Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Dialnet ActividadAntioxidanteDeExtractosDeHojasDeBocconiaF 6041492 PDF
Dialnet ActividadAntioxidanteDeExtractosDeHojasDeBocconiaF 6041492 PDF
frutescens L. (Papaveraceae)
Antioxidant activity of extracts from leaves of Bocconia
frutescens L. (Papaveraceae)
Oscar Eduardo Rodríguez Aguirre, William Alejandro Andrade Barreiro, Fabio Eduardo Diaz López.
Resumen Abstract
occonia frutescens es un árbol pequeño, occonia frutescens is a small tree, has deeply
posee hojas profundamente lobuladas y con lobed and serrated edge leaves, flowers are
B borde dentado, las flores están agrupadas en
panículas terminales pendulares, las semillas
B grouped in pendulous panicles terminal,
seeds are shiny black with a fleshy covering of
son de color negro brillante con una cubierta orange color. It is native to America, is known
carnosa de color anaranjada. Es nativa de América, es conocida under their common names: Sarno, Palo Amarillo or Trom-
con los nombres vulgares de: Sarno, Palo Amarillo o Trompeto. peto. Objectives: Evaluate the antioxidant activity of extracts
Objetivos: Evaluar la actividad antioxidante de extractos y and fractions of leaves Bocconia frutescens by DPPH• and
fracciones de hojas de Bocconia frutescens por los métodos ABTS•+ methods. Methods: the fractions obtained by Soxhlet
DPPH• y ABTS•+. Métodos: las fracciones obtenidas por with solvents of different polarity of leaves, were evaluated at
soxleth con solventes de diferente polaridad de hojas, fueron concentrations of 25, 62.5, 125 and 250 mg / LMeOH to deter-
evaluadas a concentraciones de 25, 62.5, 125 y 250 mg/LMeOH mine the antioxidant activity by DPPH• and ABTS•+ methods.
para determinar la actividad antioxidante por los métodos Results: Extracts for the bleaching method DPPH• radical the
DPPH• y ABTS•+. Resultados: Para los extractos por el método Percent Uptake was between 47.6 and 57.7 to 250 mg / LMeOH
decoloración del radical DPPH• el Porcentaje de Captación se and fractions between 45.4 and 54.1 mg / LMeOH, to 250 mg /
encontró entre 47.6 y 57.7 a 250 mg/LMeOH y para las frac- LMeOH. By the method of coloration radical ABTS•+. Extracts
ciones entre 45.4 y 54.1 mg/LMeOH, a 250 mg/LMeOH. Por el for the percentage uptake was found between 89.7 and 99.7
método decoloración del radical ABTS•+. Para los extractos el and fractions between 68.5 and 99.6 mg / LMeOH, to 250 mg
porcentaje de Captación se encontro entre 89.7 y 99.7 a 250 / LMeOH. Conclusions: The fractions of ethyl acetate and
mg/LMeOH y para las fracciones entre 68.5 y 99.6 mg/LMeOH. methanol have a high antioxidant activity to be evaluated by the
Conclusiones: las fracciones de acetato de etilo y metanol ABTS•+ and DPPH• techniques, the technique ABTS•+ present
presentaron una alta actividad antioxidante al ser evaluadas por higher sensitivity.
las técnicas ABTS•+ y DPPH• , la técnica ABTS•+ se presento
mayor sensibilidad. Keywords: Antioxidant, Bocconia frutescens, ABTS By the
method of coloration radical ABTS•+., DPPH•, antioxidant acti-
Palabras clave: Antioxidante, Bocconia frutescens, ABTS•+, vity relative (AAR).
DPPH•, actividad antioxidante relativa (AAR).
en la disminución de color, medida a 517 nm, por acción valente al Trolox (TEAC). El radical posee solubilidad
de un compuesto antioxidante. Dicha actividad también en medios polares y apolares y no es afectado por la
puede medirse por resonancia espín-electrón [6]. fuerza iónica; por tanto, evalúa antioxidantes hidrofílicos
y lipofílicos de extractos de plantas y fluidos biológicos
Autores como Sánchez-Moreno [7], clasificaron el [14] [15] [6]. Este método se basa en la capacidad de
comportamiento de la cinética en términos de tiempo, las moléculas antioxidantes (trolox) para saciar la larga
como: rápida (<5min), intermedia (5-30min), lenta vida ABTS•+, un cromóforo azul-verde con un máximo
(>30min), e introdujeron un parámetro de capacidad de absorción a una longitud de onda de 754 nm.
antioxidante llamado Eficiencia antirradical [8].
