Ejemplo de Protocolo de Validación

PROTOCOLO DE CODIGO: PROT-VAL-07
VALIDACIÓN DE REVISIÓN: 1
MÉTODOS DE ENSAYO FECHA: 30/01/2018
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MÉTODO: Manganeso en Aguas
1. OBJETIVO Y ALCANCE
1.1. Proponer la validación del procedimiento normalizado de la medición de Manganeso en

el laboratorio de Ensayos fisicoquímico de agua.
1.2. Desarrollar el procedimiento normalizado de manganeso de acuerdo a lo establecido en
el libro oficial Métodos Normalizados para el Análisis de Aguas Potables y Residuales
SMWWXX Edic. 3500 –Mn B.
1.3. Comprobar que las condiciones en que se desarrolla el procedimiento normalizado de
Manganeso, en el Laboratorio Fisicoquímico de agua del laboratorio son las adecuadas
según los requisitos de la Norma ISO/IEC 17025.
1.4. Aplicar la metodología para calcular la exactitud, precisión, linealidad, robustez e
incertidumbre del procedimiento normalizado de Manganeso en el Laboratorio
Fisicoquímico de Aguas del laboratorio.
1.5. Obtener datos verificables y trazables para el desarrollo estadístico de la validación del
método de Manganeso.
1.6. Diseñar una hoja electrónica para el tratamiento y obtención de Resultados
2. RESPONSABLES DE LAS ACTIVIDADES DE VALIDACIÓN
2.1. La aplicación de este procedimiento es responsabilidad de todo el personal, en sus

diferentes niveles. Director, Jefe de Laboratorio, profesionales y técnicos, ya sea de
planta permanente o subcontratada que desempeña funciones en el ámbito de trabajo
del Laboratorio de Ensayos.
2.2. El profesional responsable de la Validación Interna de un Método de Ensayo deberá

diseñar el Protocolo de Validación (bajo la supervisión del Responsable Técnico),
describiéndolo por escrito, paso a paso, en forma de Instructivo, abarcando como
mínimo los aspectos siguientes:
Informe conteniendo todos los parámetros de validación,
Criterio para la revalidación,
Consideraciones de Seguridad,
Persona que desarrolló e inicialmente validó el Método,
Resumen y Conclusiones.
2.3. Responsable Técnico

Evalúa el Informe.
Confronta los parámetros estadísticos obtenidos del método o bien las medidas de
validación (cartas de control, ensayos de intercomparación) con lo establecido en
forma de informe final.
Aprueba el Método y lo eleva a la Dirección de Aseguramiento de la Calidad.
ELABORÓ: Responsable Técnico REVISÓ: Dir. Aseguramiento de la Calidad APROBÓ: Dirección Ejecutiva
FECHA: FECHA: FECHA:
FIRMA: FIRMA: FIRMA:
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Aprobado por la Dirección de Aseguramiento de la Calidad, lo incorpora al Manual

de Procedimientos Normado de Trabajo del Área.
2.4. Dirección de Aseguramiento de la Calidad
Evaluar el Informe recibido del Responsable Técnico.
Si lo aprueba, lo remite al Responsable Técnico para su implementación.
Si lo rechaza, lo remite al Responsable Técnico para su revisión o revalidación, con
las recomendaciones correspondientes.
3. DEFINICIÓN DEL SISTEMA A VALIDAR.
El manganeso está asociado con minerales férricos, y es muy frecuente en los océanos, aguas
frescas, y en el suelo. Además, el manganeso se usa en aleaciones de acero, baterías, y como
aditivos en alimentos para animales.
En las aguas subterráneas, naturales o de pozo, el manganeso se encuentra presente en forma de

ión soluble divalente (forma reducida Mn2+) debido a la completa ausencia de oxígeno, sin
embargo, hay plantas de tratamiento de aguas en las que el manganeso se encuentra en un estado
de valencia más elevado (forma oxidada Mn4+). No obstante la determinación de manganeso total
no va estar afectada por los diferentes estados de valencia ya sea oxidada o reducida en que se
encuentre el manganeso.
La presencia de un exceso de permanganato puede formar un complejo de manganeso trivalente o

cuadrivalente, siendo este un complejo relativamente estable y soluble.
Existe además del método colorimétrico, para la determinación de manganeso, como otra opción
el método de espectrometría de absorción atómica, con el cual se cuantifica el manganeso en las
muestras de aguas de forma directa y con exactitud aceptable.
El método del persulfato es más rápido sobre todo en la determinación de concentraciones de
manganeso relativamente bajas, además, el uso del ión mercúrico puede controlar la interferencia
del ión cloruro.
La oxidación causada por el persulfato, conlleva a que los compuestos de manganeso pasen a
permanganato en presencia de nitrato de plata. Esto ocurrirá siempre y cuando se garantice un
exceso de persulfato, y ausencia de materia orgánica, por lo tanto el color resultante será estable
por lo menos durante 24 horas (color púrpura).
En el caso en que las aguas sean de desechos y contengan materia orgánica debe hacerse una
digestión preliminar con ácidos nítrico y sulfúrico, luego se elimina la interferencia del ión
cloruro con sulfato de mercurio. Si al ponerse las muestras en contacto con el aire se produce
precipitación, las concentraciones de manganeso serán bajas, ya que parte del manganeso
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quedaría en el precipitado, por lo que para obtener lecturas más precisas es necesario re disolver
el precipitado de manganeso adicionando 1 gota de peróxido de hidrógeno al 30%.
3.1. Conceptos Fundamentales
3.1.1. Manganeso: El Manganeso es un elemento químico metálico quebradizo de color

