Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Departamento de Química
Presentado por:
Dedicatoria
A Jehová Dios por haberme permitido llegar hasta este punto, por haberme brindado salud para
lograr mis objetivos, además de su infinita bondad y amor al fortalecer mi corazón e iluminar mi
mente y por haber puesto en mi camino aquellas personas que han sido mi soporte y compañía
durante todo el periodo de estudio.
A la memoria de mi padre Jairo Felipe Quezada Espinoza (1968-2010), a pesar de nuestra distancia
física, siento que estás conmigo siempre, y aunque nos faltaron muchas cosas por vivir juntos, sé
que este momento hubiera sido tan especial para ti como lo es para mí, agradezco tus consejos y
animo que me dabas en los momentos de dificultad, gracias por haberme guiado por el buen camino
desde mi infancia, tu presencia estarán conmigo por Siempre.
A mi abuelo José Abraham Velásquez Quezada) quien en vida fue muy importante en mi formación
en la infancia y parte de mi adolescencia, el cual me entrego su cariño, consejos y apoyo
incondicional siempre que lo necesitaba, gracias por los momentos felices que me dabas a tu lado.
Agradecimientos.
Primeramente a Dios por protegerme durante todo mi camino y darme fuerzas para superar
obstáculos y dificultades a lo largo de toda mi vida.
A mi hermanita Laura María Velásquez Romero quien ha sido como una madre, al brindarme cariño,
consejos, disciplina y su ayuda incondicional en los momentos más difíciles de mi vida, sin su apoyo
no hubiese logrado culminar mis estudios.
A mi Tío Juan Manuel Romero López a quien agradezco toda la ayuda que me ha brindado en el
transcurso de mis estudios, gracias por su confianza y cariño que me ha demostrado durante todo
este tiempo.
A mi tutor de tesis Msc. Vernon Uriel Sandoval Ramos, quien se ha ganado mi lealtad y admiración
por haber brindado su tiempo, Entrega, conocimientos y orientaciones, agradezco su paciencia, y
motivación el cual ha ayudado plenamente a mi formación como estudiante.
A mi asesor Msc. Favio José Palaviccinni Narvaez por haber contribuido con sus valiosos
conocimientos para la elaboración del trabajo investigativo y al departamento de química por
habernos depositado su confianza y disposición de los materiales y equipos de laboratorio para la
realización de este estudio.
A mi compañero de Tesis y amigo Ervin David Munguía Avendaño quien ha compartido conmigo
momentos de dificultad y triunfos en la realización de este estudio, agradezco su paciencia y
comprensión en momentos difíciles que entre enojos y risas logramos culminar con éxito nuestro
estudio investigativo.
DEDICATORIA
La culminación de este trabajo se la dedico primeramente a Dios por estar conmigo en todo
momento por haberme dado la sabiduría de tomar las mejores decisiones y recibir siempre sus
bendiciones, para llegar a este momento que por muchos años anhele ver y tener.
A mi madre, Reyna María Avendaño y mi padre miguel de los Ángeles Munguía porque ellos fueron
la motivación para culminar un proceso que dura varios años pero que al final lo he terminado, por
su apoyo, sacrificio, dedicación, confianza y el gran amor incondicional que siempre me han
brindado.
A mis hermanos: Donal, Antonio, yuris, Carlos y yader a todos ellos por ser muy muy especiales por
sus ánimos, consejos y apoyo en todo el proceso de este trabajo y que confiaron en que lo lograría.
Muchas Gracias siempre estaré agradecido.
A mi compañera lesbia María Polanco porque siempre ha estado en los momentos difícil
apoyándome y animando, comprensión y ánimos que me demostró en todo este proceso.
Agradecimientos.
Antes que todo le agradezco a Dios por haberme dado la fuerza y sabiduría para llegar hasta estas instancias y así
poder llevar acabo las metas propuestas.
Luego quiero agradecer a mis padres por el esfuerzo que han hecho para apoyarme en todo momento. Por sus
consejos cuando verdaderamente los necesité y por su apoyo económico que no es lo más importante pero que es
necesario para la culminación de esta carrera.
A mi tutor el profesor MSC. Vernon Sandoval, quien es un ejemplo a seguir y su apoyo fue fundamental para la
obtención de mejores resultados en esta monografía
Mis agradecimientos a nuestro asesor Msc. Fabio Palaviccini y a la dirección del departamento de química por
habernos facilitado su laboratorio y materiales para llevar a cabo este estudio monográfico.
A mi compañera y amiga Kenny Elena Quezada Romero quien fue muy fundamental, la cual mostró mucho interés,
conocimiento y colaboración para el desarrollo de este trabajo.
Y a todas las personas que nos dieron su apoyo para este trabajo monográfico.
ÍNDICE
I. Resumen....................................................................................................1
II. Introducción...............................................................................................2
III. Objetivos...................................................................................................3
III.1 Objetivo General...........................................................................3
III.2 Objetivos Específicos....................................................................3
IV. Marco teórico...........................................................................................4
IV.1 Generalidades..............................................................................5
IV.1.1 Carnes.............................................................................5
IV.2 Composición Química..................................................................5
IV.2.1 Agua................................................................................5
IV.2.2 Proteína...........................................................................5
IV.2.3 Vitaminas.........................................................................6
IV.2.4 Carbohidratos..................................................................6
IV.3 Influencia de la temperatura en las carnes...................................6
IV.4 Relación del pH y vida útil de la carne.........................................7
IV.5 Curado de la carne.......................................................................8
IV.6 Embutidos.....................................................................................8
IV.6.1 Definición.........................................................................8
IV.6.2 Clasificación.....................................................................8
IV.6.3 Tipos de embutidos.........................................................9
IV.6.3.1 Salchicha.............................................................9
IV.6.3.2 Mortadela............................................................9
IV.6.3.3 Jamón.................................................................9
IV.7 Aditivo alimentario........................................................................9
IV.7.1 Definición.......................................................................10
IV.7.2 Principios generales para uso de aditivos.....................10
IV.7.3 Precauciones establecidas para el uso de aditivos.......11
IV.8 Nitrito..........................................................................................11
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos comunes por el método espectrofotométrico‖
IV.9.2.1.2 Precisión........................................................24
IV.9.2.1.2.1 Repetibilidad.....................................24
IV.9.2.1.2.2 Precisión intermedia.........................24
IV.9.2.1.3 Exactitud........................................................24
IV.9.2.1.3.1 Porcentaje de Recuperación.............24
IV.9.2.1.4 Límite de detección........................................25
IV.9.2.1.5 Límite de cuantificación..................................25
IV.9.2.2 Herramientas estadísticas..........................................26
IV.9.2.2.1 Linealidad.......................................................26
IV.9.2.2.2 Desviación estándar relativa..........................26
IV.9.2.2.3 Análisis de la varianza de un solo factor........26
V. Parte experimental..................................................................................28
V.1 Muestras......................................................................................29
V.2 Materiales y equipos....................................................................29
V.2.1 Materiales.......................................................................29
V.2.2 Equipos...........................................................................30
V.2.3 Reactivos........................................................................30
V.2.4 Preparados de soluciones..............................................30
V.3 Procedimiento.............................................................................32
V.3.1 Curva de Calibración......................................................32
V.3.2 Porcentaje de recuperación de nitrito de sodio..............33
V.3.3 Concentración de nitrito de sodio en embutidos.............33
VI. Análisis Estadístico................................................................................36
VI.1 Linealidad...................................................................................37
VI.2 Límite de Detección....................................................................38
VI.3 Límite de Cuantificación.............................................................38
VI.4 Repetibilidad...............................................................................39
VI.4.1 Homogeneidad de Varianza.............................................40
VI.4.2 Igualdad de las medias....................................................41
VII. Desviación estándar relativa de repetibilidad (DER)..................41
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos comunes por el método espectrofotométrico‖
Índice de Tablas.