ABTS + K2S2O8 ABTS•+
A continuación se describe la reacción modelo de barrido
entre el radical DPPH• y el antioxidante (AH): λMax = 754 nm
DPPH + AH DPPH – H + A• ABTS•+ + ArOH (Antiox) ABTS + ArO• + H+
DPPH• + A• DPPH – A Asimismo, es un método de screening para la evalua-
A • + A • A – A ción de la capacidad antioxidante de distintas sustancias
hidrofílicas y lipofílicas. El radical monocatiónico 2,2-azin-
Un nuevo radical es formado durante la interacción del obis-(ácido3-etilbenzotialzolina–6-sulfónico) (ABTS•+)
radical DPPH y el antioxidante, y las reacciones secunda- es producido por la reacción entre 50 mg de ABTS en
rias conducen a compuestos estables [9]. H2O y 2.45 mg de persulfato de potasio. Dicha reacción
da un compuesto coloreado que al cabo de 12 a 16 horas
El radical DPPH• se preparó al disolver 2 mg en 100 ml es estable, y luego es diluido con metanol hasta llegar a
de metanol; alícuotas de 500 μl de la solución metanólica una absorbancia de 0.7 medida a 754 nm.
de cada muestra son añadidas a 1,5 ml de una solu-
ción metanólica de radicales libres DPPH•. La reacción
se estabiliza a los 5 min, luego de los cuales se mide la Porcentaje de captación
absorbancia a 517 nm y se calcula el porcentaje de inhi- de radicales
bición. Como control de referencia se utiliza quercetina
y ácido ascórbico. El porcentaje de captación se calcula mediante la
siguiente fórmula [16]:
Actividad antioxidante: % de captación = (A inicial – A final / A inicial)
Método de decoloración La actividad antioxidante de los diferentes compuestos
del radical ABTS•+ se mide en función del grado de decoloración que causan
en la solución del radical monocatiónico ABTS•+ o del
Este método fue propuesto en 1993 por Miller [10] y
radical DPPH•. El ensayo de decoloración se basa en la
se basa en la capacidad antioxidante del ABTS•+ para
capacidad que tiene la sustancia a prueba de capturar el
capturar aniones radicales de larga vida. En la prueba el
electrón desapareado del radical o de liberar un protón.
ABTS•+ es oxidado por radicales peróxido, por persul-
fato de potasio [11], por peróxido de hidrógeno [12],
peroxidasa de rábano [13]. u otro oxidante hasta formar Porcentaje de actividad
el catión radical ABTS•+, el cual presenta un intenso antioxidante relativa (% AAR)
color verde-azul, y en la medición los compuestos
con capacidad antioxidante reaccionan directamente El porcentaje AAR es la actividad antioxidante de una
disminuyendo el color del catión radical ABTS•+. Los sustancia comparada con la de un patrón en las mismas
resultados obtenidos se expresan como inhibición y se condiciones, y se calcula con el coeficiente de inhibición
llevan a una concentración relativa de trolox, por ello el (IC 50) del patrón usado (trolox, quercetina o ácido
método se conoce como Capacidad Antioxidante Equi- ascórbico) por el IC 50 de la muestra analizada.
El IC 50 se calcula mediante regresión lineal o por medio ascórbico en 25 ml de metanol, luego se prepararon
de la ecuación de la recta de cada muestra o patrón diluciones con rangos de concentración entre 20 y
de referencia analizado. El porcentaje AAR se calcula 1 ppm.
mediante la siguiente fórmula: • Preparación de trolox ABTS•+: se preparó una
% AAR = (IC50 (m) / IC 50 (R)) X 100 solución stock 2 mM disolviendo 0.005 g de ácido
6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromo-2-carboxílico 97%
Donde IC 50(R) es el coeficiente de inhibición del patrón (trolox) de Acrõs Organic, en 10 ml de metanol,
de referencia usado e IC 50(M) es el coeficiente de la luego se prepararon diluciones con rangos de
muestra analizada. concentración entre 3 y 15 µM.