blanco grisáceo, parecido al Hierro pero más rígido. Su concentración en el agua
es menor a la del Hierro. En promedio el valor que se estima es de 0.06 mg/L.
Cuando se encuentra un valor mayor a 1 mg/L, es porque los minerales que lo
contienen se encuentran en contacto con el agua en condiciones “reducidas” o
porque hay bacterias activas. En las aguas crudas se ha registrado de 0.001 a
0.60mg/L.
3.1.2. Trazabilidad: Propiedad del resultado de una medición o del valor de un patrón
por la cual puede ser relacionado a referencias determinadas, generalmente
patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de
comparaciones teniendo todas las incertidumbres determinadas.
3.1.3. Verificación de calibración: Una verificación periódica de que no han cambiado

las condiciones del instrumento en una forma significativa.
3.1.4. Disolución estándar: Disolución de concentración conocida preparada a partir de

un patrón primario.
4. IDENTIFICACIÓN DE LOS PARÁMETROS A VALIDAR
Exactitud SÍ
Precisión SÍ
Especificidad SÍ
Límite de Detección SÍ
Límite de Cuantificación SÍ
Linealidad SÍ
Intervalo de concentraciones de trabajo SÍ
Robustez SÍ
Incertidumbre SÍ
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5. DISEÑO DEL PLAN EXPERIMENTAL Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
5.1. EXACTITUD
5.1.1. La exactitud es el grado de identidad de los valores analíticos obtenidos con el

método y el contenido real del analito en la muestra. La exactitud del método se
evaluará en términos de la recuperación de adiciones conocidas.
5.1.2. Se prepararán tres muestras, de concentración conocida a tres niveles bajo
(Adicionando 2,5 mg/L de analito en la matriz de la muestra), medio
(Adicionando 5,0 mg/L de analito en la matriz de la muestra) y alto
(Adicionando 10,0 mg/L de analito en la matriz de la muestra). Se evaluará
sobre el sistema evaluando la dispersión de seis lecturas por cada uno de los
niveles de concentración de los estándares del principio activo cuantificado.
5.1.3. Estas muestras/estándares se tratarán igual que las muestras normales y los
estándares antes de obtener la correspondiente señal analítica.
5.1.4. Los resultados obtenidos de la evaluación de la Exactitud se registrarán en la
Tabla 5.1.1, 5.1.2, 5.1.3.
5.1.5. Se realizará el ensayo de hipótesis estadístico de t de Student para determinar
si el valor medio hallado y el valor considerado verdadero no difieren
estadísticamente a un nivel de confianza establecido (95%) y con los grados de
libertad que correspondan, 4 grados de libertad (n=12) a los tres niveles de
concentración investigados.
5.1.6. Se realizará ensayos de comparación, en los cuales el valor obtenido no se
diferencie significativamente del valor esperado
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Tabla 5.1.1. Validación de la Exactitud en la determinación de Manganeso, por

recuperación de adiciones conocidas, adicionando 2,5 mg/L de analito en la matriz de
muestra, Nivel Bajo.
Analista:
Fecha de Análisis:
No. Ensayos Muestra + Muestra Recuperación Adición Desviaciones Recuperación
Adición mg/L calculada, conocida del esperado %
conocida mg/L mg/L mg/L
mg/L
1
2
3
4
5
6
PROM
MIN
MAX
RANGO
DESVEST
Interv. Conf
tcalc ttab
¿Diferencia Significativa?
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muestra, Nivel Medio.
Analista:
Fecha de Análisis:
mg/L
1
2
3
4
5
6
PROM
MIN
MAX
RANGO
DESVEST
Interv. Conf
tcalc ttab
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muestra, Nivel Alto.
Analista:
Fecha de Análisis:
mg/L
1
2
3
4
5
6
PROM
MIN
MAX
RANGO
DESVEST
Interv. Conf
tcalc ttab
CRITERIO DE DECISIÓN (ACEPTACIÓN) PARA LA EXACTITUD:

Si tcalculado < ttabla, el método analítico desarrollado tiene la exactitud requerida, y
ambos valores no son estadísticamente diferentes.
Si tcalculado > ttabla significa que el método analítico no es exacto y que existe un error
sistemático por defecto o por exceso, que en valor absoluto es |µ-xmed|, donde µ
representa el valor verdadero o esperado de concentración del analito.
El valor obtenido no se diferencie significativamente del valor esperado.
Recuperación satisfactoria dentro del rango (90 -110) %.
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5.2. PRECISIÓN
5.2.1. La precisión será verificada evaluándose las condiciones de repetibilidad y
precisión intermedia.
5.2.2. Se estudiará sobre el sistema, evaluando la dispersión de seis repeticiones
tomando como referencia tres muestras diferentes. Concentraciones de 2,5, 5,0,
10,0 mg/L.
5.2.3. Se procederá a evaluar la precisión sobre tres muestras diferentes, de
concentraciones de 2,5, 5,0, 10,0 mg/L, mediante el proceso de la
Repetibilidad.
5.2.4. La evaluación corresponderá a todo el procedimiento, desde la preparación de
la muestra hasta la medición del analito por el instrumento, obteniéndose las
señales analíticas de las soluciones en un mismo día bajo las mismas
condiciones de trabajo, el mismo equipo, las mismas soluciones reactivas y el
mismo analista (n = 6) para la repetibilidad.
5.2.5. Las mediciones se realizarán también en dos días diferentes (n = 12) sin
variación del resto de condiciones para evaluar la precisión intermedia
(Reproducibilidad).
5.2.6. Los resultados de la Evaluación de la Precisión tanto Intradía como Interdía se
registrarán en las Tablas 5.2.1, 5.2.2 y 5.2.3. Los resultados de la Repetibilidad
Intralaboratorio (reproducibilidad) en la determinación de Manganeso se
registrarán en las tablas 5.2.4, 5.2.5 y 5.2.6.
5.2.7. Con los resultados obtenidos, se determinará el Coeficiente de Variación (CV)
y se aplicó la prueba de ANOVA de clasificación simple para evaluar las
varianzas interdía.
Tabla 5.2.1. Validación de la Precisión de Manganeso. Repetibilidad (Intradía)

