Trabajo Práctico Genética

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Parte I:
Elabore un cuadro comparando los tres procesos: REPLICACIÓN, TRANSCRIPCIÓN y TRADUCCIÓN,
incluyendo ítems de: “Plantilla o molde”, “Dirección de síntesis”, “Proteínas implicadas”, “Otras
estructuras involucradas”, “Producto”, “Sitio de la célula donde tiene lugar el proceso”

REPLICACIÓN TRANSCRIPCIÓN TRADUCCIÓN

Hebra simple de ADN

Plantilla o molde Hebra simple de ADN Hebra de mRNA
o hebra no codificante

Dirección de síntesis 5’ a 3’ 5’ a 3’ 5’ a 3’

Factores generales
(basales)
Factores específicos
Ribosoma (rRNA +
Proteínas implicadas Proteínas SSB (activadores y
Proteínas)
coactivadores)
Proteína de unión
TATA

ADN Topoisomerasa
ADN Helicasa RNA de transferencia
Otras estructuras ARN Polimerasa II
(tRNA)
involucradas ADN Primasa
Enzimas nucleares
ADN polimerasa Aminoácidos

ADN Ligasa
Nueva molécula Proteínas
Secuencia de RNA
Producto bicentenario idéntica
mensajero (mRNA) (polipéptido)
a la original

Sitio de la célula
donde tiene lugar el Núcleo celular Núcleo celular Citoplasma
proceso

Parte II:
Ud. está a cargo de un laboratorio de Biología Molecular donde quieren implementar la
detección de SARS- Cov2 (COVID 19) por RT PCR real time. Detalle todos los reactivos e
instrumental que necesitaría para llevar a cabo la determinación.
 El SARS- Cov2 (COVID 19) tiene como información genética el ARN. Siendo así, es necesario
una RT-PCR que realiza una retrotranscripción (transcriptasa reversa) de la hebra de ARN en ADN
complementario (cADN).
Para llevar a cabo la determinación, es necesario algunos componentes y reactivos:

Componentes de la PCR
 ADN molde
 Oligonucleótidos (cebadores) – Secuencias cortas de ADN (cebadores)
 Tampón (buffer) – Crea las condiciones para la actividad del ADN polimerasa
 ADN Polimerasa termoestable – Añaden desoxirribonucleótidos
 Desoxinucleótidos (dNTPs) – Sustrato necesario para na formación de las cadenas de ADN.
 Cloruro de Magnesio (MgCl2) – Afecta a la incorporación de dNTPs, la actividad polimerasa y
temperatura de hibridación del cebador- ADN templado.

Protocolo General de Mezcla de Reacción

Componente Volumen Concentración Final

Tampón (buffer) 5 µl 1X
dNTPs 2 mM 5 µl 0.2 mM
Cebador sentido (10 pmol/µl) 0.5 – 5.0 µl 0.1-1.0 µM
Cebador antisentido (10 0.5 – 5.0 µl 0.1-1.0 µM
pmol/µl)
MgCl2 25 mM 2-8 µl 1-4 mM
ADN Templado 5 µl 10 pg – 1 µl
Taq ADN polimerasa 5 U/µl 0.2-0.5 µl 1.0 – 2.5 U
H2O (libre de nucleasas) Hasta 50 µl
Volumen total 50 µl

Equipos

Es necesario un termociclador y un detector de señales fluorescentes (fluorómetro) para

monitorear la reacción de amplificación, un hardware y un software para la captura y el análisis de
las informaciones.
 Etapas del Proceso

muestra del tracto respiratorio

Extracción y purificación del ARN

Convertir la RNA en ADN

Retrotranscripción (transcriptasa reversa)

Preparación de la muestra

Amplificación

Desnaturalización inicial
• Ciclos de la PCR: desnaturalización,
alineamiento y extensión
• Extensión final

Detección Fluorescente

¿Por qué se utiliza la RT PCR real time para diagnóstico de COVID 19 y no los test
serológicos (Anticuerpos IgG e IgM)?

Se utiliza la RT PCR real time porque la técnica amplificar y detecta simultáneamente la

presencia del virus, es decir, el producto de amplificación es monitoreado conforme transcurre la
reacción, según los estudios, con una fiabilidad superior a 90%. Además, es el test recomendado
inicialmente por la OMS.
La técnica RT PCR real time es más sencilla y tiene una sensibilidad mucho mayor. Consiste
en extraer una muestra de saliva y mucosa del paciente para determinar la presencia del virus y
luego que haya la infección ya es posible encontrar el genoma viral (el ARN del virus).
En los test serológicos (Anticuerpos IgG e IgM) se busca en la sangre y en pocos días no es
posible de generar los anticuerpos, causando la demora en obtener la respuesta. Entonces, hay que
esperar un par de días hasta que el paciente desarrolla la infección y genere los anticuerpos que se
van a detectar. Otra desventaja en los test IgG e IgM es que hay personas que pueden producir
anticuerpos que casualmente se unan al coronavirus y esto dé falsos positivos.