Índice de figuras.
Figura N°12: Comparación de las concentraciones de Mortadela de las diferentes muestras con el
valor de referencia CODEX ALIMENTARIUS......................................................................................50
Figura N°13: Comparación de las concentraciones de Choricito de las diferentes muestras con el
valor de referencia CODEX ALIMENTARIUS......................................................................................51
Figura N°14: Comparación de las concentraciones de Salchichón de las diferentes muestras con el
valor de referencia CODEX ALIMENTARIUS......................................................................................52
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
I. RESUMEN
1
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
II. INTRODUCCIÓN
Los embutidos son derivados cárnicos a partir de una mezcla de carne picada ya sea de res, pavo o
cerdo. Para su conservación y rendimiento se requiere de una serie de aditivos esenciales para
conservar sus propiedades organolépticas, uno de los más utilizados en el curado de la carne es el
nitrito de sodio el cual es el responsable de darle el color rosa que lo caracteriza, es un buen
inhibidor del desarrollo anaeróbico de ciertos microorganismos especialmente clostridium botilinum.
El nitrito de sodio a altas concentraciones puede provocar formaciones de metahemoglobina en
sangre y formación de N-nitrosamina siendo estas mutagénicas y cancerígenas. Por esta razón
existen normativas que establecen límites máximos tolerables de concentración de Nitrito de sodio
en la elaboración de productos cárnicos.
Según la norma técnica para el uso de Aditivos en embutidos cárnicos CODEX ALIMENTARIUS
establece que la dosis máxima calculada para nitrito de sodio sobre el contenido neto total del
producto final es de 125mg/kg.
La razón principal por la cual se realiza este estudio es para determinar la dosis contenida de nitrito
de sodio, en los embutidos comercializados en nuestra localidad y evaluar si se cumple lo que
establece la norma técnica.
En el presente trabajo de investigación se implementó, un método de análisis para determinar la
concentración de nitrito de sodio, en muestras de embutidos, tales como: mortadela, choricito, y
salchichón. El método utilizado fue espectrofotometría UV-vis, que es uno de los métodos más
utilizados en los laboratorios analíticos para identificar especies absorbentes.
El método espectrofotométrico UV- vis, en la determinación de nitrito, se fundamenta en la reacción
colorimétrica entre los nitritos y el colorante con grupo funcional azo-púrpura rojizo producido a
pH 2.0–2.5, por acoplamiento de sulfanilamida diazotizada con diclorhidrato de N-(1-naftil)
etilendiamina; resultando una coloración roja. El sistema de color obedece a la ley de Beer a 535.5
nm.
Los parámetros de validación estudiados en el presente trabajo fueron: linealidad, límite de
detección (LD), límite de cuantificación (LC), precisión y exactitud del método.
Estos parámetros de validación son de mucha importancia ya que nos brindan resultados confiables
para los fines propuestos.
2
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
III. OBJETIVOS
3
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
4
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
IV.1 Generalidades.
Los alimentos son factores determinantes en la obtención de nutrientes que el cuerpo necesita para
el desarrollo de funciones del organismo y mantenimiento de la salud. Dentro de los alimentos se
encuentran productos cárnicos como los embutidos que la principal materia prima para su
elaboración es la carne de res, cerdo y aves. El producto terminado deberá estar libre de toda
sustancia extraña y su calidad depende del proceso normal de elaboración.
CARNE: es la estructura compuesta por fibra muscular estriada, acompañada o no de tejido
conjuntivo elástico, grasa, fibras nerviosas, vasos linfáticos y sanguíneos, de las especies animales
autorizadas para el consumo humano, sacrificados en mataderos autorizados. (1)
IV.1.1 Clasificación
Carne roja
Suele provenir de animales adultos. Desde el punto de vista nutricional se llama carne roja a ―toda
aquella que procede de mamíferos‖. El consumo de este tipo de carne es muy elevado en los países
desarrollados y representa el 20% de la ingesta calórica. Se asocia a la aparición del cáncer en
adultos que consumen cantidades relativamente altas. (2)
Carne blanca
Se denomina así como contraposición a las carnes rojas. En general se puede decir que es la carne
de las aves. Algunos de los casos dentro de esta categoría son la carne de pollo, la carne de conejo
y a veces se incluye el pescado. Desde el punto de vista de la nutrición se llama carne blanca a
―toda aquella que no procede de mamíferos‖.
El término ―carne roja‖ o ―carne blanca‖ es una definición culinaria que menciona el color (rojo o
rosado, así como blanco), de algunas carnes en estado crudo. El color de la carne se debe
principalmente a un pigmento rojo denominado mioglobina. (2)
IV.1.2 Composición Química:
Los constituyentes fundamentales de la carne fresca son: el agua, la proteína, la grasa y vitaminas.
IV.2.1 Agua: es el mayor componente del músculo está en un porcentaje de 70 a 90 %. Cuando se
trata de algún animal joven normalmente el porcentaje de agua es 72 %.
IV.2.2 Proteína: La más abundante del músculo es el complejo actomiosina, en el que se deben las
propiedades contráctiles del músculo. El responsable del color de la carne es el pigmento
mioglobina, ya que la mayor parte de la hemoglobina, el pigmento de la sangre, se pierde durante la
sangría. Tanto la mioglobina como la hemoglobina son heteroproteínas cuya porción peptídica, la
globina, forma un complejo con una porción no proteica, el grupo―hemo‖, compuesta de un átomo de
hierro y un anillo tetrapirrolico. La porción grasa de la carne está constituida, fundamentalmente, por
triglicéridos de ácidos grasos de cadena lineal, con un número par de átomos de carbono y
pequeñas cantidades de mono y di glicéridos mientras que la grasa intramuscular contiene una
proporción de fosfolípidos y colesterol. Los fosfolípidos desempeñan un papel muy importante en
relación con la conservación de la carne y productos cárnicos, porque se oxidan con gran facilidad.
5
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
El colesterol se encuentra en los tejidos animales en forma libre o esterificada con ácidos grasos de
cadena larga. (3)
IV.2.3 Vitaminas: Es notable la presencia de vitamina B12, pero también de niacina y vitamina B2
de las cuales las carnes proporcionan entre un 25% a 50% de las necesidades diarias. (3)
IV.2.4 Carbohidratos: Los tejidos animales contienen carbohidratos que se encuentran libres o
formando partes de otros compuestos; la glucosa, fructosa y ribosa, son azucares presentes en la
carne. Entre los polisacáridos de más importancia está el glucógeno, que se almacena en el musculo
esquelético y el hígado, como sustancia de reserva energética. El glucógeno desempeña un papel
muy importante en los cambios bioquímicos post- morten. (3)
La carne contiene hierro hemínico, el cual es muy eficientemente utilizado por nuestro organismo,
permitiendo cubrir con mayor facilidad las necesidades de hierro del ser humano. El hierro es
indispensable para el buen funcionamiento del cerebro y para lograr un buen rendimiento físico.
