
magnesio, fue desarrollado para el crecimiento de células linfoblastoides en
suspensión y también es adecuado para otras células en crecimiento en
suspensión.
26.1.2 Escala y complejidad
Los cultivos de agitador de mesa estándar funcionan satisfactoriamente hasta
alrededor de 10 L para la producción a granel de células o productos solubles en
el medio. Sin embargo, si se debe prestar más atención al control del proceso, se
debe usar un biorreactor controlado (Figs. 26.4, 26.5). Estos biorreactores tienen
entrada regulada de medio y gas y proporcionan la capacidad de recopilar datos
de electrodos de oxígeno, CO2 y glucosa en el recipiente de cultivo. Están
regulados por una unidad de control programable que registra y emite datos y
puede usarse para regular la entrada y salida de gas y líquido, la velocidad de
agitación, la temperatura, etc. (consulte la Sección 26.3). El costo de capital y la
preparación, configuración y tiempo de respuesta para los biorreactores
reutilizables son significativos, y esto ha llevado a la introducción de biorreactores
desechables (Xcellerex; Sartorius; Millipore Mobius) donde el compartimento
estéril es de plástico, desechable y cabe dentro de un chaqueta de incubadora no
estéril (ver Fig. 26.5b) y está completamente validada [Hacker et al., 2009].
26.1.3 Mezcla y aireación
Los problemas de mayor escala en los cultivos en suspensión giran en torno a la
mezcla y el intercambio de gases. A diferencia de los cultivos agitadores simples,
la mayoría de los biorreactores a escala de laboratorio agitan el medio con una
turbina rotativa o paleta. Los diseños de estos biorreactores varían, principalmente
para tratar de lograr el máximo movimiento del líquido con un esfuerzo cortante
mínimo para las células (ver Fig. 26.4a). Los diseños exitosos generalmente
emplean una paleta de paletas grandes de rotación lenta con un área de superficie
relativamente alta [Griffiths, 2000] y un aditivo químico diseñado para minimizar los
efectos nocivos de la cizalla como Pluronic F68 [Cherry & Papoutsakis, 1990;
Nienow, 2006], carboximetilcelulosa (CMC) o polivinilpirrolidona (PVP). Se
requiere rociar con CO2 en el aire para cultivos profundos. Aunque un tamaño de
burbuja pequeño promueve un intercambio de gases más rápido, tiende a ser más
dañino cuando estallan en la superficie del medio (minimizado por Pluronic F68) y
generalmente se prefieren tamaños de burbuja más grandes [Nienow, 2006].
Biorreactores de olas. Las bolsas de cultivo (véase el Apéndice II), similares a las
utilizadas para el almacenamiento medio, pueden usarse para ampliar el cultivo de
células en suspensión. Son permeables a los gases y pueden agitarse
balanceándose sobre bandejas en una plataforma de balanceo plana (Fig. 26.6;
Sartorius). Esto también promueve el intercambio de gases. La bolsa viene estéril,
es desechable y se puede guardar en una incubadora / agitador especialmente
diseñada. El costo unitario y el tiempo de preparación son bajos. Fermentadores
de elevación de aire. Los fermentadores a gran escala a veces usan el principio de
elevación de aire (Fig. 26.4b): se bombea 5% de CO2 en el aire a un anillo de
acero poroso en la base del cilindro central, y las burbujas fluyen hacia el centro,
llevando un flujo de líquido con ellos, y se liberan en la parte superior, mientras
que el medio se recicla en la parte inferior del cilindro. Este tipo de fermentador
bastante simple se ha utilizado ampliamente en la industria de la biotecnología,
hasta capacidades de 20,000 L, pero ahora se prefieren los STR de lotes
alimentados [M. Mayordomo, comunicación personal; Hacker et al., 2009]. Cultura
aireador BelloCell. Este dispositivo inusual tiene un compartimento de fuelle medio
que fuerza alternativamente el medio sobre las células ancladas en matrices
porosas y lo retira nuevamente, en un movimiento de "respiración" del fuelle (Fig.