Analista: Número 1
Fecha de Análisis:
Concentración de Trabajo
No. Ensayos Nivel bajo, mg/L Nivel medio, mg/L Nivel alto, mg/L
1
2
3
4
5
6
Media
S
C.V., %
Int. Conf
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Tabla 5.2.2. Validación de la Precisión de Manganeso. Repetibilidad (Intradía)
Analista: Número 2
Fecha de Análisis:
Concentración de Trabajo
No. Ensayos Nivel bajo, mg/L Nivel medio , mg/L Nivel alto, mg/L
1
2
3
4
5
6
Media
S
C.V., %
Int. Conf
Tabla 5.2.3. Precisión Intermedia en la determinación de Manganeso. (Repetibilidad Interdía)
DÍAS Ensayo Número Nivel bajo, mg/L Nivel medio , mg/L Nivel alto, mg/L
UNO 1
2
3
4
5
6
DOS 7
8
9
10
11
12
Media
S
C.V., %
Int. Conf
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Tabla 5.2.4. Repetibilidad Intralaboratorio en la determinación de Manganeso.

(Reproducibilidad)
Muestra: Número 1, Nivel bajo
Fecha de Análisis:
No. Ensayos Analista 1 Analista 2 Diferencia
1
2
3
4
5
6
Media
S
C.V., %
t(Calculada)
t(Tabla)

(Reproducibilidad)
Muestra: Número 2, Nivel medio
Fecha de análisis:
1
2
3
4
5
6
Media
S
C.V., %
t(Calculada)
t(Tabla)
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(Reproducibilidad)
Muestra: Número 3, Nivel alto
Fecha de Análisis:

1
2
3
4
5
6
Media
S
C.V., %
t(Calculada)
t(Tabla)
CRITERIO DE DECISIÓN (ACEPTACIÓN PARA LA PRECISIÓN):

El coeficiente de Variación de los resultados, tanto para los datos correspondientes a la
Repetibilidad como para la precisión Intermedia no debe ser mayor de 5%.
Al realizar análisis de Varianza de dos factores, el valor de F calculado debe ser menor
que el valor de F de tabla (o crítico).
5.3. ESPECIFICIDAD/SELECTIVIDAD:
5.3.1. Selectividad (Elementos de los Equilibrios Químicos)
El primer parámetro que se evaluará, es el de la selectividad o especificidad del método. Ésta se

establecerá mediante la comparación de los espectros de la muestra enriquecida y un estándar de
concentración similar a la obtenida con la muestra más estándar (la muestra no presentaba analito
a niveles superiores al Límite de Detección). Los resultados se reflejaran en el Gráfico 5.3.1
indicando la correspondencia de los espectros en la zona de máxima absorción (longitud de onda
analítica) y la evidencia o no de influencia de la matriz en el espectro de absorción.
Este método de análisis es aplicable a muestras que contengan como mínimo hasta 210 µg/L
Manganeso cuando son utilizadas celdas de 1 cm y 42 µg/L si las celdas que se usan para leer son
de 5 cm.
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5.4. LÍMITE DE DETECCIÓN Y DE CUANTIFICACIÓN.
5.4.1. Los Límites de Detección y de Cuantificación de un método representan una

medida de la sensibilidad del mismo. En un método analítico sensible, ligeros
incrementos de concentración resultan en incrementos notables de la señal o
respuesta analítica.
5.4.2. La determinación de los Límites de Detección y de Cuantificación se realizará
sobre cinco estándares preparados; 0,25, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0 mg/L.
5.4.3. Los límites de detección y de cuantificación se calcularán teóricamente
utilizando el criterio de Miller que relaciona la varianza residual con el valor de
la pendiente.
5.4.4. Los resultados de la evaluación de la regresión lineal se registrarán en la Tabla
5.4.1
TABLA 5.4.1 REGRESION LINEAL SIMPLE, LIMITE DE DETECCION Y DE