El tratamiento por calor se aplica en los embutidos para consolidar la coagulación de la estructura
proteica, para eliminar los microorganismos, inactivar las enzimas y obtener las características
sensoriales deseadas (color, sabor, consistencia).
La coagulación de las proteínas niofibrilares estructurales (solubles en sal) comienza a los 40°C y
finaliza aproximadamente a los 60°C. Por el contrario, las proteínas sarcoplasmáticas hidrosolubles,
a unos 50°C, están en gran parte disueltas e incluso a 70°C no están totalmente desnaturalizadas.
La desnaturalización térmica del pigmento muscular mioglobina comienza también a los 65°C. Con
la desnaturalización de la proteína cárnica se construye una trama estable que fija en su malla
partículas de grasa y agua. Por lo tanto, para la formación de una estructura proteica adecuada se
requiere una temperatura de calentamiento de por lo menos 65°C y mejor aún de 70°C.
La inactivación de las enzimas propias de la carne tiene lugar a temperaturas de 60 a 75°C. El calor
modifica al producto también en sus características sensoriales y nutritivas. El grado de estas
modificaciones depende de diversos factores, por ejemplo, calidad de la materia prima, tipo y
formato de la tripa o envase, efecto del tratamiento calorífico (temperatura, tiempo) y proceso de
calentamiento.
El tratamiento provoca la eliminación de los microorganismos; el efecto alcanzado en esta
eliminación determina en gran medida la conservación del producto. (25)
6
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
7
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
El curado de la carne se define con la adición de sal y otras sustancias agregadas a la carne con el
fin de preservarla. El curado se refiere a modificaciones de la carne que afectan su conservación,
sabor, color y blandura, debido a los ingredientes de curado que se añade. (4)
La carne después de haberse envejecido correctamente aún se reconoce como fresca, pero el
propósito del curado es alterar totalmente la naturaleza de la carne y originar productos como tocino
humeado y salado, jamón, salazón de res, y salchichas fuertemente sazonadas. (4)
Los ingredientes principales en el curado de la carne son:
IV.6 Embutidos:
IV.6.1 Definición:
Aquellos productos y derivados cárnicos preparados a partir de una mezcla de carne picada de res,
pavo o carne de cerdo y otros animales de consumo humano, grasas, sal, condimentos, especias y
aditivos son introducidos en tripas naturales o artificiales y sometida o no a uno o más de los
procesos tecnológicos de curado, cocción, deshidratación y ahumado. (6)
IV.6.2 Clasificación:
8
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Embutidos cocidos: Cuando la totalidad de la pasta o parte de ella se cuece antes de incorporarla
a la masa. Por ejemplo: morcillas, paté. La temperatura externa del agua o vapor debe estar entre 80
y 90°C, sacando el producto a una temperatura interior de 80 - 83°C. (6)
IV.6.3 Tipos de embutidos:
IV.6.3.1 Salchicha:
Las salchichas son embutidos cuya masa se hace con carnes rojas o blancas, y grasa, todo
debidamente triturado, molido y mezclado, que además se le pueden agregar algunos aditivos
alimentarios permitidos. La masa es embutida en membrana artificial, cocida y eventualmente
ahumada. Se presentan como salchichas con una masa homogénea picada y de color rosa pálido. (7)
IV.6.3.2 Mortadela:
Es el embutido elaborado en base a una mezcla de carne de res, de cerdo o de aves de corral, como
constituyente principal y de otros animales de consumo autorizado, grasa de cerdo, sustancias
aglutinantes, agua, especias y aditivos alimentarios; adicionada de hortalizas hierbas aromáticas y
vegetales crudos o cocidos, agregado o no de trozos de grasa dura de cerdo, sometida a cocción o a
procesos de curado y ahumado. (7)
IV.6.3.3 Jamón:
Es el embutido elaborado en base a una mezcla de carne de cerdo y carne de res o carne de otros
animales de consumo autorizado, grasa de cerdo, sustancias aglutinantes, agua o hielo, especies y
aditivos alimentarios, sometida a los procesos de curado y cocción; adicionalmente puede o no ser
ahumado. (8)
La carne usada en la elaboración de embutidos deberá provenir de animales sanos, sacrificados en
mataderos autorizados y sujetos a inspección ante y post mortem. Deberá ser carne no
excesivamente grasosa y estará libre de huesos, cartílagos, tendones, conductos sanguíneos
mayores, coágulos de sangre, pelos y cerdas o cualquier materia extraña. No deberá presentar
sabor u olor extraño, decoloraciones o deterioros y estará desde todo punto de vista apta para el
consumo humano. (8)
9
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
IV.7.1 Definición:
Cualquier sustancia que, normalmente, no se consume como alimento en sí, ni tampoco se use
como ingrediente básico en los alimentos, tenga o no valor nutritivo, y cuya adición intencionada al
alimento con fines tecnológicos inclusive organolépticos (olor, color, sabor) en la fabricación,
elaboración, tratamiento, envasado, empaquetado, transporte o almacenamiento provoque o pueda
esperarse razonablemente que provoque (directa o indirectamente), el que ella misma o sus
subproductos lleguen a ser un complemento del alimento o afecten a sus características. (9)
El uso de aditivos alimentarios está justificado únicamente si ofrecen alguna ventaja, no presentan
riesgos para la salud del consumidor y no inducen al error o al engaño, desempeñando requisitos
señalados a continuación:
Los aditivos alimentarios deberán ser de calidad alimentaria adecuada y satisfacer en todo momento
las especificaciones de identidad y pureza aplicables recomendadas por la Comisión del Codex
Alimentarius.
10
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
En torno a los aditivos, existen una serie de resguardos que apuntan a su uso seguro en los
alimentos. Entre éstos, la normativa establece que:
b. En los casos en que se incorporen en un alimento dos o más aditivos con una misma
función, a los cuales se les haya asignado concentraciones máximas, la suma de las
concentraciones empleadas, no podrá ser superior a la concentración máxima autorizada
para aquel aditivo al cual se le ha fijado la concentración más alta, respetando las máximas
individuales de cada uno de ellos.
c. Los aditivos sólo pueden agregarse dentro de los límites establecidos en el Reglamento
Sanitario de los Alimentos o de acuerdo a las Buenas Prácticas de Fabricación.
d. Todos los aditivos deben cumplir con las normas de identidad, de pureza y de evaluación de
su toxicidad de acuerdo a las indicaciones del Codex Alimentarius de FAO/OMS.
f. Para cada uno de los fines tecnológicos, sólo se permite usar los aditivos que expresamente
autoriza el Reglamento y en las concentraciones que se especifican.
g. En el caso de los edulcorantes, la rotulación debe indicar la ingesta por porción de 100
gramos o 100 ml de producto, señalando para cada uno de ellos los valores de la ingesta
diaria admisible o aceptable en mg/kg de peso corporal, según recomendaciones de Codex
Alimentarius, FAO/OMS. (10)
IV.8 Nitrito:
Los nitritos son sales o ésteres del ácido nitroso (HNO2). En los nitritos inorgánicos se encuentra el
anión NO2-. En la naturaleza los nitritos se forman por oxidación biológica de las aminas y del
amoníaco o por reducción del nitrato en condiciones anaeróbicas. En la industria se pueden obtener
al disolver N2O3 en disoluciones básicas. Los nitritos forman parte de muchas formulaciones de sales
para salar carnes, como nitrito potásico y nitrito sódico. Cobran importancia dada su capacidad de
mantener un color rojizo deseado en la materia prima ya que reaccionan con la hemoglobina. Sin
embargo la concentración debe ser baja ya que favorecen el desarrollo de cáncer. Además por su
interacción con la hemoglobina resultan tóxicos.