26.7; Bellco). Se reivindica una óptima mezcla y aireación con cizallamiento
mínimo y se pueden obtener densidades muy altas con una salida de celda
equivalente a 12 botellas de rodillo [Ho et al., 2004]. Cultivo en suspensión
perfundido. Los sistemas de perfusión de fibra hueca y de membrana funcionan
según el principio de compartimentación. Las células se retienen en un
compartimento de bajo volumen a una concentración muy alta, y el medio se
perfunde a través de fibras huecas dentro del compartimento celular (Fig. 26.8;
véase también la Sección 7.4.1). La regulación del intercambio de gases en el
medio es externa a la cámara de cultivo. Las fibras huecas también están
disponibles con espacios concéntricos dobles para que el nutriente pueda ser
perfundido por el centro, el producto recolectado en el espacio exterior y las
células cultivadas entre los dos tubos concéntricos (ver Fig. 25.2).
26.2 ESCALA EN MONOAYER
Aunque las células que crecen en suspensión son más fáciles de manejar, las
células ancladas, con su potencial resultante para desarrollar polaridad, pueden
representar un mejor modelo para la traducción posterior a la modificación de
proteínas y el flujo de membrana apropiado, lo que lleva a su secreción de las
células en un forma bioactiva La mayoría de las células normales, no
transformadas, crecen en esta configuración. Para cultivos de monocapa
dependientes del anclaje, es necesario aumentar el área de superficie del sustrato
en proporción al número de células y el volumen del medio. Este requisito ha
provocado una variedad de estrategias diferentes, algunas simples y otras
complejas.
26.2.1 Propagadores de múltiples superficies
Frascos Los matraces multisuperficie están disponibles como una etapa
intermedia de ampliación, como Nunc Triple-Flask (ver Fig. 7.6) y Corning
HyperFlask (Fig. 26.9). Bandejas apiladas. Uno de los sistemas más simples para
ampliar los cultivos en monocapa es apilar varias unidades de bandeja en niveles
de hasta 40 capas. El diseño original era Nunc Cell Factory, y a esto se le unió el
similar Corning Cellstack (Fig. 26.10; también la Tabla 7.2). Estos sistemas están
formados por una pila soldada de unidades rectangulares tipo placa de Petri, con
una superficie total de 600 a 24,000 cm2, interconectadas en dos esquinas
adyacentes por tubos verticales. Debido a las posiciones de las aberturas en los
tubos verticales, el medio puede fluir entre los compartimientos solo cuando la
unidad se coloca en el extremo. Cuando la unidad se gira y se coloca plana, el
líquido en cada compartimento está aislado, aunque las aberturas en los tubos de
interconexión todavía permiten la conexión de la fase gaseosa. Estos
biorreactores tienen la ventaja de que no son diferentes en la geometría o la
naturaleza del sustrato de un matraz convencional o placa de Petri. El método
recomendado para usar Cell Factory se describe en el Protocolo 26.2 (ver Fig.
26.11). Manejar el CellStack es similar.
Análisis
Observación. El monitoreo del crecimiento celular en estas cámaras es difícil, por
lo que se suministra una sola bandeja para que actúe como cultivo piloto. Se
supone que la bandeja única se comportará como la unidad multicámara. Cosecha
de producto. El medio sobrenadante se puede recoger repetidamente para la
purificación de virus o productos celulares. La recolección de células para el
análisis depende de la eficiencia de la tripsinización. Esta técnica tiene la ventaja
de la simplicidad, aunque puede ser costosa si la unidad se desecha cada vez que
se recolectan células. La recolección del medio sobrenadante es principalmente
buena para producir grandes cantidades de células (1 × 108–1 × 1010). Discos de
múltiples matrices, espirales y tubos. Los discos, espirales y tubos se han utilizado
para aumentar el área de superficie para el crecimiento de monocapa, pero pocos
de estos sistemas ahora están disponibles comercialmente. La mayoría de los
propagadores de matriz o multisuperficie han ido hacia la perfusión (ver Sección
26.2.5), con énfasis en la recuperación del producto. Corning comercializa un
sistema de perfusión multisuperficie, llamado CellCube (Fig. 26.12), que es un
cubo de poliestireno hueco con múltiples láminas internas, perfundido con medio
oxigenado y calentado. Las láminas internas son capaces de soportar el
crecimiento de monocapa en ambas superficies, pero el crecimiento puede no ser
completamente aleatorio [Aunis et al., 2003].
