Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Recopilado por:
Cristina Lucía Mora Arango
Elkin Galeano Jaramillo
Edison Osorio Durango
1
PROGRAMA DEL CURSO DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA I
2013
2
Unidad 6. IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS.
Reconocimiento mediante pruebas químicas de compuestos fenólicos, terpénicos
y nitrogenados en muestras vegetales conocidas (6 horas).
3
PRESENTACIÓN
4
CONTENIDO
Pág.
5
Práctica No 2
OBJETIVO
Reconocimiento de los ejemplares vegetales cultivados en el huerto de
plantas medicinales del Jardín Botánico y/o en la flora universitaria.
METODOLOGÍA
Para el desarrollo de esta práctica el estudiante en visita guiada a las instalaciones
del huerto de plantas medicinales del Jardín Botánico recibirá la información y
capacitación brindada por parte del profesor, relacionada con las características
botánicas y la actividad terapéutica de las plantas medicinales. Una vez recibida la
capacitación el estudiante procederá a la presentación del respectivo informe que
debe contener una tabla en la que se incluyan las plantas observadas con el
nombre científico, nombre común, uso terapéutico, droga aprobada y una breve
descripción botánica.
CONSULTA
Consultar sobre las 10 especies de plantas medicinales de mayor comercialización
en Colombia, sus condiciones de cultivo y el uso terapéutico aprobado por el
INVIMA.
BIBLIOGRAFÍA DE CONSULTA
6
Práctica No 3
OBJETIVOS
Capacitar al estudiante el manejo de las bases de datos documentales y la
información consignada en la Biblioteca Central.
METODOLOGÍA
Para el desarrollo de esta práctica el estudiante en visita guiada a las instalaciones de
la biblioteca central recibirá la información y capacitación sobre manejo de bases de
datos documentales por parte de los profesores encargados.
Una vez recibida la capacitación el estudiante debe hacer entrega de un informe con
el siguiente contenido:
7
Práctica No 4
OBJETIVOS
Identificar los tejidos internos de las plantas monocotiledóneas y
dicotiledóneas, realizando observación microscópica sobre cortes
histológicos previamente preparados de raíces, tallos y hojas.
MARCO TEÓRICO
La morfología vegetal es la parte de la botánica que estudia las formas y
estructuras de las diferentes partes del cuerpo de la planta teniendo en cuenta
aspectos histológicos y fisiológicos en el proceso de modificación y transformación
de las plantas.
Raíz
Es el órgano generalmente subterráneo en las plantas, en general las funciones
del sistema radical son: absorción y conducción de sustancias, sostén y fijación de
la planta, almacenamiento de sustancias, reproducción vegetativa en algunas
especies.
8
Raíz de plantas dicotiledóneas:
En el corte transversal de la raíz de una planta dicotiledónea a nivel de la zona
pilífera, se pueden identificar los siguientes tejidos:
2. Córtex: grupo de tejidos que ocupa el mayor volumen de la raíz, el cual está
comformado por: exodermis, parénquima cortical y endodermis.
9
3.2. Tejidos vasculares primarios: constituidos por células del xilema y del floema.
Figura 1. Fotografía del corte transversal a nivel de la zona pilífera de la raíz de una
planta dicotiledónea en la que se observa el tejido parenquimático y los diferentes tejidos
que conforman el cilindro central.
10
A continuación en la figura 2, se observa el corte transversal de una raíz
monocotiledónea a nivel de la zona pilífera, con el fin de que se identifiquen los
tejidos correspondientes.
Figura 2. Fotografía del corte transversal a nivel de la zona pilífera de la raíz de una
planta monocotiledónea. Se observan las diferencias en cuanto a la disposición del xilema
y floema al interior del cilindro central.
Tallo
El tallo es el órgano de la planta generalmente aéreo que desempeña las
siguientes funciones: produce y sostiene ramas y flores, conduce sustancias a
través del xilema y el floema.
1. Epidermis: primera capa de una sola célula de espesor cubierta por una
cutícula impermeable de cutina.
11
2. Córtex: está conformado por los tejidos comprendidos entre la epidermis y la
parte más externa del haz vascular como colénquima, parénquima cortical,
clorénquima, esclerénquima.