11
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Producto
Propiedad Nitrito de Sodio
Fórmula NaNO2
Peso Molecular(g/mol) 69,0
Densidad (g/cm3) 2.168
Solubilidad (g/100ml) 72,1 a (0°C)
T de fusión(°C) 271
Estado de Agregación Sólido
Apariencia Polvo blanco
Concentración máxima permitida (mg/kg) 125
A la adición de nitratos o nitritos, sales y otros ingredientes incluyendo la sacarosa y especies a las
carnes se les denomina con el término de ―curado‖.
Entre las funciones que desempeñan los nitritos en el curado de la carne son:
12
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
proporciona el color rojo púrpura a los músculos. Bajo la exposición al aire, la mioglobina se oxigena
para formar oxihemoglobina, la cual tiene un color rojo cereza. Durante una prolongada exposición al
oxígeno del aire o al óxido de nitrógeno, el hierro del grupo hemo se oxida a hierro trivalente y la
mioglobina se convierte en metamioglobina cuyo color es marrón carmelita. (12)
Estas reacciones de las distintas tonalidades que adopta la hemoproteína se explican en el siguiente
esquema. (12)
Los microorganismos de la carne transforman los nitratos en nitritos, junto con los nitritos añadidos,
se convierten en óxido nitroso (NO) por el pH que prevalece en la carne. A su vez, el NO reacciona
con la mioglobina (rojo purpura) y produce la nitrosilmioglobina (rojo brillante e inestable). Cuando la
carne se somete aun cocimiento a más de 60°C, este segundo se desnaturaliza y se convierte en el
pigmento nitrosilhemocromo más estable y responsable del color rosado típico de las salchichas, los
jamones y otros. Sin embargo, el nitrosilhemocromo puede a su vez transformarse mediante
reacciones de oxidación y generar coloraciones que van del verde al amarillo. Un exceso de sales de
curación causa lo que se conoce como quemadura por nitritos en cuyo caso el color es inadecuado,
mientras que una carencia de nitritos no genera los pigmentos deseados.
13
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
La formación de óxido nítrico a partir de nitrito y la reacción de aquél con el pigmento muscular o con
el de la sangre se ven afectada por factores como la temperatura, pH, oxígeno y sustancias
reductoras. La cantidad mínima de nitrito necesaria, para la formación de color en la carne y
productos cárnicos y por tanto en embutidos escaldados es de 30 a 50mg/kg. (13)
El sabor de una carne tratada con nitrato o con nitrito es totalmente diferente del sabor de una carne
solamente salada. (14,15) La utilización de nitrato en salazón lenta, por inmersión en salmuera o
salado con sal seca, se acompaña de fenómenos enzimáticos de proteólisis y lipólisis que conducen
a la formación de compuestos sápidos que no están en relación directa con la utilización del nitrato.
Simplemente la obligación de dejar transformarse el nitrato en nitrito conduce a estas reacciones
paralelas que no se producen cuando la salazón es rápida con nitrito. Por el contrario se ha
demostrado que el nitrito tiene una acción específica sobre la formación del aroma característico de
las salazones. Se forma de los compuestos sápidos todavía no identificados pero que son
ciertamente o bien derivados nitratos o derivados nitrosados. (14)
IV.8.4 Efecto antioxidante:
Los nitritos retardan la oxidación de los lípidos y por tanto la producción de aromas indeseables en
carnes curadas. El nitrito estabiliza los componentes lipídicos de la membrana e inhibe los pros
oxidantes naturales del musculo. (16)
Los nitratos se transforman en nitritos por procesos enzimáticos, por la actividad de los
microorganismos o por agentes como el ácido ascórbico, azucares reductores, etc. Este compuesto,
resultado de la reacción de reducción, es el que tiene mayor acción frente a las bacterias
anaerobias. Por el contrario, las bacterias aerobias pueden usar el nitrato como fuente de nitrógeno,
por lo que no se ven perjudicadas. (17)
La acción antimicrobiana del nitrito depende de las condiciones fisicoquímicas del medio como pH,
temperatura y potencial de óxido-reducción. No se conocen con exactitud los mecanismos de
inhibición de los nitritos, se cree que se debe a la formación intracelular del óxido nitroso (NO) junto
con el ácido nitroso que alteran el metabolismo afectando a nivel enzimático el crecimiento de la
célula microbiana. (17)
En carnes curadas se da una interacción de diversos factores como:
- Alteración de la membrana celular con limitación de transporte de sustratos necesarios para el
crecimiento microbiano.
- Restricción del empleo de hierro y otros metales esenciales.
14
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Probablemente, en el mecanismo de inhibición del nitrito intervienen sus reacciones con otros
compuestos formados durante el calentamiento, que dan lugar a sustancias de mayor poder
inhibidor que el propio nitrito
-Actúan contra el C. botulinum microorganismo anaerobio muy peligroso por las neurotoxinas que
sintetiza, de alto grado de mortalidad. La actividad de los nitritos aumenta cuando disminuye el pH,
por lo que la adición de ácidos débiles o la inoculación de microorganismos productores de ácido
láctico potencian la actividad de los nitritos. (13)
Por su naturaleza de ácido débil, los nitritos son más efectivos a pH de 5.5; en caso de que el pH
sea superior, las concentraciones empleadas en los productos cárnicos serán insuficientes; hay una
sinergia cuando se mezcla con NaCl y al igual que sucede con cualquier otro conservador, las
temperaturas bajas favorecen su reacción antimicrobiana. (13)
IV.8.6 TOXICIDAD
Según la Norma técnica establecida por Codex Alimentarius, el límite permitido para salchichas es
125 mg de nitrito de sodio por Kg de peso de producto. (Anexo 1)
Y en cuanto a la ingesta diaria aceptable, resulta difícil estimar un promedio de ingesta de nitritos
porque ésta depende de la dieta individual y así como también del contenido de nitratos también
existente en el agua potable y en las verduras, que varía según las regiones e incluso según las
estaciones.
Puesto que la toxicidad de los nitratos proviene de su conversión en nitritos y su posible formación
endógena en N-nitroso compuestos, deberá tenerse en cuenta también la IDA de nitritos, fijada es
de 0 - 0.06 mg/kg de peso corporal. El empleo de nitrito como aditivo en alimentos infantiles para
niños menores de tres meses no está permitido. (18)
IV.8.7 Efectos sobre la salud por el uso de nitritos.
