BENEMÉRITA UNIVERSIDAD

AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LIC. QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA I

PRACTICA No.2

APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL

PARA LA

IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

ALUMNO:

RODRÍGUEZ MUÑOZ EMMANUEL

PROFESORA:

PATRICIA SUAREZ ALBORES

 CRITERIOS DE COWAN
Y STEEL

Sé tomara una pequeña

porción del cultivo con la
asa esterilizada y enfriada. MORFOLOGIA
GRAM -

AGRUPACION:
GRAM + FORMA:
Se preparará para Racimo
Coco
TINCION DE GRAM Cadena
Bacilo
Tétradas
¿Esporas? Pares

SCHAEFFER ZIEHL NEELSEN AEROBIO

FULTON Se observa su
CRECIMIENTO
ANAEROBIO

MIO Su MOVILIDAD

Producción de
CATALASA

Producción de
OXIDASA

Producción de
TSI ácido a partir de
glucosa OXIDACIÓN

FERMENTACIÓN
Su METABOLISMO
INERTE
 IDENTIFICACION:
1. Al hacer la tinción de Gram se obtuvieron las siguientes conclusiones:

Los microorganismos se Se puede observar

colorearon de color igualmente que su
violeta/azul lo que dice forma es en
que tuvieron afinidad por “cocos” y esta
el cristal violeta por lo agrupado en
que se le considerara “racimos”.
como GRAM +.

NOTA: No se procederá a tinción de schaeffer fulton y ziehl neelsen debido a que

estos son cocos y no bacilos.

2. El crecimiento no se vera afectado ni por el oxígeno ni por la ausencia

de este lo que nos dice que tenemos un microorganismo aerobio y
anaerobio facultativo.

El crecimiento no se vera
afectado por la ausencia de
oxigeno (Figura 2) y en
nuestro cultivo de agar soya
tripticasa (Figura 1) se
observaron colonias lisas,
levemente elevadas,
levemente convexas.
Fig. 1. Staphylococus Fig. 2. Crecimiento en
sp medio anaeróbico

3. Observe que en nuestra prueba MIO no se observo

movilidad por parte del microorganismo ya que este
creció en la misma línea en la que se hizo la siembra.

Se puede observar el
crecimiento en la
línea de siembra
4. Proseguí con aplicar la prueba de producción de catalasa, la cual
arrojo un resultado positivo.

Se observo un burbujeo al agregar

peróxido de hidrogeno a la muestra
ya que nuestro microorganismo esta
mediante la enzima catalasa
descomponiendo al peróxido de
hidrógeno en Agua + Oxigeno:

5. En cuanto a la Prueba de producción de oxigenasa obtuve un

resultado negativo.
Fig. 3. Prueba negativa de
presencia de c citocromo
oxidasa.
Se agrego una gota del reactivo
de Kovac’s en el papel y
posteriormente tome una parte
de nuestro microorganismo con
el asa de siembra, que frote
sobre el papel y este no tomo
ninguna coloración, lo cual
significa que no hay presencia
de la enzima “c citocromo
oxidasa” (Figura 3).

6. Realice la prueba TSI para determinar si a partir del metabolismo de la

glucosa esta produce acido y se obtuvo lo siguiente:

Se puede observar que el

microorganismo fermenta tanto
lactosa como glucosa por lo
que tomo la coloración amarilla
debido a la acidez del medio en
todo el tubo.

Fig. 4. TSI
 7. Al final aplique la prueba de su metabolismo y se observó el siguiente
resultado:

Se puede observar que el

A B
microorganismo es
“Fermentativo” debido a que
en ambos ambientes (Figura 5)
los desechos de este tipo de
metabolismo son acido y el azul
de Bromotimol toma ese tipo de
coloración en medio ácido.

Fig. 5. A) Medio de crecimiento

aerobio; B) Medio de crecimiento
anaerobio

8. Podemos concluir de acuerdo a los criterios de Cowan y Steel nuestra

bacteria es Staphylococus sp.

CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?
La identificación de una bacteria, su asignación a un taxón según su clasificación
dada. Esto mediante técnicas sencillas que no llevan más de 24 hrs. Y además
nos ofrecen dar un diagnostico especifico y un tratamiento de la misma índole.

2.- ¿Para qué sirve la tinción de Ziehl-Neelsen y cuál es su fundamento?

Es una técnica de coloración para identificar microorganismos alcohol-ácido
resistentes (AAR).
El fundamento de esta técnica de tinción se basa en las propiedades de la pared
celular de estos microorganismos. La pared está formada por un tipo de ácidos
grasos llamados ácidos micólicos; estos se caracterizan por presentar cadenas
muy largas. Cuando los ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos
pueden retener los colorantes con mayor facilidad. Algunos géneros de bacterias
son muy difíciles de teñir mediante tinción de Gram, debido al alto contenido de
ácidos micólicos de la pared celular. En la tinción de Ziehl-Neelsen se utiliza el
compuesto fenólico carbol fucsina, un colorante básico. Este tiene la capacidad de
interactuar con los ácidos grasos de la pared celular, la cual es de textura cerosa a
temperatura ambiente.
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y de catalasa y cómo se
realiza en el laboratorio?
OXIDASA:
Fundamento: Determina la presencia del citocromo C, El citocromo C oxida al
NNN'N',tetrametil,1-4,fenilendiamina (solución acuosa al 1% (p/v). La oxidación se
detecta como color azul.
Procedimiento:
1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una
pipeta Pasteur.
2. Suspender la bacteria.
3. Detectar la formación de burbujas.

CATALASA:
Fundamento: La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias
aerobias. Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El
desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es
positiva.
Procedimiento:
1. Poner un trozo de papel de filtro sobre una de las tapaderas de una placa de
Petri.
2. Añadir una gota del reactivo de oxidasa.
3. Depositar sobre el reactivo masa bacteriana (actuar de forma rápida y con un
asa de platino nueva o con un palillo de dientes) Resultado: La reacción positiva la
indica un color azul-violeta intenso antes de 10 segundos.

4.- ¿En qué medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se

interpreta?
Sulfuro Indol Movilidad (SIM), Movilidad, Indol, Ornitina (MIO)
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que
difunde más allá de la línea de inoculación.

BIBLIOGRAFÍA:
 Cowan, S. T., Steel, K. J., Barrow, G. I., & Feltham, R. K. A. (2003). Cowan
and Steel's manual for the identification of medical bacteria. Cambridge:
Cambridge University Press.

 Tinción de Ziehl-Neelsen: Fundamento, Reactivos y Técnica - Lifeder.

(2020). Revisado el 27 de agosto de 2020, en
https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
 Metodos Catalasa y Oxidasa. (2020). Revisado el 27 de agosto de 2020, en
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-
catalasa_oxidasa.htm#:~:text=La%20catalasa%20es%20una
%20enzima,que%20la%20prueba%20es%20positiva.&text=Colocar%20una
%20gota%20de%20agua,ayuda%20de%20una%20pipeta%20Pasteur.