3. Estela: es la parte central del tallo, conformada por los tejidos vasculares, el
cambium vascular y la médula.
Figura 3. Fotografía del corte transversal del tallo de una planta dicotiledónea en la que
se identifica de manera representativa el tejido colénquima, los haces vasculares y la
médula.
12
En el corte transversal del tallo de una planta monocotiledónea, en general se
observan los mismos tejidos que en el tallo de una planta dicotiledónea, con la
diferencia de que en estos tallos el tejido esclerenquimático se presenta
internamente a la epidermis y los haces vasculares se encuentran dispersos en el
tejido parenquimático y están rodeados por una vaina de esclerénquima que le
proporciona mayor resistencia a la planta. A continuación se presenta la imagen
para identificar los principales tejidos.
Figura 4. Fotografía del corte transversal del tallo de una planta monocotiledónea en la
que se observa el tejido esclerénquima y la distribución de los haces vasculares.
Hoja
La hoja es el órgano vegetativo de la planta, generalmente en forma laminar que
tiene como función principal el proceso de la fotosíntesis, respiración, transpiración
y gutación.
13
En el corte transversal de una hoja se observan los siguientes tejidos:
14
Figura 5. Fotografía del corte transversal de la hoja. Se observa el tejido epidérmico, las
células del mesófilo y los tejidos vasculares de las nervaduras.
METODOLOGÍA
Para el desarrollo de la práctica se divide el estudio en:
CONSULTA
Consultar la clasificación de las raíces, tallos y hojas de acuerdo con las
características de su morfología externa.
BIBLIOGRAFÍA
URIBE Álvarez Frank. Botánica General. Editorial Universidad de Antioquia.
Segunda edición. 1991.
15
Práctica No 5
OBJETIVOS
Aprender a identificar microscópicamente sustancias características de
plantas, formadas por moléculas pertenecientes al metabolismo primario.
Identificar la presencia de almidón en diferentes fuentes vegetales
mediante reacciones químicas y pruebas microscópicas.
Identificar microscópicamente la presencia de gránulos de aleuronas en
diferentes fuentes vegetales.
Identificar microscópicamente la presencia de gránulos de aceites fijos en
diferentes fuentes vegetales.
MARCO TEÓRICO
El metabolismo primario es el grupo de procesos metabólicos esenciales “vitales”
para los organismos vivos, estos procesos están asociados a 4 grandes grupos de
reacciones anabólicas/catabólicas:
16
El almidón: Está formado por unidades de glucosa y se encuentra en los cereales
como maíz, arroz y trigo, y en tubérculos como papas, ñame y yuca.
Frecuentemente se encuentra formado en un 25% por amilosa y un 75% por
amilopectina. A continuación se presentan las estructuras químicas de dos
polisacáridos de importancia en los vegetales: celulosa y almidón.
CH2OH CH2OH H OH
H OH
O H O H
H H O
H O H OH
OH H H H
Celulosa OH H
H O
OH H
H H H O R
HO H O
H OH H OH CH2OH
CH2OH
HO O H
H OH H OH H OH
H OH
17
general lineales; solubles en solventes orgánicos apolares (como cloroformo,
hexano), y son casi insolubles en agua. Los mamíferos los acumulamos como
grasas, los peces como ceras y en las plantas en forma de aceites. Los
fosfolípidos y esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las
membranas biológicas.
OH
Ácido graso libre
Colesterol
HO O O
Triglecerido O
O
O
O
Fosfolípido O O
P +
O O N
O HO
18
3. Metabolismo de las proteínas:
Las proteínas son biomóleculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno,
oxígeno y nitrógeno. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de
proteínas: fósforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden
considerarse polímeros de unas de aminoácidos unidos mediante enlaces
peptídicos.
O
O NH O
2
N
H C OH
3 OH HN NH OH
NH
NH NH N 2
2 2
H
Alanina (Ala) Arginina (Arg) Histidina (His)
Aleuronas: las aleuronas, del griego aleuron que significa harina, son un grupo de
gránulos proteicos presentes principalmente en las semillas de las plantas,
19
localizado en la parte externa del endospermo y que tienen la función de ser
material de reserva para el crecimiento del embrión, se encuentran principalmente
en los cereales y algunas raíces.
