Es un ensayo virológico empleado para

contar y medir el nivel de infectividad

TITULACIÓN de los bacteriófagos y los virus de
DE FAGOS mamíferos

P RE PA R AC I Ó N
DE ME DI O S
Un stock de fagos virulentos y un
Agar triptona cultivo de células huésped
Caldo de tripton susceptible
Agar blando de triptona
 Técnica de agar de doble capa

Se preparan
(DLA)
 mezcla de pocas partículas de
Se requiere fago (stock diluido)
a) Cinco tubos de agar blando de triptona: 10-  una gran cantidad de células
5, ,
10-6 ,
10-7 , 10-8 10-9 huésped en un agar blando forma
b) Cinco placas de agar duro de triptona: 10-5 , la capa superior.

10 ,-6
10 , -7
10 , -8
10 -9

c) Diez tubos de caldo de triptona: 10-1 a 10-10 Diluciones de 10 veces

en posición invertida
del stock de fagos.
durante 24 horas a 37
˚C
Las placas se

Cuando una partícula de fago se adsorbe a incuban

una célula susceptible, penetra en la

célula, se replica y libera nuevas
partículas de fago que infectan a otras las células susceptibles de

bacterias en la vecindad de la célula Escheria coli se multiplican

huésped inicial. rápidamente y producen
un césped de crecimiento
confluente en el medio.

El crecimiento o la propagación de los

nuevos virus se restringe o limita a las
células vecinas por el gel
 Las células destruidas producen áreas circulares únicas no turbias
llamadas placas en el césped bacteriano, donde no hay crecimiento
de bacterias porque la progenie del fago que se origina a partir de
partículas de virus individuales se ha multiplicado lo suficiente como
para matar bacterias en un área fácilmente visible. Este ciclo se repite hasta que se haya
destruido un gran número de
bacterias.

Los tintes que tiñen las células vivas se usan con

la placa se vuelve demasiado grande para ser
visible a simple vista. Cada placa representa la
lisis de un cultivo bacteriano infectado con
fagos y se puede designar como una unidad
formadora de placa (PFU) y se utiliza para
cuantificar el número de partículas de fagos
infecciosos en el cultivo.
frecuencia para mejorar el contraste entre las
placas y las células vivas. Por lo tanto, las células
muertas en la placa aparecerán sin manchas
contra el fondo coloreado. Solo los virus que
tienen la capacidad de causar daño visible a las
células se pueden analizar de esta manera.

 Encuentre una placa que tenga entre 30 y 300 placas y

cuente el número exacto de placas en esa placa.

 (pfu/ml) de su reserva viral.

Luego use la siguiente fórmula

para determinar el título