26.2.2 Cultivo de rodillos
Si las células se siembran en una botella o tubo redondo que luego se enrolla
alrededor de su eje largo en una rejilla de rodillos (Fig. 26.13), el medio que
transporta las células corre alrededor del interior de la botella. Si las células no son
adherentes, serán agitadas por la acción de rodar pero permanecerán en
suspensión en el medio. Si las células son adherentes, se unirán gradualmente a
la superficie interna de la botella y crecerán para formar una monocapa (Fig.
26.14). Este sistema tiene tres ventajas principales sobre el cultivo de monocapa
estática: (1) el aumento en el área de superficie utilizable para un tamaño de
botella dado; (2) la agitación constante, pero suave, del medio; y (3) la relación
aumentada del área de superficie del medio con respecto a su volumen, lo que
permite que el intercambio de gases tenga lugar a una velocidad mayor a través
de la película delgada del medio sobre las células que no están realmente
sumergidas en la parte profunda del microscopio invertido del medio. Sin embargo,
con algunos microscopios, el condensador necesita ser removido, y con otros, la
botella puede no caber en el escenario. Por lo tanto, elija un microscopio con
suficiente capacidad de escenario. El sistema de botella con rodillo es
probablemente el más económico para la recolección repetida de grandes
cantidades de células o para recolectar medio sobrenadante, aunque requiere
mucha mano de obra y requiere inversión en un estante de rodillos (ver Fig.
26.13). Agregación de variaciones. Algunas células pueden tender a agregarse
antes de unirse. Este comportamiento es difícil de superar, pero puede reducirse
reduciendo la velocidad de rotación inicial a 5, o incluso 2, rph, probando un tipo o
lote diferente de suero, o prerrevestiendo la superficie de la botella con
fibronectina o polilisina (consulte la Sección 7.2.1). Tamaño. Se encuentra
disponible una gama de botellas (alrededor de 500–1800 cm2), tanto desechables
como reutilizables (consulte la Tabla 7.2; Apéndice II: Botellas de rodillos).
Algunas botellas cuentan con una superficie interna acanalada para aumentar el
área de superficie disponible para el crecimiento celular (Corning).
26.3 CONTROL DE PROCESOS
El progreso de los cultivos en suspensión se controla a través de electrodos de
pH, oxígeno, CO2 y glucosa que se leen del cultivo in situ, y al analizar la
utilización de nutrientes, como glucosa y aminoácidos, o la acumulación de
metabolitos, como lactato y amoníaco y productos, como la inmunoglobulina de los
hibridomas (fig. 26.19). El número de células y otros parámetros, como ATP, ADN
y proteínas, se determinan en muestras extraídas del cultivo y se utilizan para
calcular la biomasa total. La temperatura del medio se regula precalentando el
medio de entrada y calentando la camisa de agua circundante regulada por la
retroalimentación de la sonda de temperatura. El caudal del medio se controla y
puede hacer coincidir la salida con la línea de muestra si la suspensión funciona
como un biostato (consulte la Sección 26.1.1), y la velocidad de agitación se
puede regular, junto con la viscosidad del medio. para reducir el esfuerzo cortante.
Existe un problema recurrente cuando los cultivos de células monocapa se
amplían, particularmente en un biorreactor de fibra hueca o de lecho fijo: ya no es
posible observar las células directamente y monitorear el progreso de un cultivo
mediante el recuento celular y la determinación de la biomasa. se vuelve difícil
Una aproximación a este problema [Brindle, 1998; Thelwall et al., 2001] utiliza la
resonancia magnética nuclear (RMN) para analizar el contenido de la cámara de
cultivo. Al colocar las células en una cámara de fibra hueca perfundida dentro del
campo magnético de un espectroscopio de RMN, se genera un espectro de RMN
característico, que permite la identificación y cuantificación de metabolitos
específicos (Fig. 26.20). Los espectroscopios de RMN también se pueden usar
como dispositivos de imágenes, produciendo una sección cuasi-óptica a través de
la cámara para revelar la distribución de las células (ver Fig. 25.10), e incluso para
distinguir entre zonas de cultivo proliferativas y no proliferativas.
