Tema 19: Fijación del Nitrógeno e Incorporación en Biomoléculas

1. Nitrógeno reducido y oxidado

Después del C, H e O, el N es el elemento más abundante en las biomoléculas. La mayor parte

del N orgánico esta en estado reducido y se encuentra en aminoácidos y nucleótidos.
Las principales formas de N inorgánico están oxidadas en forma de N2, nitritos y nitratos. La
adquisición de N para formar biomoléculas implica la reducción de las formas oxidadas desde
nitrógeno a NH3.
La fijación del N para formar biomoléculas ocurre en microrganismos y plantas. Los animales
ganan N por la dieta.

2. Ciclo del N en la Naturaleza

Fijación (reducción) del N2: N2  NH4+

Nitrificación (oxidación del amoníaco a nitrito y finalmente a nitrato) NH4+ + NO2-  NO3-
Desnitrificación: NO3 -  N2

3. Las bacterias Anamox

Llevan a cabo la oxidación anaerobia del NH4+.

3.1. Reacciones Anamox

NH3 e hidroxilamina (NH2OH) se convierten en agua e hidracina (N2H4) que es oxidada

generando N2, 4H+ (gradiente Protónico) y 4 e- que se emplean para generar ATP e
hidroxilamina.
El enzima reductor de nitritos genera hidroxilamina que se utiliza para comenzar de nuevo el
ciclo de conversión del NH3 en N2.
4. Generación de NH4+

Fijación de N2: N2  NH4+

Asimilación del Nitrato
NO3-  NO2-  NH4+

Las plantas y las bacterias pueden asimilar fácilmente nitritos y nitratos reduciéndolos a NH4+.
Las plantas incorporan este NH4+ en sus moléculas orgánicas forma de aminoácidos.

4.1. Asimilación del Nitrato

Plantas y bacterias pueden asimilar fácilmente nitritos y nitratos reduciéndolos a NH4+.

Las fuentes de electrones son el NADH y la Ferredoxina.
Figure 22-2
Las plantas y las bacterias pueden asimilar fácilmente nitritos y nitratos reduciéndolos a NH4+.
Las plantas incorporan este NH4+ en sus moléculas orgánicas forma de aminoácidos.

4.2. Fijación del N2: Estabilidad del N

N2= N triple enlace N

Triple enlace muy estable. (Energía de enlace = 930 kJ/mol ). Hace que el N atmosférico se
casi inerte en condiciones normales de P y T.

N2+ 3H2  2NH3

Esta es una reacción …

4.3. Fijación del N2: Estabilidad del N

Proceso industrial de fabricación de amoníaco

A pesar de esta gran barrera cinética, el proceso biológico de fijación del N2 ocurre a
Temperatura moderada y Presión atmosférica.

4.4. Fijación de N2: el proceso biológico

En la naturaleza, la fijación de N la realizan los organismos diazótrofos que incluyen a las

arqueas metanogénicas y a distintos tipos de bacterias fijadoras de N incluidas las simbiontes
en raíces de leguminosas.
La enzima responsable de la fijación de Nitrógeno en los organismos diazótrofos es el
COMPLEJO DE LA NITROGENASA.

4.5. Fijación de N2: el Complejo de la Nitrogenasa

1) Dinitrogenasas reductasa: es un homodímero con un único centro redox tipo 4 Fe-4S

que puede ser oxidado y reducido por 1 electrón. Tiene dos lugares de unión al
ATP/ADP.
2) Dinitrogenasa: es un tetrámero que tiene dos cofactores con Fe: el agregado P, con 2
centros 4Fe-4S, y el cofactor FeMo

La reacción global catalizada por el complejo de la Nitrogenasa

N2+ 10 H+ + 8 e- + 16 ATP  2NH4+ + 16 ADP + 16 Pi + H2
La hidrólisis del ATP es necesaria para reducir la energía de activación haciendo posible la
fijación de N2 en condiciones normales de Presión y Temperatura.
Se necesitan 8 electrones para reducir una molécula de Nitrógeno. La fuente de estos
electrones es variable (Ferrodoxina, Flavodoxina).
La hidrolisis de 2 ATP provoca cambios conformacionales en la dinitrogenasa reductasa que
hacen posible la transferencia de e- a la dinitrogenasa (2ATP por 8 e- = 16 ATP).

