Biotecnología moderna y su

potencial para el mejoramiento

genético de los cultivos
Mesa Redonda sobre
Biotecnología moderna:
Alimentación, Biodiversidad y Competitividad
CONAM – 30 Octubre, 2007

Marc Ghislain
Laboratorio de Biotecnología Aplicada
Centro Internacional de la Papa (CIP)
www.cipotato.org
www.potatoGENE.org
Centro Internacional de la Papa (CIP)
(OFRQWH[WR GHODDSDULFLyQGHOD
WUDQVIRUPDFLyQJHQpWLFD

Centro Internacional de la Papa (CIP)

De la domesticación al mejoramiento
genético de los cultivos
La agricultura empieza
hace mas de 10,000 años:
las nuevas variedades son
obtenidas de las
mutaciones naturales y
seleccionadas por los
mismos agricultores;

El mejoramiento convencional de los cultivos

tiene mas de un siglo desde Mendel. Las nuevas
variedades son obtenidas por selección de
algunos individuos de una progenia de un
cruzamiento dirigido;
Centro Internacional de la Papa (CIP)
Historia de la evolución de la precisión
de la agricultura
El mejoramiento de los cultivos por
técnicas de laboratorio tiene mas de
30 años: las nuevas variedades son
obtenidas por fusión entre células, por
rescate de embriones de cruzamientos
asistidos;

El mejoramiento de los cultivos

por ingeniería genética tiene mas
de 25 años: las nuevas variedades
son obtenidas de variedades
existentes a las cuales se agregan
un par de genes.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Un denominador común: el ADN

Centro Internacional de la Papa (CIP)

 La diversidad de los genes
Los organismos pueden compartir genes homólogos pero
no son idénticos.

Alineamiento entre dhdps de papa y de la bacteria Thermococcus

litoralis = identidad de 42.3%
Centro Internacional de la Papa (CIP)
El primer ADN recombinante
1- Corte con enzima de restricción EcoRI


5’ GTGCCGGTTGAATT CCGCGATCGTAAAC 3’ ADN de
3’ CACGGCCAAC TTAAGGCGCTAGCATTTG 5’ plásmido


5’ GTGCCGGTTGAATT CCGCGATCGTAAAC 3’ ADN del
Paul Berg 3’ CACGGCCAAC TTAAGGCGCTAGCATTTG 5’ virus SV40
1972
2- Re-unificación por enzima de ligación
6
5’ GTGCCGGTTGAATTCCGCGATCGTAAAC 3’ ADN
3’ CACGGCCAACTTAAGGCGCTAGCATTTG 5’ recombinante

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Transgenes, no tan foráneos
Caso del estudio de rehidratación con lisozima o
lactoferrina (producidos en arroz transgénicos) de niños
peruanos sufriendo de diarrea y cólera (Producto de
Ventria Bioscience probado por el IIN).
Gen nuevo de lisozima o lactoferrina

Secuencia sintética Terminador

Promotor del
imitando un gen de de un virus
gen Glutelin 1
arroz que produce la vegetal
de arroz
lisozima o
lactoferrina

Centro Internacional de la Papa (CIP)

La transgénesis: un proceso natural
aprovechado por el hombre

7L

El ADN es transferido del plásmido Ti de Agrobacterium

tumefaciens e integrado en el genoma de la planta para
sintetizar hormonas de crecimiento.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

 Producción de una papa transgénica
DNA genómico de plantas Aislamiento de explantes (hojas)
Formación de heridas

Co-cultivo de los A. tumefaciens

explantes (hojas) con A. + gen foráneo ( )
tumefaciens por 16-24
Gen foráneo en horas a 22°C,
el ADN genómico en oscuridad
de la planta

Formación de callos y regeneración de plántulas

2 - 6 semanas Centro Internacional de la Papa (CIP)

Caracterización molecular de las
plantas transgénicas
Presencia del transgen en el genoma de plantas transgénicas
C 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Transgen

Expresión del transgen dentro de los tejidos de la plantas transgénicas

Proteína foránea

Identificación precisa del sitio de inserción del transgen en el genoma

Centro Internacional de la Papa (CIP)