CUANTIFICACIÓN
ANALITO:
FECHA
X Y a (Intercepto) r
b (pendiente) R2
Varianza residual Desviación Estándar de x/y
Desviación Estándar de la Intervalo de Confianza de
Pendiente la pendiente
Desviación Estándar del Intervalo de Confianza del
Intercepto Intercepto
Límite de Detección Límite de Cuantificación
5.5. LINEALIDAD
5.5.1. Se procederá a tomar lecturas por repeticiones en quintuplicado de soluciones

estándares preparados a cinco niveles de concentraciones; 0,25, 2,5, 5,0, 10,0
15,0 mg/L.
5.5.2. La señal analítica será determinada en quintuplicado.
5.5.3. La linealidad determina la región de la curva respuesta o de cuantificación en
que hay relación directa entre la señal instrumental y la concentración del
producto analizado.
5.5.4. La curva de calibración obtenida a partir de estas medidas será analizada por
medio de regresión lineal, calculándose el coeficiente de correlación y de
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determinación, así como la ecuación de la recta y los parámetros de dispersión

del sistema.
5.5.5. Además de la prueba estadística de linealidad se practicarán ensayos de
hipótesis tanto para el Intercepto como para la pendiente para establecer su
validez estadística.
Tabla 5.5.1. Evaluación de la linealidad del sistema en la determinación de Manganeso.
LINEALIDAD/VARIABILIDAD/SISTEMA. Fecha Análisis:
Concentración
Conocida., mg/L Curva 1 Curva 2 Curva 3 Curva 4 Curva 5 PROM., Abs
Intercepto
Pendiente
Coef. Correl.
Coef. Determ.
Error Típico
VARIABILIDAD DE LA PENDIENTE
PROM S CV, % Int. Conf.
Tabla 5.5.2. Evaluación Estadística de la Linealidad
PARÁMETRO CRITERIO/ACEPTACIÓN
Coeficiente de Correlación. r ≥ 0,995
Coeficiente de Determinación R2 ≥ 0,99.
Hipótesis nula (Intercepto) texp < ttabla
Hipótesis nula (Pendiente) texp > ttabla
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5.6. Robustez del Método
Se realizará un modelo experimental tipo screening a fin de evaluar los factores que pueden tener
influencia en el proceso analítico.
Se investigaron aquellos factores que pueden tener un efecto real o una influencia que es
claramente distinguible de cualquier ruido de fondo del sistema.
Para tal fin, el diseño de experimentos correspondió al presentado en la siguiente tabla:
FACTORES BAJO
ESTUDIO
No. X1 X2 X3
1 -1 -1 -1
2 +1 -1 -1
3 +1 +1 -1
4 -1 +1 +1
5 +1 -1 +1
6 -1 +1 -1
7 -1 -1 +1
8 +1 +1 +1
La interpretación de la Tabla es como sigue:
• Las X representan distintos factores bajo estudio (Alícuota, Concentración de ácido,

Indicador).
• Las filas representan un conjunto de factores bajo estudio que se combinan para cada
experimento.
• Los valores +1 y -1 indican niveles de concentración o % de cada factor bajo estudio (+1:
Nivel alto, -1: Nivel Bajo.
• Esta Tabla está diseñada para investigar 3 factores, pero perfectamente se puede ampliar
hasta siete factores de influencia.
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FACTORES BAJO ESTUDIO

Conc. Variable de
No. Alícuota HCl Indicador Respuesta
1 -1 -1 -1
2 +1 -1 -1
3 +1 +1 -1
4 -1 +1 +1
5 +1 -1 +1
6 -1 +1 -1
7 -1 -1 +1
8 +1 +1 +1
Na2S2O8,
Sol. Esp., mL mg Tiempo Ebullic.
Bajo 4.9 99 50
Alto 5.1 101 60
MODELO MATEMÁTICO:
y = ß0 + ß1x1 + ß2x2 + ß3x3 +ε
CÁLCULO DE LOS EFECTOS:

Constante βo
Alícuota β1
Conc. HCl β2
Indicador β3
ECUACIÓN QUE DEFINE EL COMPORTAMIENTO DEL SISTEMA:
y = 5,09 - 0,025x1 – 0,0094x2 + 1,11E-02x3
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6. EQUIPOS Y SU CALIFICACIÓN (INCLUYE TRAZABILIDAD)
6.1. Las masas, para la preparación de las soluciones estándares de titulación, se

midieron con la Balanza Analítica electrónica KERN modelo ALS 120 -4N
con aproximación de 0.0001 g. La cual cuenta con certificado de calibración
por instancia certificada. SCM Metrología y Laboratorios S.A. Las
especificaciones técnicas según diseño, de este equipo se describen en tabla
6.1.
6.2. Las cuantificaciones se realizaron utilizando un Espectrofotómetro UV-
Visible, con arreglo de diodos, marca Agilent, Modelo 8453. El
Mantenimiento y la Cualificación del Desempeño del Equipo es realizado por
técnicos de la casa proveedora (ORGOMA) según contrato anual de Servicio
de Mantenimiento. Las Especificaciones Técnicas, según diseño, de este
equipo se describen en tabla 6.2.
6.3. El ensayo físico-químico para la determinación de Cloruros se apegó al descrito en el
Manual de Procedimientos de Análisis Fisicoquímico de Aguas AFQ-14.
Tabla 6.1. ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DE LA BALANZA KERN