• Preparación de quercetina ABTS•+: se preparó una
Materiales solución stock 2,6 mM disolviendo 0.02 g de quercetina,
Se utilizó trolox (ácido 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil- en 25 ml de metanol, luego se prepararon diluciones
cromo-2-ácido carboxílico 97%), quercetina y ácido con rangos de concentración entre 3 y 12 µM.
ascórbico como antioxidantes de referencia. El DPPH • Preparación de ABTS•+: se preparó una solución
(2,2-difenil-1-picrilhidrazilo, D-9132), ABTS (ácido stock 5,7 mM disolviendo 0.01 g de ácido ascórbico
2,2-azino-bis(3-etilbenzotiazolin)-6-sulfónico, A-1888), (vitamina C), en 10 ml de metanol, luego se prepa-
metanol, agua destilada. raron diluciones con rangos de concentración entre
3 y 12 µM.
Las soluciones se prepararon de la siguiente forma:
• Preparación del radical DPPH•: se disolvieron 2 mg de
Experimental y resultados
DPPH Sigma-Aldrich en 100 ml de metanol. La solu-
ción se dejó reaccionar a temperatura ambiente en la
oscuridad durante 30 minutos. Luego se prepararon Obtención de extractos
soluciones de trabajo hasta obtener una absorbancia y fracciones de Bocconia
de 0.700 ± 0.050 para todos los casos[12], a una frutescens L. (Papaveraceae)
longitud de onda de 517 nm.
• Preparación del radical ABTS•+: se disolvieron 50 mg
Extracción
de (ABTS), la sal diamónica del 2,2-azino-bis-(3-etIl-
benzotiazolina-6-sulfónico) de Sigma-Aldrich, en 50 la planta colectada en Bogotá fue desecada y molida, para
ml de agua desionizada y luego se adicionaron 2.45 una extracción con etanol en Equipo Soxhlet, (Foto 1)
mg de persulfato de potasio (K2S2O8). La solución se obteniéndose el extracto etanólico total concentrado en
dejó reaccionar a temperatura ambiente en la oscu- Rotaevaporador.
ridad durante 16 horas (Imagen 6). Posteriormente
se prepararon soluciones de trabajo hasta obtener
una absorbancia de 0.750 ± 0.050 para todos los Fraccionamiento sólido-líquido
casos, a una longitud de onda de 754 nm.
A los extractos etanólicos totales de hojas y flores se les
• Preparación de ácido ascórbico C - DPPH•: se realizó un fraccionamiento sólido líquido (percolación)
preparó una solución stock 1000 ppm disolviendo 10 empleando como fase estacionaria sílica gel 60 (MN Kieselgel
mg de ácido ascórbico, en 10 ml de metanol, luego se 60 0.063 0.2 mm/70 –230 mest ASTM), y como fase móvil,
prepararon diluciones con rangos de concentración éter de petróleo. Se continuó con diclorometano, acetato
entre 400 y 1 ppm. de etilo y metanol, obteniéndose las fracciones de éter
• Preparación de quercetina DPPH•: se preparó una de petróleo, diclorometano, acetato de etilo y metanol, las
solución stock 800 ppm disolviendo 20 mg de ácido cuales se concentraron en rotaevaporador.
Concen- Log % de
A A
tración Concen- captación
inicial final
mg/ L MeOH tración de DPPH•
1,25 0,10 0,793 0,561 29,26
6,25 0,80 0,796 0,392 50,75
Actividad antioxidante de los di- 12,5 1,10 0,791 0,330 58,28
ferentes extractos y fracciones
Al igual que con el ácido ascórbico se realizó la curva de
Ensayo de decoloración del radical referencia con la Rutina, siguiendo los datos de la tabla 2,
y se realizó la curva de referencia (Grafica 2) que permite
1-1-Difenil-2- Picrilhidrazilo (DPPH•) verificar la dependencia lineal del porcentaje de captación
La actividad antioxidante de decoloración del radical DPPH• del radical Vs la concentración de la rutina en miligramos
se determinó de acuerdo a los parámetros establecidos: por litro de metanol, obteniéndose un R2 de 0,999.
