Microbiología General

“Año de la Lucha Contra la Corrupción y la Impunidad”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA
PERUANA

Facultad de Ciencias Biológicas.

Título : Manejo del asar de siembra y

técnicas de
cultivo de bacterias en medios sólidos
y
líquidos.
Curso : Microbiología General..
Practica : N° 03 Grupo: N° 01/ 8:00 a 10:00
am
Mesa: N° 01

Alumnos : Oscar Cayo Vargas Ramos.

Rodrigo roonmel rodriguez.
Alison Chis Yahuarcani Sanchez.
Docente : Blga. Julia Bardales Garcia, Msc.

Fecha de ejecución: 06 / 06 / 2019.

Fecha de entrega : 13 / 06 / 2019.

Nivel/Ciclo : II/III

Iquitos – Perú
Microbiología General

2019
Microbiología General

I. Título: Manejo del asar de siembra y técnicas de cultivo de bacterias en

medios sólidos y líquidos.

II. Objetivos:

 Aprende a manejar correctamente el asa bacteriológica.

 Aprende a inocular correctamente los diferentes medios de cultivo.
 Reconoce por su nombre los diferentes materiales de vidrio que se
utiliza en el proceso de siembra en el laboratorio de microbiología.

III. Fundamento teórico.

Asa bacteriológica.
El asa bacteriológica es el instrumento más utilizado en el laboratorio de
microbiología, por eso reviste gran importancia saber cómo manejarla, pues
de ello depende que al tomar un inoculo (muestra pequeña de un sólido o
liquido), este permanezca puro y no se contamine con los microorganismos
del medio ambiente donde estamos trabajando.
Este instrumento se toma como si fuera un lápiz, por la parte denominada
“mango” de ahí sale un alambre de nicromel, cuyo extremo libre debe
terminar en un círculo; este metal es sumamente resistente a la flama del
mechero y fuera del calor se enfría en segundos.

El asa bacteriológica debe esterilizarse antes y después de su uso, para

lograr esto, el alambre de nicromel de la asa se introduce de la parte fría de
la flama, que es la parte superior del mechero de bunsen, ahí el asa debe
permanecer hasta que esté al “rojo vivo”. En ese momento el asa está a
más de 100°C, temperatura en la que por lo general ya no queda vivo
ningún microorganismo. Se retira el asa de la flama. Sin separarla a más de
un diámetro 20cm del mechero (esto evita que se contamine con el aire
circulante), y se agita al aire unos segundos para que se enfrie. Ya tibia se
puede tomar una asada del medio de cultivo que contiene bacterias y
transferirlas a otro medio de cultivo estéril.
Una vez terminado el proceso de sembrado se debe esterilizar el asa para
evitar que alguien, en la siguiente práctica, se pueda infectar o que se
contamine a mesa de trabajo.

Tubos con medios de cultivo líquido y su inoculación.

La inoculación de medios de cultivos en el laboratorio tiene como finalidad

principal trasplantar una bacteria de un medio a otro, ya sea para hacerla
crecer en un medio de cultivo que tenga nutrientes nuevos o bien con el
objetivo de aislarla del medio de cultivo sólido y después lograr su
identificación.
Microbiología General

En estos medios de cultivo, líquidos o semisólidos, los microorganismos se

mantienen vivos hasta que los nutrientes se terminan. Los tubos deben
llevar un tapón de algodón estéril, en el caso de que sean bacterias
aerobias, para permitir que llegue oxigeno ser ambiente o un lapón de hule,
en el caso de que sean bacterias anaerobias.
Cuando los cultivos se efectúan en medios de líquidos el crecimiento
bacteriano se detecta con la presencia de turbidez, es decir, un cambio de
un medio de cultivo cristalino a uno que se ve turbio.

Caja de Petri.
Es una caja circular de vidrio que fue inventado por el bacteriólogo alemán
Julius Richar Petri. Dentro de esta caja se vacían los medios de cultivos que
contienen un solidificante conocido como agar, el cual se extrae de las
algas marinas de la familia Rhodoficia polisacárido que no sirve como
alimento para las bacterias y que no se licua a 37°C en él se disuelven los
nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano. Cundo las bacterias
crecen en un medio sólido, su crecimiento se detecta con la formación de
colonias, las cuales poseen diferentes formas tanto en sus bordes como en
sus consistencias.

Los medios de cultivo se dividen en:

Simples. Son aquellos que solo poseen nutrientes sencillos como azucares
y frijol de soya en polvo; en ellos crecen las bacterias poco patógenas para
el hombre y las saprofitas (que viven en el suelo, agua o aire).

Enriquecidos. Son aquellos en los que crecen bacterias patógenas para el

hombre, la cuales son muy exigentes en sus requerimientos nutritivos
(sangre, suero, vitaminas, etc.).

Selectivos. Son los que seleccionan un género bacteriano de acuerdo con

diferencias fisiológicas; por ejemplo staphylococcus aureus resiste grandes
concentraciones de cloruro de sodio, mientras que otras son muy sensibles
a la sal de ahí que un medio preparado así, solo crecería esta bacteria. Otro
ejemplo seria acidificar un medio de cultivo en el que solamente crecerían
bacterias que viven en este pH, como lactobacillus acidopilus.

Diferenciadores. Son aquellos medios a los que se le agrega un colorante

indicados así, si la bacteria produce un metabólico acido, las colonias
darían un color especial y si no lo producen estas no cambiarían, de esta
manera se puede hacer el diagnostico de género.
Microbiología General

IV. Procedimiento experimental.

Materiales y equipos.