Balanza KERN ALS 120 -4N
Gama de pesaje máximo 120 g
Lectura (d) 0,1 mg
Reproducibilidad 0,2 mg
Linealidad ± 0,2 mg
Tiempo de calentamiento 8 horas
Peso de ajuste recomendado, no adjunto (clase) 100 g (E2)
Peso mínimo de pieza con piezas contadas ˃ 0,5 mg
Cantidad de piezas referencial con piezas contadas 10, 20, 50, facultativos
Unidades de pesaje mg, g, ct, oz, ozt, GN, mom, dwt, teal
Tiempo de estabilización (típico) 4 sec.
Suministro de corriente 230VI50 Hz (Euro) 11V AC
Temperatura de Servicio +18 oC….. +30 oC
Humedad del aire máx. 80 % (no condensado)
Dispositivo de pesaje sumergido Ojete de enganche, serie
Carcasa (A x p x a) mm 206 x 335 x 335
Dimensiones protección de vidrio contra viento 168 x 160 x 225 compartimiento de pesaje
Platillo de pesaje (acero inoxidable) mm 85 mm

Peso Kg (neto) 6,3 kg
Interfaz RS 232 C
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Tabla 6.2. ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DEL ESPECTROFOTÓMETRO

UV-VISIBLE AGILENT 8453
AJUSTE ÓPTICO ESPECIFICACIÓN CONDICIONES ADICIONALES PARA
CUMPLIR LA ESPECIFICACIÓN
Rango de Longitud de Onda 190 – 1100 nm
Abertura de Ventana 1 nm
Resolución de prueba > 1,6 Tolueno en hexano, cociente de absorbancia a 269
(Farmacopea Europea, EP) nm/266 nm)
Pérdida de luz < 0,03 % A 340 nm (NaNO2, ASTM)
< 0,05 % A 220 nm (NAI, ASTM)
<1% A 198 nm (KCl, EP)
Exactitud de Longitud de < ± 0,5 nm Escaneo de 0,5 seg. (NIST 2034).
Onda < ± 0,2 nm A 486,0 y 656,1 nm.
Reproducibilidad de longitud ± 0,02 nm 10 escaneos consecutivos (NIST 2034)
de onda
Exactitud Fotométrica < ± 0,005 A A 440,0; 465,0; 546,1; 590 y 635,0 nm, 1 A (NIST
< ± 0,01 A 930e)
A 235, 257, 313, 350. 430 nm (K2CrO7, método EP)
Sonido Fotométrico < 0,0002 A 60 escaneos en 0,5 segundos a Cero A, 500 nm, rms.
Estabilidad Fotométrica < 0,001 A/h A 0 A, 340 nm, después de 1 hora de calentamiento,
medido sobre 1 hr, cada 5 segundos, temperatura
ambiente constante.
Llanura de línea base < 0,001 A Blanco 0,5 segundos, escaneo 0,5 segundos, rms.
Tiempo típico de escaneo 1,5 segundos Rango completo
Tiempo de escaneo de prueba 0,1 segundo Rango completo
corta
Tiempo hasta el siguiente 0,1 segundo Rango completo. Escaneo de 0,1 segundos, hasta
escaneo 150 escaneos consecutivos.
REQUERIMIENTOS DE
PODER
Voltaje 90 – 264 V, AC.
Frecuencia 47 – 63 Hz
Consumo de poder 70 VA típico.
CONDICIONES
AMBIENTALES
Temperatura de operación 0 – 50 ºC
Temperatura de no- - 40 - 70 ºC
operación <95% a 25 – 40 ºC
Humedad
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2. DESCRIPCION DEL MÉTODO
7.1. Reactivos:
7.1.1. Agua tetra-destilada ultra pura especificación ASTM D1193 Tipo I.

Certificados de Calidad internos.
7.1.2. Reactivo especial para Manganeso.
7.1.3. Persulfato de Amonio (NH4) 2S2O8, o Persulfato de sodio, Na 2S2O8, sólido.
7.1.4. Peróxido de Hidrógeno, H2O2.
7.1.5. Ácido Nítrico, HNO3, concentrado.
7.1.6. Ácido clorhídrico, HCl, concentrado.
7.1.7. Bisulfito de Sodio.
7.1.8. Oxalato de sodio, Na2C2O4.
7.2. Estándares:
7.2.1. Material de Referencia certificado de Permanganato de Potasio (KMnO4)
7.2.2. Oxalato de sodio, Na2C2O4, estándar primario
7.2.3. Solución estándar de Manganeso 1000 mg/L.
7.2.4. Solución estándar de Manganeso 0,1N.
7.2.5. Solución estándar intermedia de Manganeso 50 mg/L.
7.2.6. Solución Estándar de Manganeso 0 ,25 mg/L.
7.2.7. Solución Estándar de Manganeso 2,5 mg/L.
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7.3. Materiales:
7.3.1. Balones aforados clase A de 1000 mL.

7.3.2. Balones aforados clase A de 25, 50, 100 mL.
7.3.3. Erlenmeyer de precipitado de vidrio de 250 mL.
7.3.4. Pipetas volumétricas; 0,5, 10, 20, 50 mL.
7.3.5. Pipetas graduadas.
7.3.6. Micro espátula.
7.3.7. Bureta graduada de 25, 50 mL.
7.3.8. Cubeta de 1 cm de camino óptico.
7.4. Instrumentación:
7.4.1. Agitador magnético con barra agitadora recubierta de TFE.