Los N-nitroso compuestos pueden tener dos orígenes diferentes: Formación endógena, que es una
formación natural de N-nitroso compuestos en el estómago, y los N-nitroso compuestos exógenos,
presentes en los alimentos y en los fármacos, debidos a las técnicas de fabricación o de tratamiento:
La formación endógena de N-nitroso compuestos comienza cuando los nitratos son reducidos a
nitritos por los microorganismos de la cavidad bucal y estos nitritos se transforman después en óxido
nítrico en el estómago debido a las condiciones ahí existentes. Bajo circunstancias específicas,
como la gastritis crónica, los nitritos pueden oxidarse en el estómago en agentes nitrosantes (N2O3;
N2O4) y formar N-nitroso compuestos. Esta reacción se produce con precursores nitrosables, que
incluyen una gran variedad de componentes de la dieta tales como: aminas secundarias (pescados,
huevos, quesos, carnes), precursores naturales en los alimentos (como ciertos aminoácidos), los
alcaloides presentes en especias que se emplean para curar carnes (pimienta negra), y otros
15
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
reaccionar con ácido nitroso y producir nitrosaminas, lo que es bastante bajo en aminas secundarias
y terciarias, todo esto depende de la temperatura, pH o falta de catalíticos inhibidores de nitrosación.
Se conocen afortunadamente una serie de técnicas para disminuir el riesgo de formación de
nitrosaminas. En primer lugar, obviamente, reducir la concentración de nitritos y nitratos, siempre
que sea posible. En segundo lugar, se pueden utilizar otros aditivos que bloqueen el mecanismo
químico de formación de nitrosaminas.
Estos aditivos son el ácido ascórbico y los tocoferoles. En algunos países el empleo de ácido
ascórbico junto con los nitritos es obligatorio. (18)
La toxicidad del nitrato en humanos se debe principalmente a que una vez reabsorbido ejerce en el
organismo la misma acción que sobre la carne conservada, es decir, transforma la hemoglobina en
metahemoglobina, pudiendo producir cianosis. Se han producido repetidamente intoxicaciones
debido a una cantidad excesiva de nitrito sódico en las carnes en conserva, principalmente debido a
una mala homogeneización entre ingredientes y aditivos. Cantidades de 0.5-1 g de nitrito producen
en el hombre intoxicaciones ligeras, de 1-2 g intoxicación grave y 4 g intoxicación mortal. Por ello, la
sal para salazones no debe nunca contener más de 0.5-0.6% de nitrito sódico, y la cantidad de sal
empleada no debe sobrepasar los 15 mg por cada 100 g de carne tratada.
Existe una especial susceptibilidad a los nitratos/nitritos en la población infantil debida principalmente
a cuatro razones:
Acidez gástrica disminuida, lo que favorece la proliferación de microorganismos reductores
de nitratos a nitritos antes de su total absorción.
La ingesta de agua en niños, según su peso, es 10 veces superior a la de los adultos por
unidad de peso corporal.
Hemoglobina fetal (60-80% en recién nacidos), que se oxida más fácilmente a
metahemoglobina.
Desarrollo incompleto del sistema NADH-metahemoglobina reductasa en recién nacidos y
pequeños, que salvo casos raros de deficiencia enzimática hereditaria, parece desaparecer
al cabo de los 3-4 meses de vida. (19)
17
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
IV.8.7.4 Botulismo:
El botulismo es una enfermedad grave, causada por una neurotoxina producida por el bacilo
Clostridium botulinum. La toxina es extremadamente potente, incluso mortal en ínfimas cantidades.
Bloquea la liberación de acetilcolina en las terminaciones nerviosas, lo que paraliza los músculos y
puede llevar a la muerte por paro respiratorio.
Entonces, hay reacción de acoplamiento diazo entre la diazonio y el anillo benzo de 1-α- naftilamina:
El uso de nitrito y nitrato de sodio en la conservación de carnes evita el crecimiento de Clostridium
botulinum.
Lo que está claro es que prescindir de los nitritos en las carnes curadas es imposible, porque no se
ha hallado un sustituto valido para controlar el peligroso patógeno C. botulinum. (19)
IV.8.7.5.1 Sobreaguda:
Producto del consumo de una gran concentración de nitritos. Asintomática. Muerte súbita
IV.8.7.5.2 Aguda
Se da una acción directa de los nitritos sobre la mucosa gástrica pudiendo producir Gastroenteritis
hemorrágica. A nivel de los glóbulos rojos: Se da una Oxidación del ion Ferroso (Fe2+ ) a Férrico
(Fe3+ ). Ocurre una Transformación de Hemoglobina en Metahemoglobina. Además falla en el
transporte de oxígeno, produciendo hipoxia. A nivel de la pared vascular: Produce vasodilatación
contribuyendo a la hipoxia, desencadenando en una insuficiencia cardiaca periférica. (19)
IV.8.7.5.4 Crónica:
Consumo constante de baja concentración de nitritos. Abortos por hipoxia fetal. (19)
IV.8.7.5.5 Manifestaciones clínicas (19)
Disnea.
Respiración con el cuello extendido rápida y jadeante.
Taquicardia.
Pulso acelerado pero débil.
Cianosis.
Mucosas pálidas.
Anorexia.
Apatía o hiperexcitabilidad.
Temblores musculares.
Debilidad y marcha tambaleante.
18
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Suele aparecer sangre fluyendo por los orificios, de color achocolatado y que no coagula.
Hemorragias petequiales en músculo cardíaco y tráquea. Líquido pericárdico sanguinolento.
Congestión vascular generalizada. (19)
IV.8.7.5.7 DIAGNÓSTICO.
Determinar la cifra de metahemoglobina en sangre cuando haya cianosis. El examen debe hacerse
rápido debido a que la metahemoglobina desaparece en el tubo de ensayo.
Presuntivos:
Por anamnesis.
Por síntomas clínicos.
Por datos de necropsia.
Test de difenilamina (en pastura, sangre).
Color de la sangre. (20)
Definitivos:
Partes por millón de nitritos en alimento, por espectrofotometría. Respuesta positiva al azul de
metileno. (20)
IV.8.7.5.8 TRATAMIENTO
19
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
20
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
El mecanismo de la reacción tiene dos fases, en primer lugar la formación de una nitrosamina
seguido por la protonación del grupo hidroxilo y una deshidratación, que conduce al diazonio:
Luego, hay una reacción de acoplamiento diazo entre la diazonio y el anillo bencénico de
1-- naftilamina:
21
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Durante los acoplamientos diazo, de diazonios se acoplan solamente con sustratos activos, tales
como fenoles o aminas. El diazonio posee un carácter electrófilo, pero no es muy reactivo por la
carga positiva deslocalizada a lo largo del ciclo. El ataque se produce preferentemente en la posición
para, y si la posición está ocupada, ocurrirá en la posición orto.
El medio no debe ser muy ácido, ya que es la amina no protonada la que reacciona. Si el pH es
demasiado bajo, la concentración de amina libre disminuye y la reacción no ocurriría. Los colorantes
azoicos se utilizan como indicadores de color a medida que cambian de color dependiendo del pH.
IV.9.1.2 Ley de Beer
La ley de Beer establece que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de una
determinada especie absorbente siendo su ecuación:
En donde:
a = es la absortividad.
b = longitud de trayecto óptico.
c = concentración de la muestra.
22
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
23
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
̅
IV.9.2.1.2.1 Repetibilidad: Coincidencia entre los resultados de mediciones sucesivas realizadas en
las mismas condiciones de medición.
