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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad
CÁTEDRA DE TOXICOLOGÍA del Perú,
Y QUIMICA DECANA
LEGAL DE AMÉRICA)
-TOXICOLOGÍA GRUPO: MARTES

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

EAP FARMACIA Y BIOQUÍMICA

“Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático”

CÁTEDRA DE TOXICOLOGÍA Y QUIMICA LEGAL

TOXICOLOGÍA

GRUPO: MARTES

IDENTIFICACIÓN DE INSECTICIDAS ÓRGANO FOSFORADOS, ÓRGANO CLORADOS Y


ÓRGANO CARBÁMICOS

Fecha Práctica: 19-05-2014; Hora: 10 a.m. - 2 p.m.

INTEGRANTES

 HUAYHUA ABREGÚ, Jhonny 10040072


 HERNÁNDEZ LOLI, María 09040096
 HUERTA CRUZ, Evelin 09040064
 TRUJILLO DOMINGUEZ, John 10040128
 VALLE GARCÍA, Alex
 VÁSQUEZ GONZALES, Alan 07040001

PROFESOR:

LIZANO GUTIERREZ, JESÚS VÍCTOR

Año Académico: 5to Año

SEMESTRE:

2014-I

IDENTIFICACIÓN DE INSECTICIDAS ÓRGANO FOSFORADOS, ÓRGANO CLORADOS Y


ÓRGANO CARBÁMICOS
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INTRODUCCION

Según la OMS, un pesticida o plaguicida es cualquier sustancia o mezclas de sustancias, de


carácter orgánico o inorgánico, que está destinada a combatir insectos, ácaros, roedores y
otras especies indeseables de plantas y animales que son perjudiciales para el hombre o
que interfieren de cualquier otra forma en la producción, elaboración, almacenamiento,
transporte o comercialización de alimentos, producción de alimentos, productos agrícolas,
madera y productos de madera o alimentos para animales, también aquellos que pueden
administrarse a los animales para combatir insectos arácnidos u otras plagas en o sobre
sus cuerpos.

CLASIFICACION: Según la especie a combatir

Compuestos arsenicales
Compuestos fluorados
MINERALES
Azufre
Derivados del selenio
Organofosforados
ORGANICOS DE
INSECTICIDAS SINTESIS Organoclorados
MINERALES Carbamatos
A BASE DE ACEITES Aceites antracénicos
MINERALES Aceites de petróleo
Nicotina
DE ORIGEN VEGETAL Piretrina
Rotenona
Sales de NH4+, Ca++, Cu++, Fe+++, Mg++, K+,
MINERALES Na+, en forma de sulfatos, nitratos,
cloruros, cloratos.
Fitohormonas
Derivados de la urea
Triazinas y Diazinas
HERBICIDAS Derivados de los fenil sustituidos y las
quinoxalinas
ORGANICOS
Derivados de la oxiquinoleína
Derivados de las tiadizinas y tiadiazoles

FUNGUICIDAS MINERALES Sales de cobre


Compuestos arsenicales

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Aceites minerales
ORGANOMETALICOS Derivados órganomercuriales
Carbamatos y ditiocarbamatos
Derivados del benceno
ORGANICOS
Amicidas
Benzonitrilos
Derivados cumarínicos Warfarinas
RODENTICIDAS
Inorgánicos Sales de talio

El término plaguicida incluye también los siguientes tipos de sustancias: reguladores del
crecimiento de las plantas, defoliantes, desecantes, agentes para reducir la densidad de la
fruta, agentes para evitar la caída prematura de la fruta y sustancias aplicadas a los
cultivos antes o después de la cosecha, para proteger el producto contra el deterioro,
durante el almacenamiento y transporte.

Desde el punto de vista de la toxicología, es importante señalar que las formulaciones de


plaguicidas además del principio activo incluyen sustancias transportadoras, diluyentes
como agua o solventes orgánicos, aditivos e impurezas, que pueden tener potencial tóxico
por si mismas.