7.4.2. Placa de agitación magnética
7.4.3. Frascos goteros.
7.4.4. Horno de calentamiento.
7.4.5. Desecador provisto de material desecante con indicador del color.
7.4.6. Soporte universal con pinza para bureta.
7.4.7. Campana de extracción.
7.5. Condiciones ambientales:
7.5.1. Temperatura ambiental 25 ±1 oC

7.5.2. Humedad relativa del ambiente 50 ±5 %
7.6. Medidas de seguridad para el uso de reactivos:
7.6.1. Para el desarrollo de este procedimiento no es necesario aplicar normas

especiales de seguridad, tener cuidado con la manipulación de los ácidos,
solución especial para manganeso para los cuales debe protegerse usando
guantes de látex, gafas, máscara antigases o la campana de extracción.
7.6.2. Desechar los residuos tóxicos.

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7.7. Preparación de reactivos:

7.7.1. Reactivo especial para Manganeso: Disolver 75 g de Sulfato de Mercurio
(HgSO4), en 400 ml de ácido nítrico concentrado (HNO3) y 200 ml de Agua
Destilada (H2O); Adicionar 200 mL de ácido fosfórico 85% (H3PO4) y 35
mg de Nitrato de Plata (AgNO3), dejar enfriar y completar a 1L en un balón
aforado.
7.7.2. Bisulfito de Sodio: Disolver 10 g NaHSO3 en 100 mL de agua destilada.
7.8. Preparación de estándares:

7.8.1. Solución estándar de Manganeso 1000 mg/L, (alternativo): Disolver
1,0000 g de manganeso metal 99,8 % en 50 mL de ácido nítrico 6 N. Diluir a
1000 mL con HCl al 1% (v/v). 1mL = 1000 mg Mn.
7.8.2. Solución estándar intermedia 50 mg/L, (alternativo): Diluir 10 mL en 200
mL con agua destilada. 1mL = 0,05 mg Mn. Preparar diariamente.
7.8.3. Solución estándar de Manganeso 0,1N: Preparar una solución de
Permanganato de Potasio (KMnO4) 0.1N, disolviendo 3.2 g de
Permanganato de Potasio (KMnO4), en agua destilada y completar a 1 L.
Almacenar esta solución por varias semanas a la luz del sol, o caliéntela por
varias horas cerca de su punto de ebullición, luego filtre la solución a través
de un filtro de fibra de vidrio y estandarice cuidadosamente con Oxalato de
Sodio.
7.8.4. Solución estándar intermedia 50 mg/L: Con el promedio resultante de
varias titulaciones. Calcular el volumen necesario de esta solución para
preparar 1 L, de tal manera que 1.00 mL = 50.0 µg Mn, como sigue:
mLKMnO4 = 4.55/ N KMnO4
A este volumen obtenido mediante el cálculo hecho adicionar 2 a 3 mL de
H2SO4 y unas gotas de la solución de Bisulfito de Sodio (NaHSO3), en
agitación constante hasta que el color del permanganato desaparezca. Hervir
para quitar exceso SO2, enfriar, y diluir a 1000 mL con agua destilada.
Página 21 de 30
7.8.5. Solución Estándar de Manganeso 0,25 mg/L. De la solución estándar de

Manganeso 50 mg/L, pipetear volumétricamente 0,5 mL depositar la alícuota
en un frasco volumétrico de 100 mL y aforar a la marca con agua destilada.
Manganeso 50 mg/L, pipetear volumétricamente 5 mL depositar la alícuota
en un frasco volumétrico de 100 mL y aforar a la marca con agua destilada
7.9. Preparación de la muestra:
7.9.1. Deben tomarse un mínimo de 500 mL de muestra en envases de polietileno

limpio, y bien tapado. Pueden utilizarse muestras compuestas o simples.
7.9.2. No se requiere de ningún tratamiento específico. Una vez recogida la
muestra se deben tomar las precauciones normales de seguridad que eviten
contaminar la muestra. Las mediciones deben hacerse lo antes posible
preferiblemente antes de los 28 días de su colecta, de lo contrario la muestra
se debe acidificar con HNO3 a pH ˂2.
7.9.3. Si la muestra presenta interferencia por turbidez o color, se debe corregir.
Evitar la filtración debido a la posible retención de algo de permanganato en
el papel de filtro. Si se usa la comparación visual, el efecto de la turbidez
solo se puede estimar y no se puede corregir los iones de color interferentes.
Cuando se realizan mediciones fotométricas, utilice el siguiente método de
"blanqueamiento", que también corrige el color que interfiere: Tan pronto
como se haya realizado la lectura del fotómetro, agregue 0.05 ml de solución
de H2O2 directamente a la muestra en la celda óptica. Mezcle y, tan pronto
como el color del permanganato se haya desvanecido completamente y no
queden burbujas, vuelva a leer.
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Deduzca la absorbancia de la solución blanqueada de la absorbancia inicial

para obtener la absorbancia debida a Mn.
7.10. Procedimiento
7.10.1. Procedimiento para Estandarización del Permanganato de Potasio