IV.9.2.1.2.2 Precisión intermedia: Medida de la precisión de los resultados de un método en
condiciones diferentes de analista, día, equipo y lote de reactivos. (22)
IV.9.2.1.3 Exactitud: Medición de la diferencia entre los resultados previstos del análisis y el valor
de referencia aceptado, debido a un error sistemático del método y del laboratorio. Normalmente se
expresa en porcentaje. La exactitud y la precisión determinan el error total del análisis. La exactitud
se determina teóricamente utilizando material de referencia certificado (MRC) si es posible, métodos
de referencia, estudios en colaboración o mediante comparación con otros métodos.
X Valor teórico
% Error x100
Valor teórico
24
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
IV.9.2.1.4 Límite de Detección: Se entiende por límite de detección a la mínima cantidad de analito
en la muestra, que se puede detectar aunque no necesariamente cuantificar bajo dichas condiciones
experimentales.
Lo que se pretende alcanzar con el límite de detección es que el método es realmente capaz de
detectar la concentración límite, por medio de una señal que se medirá con certeza, pudiendo
detectar su presencia sin incurrir en falsos positivos.
La concentración del analito cuando se procesa a través del método completo, produce una señal
con una probabilidad del 99% de ser diferente del blanco. Para siete réplicas de la muestra, la media
debe ser 3.14s veces superior al blanco. (23, 24) Siendo su ecuación:
LD = yb + 3 Sb
Dónde: yb= a intercepto de la pendiente
Sb=Sx/y varianza residual
Para determinar el límite de detección a partir de la pendiente (CCN) se hace uso de la ecuación de
regresión lineal
25
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Su ecuación: ∑
Análisis de la Varianza de un sólo factor: Esta es una prueba generalizada del contraste de
medias para muestras con datos independiente. Se comparan tres o más muestras independientes
cuya clasificación viene dada por la variable llamada Factor. La base de este procedimiento consiste
en estudiar si el Factor influye sobre la Variable Respuesta, y la forma de hacerlo es analizando
como varían los datos dentro de cada uno de los grupos en que clasifica el Factor a la
observaciones de la Variable Respuesta.
El análisis de anova se determina mediante el programa de Excel, es uno de los paquetes
estadístico que consiste en analizar un grupo de datos, y determinar la medida de dispersión, donde
se compara mediante una prueba de hipótesis si Fcalculado <Ftabla las varianzas son homogéneas
y no hay diferencia significativa. (22)
26
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
V.PARTE EXPERIMENTAL
27
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
V.1 MUESTRAS
Se evaluaron un total de nueve muestras de embutidos recolectadas de forma aleatoria, las cuales
fueron analizadas espectrofotométricamente.
Las muestras analizadas fueron recolectadas en supermercado de la localidad, la cual la
clasificamos por marcas, tipos de embutidos con diferentes tipos de lotes a como se aprecia en la
siguiente tabla:
Tipo de
Código Embutidos. N°. Lote.
Muestra D1-C Choricito. 62
Muestra D1-S Salchichón. 71
Muestra D1-M Mortadela. 83
Muestra C2-C Choricito. 26-feb-15 Mv2
Muestra C2-S Salchichón. 27
Muestra C2-M Mortadela. 12-02-2015 Mv2
Muestra S3-C Choricito. 059 w-g L2
Muestra S3-S Salchichón. 047 w-g L2
Muestra S3-M Mortadela. 062 w-g L2
28
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Papel filtro.
Agitador de vidrio
V.2.2 Equipos:
Licuadora Óster
Bomba de vacío
Baño maría con control de temperatura
Cocina eléctrica
Balanza analítica (±0.0001)
Celda de cuarzo 10mm
Espectrofotómetro UV-visible, shimadzu 1203
V.2.3 REACTIVOS.
Ácido súlfanilico.
N-naftilendiamida (NED)
Tetra borato de sodio decahidratado
Nitrito de sodio
Acetato de zinc
Ferrocianuro de potasio
Ácido acético glacial
Carbón activado.
Disolver 12.5g de tetra borato di sódico decahidratado en agua destilada, calentar hasta disolución
completa, enfriar a temperatura ambiente y aforar a 250 mL.
Acetato de Zinc:
Disolver 75g de acetato de zinc en agua destilada calentando. Enfriar y transferirlo en un balón de
250mL y adicionar 30mL de ácido acético glacial y diluir hasta la marca con agua destilada.
Ferrocianuro de potasio:
Disolver 37.5g de ferrocianuro de potasio en agua destilada, calentar para una total disolución una
vez disuelto enfriar y transferir la solución a un balón de 250mL y aforar con agua destilada.
29
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Reactivo de Griess:
Ácido súlfanilico: Disolver 0.5g de ácido súlfanilico en 120mL de agua y adicionar 30mL de ácido
acético glacial.
N-naftilendiamida (NED): Disolver 0.1g de N-naftilendiamida en 120mL de agua y adicionar
30mL de ácido acético glacial.
Solución Madre (1,000ppm NaNO2): Disolver 1 g (± 0.0001) NaNO2 en agua destilada y diluir a un
litro. En esta parte es importante mezclar bien por aproximadamente 10 minutos ya que dicha
solución dará paso a las siguientes y se utilizará como base para la curva de nitritos estándar.
Solución hija (20ppmNaNO2): Diluir 2mL de la Solución madre a 100 mL con agua destilada.
V.3 Curva de Calibración
Medir cada uno de los volúmenes utilizando una micro pipeta de 1mL. Una vez agregados los
volúmenes en las 10 fiolas agregar a cada una 2mL de reactivo de griess y aforar con agua
destilada, agitar bien la solución.
Dejar reposar por 25 minutos para el desarrollo de color y leer la absorbancia en el
espectrofotómetro UV-visible a una longitud de onda de 535.5nm.
30
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
V.3.1 Procedimiento
Curva de Calibración.
1g Nitrito de sodio
1L de solución (1000mg/L)
31
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Procedimientos.
V.3.2 Porcentaje de recuperación de nitrito de sodio.
Para conocer la concentración de nitrito de sodio en la muestra de embutido. Se sigue este mismo
procedimiento a excepción del paso (7) que será omitido. En el paso (10) se toma 10mL de la
solución en lugar de 1mL.
32
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
PROCEDIMIENTO:
Concentración de nitrito de sodio en embutidos.
En un balón de 50mL
agregar 2mL de reactivo
de griess y aforar
Dejar reposar 30
minutos hasta observar
tono rosa en la solución
33
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Pesar 5.000g de
muestra con
aproximación 0.001g
Aforar a 200mL,
extraer el líquido
sobrenadante y filtrar
la solución
1mL de solución
34
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
35
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
C vs ABS
0.8 y = 0.3861x + 0.0044
concentracion
R² = 0.999
0.6
0.4
C vs ABS
0.2
Lineal (C vs ABS)
0
0 0.5 1 1.5 2
absorbancia
En la figura N°9 tenemos como concentración mínima 0.2mg/kg de NaNO2 y como concentración
máxima 1.8mg/kg de NaNO2 en el cual se obtuvo un coeficiente de correlación de R 2= 0.999 con
este resultado podemos ver que en este rango (0.2-1.8) de concentraciones de NaNO2 Hay buena
linealidad en el gráfico.