 Asa bacteriológica
 Mechero de bunsen
 Tubos con caldo nutritivo.
 Plagas con Agas TSA
 Plumón /marcador.
 Encendedor.
 Gradilla
 Estufa
 Incubadora
 Cultivo
 Bacteriano

5.1. Desarrollo de procedimiento.

Manejo del asa bacteriológica.

Revisar el asa bacteriológica para verificar que el alambre de niclomel este
correctamente cerrado (en el caso de usan asa en círculo). Si no es así,
antes de tocar el asa especialmente si no es nueva esterilícela con la flama.
Se enfría agitándolo con el aire, después de ente procedimiento lo puede
tocar para arreglarlo, tome el asa como si fuera un lápiz e introdusquela en
la parte más fría, del mechero, déjala ahí uno segundos y llévala a la zona
más caliente hasta que esté al rojo vivo, sin alejarse del mechero, agite el
asa de arriba abajo durante 15 seg; luego de este procedimiento el asa por
fin esta estéril y tibio, lista para introducir al medio de cultivo.

Manejo del asa bacteriológica y tubos con medio de cultivos líquido.

Una vez que este estéril el asa bacteriológica no lo suelte. Con la mano
contraria a la que sostiene el asa tome el tubo marcado como tubo
problema.

Destapa el tubo problema, tomando el tapón de algodón con los dedos

anular y pulgar de la mano que sostiene el asa. Todo este procedimiento se
hace del mechero.

Introduzca el asa al tubo, sin tocar las paredes del mismo y al llegar al
medio de cultivo, agite unas tres o cuatro veces. Las bacterias se quedan
pegadas en el asa bacteriológica, por lo tanto ya está preparada para
transportar los microorganismos al caldo estéril.

Cierra el tubo problema, antes de ponerle el tapón, flamee la boca del tubo
y déjelo serrado en la gradilla.
Microbiología General

Tome el tubo con caldo estéril y manéjala de la misma manera que el tubo
problema.

Introduzca el asa, agítala en el caldo y de esta manera ya está inoculada.

Flamee la boca del tubo póngale el tapón de algodón y déjelo en la gradilla,

mientras se esteriliza el asa nuevamente.

Enseguida marque el tubo con su nombre, nombre del microrganismo,

grupos de laboratorio, fecha y deje el tubo en la incubadora, en la cuan
debe estar a 37°C ante 24 horas.

Manejo del asa bacteriológica e inoculación de caja de Petri.

Invertir la casa de Petri: es decir colóquela con la cara donde está el agar
(base de la caja) asía arriba.

Póngala sobre su mesa de trabajo y con un plumón marcador de vidrio

marque en tres secciones, ahora como siempre esterilice el asa
bacteriológica.

Habrá la caja de Petri que tiene colonias bacterianas.

Tome una azada del tubo problema o de la caja que contiene colonias.

Sin soltar el asa, levántate la caja de Petri con la mano contraria, a la que
trae el asa, todo este procedimiento se hace sin alejarse del mechero.}

Con su caja en la mano observe la numeración en forma seriada.

Lleve el asa hacia una orilla de sección número 1 y comience a hacer

estrías, muy suavemente en zigzag, hasta llenar toda la sección.

Al terminar la sección numero 1 esterilice el asa déjate enfriar y mientras

voltee la caja de Petri hacia la sección número 2 con la misma mano con la
que tiene sostenida.

Comience a sembrar la sección número 2 introduciendo las primeras

asadas en la sección numero 1 (unas 7 veces), deteniéndose un poco antes
de tocar la zona 3.

Esterilice el asa y déjala enfriar mientras voltee la caja de Petri hacia la

sección número III.

Luego de introducir el asa bacteriológica unas 3 veces por la sección nuero

1 siga sembrando en zigzag, pero ya sin tocar la sección 2 y deteniendo la
siembra al llegar a la sección número 3,
Microbiología General

Después gire la placa de Petri con su mano izquierda, hasta tener la

sección 2 y 3 entre el dedo pulgar e índice izquierdo.
Con este procedimiento comience a sembrar introduciendo el asa 3 veces
en la sección número 2 y siga en la 3 sembrando en zigzag ya sin tocar la 2
hasta para toda la sección 3.

Cierre la caja marque con su nombre y grupo por la base de la placa de

Petri y así invertida introdúzcala en la incubadora por 24 horas a 37°C luego
se ese tiempo se observan colonias bacterianas.

V. Interpretación y conclusión.

Se hizo la lectura del sembrío:

En las placas Petri. TSA:

Se observaron que donde se sembraron bacillus estaba contaminado, en el

agar donde se sembró E. coli, hubo presencia de contaminantes y solo una
colonia de E. coli.

En los caldos:
Hubo sedimento de estafilo, para ver si hay presencia de microorganismo
se hizo un agitamiento y se movió un serpentín y era un cultivo
contaminado.

Los microorganismos deben crecer, por ejemplo en caldo, crecen

uniformemente distribuido ose tiene que haber turbidez, pueden ser
aerobios y anaerobios, pueden crecer en la superficie o en inferior.
En todas las siembras que se realizó ha sido contaminado por aver tenido
por mucho tiempo desprotegido nuestras muestras y como en el ambiente
has presencia de microorganismo se ha contaminado.

Lo importante es que se pudo aprender a ser una siembra de

microorganismos y a utilizar el asa.