 3RWHQFLDOGHO$'1UHFRPELQDQWH
SDUDHOPHMRUDPLHQWRJHQpWLFRGH
SODQWDV

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Aplicaciones teóricas del ADN
recombinante
„ Disminuir o suprimir el funcionamiento de ciertos genes
(= mutagénesis)
„ Introducir genes existentes de especies no compatibles
sexualmente o lejanas (genes Bt = bio-pesticidas, genes
Rblb = mejoramiento convencional)
„ Modificar la expresión de los genes:
… A la germinación, pre-floración, etc.
… En el tubérculo, la hoja, el polen, etc.
… En condiciones de estrés: ataque de pestes, sequilla, frió, etc.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Logros de la modificación por
ingeniería genética en plantas
Permite modificar las características existentes de
los cultivos, como reducir las sustancias toxicas,
alérgicas, retardar la maduración de los frutos, …

pero también agregar nuevas características tales

como resistencia a plagas y enfermedades,
tolerancia a herbicidas, aumentar β−caroteno,
hierro, zinc, producir fármacos, etc …

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Papa-Bt “NewLeaf”
Resistencia al escarabajo de Colorado (1996); gen
quimérico basado la secuencia del gen cry3A de
Bacillus thuringiensis.

NewLeaf Plus de Monsanto estuvo en venta en los EEUU y Canadá de 1997

– 2001. Los beneficios fueron menor uso de pesticidas y mejora de la
calidad del tubérculo.

No prosperó debido a:
- Desconocimiento del manejo de cultivo (refugia);
- Nueva clase de insecticida (Imicloprid);
- Solo 4% de la producción total cuando el debate llegó a su
paroxismo y permitió que las grandes industrias de procesamiento
hicieran pública su decisión de no comprar papa transgénica.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Papa Bt - CIP - MSU
• La polilla ataca el tubérculo (mundial)
• Baja el valor comercial, uso de pesticidas;
• El MIP no ha logrado controlarla;
• No existe resistencia en el germoplasma de la papa.
Transferencia del gen Bt (cry1Ab5) confirió
resistencia en follaje y tubérculo.
Con otro gen Bt, una Spunta Bt esta en proceso de
liberación en África del Sur
…sin Bt …con Bt

30 larvas
neonatas por
tubérculo con 5
repeticiones

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Papa resistente al virus del
enrollamiento (PLRV)
PLRV es responsable de bajos rendimientos y
baja el valor comercial del tubérculo.

INTRON
PLRV-CP
P 35S PLRV-CP T 35S

El gen foráneo esta basado en secuencia

de la proteína de cubierta invertida

Varias plantas con resistencia en

infección primaria y secundaria a PLRV.
Con otro gen (replicasa), ha sido liberada
con la NewLeaf; también con CP PVY.

9,57(&
Centro Internacional de la Papa (CIP)
Papa resistente a tizón tardío
Song et al., 2003. PNAS 100(16):9128–
Enfermedad 9133

responsable de
bajos rendimientos,
uso de fungicidas
(costosos, dañinos).
Transgénico con 1 gen candidato (B es el Rblb ) inoculado por Pi.

El gen Rblb confiere resistencia a Phytophthora infestans,

proveniente de Solanum bulbocastanum (incompatible con
S. tuberosum). Ensayos de campos en US, India,
Bengladesh, Indonesia, EU.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Papa Amflora

• El almidón consta de amilopectina y amilosa

(polímeros de glucosa)
• Ciertas aplicaciones industriales requieren
solo amilopectina (papel, pegamientos,
textiles, construcciones, y cosméticos);
• El almidón es modificado por una vía
química (agua, energía)

„ Inhibición de la expresión del gen “Granule Bound Starch Synthase”

GBSS logro producción de una papa pura amilopectina por
Wageningen y últimamente por BASF.
„ No entrara al mercado de consumo por contratos con agricultores

Centro Internacional de la Papa (CIP)

$QiOLVLVGHODVHJXULGDGGHORV
DOLPHQWRVGHULYDGRVGHORV
FXOWLYRVWUDQVJpQLFRV

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Evaluación de riesgo por
comparación
• El ADN es universal y existe transferencia natural de
organismos a otros de tal manera que el ADN foráneo per se no
esta considerado mas bien su función y los cambios
bioquímicos
• Los alimentos tradicionales contienen a veces toxinas naturales
pero por su historia de uso son considerados como
generalmente seguros (principios “GRAS” y de familiaridad)

Por lo tanto, la evaluación de riesgo del cultivo transgénico está

basada en la comparación con una contraparte convencional.
Ese principio es conocido como de la equivalencia substancial.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Principios generales del
análisis de riesgos
Basado en toxicidad por un químico:
Riesgo = Daño x Frecuencia

Diarrea Alergenicidad Ocasional

Intoxicación Toxicidad Dosis diaria
Parálisis Cancerígeno Procesamiento
Muerte Deficiencia nutritiva

Principio aceptado a nivel mundial (FAO/WHO,

1995; 1997)

Centro Internacional de la Papa (CIP)