(KMnO4) 0,1 N.
a) Secar a 110 oC por 2 horas de 100- 200 mg de Oxalato de Sodio
(Na2C2O4), calidad patrón primario) pesar y transferir 0.1g del reactivo a
un Beaker de 400 mL. Adicionar 100 mL de agua destilada y disolver.
b) Adicionar 5 mL de ácido sulfúrico concentrado y calentar rápidamente con
temperaturas entre 90 -95 oC.
c) Titular sobre la plancha de calentamiento, con solución de KMnO4 tratando
de conservar la temperatura en el rango anteriormente indicado y en
constante agitación hasta lograr el punto de equilibrio evidenciado por el
paso del incoloro al rosado persistente, dejar ebullir al menos por 1min.
100 mg de Na2C2O4 consumen aproximadamente 15 mL de solución de
KMnO4.
d) Correr un blanco de reactivos.
e) Calcular la Normalidad de la solución de Permanganato de Potasio
(KMnO4) 0,1 N.
g ( Na 2C 2O 4)
N ( KMnO4) =
( A − B) * 0,06701
Dónde.
A: mL consumidos en la titulación del KMnO4)
B: mL consumidos en la titulación del blanco
7.10.2. Procedimiento general para la determinación de la curva de calibración
de Manganeso.
a) Se coloca en matraces volumétricos de 100 mL, las siguientes alícuotas de
solución estándar de trabajo de 50 mg/L de Manganeso; 0,5, 5, 10, 20, 30
mL, seguido aforar con agua destilada hasta la marca de aforo.
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b) Las concentraciones resultantes producto de las diluciones anteriores son;

0,25, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0 mg/L de Manganeso.
c) Depositar cada una de las soluciones de estándar de Manganeso preparadas

en erlenmeyer de 250 mL. Ver Tabla 7.10.2.
Tabla 7.10.2. Preparación de curva de calibración de Manganeso.

STD Alícuotas, mL CSP mL, Agua Manganeso,
STD, 50 Destilada mg/L
mgMn/L
1 0,5 100 0,25
2 5 100 2,5
3 10 100 5,0
4 20 100 10,0
5 30 100 15,0
d) Adicionar 5 mL de solución especial para manganeso, una gota de peróxido

de hidrógeno y 1g de (NH4)2S2O8 o Na2S2O8.
e) Adicionar algunas perlas de vidrio, mezclar, colocar los Erlenmeyer en la
plancha de calentamiento y calentar hasta ebullición, dejar ebullir por un
minuto para asegurar la disolución de todo el manganeso.
f) Bajar de la plancha de calentamiento dejar reposar por un minuto y enfriar
con corriente de agua.
g) Transferir con cuidado la solución y los lavados a un recipiente
volumétrico de 100. mL y completar a volumen.
h) Correr paralelo a los estándares un blanco de corrección o reactivos. El
blanco se prepara tomando 100 mL de agua destilada más reactivos.
i) Calibrar con el blanco de reactivos y, leer la Absorbancia de los estándares
a 520 nm.
j) Grafique la Absorbancia leída para cada concentración contra los mg Mn/
L, para obtener la ecuación de regresión lineal en la curva.
Página 24 de 30
7.10.3. Procedimiento para la medición de Manganeso.
a) Mezclar y homogenizar completamente la muestra, medir

volumétricamente 100 mL o alícuota diluida.
b) Colocar la alícuota de muestra en un erlenmeyer de 250 mL de capacidad.

c) Adicionar 5 mL de solución especial para manganeso, una gota de peróxido
de hidrógeno y 1g de (NH4)2S2O8 o Na2S2O8.
d) Adicionar algunas perlas de vidrio, mezclar, colocar los Erlenmeyer en la
plancha de calentamiento y calentar hasta ebullición, dejar ebullir por un
minuto para asegurar la disolución de todo el manganeso.
e) Bajar de la plancha de calentamiento dejar reposar por un minuto y enfriar
con corriente de agua.
f) Transferir con cuidado la solución y los lavados a un recipiente
volumétrico de 100. mL y completar a volumen.
g) Correr paralelo a las muestras un blanco de corrección o reactivos. El
blanco se prepara tomando 100 mL de agua destilada más reactivos.
h) Correr paralelo a las muestras un estándar intermedio o estándar de control
de 5,0 mg/L.
i) Calibrar con el blanco de reactivos y, leer la Absorbancia de las muestras a
520 nm.
j) Grafique la Absorbancia leída para cada concentración contra los mg Mn/
L, para obtener la ecuación de regresión lineal en la curva.
k) Calcular la concentración (mg/L) directamente de la Ecuación de

Regresión Lineal, calculada por el método de los Mínimos Cuadrados,
aplicando la Hoja de Cálculo (RLS). En los casos en que se haya realizado
dilución en la muestra, se deberá tener en cuenta el factor de dilución por lo
que éste debe multiplicarse por la concentración de Manganeso resultante
en la determinación del analito.
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k) Cálculos e interpretación de Resultados:
De la curva de calibración, obtenida por Regresión lineal, en la hoja de Cálculo de Excel

(RLS), obtener los mg/L de Fe /L, de acuerdo con la lectura de absorbancia de la muestra.
En caso de usar diluciones, el resultado final de Hierro se multiplica por el factor de
dilución correspondiente.
mgMn / Lcurva *VTotal

mgMn / L =
V (muestra)
Dónde:
V Total= 50 mL, Volumen de muestra y aforo de los estándares.
V(muestra) = Alícuota de la muestra.
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7.11. ESTIMACIÓN DE LA INCERTIDUMBRE
7.11.1. MODELOS MATEMÁTICOS DE CÁLCULO
A. Preparación de la Solución Estándar de NaCl (0,0141 mol/L)
B. Estandarización de la Solución de AgNO3 (0,0141 mol/L)
C. Valoración de la Muestra con Solución de AgNO3 0,01 mol/L
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Página 28 de 30
7.11.2. COEFICIENTES DE SENSIBILIDAD
A. Preparación de la Solución Estándar de NaCl (0,0141 mol/L)
B. Estandarización del AgNO3
Página 29 de 30
C. Valoración de la Muestra con AgNO3 0,0141 mol/L
Página 30 de 30