El análisis de plaguicidas puede clasificarse en diversas áreas:


-Forense
-Diagnóstico de urgencia
-Control de poblaciones expuestas y no expuestas.
-Contaminación ambiental.

Si el plaguicida fue causa de muerte, estará en alta concentración, al igual que en una
intoxicación aguda grave. En las dos últimas áreas se trabaja con muestras con niveles
muy bajos de plaguicidas (menores de 0,1 ppm), se habla de “residuos” de plaguicidas. De
todos ellos estudiaremos los insecticidas organoclorados, organofosforados y carbamatos,
por ser los más utilizados actualmente y producir efectos tóxicos muy característicos.

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OBJETIVOS

 Comprender y poner en práctica las normas de Bioseguridad.

 Conocer el efecto toxicológico de las distintas formas de los plaguicidas


en el organismo humano.

 Identificación De Insecticidas Órgano Fosforados, Órgano Clorados Y


Órgano Carbámicos mediante reacciones específicas y cromatografía
en capa fina.

MARCO TEÓRICO
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS

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Estas propiedades son las determinantes de su cinética ambiental. El aire, el agua, el suelo
y los alimentos retienen gran parte de los pesticidas y éstos llegarán a los seres vivos.
Constituye un problema actual su persistencia en el medio ambiente, su concentración y
transformación en organismos vivos.

  ORGANOFOSFORADO ORGANOCLORADO

Estabilidad  Muy Baja Elevada

Persistencia Baja Alta

Efectos bioacumulativo No Posee Muy Grande

Toxicidad aguda Alta Baja

Solubilidad en agua Alta Baja

Hidrofobicidad Bajo Alto

Costo Alto Bajo

Selectividad Alta Baja

ETIOLOGIA: Las intoxicaciones accidentales son generalmente de origen profesional,


afectando al los obreros que trabajan en la preparación de los insecticidas o a los peones
rurales durante o inmediatamente después de la aplicación en cultivos.

Las intoxicaciones alimentarias se deben al consumo de alimentos tratados


impropiamente con pesticidas. Las intoxicaciones casuales se deben generalmente a
confusiones, manejo imprudente y falta de vigilancia de los niños.

Las intoxicaciones suicidas y criminales se han hecho más frecuentes debido a su alta


toxicidad y fácil adquisición.

1.-PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS

Desde el punto de vista estructural, constituyen un grupo de sustancias, muy


heterogéneo, teniendo en común la presencia de estructuras monocíclicas o policíclicas
con distinto número de sustituyentes cloro.

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Incluyen varios grupos:
a) Grupo de los Ciclodienos:Aldrín y su epóxido, el Dieldrín, Mirex
b) Grupo del DDT (dicloro-difenil-tricloroetano): p-p´-DDT, o-p´-DDT, p-p´-Metoxiclor.
c) Grupo del Hexaclorociclohexano (HCH) y Hexaclorobenceno(HCB): HCH,  -HCH, HCB.
d) Grupo de los indenos clorados: hepatacloro, a-Clordano.
e) Grupo de los terpenos clorados: Toxafeno.

Absorción

Por vía digestiva principalmente; a través de la piel cuando están en solventes lipídicos y a
través de la vía respiratoria por su aplicación en forma de pulverizaciones.

Mecanismo de acción

Poseen acción neurotropa, aunque no se conoce bien el mecanismo sobre el sistema


nervioso. A largo plazo, inducen las enzimas microsomales hepáticas. Son inductores en
cantidades residuales, del orden de las que pueden estar acumuladas en el tejido adiposo.

En el hombre, al igual que en el medio ambiente, se degradan lentamente y se pudo


determinar que tienen una gran afinidad por los tejidos grasos. Estas cantidades
acumuladas en grasas preocupan, pues por ejemplo, en el caso de adelgazamiento brusco
pasan a la circulación general y producen síntomas de intoxicación. 
Preocupa también, porque pasan en cantidades considerables a la grasa de la leche. Los
recién nacidos se pueden ir contaminando, debido a los residuos de pesticida presentes
en su alimento natural.

