Analisis de alimento irradiado Periodo Académico: 2020 I

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Semestre: IX
Farmacia y Bioquímica Unidad: I
 OBJETIVO DE LA PRACTICA
El estudiante prepara adecuadamente las muestras de alimentos
irradiado (te anís manzanilla filtrante), realizar diluciones tal como se
efectuaron en la práctica N°3. En nuestra práctica realizamos la
numeración de aerobios mesófilos viables

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 MATERIAL Y EQUPOS

• Matraces conteniendo 90 ml de agua peptonada estéril

• Tubos conteniendo 9 ml de agua peptonada estéril Pipetas estériles de 5 ml.

Placas petri estériles. Mechero a gas. Gradilla
Cuenta colonias Mechero Baño Maria.
Plate Count agar estéril Incubadora a 37°C
Agar nutritivo Algodón hidrófilo. Autoclave
Alcohol 70 Cámara de flujo laminar

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 DILUCIONES SERIADAS

• Pesar asépticamente (en recipiente estéril) 10 g. de la muestra. Adicionar a un

matraz que contenga 90 ml. e diluyente (agua peptonada) (seria nuestra solución
madre) Mezclar bien con el total de la muestra. Obtenemos nuestra dilución 10-1.
(1/10). De esta dilución tomar 1 ml. e incorporarlo a un tubo que contiene 9 ml.
de diluyente, obtenemos nuestra dilución 10-2 (1/100). A continuación de este
tubo 10-2 tomamos 1 ml. y adicionamos a otro tubo con 9 ml de diluyente(agua
peptonada) y obtenemos nuestra dilución 10-3 (1/1000) y así sucesivamente.

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 CUIDADOS PARA EL PESADO Y TOMA DE MUESTRA
• Se debe evitar contaminaciones en el momento de la apertura de los
envases que contienen las muestras, para ello es conveniente
eliminar la contaminación de la superficie de los alrededores
Iniciar el proceso de extracción de muestra representativa siempre
alrededor de un mechero.
• MUESTREO: En este caso vaciar por lo menos30 bolsitas del filtrante
en una bolsa de polietileno de primer uso(aséptico) u otro envase
esterilizado (matraz de boca ancha)Mezclar sin contaminar teniendo
siempre los cuidados con las superficies. Pesar 10 gramos de muestra
y verter en un matraz pesado tarado conteniendo 90 ml de agua
peptonada estéril.

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 PESADO HOMOGENIZADO DE MUESTRA

Es una operación importante y cuidadosa, porque hay que evitar la destrucción de los
microorganismos y es necesario obtener una mezcla homogénea.

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 INCORPORACION – HOMOGENIZADO – INCUBACION
Preparar diluciones hasta 10-4 .Por lo tanto debemos tener 8 placas estériles .

Rotulamos las placas en 2 series de 4 c/u. Señalar claramente por el cover dilución
,nombre dela muestra y el medio de cultivo .En este caso PCA por que vamos a realizar la
búsqueda de aerobios mesófilos viables. Incorporar en las placas por duplicado 1 ml de
cada dilución.

Verter en las placas sembradas placa que contienen el inóculo unos 15 ml del agar fundido
respectivo. Mezclar el conjunto con suave agitación (6 hacia la derecha y 6 hacia la
izquierda) y dejar solidificar. Las placas así sembradas y con el agar solidificado ya están
listas para su incubación en estufa. Para evitar condensaciones de agua sobre la superficie
del agar que puedan dispersar las colonias superficiales y falsear el recuento, se suele
ubicar las placas en la estufa, de forma invertida .Incubar durante 24-48 horas a 37°C

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 INCUBACION
• Para las lecturas seleccionar las placas que presenten un
rango de conteo entre 30 – 300 colonias. De realizarse
duplicados tomar el promedio. En caso de obtener recuentos
dentro del rango en diluciones consecutivas, registrar el
número de colonias de cada dilución, multiplicar por el inverso
de la dilución y luego determinar el promedio del recuento
bacteriano entre ambas diluciones. El resultado se multiplica
por el factor de dilución (la inversa de la dilución). El resultado
se da en UFC/g. En caso de no obtener desarrollo en las
placas se debe informar de acuerdo al límite de detección
de la técnica.(<10) Efectuar lecturas de los resultados
obtenidos de ambas muestras. Informar y concluir
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 ¡Gracias!

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