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PROTOCOLO DE CODIGO: PROT-VAL-07

1.1. Proponer la validación del procedimiento normalizado de la medición de Manganeso en

2. RESPONSABLES DE LAS ACTIVIDADES DE VALIDACIÓN

2.1. La aplicación de este procedimiento es responsabilidad de todo el personal, en sus

2.2. El profesional responsable de la Validación Interna de un Método de Ensayo deberá

2.3. Responsable Técnico

Aprobado por la Dirección de Aseguramiento de la Calidad, lo incorpora al Manual

3. DEFINICIÓN DEL SISTEMA A VALIDAR.

En las aguas subterráneas, naturales o de pozo, el manganeso se encuentra presente en forma de

La presencia de un exceso de permanganato puede formar un complejo de manganeso trivalente o

3.1. Conceptos Fundamentales

3.1.1. Manganeso: El Manganeso es un elemento químico metálico quebradizo de color

3.1.3. Verificación de calibración: Una verificación periódica de que no han cambiado

3.1.4. Disolución estándar: Disolución de concentración conocida preparada a partir de

4. IDENTIFICACIÓN DE LOS PARÁMETROS A VALIDAR

5. DISEÑO DEL PLAN EXPERIMENTAL Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN

5.1.1. La exactitud es el grado de identidad de los valores analíticos obtenidos con el

Tabla 5.1.1. Validación de la Exactitud en la determinación de Manganeso, por

Tabla 5.1.2. Validación de la Exactitud en la determinación de Manganeso, por

Tabla 5.1.3. Validación de la Exactitud en la determinación de Manganeso, por

CRITERIO DE DECISIÓN (ACEPTACIÓN) PARA LA EXACTITUD:

Tabla 5.2.1. Validación de la Precisión de Manganeso. Repetibilidad (Intradía)

Tabla 5.2.2. Validación de la Precisión de Manganeso. Repetibilidad (Intradía)

Tabla 5.2.3. Precisión Intermedia en la determinación de Manganeso. (Repetibilidad Interdía)

Tabla 5.2.4. Repetibilidad Intralaboratorio en la determinación de Manganeso.

Muestra: Número 1, Nivel bajo

Tabla 5.2.5. Repetibilidad Intralaboratorio en la determinación de Manganeso.

Muestra: Número 2, Nivel medio

Tabla 5.2.6. Repetibilidad Intralaboratorio en la determinación de Manganeso.

Muestra: Número 3, Nivel alto

No. Ensayos Analista 1 Analista 2 Diferencia

CRITERIO DE DECISIÓN (ACEPTACIÓN PARA LA PRECISIÓN):

5.3.1. Selectividad (Elementos de los Equilibrios Químicos)

El primer parámetro que se evaluará, es el de la selectividad o especificidad del método. Ésta se

5.4. LÍMITE DE DETECCIÓN Y DE CUANTIFICACIÓN.

5.4.1. Los Límites de Detección y de Cuantificación de un método representan una

TABLA 5.4.1 REGRESION LINEAL SIMPLE, LIMITE DE DETECCION Y DE

5.5.1. Se procederá a tomar lecturas por repeticiones en quintuplicado de soluciones

determinación, así como la ecuación de la recta y los parámetros de dispersión

Tabla 5.5.1. Evaluación de la linealidad del sistema en la determinación de Manganeso.

LINEALIDAD/VARIABILIDAD/SISTEMA. Fecha Análisis:

Tabla 5.5.2. Evaluación Estadística de la Linealidad

5.6. Robustez del Método

Para tal fin, el diseño de experimentos correspondió al presentado en la siguiente tabla:

La interpretación de la Tabla es como sigue:

• Las X representan distintos factores bajo estudio (Alícuota, Concentración de ácido,

FACTORES BAJO ESTUDIO

CÁLCULO DE LOS EFECTOS:

ECUACIÓN QUE DEFINE EL COMPORTAMIENTO DEL SISTEMA:

y = 5,09 - 0,025x1 – 0,0094x2 + 1,11E-02x3

6. EQUIPOS Y SU CALIFICACIÓN (INCLUYE TRAZABILIDAD)

6.1. Las masas, para la preparación de las soluciones estándares de titulación, se

Tabla 6.1. ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DE LA BALANZA KERN

Platillo de pesaje (acero inoxidable) mm 85 mm

Tabla 6.2. ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DEL ESPECTROFOTÓMETRO

2. DESCRIPCION DEL MÉTODO

7.1.1. Agua tetra-destilada ultra pura especificación ASTM D1193 Tipo I.

7.3.1. Balones aforados clase A de 1000 mL.

7.4.1. Agitador magnético con barra agitadora recubierta de TFE.

7.5. Condiciones ambientales:

7.5.1. Temperatura ambiental 25 ±1 oC

7.6. Medidas de seguridad para el uso de reactivos:

7.6.1. Para el desarrollo de este procedimiento no es necesario aplicar normas