METODOLOGÍA
Material vegetal:
Maíz: _____________________ (nombre científico)
Yuca: _____________________
Arroz: _____________________
Papa: _____________________
ANÁLISIS QUÍMICO:
Cortar o rallar 15 g de material vegetal sin cáscara y extraer con 10 ml de agua
(sin calentar). Filtrar y realizar las siguientes reacciones por separado en tubos de
ensayo:
ANÁLISIS MICROSCÓPICO:
Tomar 1 gota de la solución filtrada para los análisis químicos y observar al
microscopio cada una de las muestras de almidón preparada (maíz, yuca, papa y
arroz).
20
Almidón de maíz: Se observa como gránulos irregulares y poligonales con hilum
concéntrico de forma mixta: se puede observar como un punto en forma de
asterisco, una línea o una cruz. El tamaño promedio de los gránulos es de 12 μm
con una desviación estándar de ±6 μm.
RESULTADOS
Almidón
Análisis papa maíz arroz yuca Muestra
Color
Textura
Olor
Sabor
Hilum
21
remover el exceso de reactivo con una tira de papel filtro y agregar 1 gota de
H2SO4 60%. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio, las paredes de
celulosa se observan en colores desde el azul al violeta.
22
A continuación se presentan las fotografías de las placas microscópicas de los
montajes correspondientes para la observación de celulosa de gránulos de
aleurona presentes en semillas de lino molidas:
23
A continuación se presentan las fotografías de las placas microscópicas de los
montajes correspondientes para la observación de aceites fijos presentes en
semillas de lino molidas:
Figura 11. Fotografía de las gotas de aceite fijo presentes en las semillas de lino.
Consulta
1. Funciones biológicas en la célula vegetal de los carbohidratos, lípidos y
proteínas.
2. Aplicaciones en Farmacognosia de los carbohidratos, lípidos y proteínas.
3. Esquema de las reacciones realizadas en el laboratorio.
BIBLIOGRAFÍA
Evans, W.C. Trease & Evans Pharmacognosy. Ed. Saunders. 16o Edición. China.
2009.
24
Práctica No 6
OBJETIVO
Reconocer elementos de valor diagnóstico en el material vegetal: cristales
de oxalato de calcio, gránulos de polen, pelos epidérmicos, vasos
lignificados, estomas, de acuerdo con las monografías de plantas
medicinales textos de referencia y farmacopeas oficiales.
MARCO TEÓRICO
El planteamiento sistemático de la identificación de drogas en polvo puede
realizarse por varios caminos, sin embargo cuando se trata de drogas
organizadas, todos los métodos dependen del reconocimiento microscópico de los
tipos celulares característicos: fibras tabicadas, pelos epidérmicos, tricomas; así
como de los contenidos de las células: almidón, cristales de oxalato de calcio,
gránulos de aleurona. Estas estructuras pueden considerarse como elementos de
valor diagnóstico porque resultan de gran valor para la identificación del material
vegetal como materia prima.
Existen reactivos específicos que permiten destacar cada una de las estructuras,
para la observación de los gránulos de almidón se realiza el montaje en agua y en
solución de lugol, los cristales de oxalato de calcio se observan con mayor
facilidad en las placas de hidrato de cloral, mientras que el montaje con
fluoroglucina y ácido clorhídrico facilita la observación de los tejidos lignificados.
25
METODOLOGÍA
Bajo la orientación del profesor el estudiante procederá a realizar las siguientes
actividades:
Sabor: los sabores se pueden describir como: auténticos (amargo, dulce, ácido,
salado) o insípidos.
26
clarificante. Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y
agregar de 2 -8 gotas que impregnen todo el material vegetal y calentar
suavemente. El hidrato de clorar disuelve contenido celular y sustancias
extracelular (granos de almidón, granos de aleurona) y permite una mejor
visualización de tejidos celulares como: pared celular, fibras, vasos, cristales de
oxalato de calcio, tricomas, estomas y polen.
CONSULTA
El estudiante debe consultar las estructuras internas a nivel microscópico de las
siguientes drogas en polvo: canela, ruibarbo, jengibre, regaliz, sen, digital,
caléndula y sauco.
BIBLIOGRAFÍA
Gattuso M.A.,Gattuso S.J. “Manual de procedimientos para el análisis de drogas
en polvo”. Cooperación Iberoamericana Ciencia y Tecnología para el desarrollo.