Para realizar la curva de referencia se prepararon solu- El coeficiente de Inhibición (IC50) se calcula con la ecua-
ciones de ácido ascórbico ( Vitamina C) y Rutina en ción de la recta, la cual se obtiene de la curva de referencia
concentraciones de 1,25, 6.25 y 12.5 miligramos por litro de cada patrón analizado (ácido ascórbico y Rutina) para
de metanol respectivamente, se realizó la medición del el método de decoloración del radical DPPH•. Para el
porcentaje de captación de DPPH•. Los resultados de método de decoloración del radical ABTS•+ se utilizaron
la medición del porcentaje de captación de DPPH• se ácido ascórbico, rutina y trolox. Para calcular el IC50 se
encuentran en la tabla 1 y 12. sustituye (y) por 50, y así calculamos la concentración,
o mediante un análisis de regresión del porcentaje
Tabla 1. Porcentaje de Captación del radical DPPH• em- de captación de DPPH• o porcentaje de inhibición del
pleando Ácido ascórbico. (Fuente: Autor) radical ABTS•+, versus la concentración necesaria de
los extractos, para inhibir el 50% del radical DPPH•+, o
Concen- Log % de
A A ABTS•+ [5].
tración Concen- captación
inicial final
mg/ L MeOH tración de DPPH•
IC50 Ácido ascórbico
1,25 0,10 0,786 0,397 49,49
6,25 0,80 0,784 0,097 87,63 Según la gráfica 1 la curva de referencia del ácido ascór-
bico da una ecuación: y = 17,864ln(x) + 47,677 y un R2
12,5 1,10 0,792 0,097 87,75
= 0,916.
Gráfica 1. Curva de referencia del porcentaje de cap- Actividad antioxidante de los extractos
tación de DPPH• v/s concentración de ácido ascórbico.
(Fuente: Autor). La actividad antioxidante fue evaluada para los extractos
de Bocconia frutescens obtenidos de los solventes de
100,00
diferentes polaridades (Diclorometano, Acetato de Etilo
80,00 y Etanol), en diferentes concentraciones (25, 62,5, 125
y 250 miligramos por litro MeOH), mediante la aplica-
% Capacitación
100
40,00 90
% Captación DDPH*+
30,00 80
y=9,6002In(x)+33,654 70
20,00 R2 =0,99912
60
10,00 50
0,00 40
30
0 2 4 6 8 10 12 14 20
Concentración (mg/Litro MeOH) 10
0
Debido a que la curva se basa en el logaritmo de la 25 62,5 125 250
Concentración (mg/Litro MeOH)
concentración, el resultado obtenido para obtener la
concentración de rutina es: 5,49 miligramos por litro de Extracto diclorometano
Extracto acetato de etilo
metanol. Extracto etanol
tilo
ol
ico
no
o
tilo
tin
tan
tan
tan
tilo
ol
ico
no
o
tilo
orb
tin
eta
ee
tan
Ru
ee
tan
tan
me
orb
.E
me
eta
ee
Ru
ee
od
asc
me
od
.E
me
Ex
oro
oro
od
asc
Fr.
od
tat
Ex
oro
tat
ido
oro
Fr.
icl
tat
icl
ce
tat
ido
ce
icl
.D
Ac
icl
D
ce
.A
ce
A
.D
Ac
D
Ex
Fr.
.A
Ex
Fr.
A
Ex
Fr.
Ex
Fr.
Capacidad antioxidante de extractos Actividad antioxidante relativa (AAR)
y fracciones por el ensayo de DPPH• La actividad antioxidante relativa (AAR), de extractos y
fracciones Wedd, para el método de decoloración del
La capacidad antioxidante significa la captación que
radical DPPH•, se calculó con la ecuación
tiene un miligramo de antioxidante para atrapar radi-
cales libres en un litro de metanol, para este ensayo se El AAR, muestra el comportamiento de las fracciones
evidencia que la mayor capacidad antioxidante de las y extractos analizados comparados con los patrones
muestras evaluadas la tiene la fracción Acetato de etilo usados, los resultados son obtenidos en actividad anti-
con 0.02 miligramos por litro de metanol, la capacidad oxidante relativa. Estos resultados aunque diferentes
antioxidante comparada con la del ácido ascórbico es un para cada uno de los patrones, muestran el mismo orden
88.87% menor. de resultados (Tabla 7). La fracción Acetato de etilo
presentó un 58,53 AAR comparado con el acido ascorbico
Tabla 6. Capacidad antioxidante de extractos y fraccio- y 11,25 de AAR con la Rutina, siendo la fracción analizada
nes calculados por el método de decoloración del radi- con mejor actividad relativa, seguido por la extracto en
cal DPPH•. (Fuente: Autor) Acetato de Etilo con 61,62 de AAR para el ácido ascórbico
y 11,77 AAR para la Rutina.