Muestras

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La sangre es la muestra más adecuada para la búsqueda de plaguicidas organoclorados ya
que por su gran liposolubilidad rara vez aparecen en orina. Se colectan 8-10 ml de sangre
en tubo de centrífuga heparinizado.

Jugo gástrico: evitar el agregado de carbón vegetal . Conservar en la heladera.

Distintos tipos de alimentos, principalmente de origen vegetal, productos cárneos y aguas.


Los alimentos son considerados como la principal vía de acceso de los pesticidas
organoclorados al organismo (80-90% del ingreso diario de plaguicidas según Kaphalia,
1985)

2.-  PLAGUICIDAS ORGANOFOSFORADOS

Son sustancias biodegradables en la naturaleza, sin tendencia a acumularse en las grasas


del organismo, pero con gran actividad neurotóxica que va a producir intoxicaciones
agudas de gravedad. Son los insecticidas, junto con los carbamatos y piretroides, más
ampliamente utilizados en la actualidad.

Sus estructuras químicas derivan de la sustitución por restos orgánicos en el fósforo


pentavalente. Pueden clasificarse como:

a) Derivados de la molécula del ácido fosfórico. Si los dos primeros oxhidrilos se esterifican
con radicales alquílicos se obtienen los alquil-fosfatos o alquil-pirofosfatos (ejemplo:
dichlorvos) . Si dichos oxhidrilos se sustituyen por amidas se obtienen las fosforamidas
(ejemplos: metamidofós, acefato).

b) Derivados de la molécula del ácido fosforotiónico: De este ácido derivarán a su vez


numerosos ésteres tiofosfóricos (ejemplo: paratión).

c) Derivados del ácido fosforotiolotiónico. (ejemplo: malatión).

d) Derivados del ácido fosforotiólico (ejemplos: malaoxón, demeton-S-metil.).

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Mecanismo de acción

Los insecticidas organofosforados actúan combinándose con gran afinidad con cierto tipo
de esterasas, con la consecuencia de su inactivación. Esta reacción, en el contexto de la
fisiología de sus funciones, es irrevesible. Los oxofosforados (enlaces P=O) son
fuertemente inhibidores, mientras que los tiofosforados (P=S) no son fuertemente
inhibidores y necesitarán de una biotransformación a la forma oxo para actuar como
inhibidores.

En particular, la inhibición de las colinesterasas es la que va a derivar en los síntomas y


signos de la intoxicación aguda. El papel fisiológico de la colinesterasa consiste en la
hidrólisis de la acetilcolina, mediador químico en la transmisión del impulso nervioso. Se
acumulan así grandes cantidades de acetilcolina en las sinapsis.

Existen dos tipos de colinesterasas: la colinesterasa verdadera, presente en eritrocitos y


tejido nervioso y la pseudocolinesterasa presente en suero o plasma.

Ambas enzimas son inhibidas por los compuestos organofosforados, pero la eritrocitaria
es la que mejor refleja el estado de inhibición de la colinesterasa del sistema nervioso, por
lo que se utiliza para evaluar el estado de intoxicación aguda de un paciente. Por otro
lado, la colinesterasa plasmática o pseudocolinesterasa es la que más tarda en
regenerarse, por lo que se utiliza en la evaluación de la exposición crónica a
organofosforados.

Absorción:

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Los ésteres fosforados se absorben fácilmente a través de la piel y más rápidamente por
vía digestiva. La absorción respiratoria es casi instantánea.

Muestras

La muestra más utilizada para la determinación de organofosforados y sus metabolitos es


orina de 24 hrs, colectada en envase de vidrio y conservada en heladera.
También, como índice de la intoxicación, puede determinarse la actividad de las
colinesterasas sanguíneas: plasmática o eritrocitaria.
La determinación de residuos se realiza, por un lado, en distintos tipos de alimentos,
principalmente de origen vegetal, productos cárneos y aguas de bebida, y por otro lado en
muestras ambientales como aguas superficiales y suelos.