Universidad Nacional del Rosario. Argentina. 1999.
27
Práctica No 7
OBJETIVO
Aplicar los ensayos físicos (organolépticos-macroscópicos), análisis
microscópico (identificación de elementos de valor diagnóstico) y pruebas
químicas de coloración en la identificación de adulteraciones y/o
falsificaciones en el material vegetal.
Identificar una muestra problema de material vegetal en polvo mediante sus
características organolépticas, macro y microscópicas y pruebas químicas.
MARCO TEÓRICO
El material vegetal es clasificado de acuerdo a sus características sensoriales,
macroscópicas y microscópicas. Un examen para determinar estas características
es en primer paso establecer la identidad y el grado de pureza del material, para
después llevarse a cabo posteriores análisis. Siempre que sea posible, patrones
del material o muestras de calidad farmacopéica debe de estar disponible como
referencia.
Una inspección visual provee una simple y rápida medida para identificar el
material, pureza y, posiblemente, calidad. Si una muestra es encontrada ser
significativamente diferente, en términos de color, consistencia, olor o textura, de
las especificaciones, se considera una no conformidad de los requerimientos. Sin
embargo, los juicios deben ser cautelosos con relación al olor y la textura, debido
a las diferencias que existen entre personas o por la misma persona a diferentes
tiempos. Siendo entonces esta una habilidad sensorial que se afina con la
experiencia.
28
tamaño, color, características superficiales y textura. Sin embargo, mientras esas
cualidades son juzgadas subjetivamente y sustituciones o adulteraciones pueden
ser muy parecidas al material genuino, a menudo es necesario respaldarse en
análisis microscópicos y/o fisicoquímicos.
METODOLOGÍA
1. Ensayos preliminares para la identificación de las características organolépticas
del material vegetal para identificar el color, el olor y el sabor.
29
Detección de lípidos y aceites esenciales: colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo
sobre un portaobjetos. Verter 2 ó 3 gotas de solución de Sudan III (0.5 g Sudan III
calentados a reflujo en etanol o isopropil alcohol) y dejar actuar durante 2 ó 3
minutos. Escurrir el líquido y lavar bien con alcohol 70 %. Colocar el cubreobjetos
y observar al microscopio a 10x y 40x. Los lípidos aparecen como gotas de color
rojo.
30
3. Pruebas químicas rápidas
Presencia de aceites fijos y/o aceites esenciales: para la prueba de aceites fijos se
debe comprimir una pequeña cantidad de muestra en un pequeño trozo de papel
kraft, si aparece una mancha oleosa que persiste luego de someterla a
calentamiento a una temperatura de 50°C, la muestra contiene aceite fijo. Ejemplo:
semillas de lino y maní.
31
prueba de antraquinonas (5 ml). Realizar las pruebas de identificación
correspondientes de acuerdo con el procedimiento descrito en la práctica No. 7.
BIBLIOGRAFÍA
WHO. Quality control methods for medicinal plant material. Geneva: WHO. 1998.
ISBN 92 4 154510 0.
32
Práctica No 8
OBJETIVO
Realizar pruebas químicas rápidas de coloración y precipitación para la
identificación de compuestos fenólicos, terpénicos y nitrogenados en
muestras vegetales conocidas.
MARCO TEÓRICO
Los compuestos denominados metabolitos secundarios son subproductos de rutas
metabólicas normales que ocurren en ciertas especies, siendo particulares dentro
de un grupo taxonómico, estado de vida o tejido presentando una distribución
restringida dentro del Reino Vegetal dando origen a la quimiotaxonomía. Su
ocurrencia depende de condiciones externas tales como ataques de patógenos,
depredadores, cambios térmicos o lumínicos, deficiencias nutricionales o
presencia de otros organismos intra o interespecíficos.
33
Reconocimiento de metabolitos: el reconocimiento de metabolitos secundarios
se realiza por medio de pruebas fitoquímicas preliminares, las cuales son una
prueba cualitativa de caracterización consistente en una reacción química que
produce alteración rápida en la estructura molecular de un compuesto, por
ejemplo, la modificación de un grupo funcional, la apertura de un sistema anular, la
formación de un aducto o un complejo, lo cual genera como resultado una
manifestación sensible como el cambio de coloración, la formación de un
precipitado o el desprendimiento de un gas, lo cual indica la presencia o ausencia
de un metabolito secundario en particular.