Capacidad antioxidante
Extracto o fracción
miligramo/ LMeOH La actividad antioxidante relativa entre mayor sea el valor
Extracto. Diclorometano 0 menor es la capacidad antioxidante en concentración de
miligramos por litro de metanol
Fraccion Diclorometano 0
Extracto. Acetato de etilo 0,01 Tabla 7. AAR: actividad antioxidante relativa de extrac-
tos y fracciones calculados por el método de decolora-
Fraccion Acetato de etilo 0,02 ción del radical DPPH•. (Fuente: Autor).
Extracto. Etanol 0
AAR AAR
Fraccion. Metanol 0,01 Extracto o Fracción
Ácido Ascórbico Rutina
Rutina 0,17 Extracto. Diclorometano 402,5 77,35
Acido Ascorbico 0,88 Fraccion Diclorometano 896,11 172,21
En la gráfica 7. Se observa que por el ensayo de decolo- 0.625 - 0.20 0.788 0.577 26.78
ración DPPH•, hay menor actividad antioxidante relativa 6.25 0,8 0,788 0,347 55.96
con respecto a las sustancias de control, verificando que a 12.5 1,10 0,784 0,110 85.97
mayor valor menor capacidad de atrapar radicales libres.
Partiendo de los datos obtenidos del porcentaje de
Gráfica 7. Comparación AAR: actividad antioxidante re- captación del radical catiónico Acido 2,2-azino-bis-3-etil-
lativa de extractos y fracciones de calculados por el en-
benzotiazolin-6-sulfonico (ABTS•+), se construyó una
sayo de DPPH•. (Fuente: Autor).
curva de referencia (Grafica 8) que permite verificar la
1000,0 896,1 dependencia lineal del % de captación del radical ABTS*+
900,0 AAR Acido
ascorbico
Vs la concentración del trolox, obteniéndose un R2 de 0,968,
800,0
700,0 AAR Rutina el cual nos permite calcular el porcentaje de concentración
600,0 efectiva 50 (IC50) por medio de la ecuación de la gráfica 8.
500,0 402,5
400,0 Tabla 9. Porcentaje de captación del radical ABTS•+ em-
296,1
300,0 pleando ácido ascórbico. (Fuente: Autor).
172,2 175,9
200,0
61,2 58,5 56,9
100,0 77,4
33,8 Concen- Log % de
11,8 11,2 A A
0,0 tración Concen- captación
inicial final
o
tilo
ol
no
tilo
tan
tan
tan
eta
ee
ee
me
me
.E
od
M
od
Ex
oro
Fr.
tat
tat
icl
icl
ce
ce
.D
.A
Ex
Fr.
Analisis de resultados Tabla 10. Porcentaje de captación del radical ABTS•+ em-
pleando rutina. (Fuente: Autor).
de la recta.
60,00
40,00
IC50 Trolox
20,00
Partiendo de los datos obtenidos de la captación del 0,00
0 5 10 15 20 25
radical ABTS•+ causado por el trolox, se construyó la
curva de referencia (Grafica 8) que permite verificar Concentración (mg/Litro MeOH)
la dependencia lineal del porcentaje (%) de captación
contra concentración de trolox obteniéndose un R2 de IC50 Ácido Ascórbico
0,968. La curva de referencia de trolox da una ecuación
de recta y= 18,703 lnx + 34,205. Cómo se ha venido calculando el IC50 para los patrones,
el del ácido ascórbico se obtuvo en base a la ecuación de
la recta, de la gráfica 10. y = 19,848 lnx + 43,151 y un
Gráfica 8. Curva de referencia del porcentaje de cap-
tación del radical ABTS•+ v/s concentración de Trolox.
R2: 0,953
(Fuente: Autor).
Gráfica 10. Curva de referencia del porcentaje de capta-
100 ción del radical ABTS•+ v/s concentración de ácido ascór-
bico. (Fuente: Autor).
80
% Capacitación
60 60,00
% Capacitación
y=18,703In(x)+34,205
R2 =0,968 60,00 y=19,848In(x)+43,151
40
R2 =0,953
40,00
20
20,00
0 0,00
0 2 4 6 8 10 12 14 0 5 10 15 20 25 30
Concentración (mg/Litro MeOH) Concentración (mg/Litro MeOH)
% Captación DDPH*+
90 78,4 80 70,3
76,16
68,58
80 71,5 68,4 70
70 55,2 63,1 60
60 49,61
50 38,86 41,84
50 38,5 40,4 36,47
40 34,3 40 32,63
30 30
20 20
10 10
0 0
25 62,5 125 250 25 62,5 125 250
Concentración (mg/Litro MeOH) Concentración (mg/Litro MeOH)
Extracto diclorometano Extracto etanol Extracto diclorometano Extracto etanol
Extracto acetato de etilo Extracto acetato de etilo
x
no
tilo
ico
no
no
no
lo
tin
etil
eta
Tro
orb
Eta
eta
eta
ee
Ru
om
de
od
M
rom
asc
Ex.