36
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Datos Resultados
Sy/x 0.00729 Ecuación.
Ylc 0.07726
L.C 0.19 mg/kg
37
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
( )
38
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
En la tabla N°9 se observa que para cada serie de resultados, sus valores están entre los límites
inferiores y limites superiores, por lo cual se afirma que los resultados pertenecen a la misma serie
de resultados y por lo tanto no existen valores aberrantes.
TablaN°10: Resultados
Dónde:
k= es el número de serie de estudio.
n-1= son los grados de libertad.
39
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Las absorbancias de cada una de las series fueron empleadas para el cálculo estadístico de
Cochran resultando ser: Gcalc = 0.3798 que al compararlo con G(0.05;5;4) = 0.598 resulto ser menor
(0.3798<0.598), por lo que aceptamos la H0 y concluimos que las varianzas de las absorbancias
obtenidas en las cinco series de estudio son iguales.
VI.4.3 Igualdad de las Medias
Se realizó un estudio de igualdad de media, para esto aplicamos el método estadístico de ANOVA
de un factor utilizando la herramienta de procesador de datos de Excel. En este caso la hipótesis
nula planteada fue:
H0: Las medias de las absorbancias de concentraciones de NaNO2 son iguales.
Siendo el criterio de aceptación:
Si Fcalc F(0.05;k;n-1) , se acepta H0
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 2.24E-06 4 5.6E-07 0.05137615 0.9946474 2.866081402
Dentro de los grupos 0.000218 20 0.0000109
Total 0.00022024 24
40
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Para evaluar DERr para las cinco series de datos de las absorbancias de NaNO2 necesitamos
primero evaluar la media global que aparece reflejada en la tabla de resultados el cual es de 0.4775,
luego calculamos la desviación estándar de las repeticiones que se realizó con la siguiente ecuación:
Si =√ ∑
Dónde: k= serie de datos (5); N=es el total de numero de datos (25); ni=número de repeticiones por
cada serie (5); Si = es la varianza de los datos para cada serie. Al realizar el cálculo de desviación
estándar de repeticiones se obtuvo un resultado de 0.00330151
Con la media global y la desviación estándar de las repeticiones que evaluamos anteriormente
podemos calcular DERr con la siguiente ecuación:
DERr= ( ) 100
Dando como resultado 0.6913% siendo esta menor que el 3% por lo que se asume que la
variabilidad de los resultados es muy baja y existe una buena repetibilidad de lectura de las
absorbancias de concentraciones de NaNO2 realizadas para las cinco serie de datos analizados.
41
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
En la tabla N°12 se observan los resultados de porcentaje de recuperación los cuales se encuentran
dentro del rango de los límites establecidos.
Figura N°10: limite inferior (L.I) y limite superior (L.S) de porcentaje de recuperación.
Porcentage de Recobro
115
110
105
100
95
90
85
80
75
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
L.I 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80
% recobro 100.05 100.05 100.05 102.65 102.65 101.79 101.79 101.79 105.25 103.52
L.S 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110
42
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Como se observa en la figura N°10 de límite inferior y límite superior, los valores de porcentaje de
recuperación de NaNO2 calculados se encuentran dentro del rango establecido de aceptación el cual
es de 80-110% (anexo N°7) para la recuperación de NaNO2 en alimentos esto nos indica que el
método propuesto muestra la exactitud necesaria para considerarlo adecuado para la determinación
de NaNO2 en embutidos.
Promedio 101.96
Desviación 1.67
Estándar
CV 0.0164
Como podemos observar en la tabla N°8 el resultado obtenido del coeficiente de variación es de
1.64% lo que indica que hay buena precisión en el método utilizado ya que existe poca variación de
los porcentajes calculados
VII.1 Resultados de Concentraciones de Nitrito de Sodio expresados en mg/kg de embutidos.
43
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Según los resultados de la tabla N°14 de análisis de nitrito de sodio en embutidos, para las muestras
de mortadela Se obtuvo una concentración mínima de 36.2mg/kg y una concentración máxima de
80.5mg/kg, en el caso de las muestras de choricito se obtuvo una concentración mínima de
37.2mg/kg y una concentración máxima de 55.5mg/kg, para las muestras de salchichón una
concentración mínima de 55mg/kg y una concentración máxima de 99.5mg/kg. Con este resultado
obtenido que al compararlo con la norma técnica Codex alimentarius, (anexo N°3) que establece que la
dosis máxima calculada para nitrito de sodio sobre el contenido neto total del producto es de 125mg
NaNO2/kg de embutido. Por lo que siendo estas concentraciones menores se puede decir que
cumplen con la concentración máxima permitida que establece la norma técnica siendo estos
productos aptos para el consumo humano.
En la página N°66 (anexos N05) se encuentran los datos que se obtuvieron en el análisis de las
muestras que fueron necesario para encontrar las concentraciones de NaNO 2 al igual que las
absorbancias de cada una de las réplicas que se le hicieron a cada muestra de embutido según su
presentación y marca.
Donde:
Abs = absorbancia de la muestra.
C = concentración estándar de la curva.
FD = Factor de dilución.
Pm = Peso de la muestra.
Donde:
Y= Absorbancia de la muestra x.
B= Pendiente de la recta.
A= intercepto de la recta.
C= Concentración de la muestra.
44
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
CODIGO D-1M C-2M S-3M D-1C C-2C S-3C D-1S C-2S S-3S
Promedio de 0.081 0.068 0.150 0.097 0.070 0.083 0.126 0.102 0.184
Absorbancia
Ecuación de la 42.9 36.35 77.3 51.23 37.7 44.1 65.53 53.7 94.4
Recta. mg/kg
Ley de Beer. 43.8 36.93 77 54.35 38.19 45.1 70.27 57.1 94.5
mg/kg
Diferencia de 0.9 0.6 0.3 3.1 0.5 1.00 4.7 3.4 0.1
concentraciones
mg/kg
En la tabla N°15 se muestran dos series de resultados de concentración de nitrito de sodio. Estos
resultados fueron obtenido utilizando un promedio de absorbancia de todas las replica de cada
muestra de embutido.
Para encontrar las concentraciones de cada serie se utilizaron dos ecuaciones: ecuación ley de
beer y la ecuación de la recta. El objetivo de esta comparación es para comprobar la cercanía que
muestran las concentraciones calculadas con ambas fórmulas.
Podemos observar en la muestra de salchichón código D-1S la diferencia de concentración es de
4.7mg la absorbancia de la muestra es de 0,126 y la absorbancia de referencia que se usó en la
ecuación ley de Beer es de 0,108.
Por otra parte en la muestra de mortadela código C-2M la diferencia es de 0.6mg la absorbancia
de la muestra es de 0,068 y la absorbancia de referencia es de 0,074.
La muestra de mortadela presenta menor diferencia de concentración esto se debe a que la ley de
beer establece que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de una
determinada especie absorbente.
45
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Por lo tanto se puede decir que entre más cercana sea la absorbancia de la muestra con respecto a
la absorbancia de referencia menor será la diferencia entre las concentraciones calculadas con
ambas fórmulas.