 Evaluación de riesgos de un
cultivo transgénico / alimento
Donante, Caracterización Evaluación de
Cultivo del producto(s)
transgén(es), seguridad del
parental del transgén(es)
transferencia cultivo / alimento

Identidad, fenotipo Estructura, Identidad, fenotipo

Descripción
y performancia identidad, y y performancia
del donor
agronómica caracterización agronómica

Distribución Descripción del Forma de acción / Análisis de

geográfica vector del ADN especificad composición

Historia de Transferencia Análisis

Toxicidad
uso seguro del transgén nutricional

Caracterización Análisis de
Análisis de
del ADN Alergenicidad seguridad
composición
introducido (animales)
Caracterización
del sitio de
inserción

König et al., 2004. Food & Chem Toxic 42:1047-1088 Centro Internacional de la Papa (CIP)
 Evaluación del donante,
transgén(es) y transformación

• Descripción del donante: organismo: taxonomía, toxicidad,

alergenicidad, patogenicidad; sustancias: nocivas, no-
nutritivas, bioactivas; usos: en relación al consumo humano.
• Descripción del vector de ADN: secuencias completas,
funciones de los elementos, organismos usados para su
producción.
• Método de transferencia: cepa de Agrobacterium
tumefaciens, pistola, y otros.

König et al., 2004. Food & Chem Toxic 42:1047-1088 Centro Internacional de la Papa (CIP)
 Evaluación del donante,
transgén(es) y transformación
• Inserto y sito de inserción: presencia de secuencia del
vector, interrupción de un gen existente, síntesis de un
nuevo gen por fusión.
EcoRI EcoRI

Secuencias próximas:
• Búsqueda en bancos de genes
• Análisis de estructura

König et al., 2004. Food & Chem Toxic 42:1047-1088 Centro Internacional de la Papa (CIP)
 Caracterización del producto(s),
toxicidad y alergenicidad
• Descripción del producto: proteína, ARN (anti-sentido),
ribosima; metabolitos analizados en relación substancias
nocivas, anti-nutritivas, bio-activas; forma parte o no de
nuestra dieta;
• Descripción del modo de acción: cuál es el nuevo rasgo
conferido, y su especificidad;
• Estudio de la estructura y función:
• Comparación por homología de secuencia (<35% dentro
de una ventana de 80 aa) con base de datos de químicos
conocidos como alergénicos;
• Búsqueda de epítopes de potencial alergénico (8 aa);
• Pruebas serológicas de pacientes con reacción
alergénica

König et al., 2004. Food & Chem Toxic 42:1047-1088 Centro Internacional de la Papa (CIP)
 Caracterización del producto(s),
toxicidad y alergenicidad
• Ensayos in vitro :
• simulaciones de la digestión (estabilidad de la proteína
foránea frente al liquido gástrico);
• Estudios in vivo:
• Con animales pequeños (ratones, pollos): uso de la
proteína foránea purificada, o de nuevos metabolitos;
• Con animales grandes (vacas, ovejas, chanchos): uso
del alimento mismo;
• Estandarización, metodología y variabilidad son aun
sujetos a investigaciones;
• Estudios post-mercadeo:
• Responsabilidad del proveedor del cultivo transgénico;
• Encuestas al consumidor.

König et al., 2004. Food & Chem Toxic 42:1047-1088 Centro Internacional de la Papa (CIP)
Inocuidad de los alimentos derivados
de los cultivos transgénicos

Todas la agencias internacionales y nacionales

consultadas sobre la inocuidad de los alimentos
derivados de los OVMs, coinciden en que estos
alimentos son tan seguros, si no más, como su
contraparte convencional. Esto se debe a que los
estudios de inocuidad previos a la comercialización son
basados en criterios científicos.
CODEX, FAO, WHO, FDA, Academia Nacional De Ciencias de los EEUU,
Asociación Medical Americana del os EEUU, EU comisión, Sociedad de
Toxicología de los EEUU, Sociedad Royal del Reino Unido, etc.

Centro Internacional de la Papa (CIP)

Evolución futura de la transgénesis
Respuestas a varias preocupaciones:
1. Uso de genes de resistencia a antibióticos
- No usar gen de selección
- Usar otros genes de selección
- Eliminar el gen después de la selección
2. Integración aleatoria del transgén:
- Inserción del transgén en sitios específicos del genoma
3. Expresión constitutiva de los transgenes:
- Promotores para tejidos y células específicas de la planta
- Eliminación después de cumplir su función
4. Uso de genes foráneos y quiméricos:
- Genes de origen vegetal
- Alelos de genes de interés en el germoplasma
Centro Internacional de la Papa (CIP)