Fr.
to
lor
tat
Los resultados se compararon con los patrones usados
do
iclo
eta
Dic
Ace
Aci
Ac
D
para el método de decoloración del radical ABTS•+,
Ex.
Fr.
Ex.
Fr.
el ácido ascórbico (1.55 miligramos por litro MeOH), En la anterior grafica se observa que por este ensayo los
rutina (2.60 miligramos por litro MeOH) y trolox (2.58 extracto y fracciones edvaluados presentan una capacidad
miligramos por litro MeOH), obteniéndose resultados antioxidante baja respecto a las sustancias antioxidantes
que tienen mayor IC50 que el los patrones, concluyendo de referencia.
que la actividad antioxidante es baja en relación al ácido
ascórbico, rutina y trolox.
Capacidad antioxidante de extractos
y fracciones por el ensayo ABTS•+.
Tabla 13. IC50 de extractos y fracciones calculados por
el método de decoloración del radical ABTS•+. (Fuente: La capacidad antioxidante por este metodo es baja compa-
Autor). rada con los patrones para todas las muestras evaluadas,
en la fracción acetato de etilo del extracto acetato de etilo
IC50 DPPH presenta un valor de 0.10 mg/L de metanol, comparada
Extracto o fracción
miligramo/ LMeOH
con el ácido ascórbico que alcanza un 0.65 mg/L.
Extracto. Diclorometano 50,42
Tabla 14. Capacidad antioxidante de extractos y fraccio-
Fraccion Diclorometano 94,55 nes calculados por el método de decoloración del radi-
cal ABTS*+. (Fuente: Autor).
Extracto. Acetato de etilo 43,92
Fraccion Acetato de etilo 36,88 Capacidad antioxidante
Extracto o fracción
miligramo/ LMeOH
Extracto. Etanol 31,75 Extracto. Diclorometano 0,02
Fraccion. Metanol 30,27 Fraccion Diclorometano 0,01
Trolox 2,58 Extracto. Acetato de etilo 0,02
Rutina 2,60 Fraccion Acetato de etilo 0,03
Gráfica 14. Capacidad antioxidante de extractos y frac- Gráfica 15. Comparación AAR: actividad antioxidante
ciones de hojas de calculados ABTS•+. relativa de extractos y fracciones calculados por el ensa-
1,00 yo de ABTS•+. (Fuente: Autor).
0,90
0,80 80,0 AAR Rutina
0,70 0,65
70,0 61,0 AAR Acido
0,60
0,50 0,39 0,38 60,0 ascorbico
0,40 50,0 AAR Trolox
0,30 40,0 32,5
36,4 36,4
0,20 28,3
30,0 23,8
0,10 0,02 0,01 0,02 0,03 0,03 0,03 19,4 19,5 16,9 17,0 14,2 14,3 20,5 19,5
0,00 20,0 12,2 12,3 11,6 11,7
10,0
x
no
tilo
ico
no
no
no
lo
tin
etil
eta
Tro
orb
0,0
Eta
eta
eta
ee
Ru
om
de
od
M
rom
asc
Ex.
no
tilo
l
no
no
no
o
Fr.
to
lor
etil
tat
eta
do
iclo
Eta
eta
eta
ee
eta
Dic
Ace
Aci
om
de
od
M
rom
Ac
D
Ex.
Ex.
Fr.
to
Fr.
Ex.
lor
Fr.
tat
iclo
eta
Dic
Ace
Ac
D
Actividad antioxidante relativa (AAR)
Ex.
Fr.
Ex.
Fr.