34
Figura 12. Estructura química de una catequina.
35
agua formando espuma abundante. Las saponinas por hidrólisis dan origen a las
llamadas sapogeninas.
36
6. Taninos: los taninos son polímeros de polifenoles, sustancias con alto peso
molecular, comprendido entre 500 a 3000 g/mol. Se consideran productos de
excreción de muchas plantas, involucrados como mecanismos de defensa de las
mismas, contra organismos parásitos. Se clasifican en:
37
Figura 17. Estructura química de los taninos no hidrolizables o proantocianidinas.
38
del ácido quínico. Las quinonas se pueden clasificar en benzoquinonas,
naftoquinonas y antraquinonas (las más numerosas).
39
METODOLOGÍA
Sobre el extracto de la planta seleccionada, el estudiante realizara pruebas
químicas de coloración y/o precipitación, para identificar la presencia del
metabolito respectivo.
1. Reconocimiento de alcaloides
Los alcaloides son bases nitrogenadas, las cuales pueden convertirse en sus
respectivas sales mediante la adición de un ácido diluido y formar precipitados al
reaccionar con los reactivos específicos para alcaloides. En esta práctica
utilizaremos los reactivos de: Mayer y Dragendorff.
40
aparición de coloraciones: verdes, azules, rojas o violeta es prueba positiva para
esteroides y/o triterpenoides en la muestra.
3. Reconocimiento de saponinas
Obtención del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco y
macerar en un mortero, adicionar suficiente cantidad de agua que cubra la
muestra, filtrar a través de gasa.
41
5. Reconocimiento de flavonoides, leucoantocianidinas y cardiotónicos:
Obtención del extracto: macerar en un mortero aproximadamente 10 g del material
vegetal finamente picado, adicionar suficiente cantidad de etanol, calentar al baño
maría durante 5 minutos, enfriar y filtrar.
6. Reconocimiento de quinonas
Obtención del extracto: pesar 0,5 g de material vegetal en polvo en un beaker de
100 ml, adicionar 20 ml de etanol al 95% y calentar en baño maría durante 5
minutos hasta ebullición, filtrar en caliente,
42
Extracción con tolueno: adicionar 5 ml de tolueno al extracto previamente
hidrolizado, agitar suavemente sin emulsionar, utilizando la cabina de extracción.
7. Reconocimiento de antocianinas
Obtención del extracto: en un erlenmeyer colocar 100 g de muestra fresca
finamente desmenuzada, añadir 200 ml de agua, calentar a ebullición durante 5
minutos y filtrar.
En otro tubo de ensayo adicionar 2 ml del filtrado y añadir 6 gotas de algún ácido
mineral diluido (HCl ó H2SO4 al 10%). Observar la coloración formada.
8. Reconocimiento de cumarinas
En un tubo de ensayo grande adicionar 1 g de material vegetal fresco y macerado
y agregar cantidad suficiente de etanol comercial hasta cubrir la muestra. Con un
trozo de papel filtro blanco cubrir la boca del tubo de ensayo y sujetarlo con pinzas
o una banda elástica. Agregarle unas gotas de NaOH diluido en el papel filtro y
calentar hasta ebullición durante 5 minutos, posteriormente enfriar y retirar el papel
filtro. Observar bajo luz ultravioleta a 365 nm la aparición de una coloración
fluorescente que puede ser: verde, amarilla o roja.
43
CONSULTA
Consultar las reacciones químicas que se presentan en cada una de las pruebas
de identificación de metabolitos secundarios.
BIBLIOGRAFÍA
DOMÍNGUEZ X.A. Métodos de investigación Fitoquímica. Ed.Limusa. México.
1973.
44
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
(1). EVANS W.C. Trease and Evans. Pharmacognosy. Ed. Saunder. 15ª Edition.
Edinburg. 2002.
(8). WAGNER H., BLADT S., ZGAINSKI M. Plant Drug Analysis. Springer Verlag.
1984.
(10). WHO. Quality control methods for medicinal plant material. Geneva: WHO.
1998. ISBN 92 4 154510 0.
45