3.-CARBAMATOS

Forman parte de una gran familia de plaguicidas entre los que se hallan herbicidas,
fungicidas e insecticidas. Todos ellos derivan del ácido carbámico:

Se los divide en tres grupos:

1-N-metil carbamatos: uno de los hidrógenos del grupo amino es reemplazado por un
grupo metilo (ejemplos: Aldicarb, Carbaryl, Carbofuran).

2-N,N, dimetil Carbamato: ambos hidrógenos del grupo amino son reemplazados por
grupos metilos (ejemplos: Isolan, Pirolan).

3-N-fenil Carbamatos: un grupo fenilo sustituye a uno de los hidrógenos del grupo amino.

Mecanismo de acción

Es equivalente al mecanismo de acción de los organofosforados, uniéndose a las


colinesterasas e inactivándolas. Pero ésta unión es reversible espontáneamente en menos
de una hora, de manera que en el curso de una intoxicación aguda por carbamatos se
manifiestan los mismos signos y síntomas de la intoxicación por organofosforados pero
con un curso más rápido hacia la recuperación

Muestras

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Se los encuentra en orina de 24 horas. También se los halla en distintos tipos de alimentos
contaminados, principalmente de origen vegetal.

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ÓRGANO CLORADOS Y ÓRGANO CARBÁMICOS

I. Parte Experimental

I.I. REACTIVOS y MATERIALES

1. Muestra problema previo tratamiento (extracción directa con


benceno y hexano)
2. Reactivos de Identificación:
 Cloruro de Paladio
 Tricloruro de Hierro
 Nitrato de Plata amoniacal
 P-dimetilaminobenzaldehído al 1% en etanol
 Ácido sulfúrico
 Hidróxido de Sodio (reacción de Folidol)
3. Cromatografía en capa fina:
 Soporte: Silicagel-G (más especificidad)
 Sistema solvente: Benceno: metanol (6:1)
4. Reveladores:
 Verde brillante al 0.5% en acetona (alta sensibilidad)

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN

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1.-Reacción general del paration con el p- nitrofenol

 Fundamento
La unión del paraoxon con la acetilcolinesterasa hace que este libere metabolitos como el p-
nitrofenol lo que nos permite realizar la identificación preliminar de compuestos
organofosforados.
El p- nitrofenol es incoloro en disolución acida, pero se vuelve de intenso color amarillo cuando
la disolución se alcaliniza. Esto debido a que la molécula original no ionizada es incolora, pero el
ion negativo correspondiente es coloreado. En disolución alcalina el exceso de base separa al ion
H+ de la molécula y la disolución se vuelve amarilla a causa del anión liberado.
Reacción química

 Método operatorio
a. Adicionar en la capsula de porcelana I Gta. MP (Orina)
b. Luego agregar 1mL NaOH 10%
c. Llevar a B.M. x 5minutos

 Resultado
Rx. Positiva para ORGANOFOSFORADOS si:
COLORACIÓN AMARILLO INTENSO

 Conclusión

Posible presencia de compuestos organofosforados

1. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

2.1 Fundamento

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Los plaguicidas organofosforados a separar se desplazan en una dirección predeterminada
por medio de un material sólido insoluble inorgánico: Silicagel G 60 como fase estacionaria
y la fase móvil que en este caso es la mezcla de hexano: acetona: alcohol isopropílico los
cuales van a migrar a través de la superficie de la placa.
La fase móvil va arrastrar a los plaguicidas organofosforados por un proceso de reparto
múltiple que se da en toda sustancia de mediana o baja polaridad como es el caso de los
plaguicidas organofosforados.

2.2 Sensibilidad del método de cromatografía de capa fina (CCF): Es de 0.5 microgramos

2.3 CROMATOGRAFÍA Y RELEVADO DE LOS ORGANOFOSFORADOS


 Revelado con verde brillante 0.5%
Método de detección específico para ácidos carboxílicos.

 Cloruro de paladio 1% en HCl 5%


La principal aplicación del paladio es su uso como catalizador el cual actúa permitiendo
una reacción de acoplamiento C-C. El primer paso consiste en la activación del enlace C-X
por la inserción de paladio, seguido de la coordinación al doble enlace (al anillo en caso
de arilos metálicos) y la formación del enlace C(sp2)-C(sp2) con la consiguiente salida del
átomo de paladio.