46
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Total 18493.5224 53
Según la tabla N°16 observamos que el valor de F calculado es de 18.36 que es mayor al valor
crítico para F de 3.17, en el cual comprobamos la ANOVA con un nivel de confianza del 95% se
puede decir que debido a que son mezclas de carnes y que cada empresa tiene control de la
cantidad de nitrito de sodio como aditivo en la producción, por esas variables de fabricación los tipos
de embutidos dan resultados con una diferencia significativa entre ellos, sin indicar cuál de todos
estos lo presenta y sin hacer comparación con la Normativa Codex alimentarius, Se comprueba que
la hipótesis nula se rechaza en lo cual todas las muestras de embutidos evaluadas son iguales sin
importar marca y tipo de embutido, por lo tanto se acepta la hipótesis alternativa.
47
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Figura N°11: Comparación del promedio global de embutidos analizados con el valor de referencia,
CODEX ALIMENTARIUS.
Embutidos
125
valor de referencia 125mg/kg NaNO2
100
73.97
75
52.24
50 45.88
25
0
Mortadela mg/kg Choricito mg/kg Salchichon mg/kg
En la figura anterior observamos que para cada tipo de embutidos (Mortadela, Choricito, Salchichón)
en comparación con el valor de referencia según la norma técnica CODEX alimentarius (Normas
internacionales de los alimentos), anexo N°3, el cual es de 125mg/kg de NaNO2 estos se
encuentran por debajo del valor máximo permitido de mg/kg de NaNO 2
48
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
125
valor de referencia 125 mg/kg NaN02
100
77
75
50 43.86
36.93
25
0
MuestraD1-M mg/kg NaNO₂ MuestraC2-M mg/kg NaNO₂ MuestraS3-M mg/kg NaNO₂
En la figura N°12 se reflejan los tres tipos de marcas para la Mortadela en este caso la muestra S3-
M es la que presenta mayor concentración con un valor de 77mg/kg de NaNO 2 y la de menor
concentración es la muestraC2-M con 36.93mg/kg de NaNO2
49
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Figura N°13: Comparación de las concentraciones de Choricito de las diferentes muestras con el valor
de referencia CODEX ALIMENTARIUS.
Choricito
125
valor de referencia 125 mg/kg NaNO2
100
75
54.34
45.12
50
38.19
25
0
MuestraD1-C mg/kg NaNO₂ MuestraC2-C mg/kg NaN0₂ MuestraS3-C mg/kg NaNO₂
En la figura N°13 se reflejan los tres tipos de marcas para choricito en este caso la muestra D1-C es
la que presenta mayor concentración con un valor de 54.34mg/kg de NaNO 2 y la de menor
concentración es la muestra C2-C con 38.19mg/kg de NaNO2
50
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Salchichón
125
Valor de referencia 125mg/kg NaNO2
100 94.51
75 70.26
57.12
50
25
0
MuestraD1-S mg/kg NaNO₂ MuestraC2-S mg/kg NaNO₂ MuestraS3-S mg/kg NaNO₂
En la figura N°14 se reflejan los tres tipos de marcas para Salchichón en este caso la muestra S3-S
es la que presenta mayor concentración con un valor de 94.51mg/kg de NaNO 2 y la de menor
concentración es la muestra C2-S con 57.12mg/kg de NaNO2
51
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
IX. CONCLUSIONES
52
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Conclusiones
El objetivo de este estudio fue determinar la concentración de nitrito de sodio mediante el método
espectrofotométrico en salchicha, choricito y mortadela producidas por las diferentes industrias
alimenticias, alcanzando los objetivos propuestos se presenta los siguientes resultados:
Según lo que establece la norma técnica Codex Alimentarius para aditivos en productos
cárnicos y embutidos, el nivel máximo permitido es de 125mg/kg, comparado con los valores
promedios de las concentraciones de nitrito de sodio analizados para choricito (45.88mg/kg),
mortadela (52.24mg/kg), salchichón (73.97mg/kg) no sobrepasa el nivel máximo permitido
por dicha norma, lo cual se concluyen que estos productos de embutidos pueden ser de
consumo de la población.
53
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
X. RECOMENDACIONES
54
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
RECOMENDACIONES
4. Determinar la concentración de nitrito de sodio en los hot dogs de consumo directo que se
expenden en instituciones educativas estatales.
55
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
XI.BIBLIOGRAFÍA
56
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Referencias Bibliográficas
5. http://ingenieria-alimentaria.blogspot.mx/2009/12/carnicos-practica-01.html
9. Artículo 130, Reglamento Sanitario de los Alimentos, Decreto Supremo Nº 977, Ministerio de
Salud, 1996
11. ANTÓN, Almudena y LIZASO, Jesús. Nitritos, nitratos y nitrosaminas. Fundación Ibérica
para la Seguridad Alimentaria. Madrid, 2001.
57
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
13. BaduiDergal S. Química de los alimentos. Pearson Educación; 4ª ed. México 2006. p. 514-
515.
15. Wirth F. Tecnología de los Embutidos Escaldados. Editorial Acribia. España 1992. p.127-148
16. Agroindustrial, Universidad Popular del Cesar Ingeniería. 2006. Programa de Ingeniería
Agroindustrial. Elaboración de Productos Cárnicos. http://es.scribd.com/doc/31697216/Guia-
Laboratorio-Productos-Carnicos-Crudos.
18. Almudena, Anton and Lizaso, Jesús. 2000. Nitritos, Nitratos y Nitrosaminas. [Online] 2000.
19. http://mie.esab.upc.es/ms/formacio/Control%20%20Contaminacio%20Agricultura/biblio/nitrat
os%20y%20nitrosaminas.pdf.
20. Fajardo, Gonzalo. 1992. NCR: 146: 1991 Productos Cárnicos, Salchichas. [En línea] 16 de
Junio de 1992.
22. Skoog A., Holler F.J. y Nieman, T, Análisis Instrumental, Quinta y Sexta edición, editorial
Graw Hill, España año 2001.
23. Miller N. James, Miller C. Jane. Estadística y Quimiometría para Química Analítica 4ta
edición 2002.
58
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
25. Ortega Aguirre L. y Otros. 2001. Validación de Métodos Analíticos. Barcelona España.
Páginas 33-36, 46-47, 54-58, 68-70,75-77 y 85.
26. STIEBING, A. (1992). ―Tratamiento por calor- conservabilidad‖. En: ―Tecnología de los
embutidos‖. Wirth, F. (ed.), Ed. Acribia, Zaragoza, PP.171—190.
59
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
XII. ANEXOS
60
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Anexo: 1
61
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Anexo:2
62
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Anexo:3
Norma Codex Alimentarius
63
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
64
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
Anexo 4
65
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
ANEXO N0 5
N°./CODIGO D-1M C-2M S-3M D-1C C-2C S-3C D-1S C-2S S-3S
Promedio: 0.081 0.068 0.150 0.097 0.070 0.083 0.126 0.102 0.184
F.D 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Concentración 0.2 0.2 0.4 0.3 0.2 0.2 0.3 0.3 0.4
Estándar mg
NO2
Absorbancia 0.074 0.074 0.156 0.108 0.074 0.074 0.108 0.108 0.156
Estándar.
66
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
ANEXO N0 6
Regresion+lineal+con+Excel
67
―Cuantificación de Nitrito de sodio en embutidos por espectrofotometría UV-vis‖
ANEXO N° 7
Criterios para la validacion de metodos Fisicoquimicos.
68