5. Complejo de la Nitrogenasa

Aunque se necesitarían solo 6 e- para fijar el N (N2 2NH3), la reacción biológica del complejo
de la Nitrogenasa genera siempre además de 2NH3, 1 mol de H2 y por ello se necesitan 8 e-
para fijar el N2.

El complejo de la Nitrogenasa es muy sensible a la presencia de O2: la reductasa se inactiva

en contacto con el aire.
La relación de simbiosis entre bacterias fijadoras de N y plantas leguminosas, resuelve las
necesidades energéticas de las bacterias y la labilidad del complejo de la nitrogenasa al O2.

6. Nódulos fijadores de N2

Las raíces de las leguminosas tienen nódulos que contienen las bacterias fijadoras de N2.
Bacterias simbiontes fijadoras de N2.
Las plantas leguminosas proveen de glúcidos y metabolitos del ciclo de Krebs a las bacterias
fijadoras de N lo que les permite fijar centenares de veces mas N que sus parientes que viven
libres en el suelo.
Fijación de cultivos: enriquecimiento del suelo con NH3.

7. Leghemoglobina

Las bacterias de los nódulos están inmersas en una disolución de leghemoglobina, una
hemoproteína producida por la planta que protege a la nitrogenasa del O2 y lo aporta a la
cadena de transporte electrónico.
8. Incorporación del nitrógeno reducido (NH3) en las biomoléculas

9. Utilización of Ammnonia: Biogenesis of Organic Nitrogen

Glutamato y Glutamina son el principal punto de entrada del NH3 primero en los aminoácidos y
después en las otras biomoléculas.
Reacciones en la asimilación del amonio and major fates of the fixed nitrogen:

1. Glutamato deshidrogenasa
2. Glutamina sintetasa
3. Asparagina sintetasa
4. Carbamoil fosfato sintetasa
5. Glutamato sintasa

In animals, glutamine, rather than NH3, is the chief nitrogen source of pyrimidines.

9. Utilization of Ammonia: Biogenesis of Organic Nitrogen

Reacción de la Glutamato Deshidrogenasa

NH4+ + alfa-cetoglutarato + NADPH + H+  Glu + NADP + H2O.

Reacción de la Glutamato Sintetasa

NH4+ Glu + ATP  Gln + ADP + Pi

La glutamato sintasa provee de Glutamato para la reacción de la Glutamina sintetasa

La Glutamato sintasa solamente en bacterias y plantas.

Reacción de la Asparagina Sintetasa

Gln + Asp + ATP  Asn + Glu + AMP + PPi

Reacciones de las CarbamoilP sintetasa I y II

NH4+ + HCO3- + 2 ATP carbamoil-P + 2ADP + Pi (CPS-I)
Gln + HCO3- + H2O + 2 ATP  Carbamoil-P + Glu + 2 ADP + Pi (CPS-II)

10. La glutamina sintetasa

La glutamina ocupa u lugar central en el metabolismo al estar implicada en la biosíntesis de

varios aminoácidos y en el transporte de amonio.

10.1. Regulación de la Glutamina sintetasa

La GS está regulada a 4 niveles:

1. Alostérico
2. CMC
3. Transcripción
4. Traducción
Regulación alostérica: retroinhibición acumulativa.
Cada inhibidor alostérico que son los productos derivados del metabolismo de la Gln, inactiva
parcialmente la GS: sólo todos los inhibidores actuando en conjunto inactivan completamente al
enzima.
22-8

10.2. Regulación de la Gln sintetasa por CMC: adenililacion & desadenililacion

PA & PO modulan la actividad de la adenililtransferasa (AT)

PA/PO: es la proteína reguladora de AT y su actividad está regulada por uridilación.
P1/PD: es la proteína reguladora de AT y su actividad está regulada por uridilación.
Adenilación se refiera a la incorporación de AMP.
¿Por qué ATP y alfa-cetoglutarato son activadores de la uridiltransferasa? Porque en la
reacción de la Gln Sintetasa requiere ATP. Y en la reacción de la Glutamato DH, si hay alfa-
cetoglutarato se pueden sintetizar grandes cantidades de Glu, que es el sustrato de la reacción
de la Gln Sintetasa.

Figure 24-22b

10.3. Regulación covalente de la AT por uridilación

Figure 22-24 Biochemistry

Uridiltransferasa
(UT)

10.4. Reacción de la Gln Sintetasa

Glu + NH3 + ATP  Gln + ADP + Pi + NADPH + H+

NH4+ alfa-cetoglutarato+ NADPH+ H+ (reacción de la GD) Glu + NADP+ + H2O