Comparación del IC50 de extractos y calculados
La actividad antioxidante relativa de los extractos, por por los métodos de DPPH* y ABTS*+
el ensayo de ABTS•+, la fracción que presento menor
porcentaje de Actividad Antioxidante Relativa (AAR) de los Se determinó la concentración media inhibitoria 50
extractos y fracciones evaluadas fue la del extracto acetato (IC50) de la actividad antioxidante mediante por los
de etilo fracción acetato de etilo con 2.7 de AAR con ensayos DPPH• y ABTS•+ (Tabla 21) de los extractos y
respecto al trolox, 2.5 AAR con respecto a la rutina, y 4,5 fracciones de hojas Bocconia frutescens, para el extracto
AAR con respecto al acido ascórbico, esto indica que para acetato de etilo se encontró el mayor valor de IC50. Por
este ensayo de ABTS•+ las muestras evaluadas presentan el método de DPPH• la fracción metanolica del extracto
una capacidad antioxidante baja, ya que los valores compa- total de etanol presenta el menor valor con un IC50 de
rados con las muestras control son mas altos. 2.34 mg/L de metanol, siendo la fracción mas activa.
Tabla 15. AAR: actividad antioxidante relativa de extrac- Tabla 16. Comparación IC50 en extractos y fracciones
tos y fracciones calculados por el método de decolora- calculados por los métodos de decoloración del radical
ción del radical ABTS•+. (Fuente: Autor). DPPH• y decoloración del radical ABTS•+. (Fuente: Autor).
Por el metodo de ABTS•+ se obtuvieron resultados dife- La comparación de la capacidad antioxidante evaluada
rentes resultados, en este método se presenta mayor por ambos métodos concluye que la fracción metanol, el
sensibilidad ya que lo valores de IC50 son mas bajos extracto total de etanol el método de ABTS•+ presentan
comparados con los del ensayo de DPPH•, presentando. la mayor captación de radicales libres por miligramo de
sustancia en un litro de metanol con un 0,03, esta capa-
Gráfica 16. Comparación IC50 de extractos y fracciones cal- cidad es mayor evaluada frente a Rutina por el método de
culados por los métodos DPPH• y ABTS•+. (Fuente: Autor). DPPH•, esta fracción presenta la mejor capacidad antioxi-
1200
1012,606
IC50 DPPH
miligramo/
dantede las muestras de estudio. [17] [18] [19].
1000 LMeOH
IC50 ABTS
800 miligramo/
LMeOH Grafica 19. Comparación de la capacidad Antioxidan-
600 454,83 te de extractos y fracciones calculados por los ensayos
400 334,61
DPPH• y ABTS•+. (Fuente: Autor).
198,72
200 50,42 94,55 69,18 66,14
43,92 36,88 31,75 30,27 0,1 Capacidad
0 0,09 Antioxidante DPPH
miligramo/ LMeOH
no
tilo
0,08
no
no
no
o
etil
eta
Eta
eta
eta
ee
0,07 Capacidad
om
de
od
M
rom
Antioxidante ABTS
Ex.
0,06
Fr.
to
lor
miligramo/ LMeOH
tat
iclo
eta
0,05
Dic
Ace
Ac
D
Fr.
Ex.
Fr.
tilo
l
no
no
no
o
etil
eta
Eta
eta
eta
ee
Siendo el ensayo ABTS*+ más sensible. Evidenciándose
om
de
od
M
rom
Ex.
Fr.
to
lor
tat
que la fracción metanol del extracto de etanol por el
iclo
eta
Dic
Ace
Ac
D
Ex.
Ex.
Fr.
muestra evaluada presenta mejor actividad antioxidante En la anterior grafica se observa que la capacidad antioxi-
por ambos métodos. dante el comportamiento es similar por ambos métodos,
se evidencia que las muestras con mayor capacidad anti-
Comparación de la capacidad antioxidante de
extractos y fracciones calculados por los ensayos oxidante son en el ensayo der DPPH
DPPH• y ABTS•+ comparadas con la Rutina
Conclusiones
Tabla 17. Comparación de la capacidad Antioxidante de
extractos y fracciones calculados por los ensayos DPPH• Las fracciones acetato de etilo y metanolicas de hojas
y ABTS•+. (Fuente: Autor).
de Bocconia frutescens presentaron una alta actividad
Capacidada Capacidada antioxidante evaluadas por las técnicas ABTS•+ y DPPH•
Antioxidante Antioxidante presentando mayor sensibilidad la técnica ABTS•+.
Extracto o Fracción DPPH• ABTS•+
miligramo/ miligramo/
LMeOH LMeOH Agradecimientos
Extracto. Diclorometano 0 0,02 Agradecemos a a la Facultad de Ingeniería Programa
Fraccion Diclorometano 0 0,01 Ingeniera Ambiental de la Universidad El Bosque.