 Revelado con tricloruro férrico (FeCl3)


Vapores de bromo permite la bromación de compuestos enólicos y fenólicos

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Se logra observar una coloración de va desde el amarillo hasta rojo.


El exceso de bromo se elimina con acido sulfosalicilico.
El cloruro férrico permite la formación de quelatos

2.4 CROMATOGRAFÍA Y REVELADO DE LOS CARBÁMICOS


 REVELADO CON P-DIMETILAMINOBENZALDEHÍDO
Reactivo de visualización que permite la identificación de sulfonamida.

2.5 Método operatorio

 Comenzamos primero diluyendo nuestro vial R3, con residuos de tóxicos neutros, con 1 ml
de metanol.
Luego pasamos a sembrar en las placas preparas para la cromatografía, a la altura
de la siembra correspondiente al estándar.

Sembrado
 Después de ello pasamos a incubar en todas
las placas las placas
sembradas en la cámara de separación para
cromatografía de capa fina, hasta que suba totalmente (aproximadamente 45 minutos a 1
hora).
- Soporte: Silicagel g, coadyuvante yeso.
- S. Solvente: benceno: metanol en una proporción
de 6:1

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 Al haber transcurrido el tiempo, pasamos a sacar cada una de las placas y empleamos los
reveladores para poder comprobar la presencia o no de los plaguicidas organofosforados.

a) Revelador verde brillante 0.5% en acetona: (muy sensible)

T.O. Para ello rociamos la placa con cloruro de verde brillante y luego lo exponemos a
los vapores de bromo.

Añadido de
revelador
verde
brillante.

Placas después del tiempo


de incubación

Llevado nuevamente
a la cámara.

Exposición de vapores de bromo

b) Revelador de cloruro de paladio (ClPd) 1% en ácido clorhídrico (HCl) 1%:


T.O. Obtenida nuestra placa, rociamos la placa con el cloruro de paladio y vemos lo
sucedido.

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Rociamos el cloruro de paladio

c) Revelador de cloruro hierro en etanol

T.O. Sacamos la placa sembrada transcurrido el tiempo, y exponemos a los vapores de


bromo durante 10 minutos y se forman machas marrones/naranja.
Luego de ello, rociamos ácido sulfocílico 1% en etanol (elimina el exceso de bromo en la
placa y dejamos en reposo durante 10 minutos. Pasado el tiempo, rociamos con
tricloruro de hierro (Cl3Fe) 0.1% en etanol.

Placas después del


Exposición de vapores de bromo
tiempo de incubación

Nuevamente se
lleva a la cámara.

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V. BIBLIOGRAFIA

 Fernández R. Marcha toxicológica de urgencia.Argentina.2007.Disponible


en:http://www.bvsde.paho.org/bvstox/e/fulltext/marcha_toxicologica.pdf

 Giannuzzi L. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología.


Argentina. Disponible en: http://www.slideshare.net/adnestelamartin/captulo-3-
7409408.

 MILLA, Manuel; PALOMINO, Rodolfo. Niveles de colinesterasa serica en


agricultura de la localidad de Coropongo(Peru) y determinacion de residuo de
plaguicidas inhibidores de la acetilcolinesterasa en frutas y hortalizas cultivadas.
Tesis para optar el titulo. Lima. UNMSM.2002. Disponible en:

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtualdata/tesis/salud/Milla_C_O/t_completo.pdf

 Reactivos de visualización en cromatografía de capa fina. Disponible en:


http://lcso.epfl.ch/files/content/sites/lcso/files/load/TLC_Stains.pdf

 HERNANDEZ, F. Y BELTRAN,J. Analisis de residuos plaguicidas en aguas. Disponible en;

http://abe.ufl.edu/carpena/files/pdf/zona_no_saturada/avances_en_la_investigacion_v2/
c23_p321_356.pdf

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