TÉCNICAS DE LABORATORIO Y MICROTECNIA.

FIJACIÓN.
La fijación debe realizarse lo más rápido posible luego de tomada la muestra para
evitar los procesos de autolisis. Además, se debe escoger el método más adecuado al
objetivo de estudio a realizar. Se puede clasificar en los siguientes métodos:
 Por inmersión: Pequeños trozoz del tejido son sumergidos en el liquido fijador.
 Por perfusión; El líqiuido fiajdor se aplica por inyección vascular.
 Por vapores: Consiste en liquidos fijadores que emitan vapores, se deben
realizar bajo campana extraxtora de gases.

DESHIDRATACIÓN.
Luego de que la muestra ha sido fijada se debe eliminar el fijador y deshidratar, para
esto se utiliza una serie gradual de soluciones acuosas con una concentración de
menor a mayor del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol etílico. La
deshidratación gradual se realiza para evitar la deformación de la morfología del tejido
debido a la rápida salida de agua.

ACLARAMIENTO.
Posterior a la deshidratación el tejido se debe sumergir en un líquido que sea miscible
tanto en el medio de inclusión como en el medio de deshidratación. Comúnmente se
utiliza xilol. Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el tejido se vuelve
transparente.

INCLUSIÓN.
Para poder obtener cortes delgados que puedan ser observados al microscopio óptico,
los tejidos deben ser incluidos en una sustancia de consistencia firme la cual puede ser
hidrófila o hidrófoba. Un medio hidrófobo que se puede utilizar es la parafina o el
paraplast, el cual es una parafina altamente purificada a la cual se han agregado
cantidades variables de polímeros especiales, lo cual le dará distinta dureza.

CORTE.
El material producto obtenido en la inclusión se debe cortar en secciones lo
suficientemente delgadas que permitan el paso de la luz, para esto se utiliza un
micrótomo. Para esto el bloque se debe tallar para eliminar el exceso de parafina
formando una pirámide truncada.
Los cortes que se van obteniendo se deben ir estirando, esto se puede realizar en un
baño termorregulado a una temperatura de 40°C a 45°C. El estiramiento se basa en la
dilatación de la parafina producto del calor.

TINCIÓN.
Primero la parafina debe ser eliminada sumergiendo el portaobjetos con los cortes en
un solvente orgánico el cual puede ser xilol. Luego los cortes deben ser hidratados
pasando por una serie de graduaciones decreciente de alcohol etílico, hasta llegar a
una solución que sea 100% agua. Una vez rehidratado el tejido puede ser teñido. Los
colorantes más utilizados son hematoxili.

MONTAJE.
Luego de teñir el tejido debe ser deshidratado nuevamente, para esto hay que pasarlo
por una serie de alcoholes en grado ascendente. Posteriormente hay que pasar el
tejido por xilol, de modo de hacerlo miscible con el medio de montaje. Finalmente, se le
agrega el medio de montaje y se le coloca el cubreobjetos, teniendo precaución de no
dejar burbujas.