[2] Vargas, W.G. Guía ilustrada de las plantas de las [12] Villano D, Fernández-Pachón MS, Troncoso AM,
montañas del Quindío y los Andes centrales. Manizales: García-Parilla MC. The Antioxidant Activity of Wines
Editorial Universidad de Caldas. 2002;497 – 498. Determinated ABTS•+ Method: Influence of Simple
dilution and Time. Talanta, 2004; 64:501-9.
[3] Mahecha Vega, G.E.. Vegetación del territorio CAR,
450 especies de sus llanuras y montañas. Corporación [13] Labrinea EP, Georgiu CA. Stopped-Flow Method
Autónoma Regional de Cundinamarca. Colombia. 2004; for Assessment of pH and Timing Effect on the ABTS
565 – 789. Total Antioxidant Capacity Assay. Anal. Chim. Acta
2004;526:63-8.
[4] Berdonces, J.L. (2010). Llorasangre. En Gran enciclo-
pedia de las plantas medicinales: de la A a la Z. 2, 695. [14] Roginsky V, Lissi EA. Review of methods to deter-
mine chainbreaking antioxidant activity in food. Food
[5] Brand-Williams W, Cuvelier ME, Berset C. Use of a Chem. 2005: 235-54.
Free Radical Method to Evaluate Antioxidant Activity.
Lebens. Wiss. u.Technol, 1995; 28:25-30. [15] Krishanti M, Xavier R, Kasi M, Ayyalu D, Surash R,
Sadasivam K, Sreeramanan S. A comparative study on the
[6] Prior RL, Wu X, Schaich K. Standardized Methods for antioxidant activity of methanolic leaf extracts of Ficus
Determination of Antioxidant Capacity and Phenolics in religiosa L, Chromolaena odorata (L.) King & Rabinson,
Foods and Dietary Supplements. J. Agric. Food Chem, Cynodon dactylon (L.) Pers. and Tridax procumbens
2005; 53:4290-302 L. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 2010;
[7] Sánchez-Moreno C, Jiménez-Escrig A, Jiménez- 3(5):348-50
Jiménez I, Saura-Calixto F. Evaluation of Free Radical
[16] Kulisic T, Radonic A, Katalini V, Milos M. Analytical,
Scavening of Dietary Carotenoids by the Stable Radical
Nutritional and Clinical Methods Use of different methods
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl. J. Sci. Food Agric., 2000;
for testing antioxidative activity of oregano essential oil,
80:1686-90.
Food Chemistry, 2004;85:633-40.
[8] Huang D, Ou B, Prior RL. The Chemistry behind
[17] Thaipong K, Boonprakob U, Crosby K, CisnerosZe-
Antioxidant Capacity Assays. J. Agric. Food Chem., 2005;
vallos L, Hawkins D. Comparison of ABTS, DPPH, FRAP,
53:1841-56.
and ORAC assays for estimating antioxidant activity from
[9] Suja KP, Jayalekshmy A, Arumughuan C. Free Radical guava fruit extracts Journal of Food Composition and
Scavenging Behaviour of Antioxidant Compounds of Analysis 2006; 19:669-75.
Sesame (Sesame indicum L.) in DPPH• System. J. Agric.
[18] Floegel A, Dae-Ok K, Sang-Jin C, Sung K, and Ock
Food Chem, 2004; 52:912-15.
C. “Comparison of ABTS/DPPH Assays to Measure
[10] Miller NJ, Diplock AT, Rice-Evans C, Davies MJ, Antioxidant Capacity in Popular Antioxidant-Rich US
Gopinathan V, Milner A. A Novel Method for Measuring Foods.” Journal of Food Composition and Analysis 2011;
Antioxidant Capacity and its Application to Monitoring 24(7):1043–48. 9.
the Antioxidant Status in Premature Neonates. Clin. Sci.
[19] Thang PT, Patrick S, Teik LS, Yung CS. Anti-oxidant
1993; 84:407-12.
effects of the extracts from the leaves of Chromolaena
[11] Re R, Pellegrini N, Protegente A, Pannala A, Yang M, odorata on human dermal fibroblasts and epidermal
Rice-Evans C. Antioxidant Activity Applying and Improved keratinocytes against hydrogen peroxide and
ABTS+• Radical Cation Decolorization Assay. Free Rad. hypoxanthine–xanthine oxidase induced damage, Burns
Biol. Med, 1999; 26:1231-37 2001; 27: 319-27.
Los Autores
William A. Andrade B.
Fabio E. Díaz L.