26.4 AUTOMATIZACIÓN
Implícito en muchos de los procedimientos descritos para la ampliación está la
participación de algún grado de automatización. Los biorreactores se pueden
alimentar y cosechar automáticamente (véanse las Fig. 26.3, 26.19), y muchos
otros dispositivos se controlan continuamente en busca de parámetros
fisioquímicos y fisiológicos con retroalimentación utilizada para ajustar el pH o las
concentraciones de nutrientes (ver Sección 26.3). Sin embargo, siempre ha sido
necesario automatizar los procedimientos rutinarios de cultivo y subcultivo y el
manejo a gran escala de múltiples réplicas para la detección de alto rendimiento.
Esto ha impulsado la introducción de la robótica en el cultivo celular, por un lado,
para la producción a gran escala en matraces de cultivo convencionales y, por
otro, para manejar y analizar decenas de miles de micromuestras por día.
26.4.1 Cultivo celular robótico
Uno de los sistemas más utilizados es el Cellmate (The Automation Partnership,
TAP), que manejará frascos de cultivo y botellas giratorias y subcultivo mediante
desagregación enzimática o mecánica (Fig. 26.21; véase también la Lámina 24).
Las versiones también pueden clonar células y cosechar los clones (CellCelector)
y expandir los cultivos de células madre embrionarias para la ingeniería de tejidos
(CompacT SelecT). Como todas las operaciones se llevan a cabo en un ambiente
sellado, la contaminación se previene de manera efectiva, y el sistema puede
funcionar continuamente siempre que esté provisto de medio fresco y cultivos de
siembra. Esto libera personal calificado para realizar operaciones más exigentes.
El sistema Compact Select se ha utilizado en varias aplicaciones [Gryseels, 2008],
incluido el descubrimiento de fármacos [Cawkill & Tucker, 2008; Lou et al., 2008] y
producción de células madre [Thomas et al., 2008]. Este y varios otros sistemas
de robótica manejarán placas y microplacas de pocillos múltiples, proporcionando
múltiples réplicas para el cribado de alto rendimiento basado en células (ver Fig.
26.21a, zonas 3 y 6).
26.4.2 Cribado de alto rendimiento
Mientras que en términos de volumen de cultivo y número de células, la mayor
parte de la producción industrial de cultivos celulares se usa para la producción de
productos biofarmacéuticos, gran parte de la producción en términos de la
cantidad de cultivos individuales manejados se dirige a la detección de la
respuesta a productos farmacéuticos experimentales o citotoxinas de grandes
cantidades muestras de células pequeñas, generalmente en algún tipo de
microplaca o conjunto de portaobjetos de microscopio a las que se puede acceder
mediante análisis de microarrays [Fernandes et al., 2009; Kikuchi et al., 2009]. Las
respuestas celulares se registran in situ y se procesan mediante análisis
informáticos posteriores. Hay dos ventajas principales de estos sistemas:
(1) se pueden analizar simultáneamente un gran número de muestras con
relativamente pocas células, y (2) el registro y la reducción de datos son
instantáneos con una mínima intervención manual. Se han realizado varios
intentos exitosos para automatizar la generación de la curva de crecimiento en
cultivos convencionales mediante la grabación digital de fotos in situ, ya que esto
es útil para el mantenimiento general, así como para estudios analíticos (ver
Sección 20.9.3; Fig. 20.11) y puede usarse en conjunto con sistemas robóticos
como CompacT SelecT. Estos sistemas también son aplicables a placas de
pocillos múltiples y microplacas y pueden realizar observaciones programadas en
pozos seleccionados. También hay una serie de mini sistemas de biorreactor
paralelos con monitoreo de imágenes, como el PANsys 3000 (Applikon) y
Hexascreen (Hexascreen Culture Technologies), e incluso hasta nanoescala en
una plataforma de microfluidos [Barbulovic-Nad et al., 2010]