COMISIÓN B1

BIOLOGIA CELULAR/MICROSCOPIA

Valoración de técnicas de coloraciones topográficas en preparados histológicos: Corte

transversal de intestino delgado teñido con H/E
Flores González, María Luz; Jofre, María Milagros; Ludueña Malva Azul; Miller, Franco Thomas
Profesora Alioni, Ana Magdalena

RESUMEN muestra de una forma específica, siguiendo una serie

de pasos. Resultados: La utilización del MO y la
Introducción: El intestino delgado es un órgano que se
aplicación de coloraciones topográficas nos permitió
encuentra en el sistema digestivo de todos los
evidenciar la morfología y las regiones básicas y acidas
organismos pluricelulares. La mayor parte de la
de las células que conforman los tejidos presentes en
digestión y la absorción se realizan es este órgano.
el intestino delgado. Los componentes que se
Está formado por mucosa, submucosa, capa muscular
destacan son el núcleo, el citoplasma de la célula y la
externa e interna y serosa. La motilidad
matriz extracelular del tejido. Hay que tener en
gastrointestinal esta dada por las contracciones
cuenta la importancia de los distintos aumentos que
musculares (movimientos peristálticos y movimientos
presenta el microscopio, ya que permite apreciar las
de segmentación). El objetivo del presente trabajo es
diferenciaciones de coloración en el preparado.
indagar y profundizar sobre la morfología y función de
Gracias a ellos se pudieron observar los distintos
los diferentes tejidos que componen el intestino de
tejidos presentes en el órgano y las células que
una rata a partir de la observación de una muestra
componen cada uno. Conclusiones: Se considera que
teñida con hematoxilina/eosina. Materiales y
el microscopio óptico ha sido y es de gran utilidad en
métodos: Para que este material pueda ser observado
el campo de la biología, permitiendo analizar en
con microscopio óptico, es necesario preparar la
detalle las estructuras de la materia viva.

INTRODUCCIÓN el ser humano, es de longitud intermedia. El primer

segmento del intestino delgado se denomina duodeno
A partir de la observación con MO de un preparado
y es donde ocurre la mayor parte de la digestión,
histológico de intestino delgado de rata se pueden
luego se encuentran el yeyuno e íleon, donde tiene
reconocer los tejidos: epitelial, conectivo, muscular y
lugar la absorción.
nervioso que componen dicho órgano y las
estructuras celulares que se agrupan para conformar El proceso digestivo del intestino ocurre en las criptas
el nivel tisular. intestinales donde células secretoras liberan moco,
agua y varias enzimas que continúan con la digestión.
El intestino delgado es un órgano que se encuentra en
El moco lubrica el contenido intestinal, el agua lo
el sistema digestivo de todos los organismos
hidrata y las diferentes enzimas continúan con la
pluricelulares. Es un largo tubo enrollado de
digestión del alimento que llega al intestino.
aproximadamente 6 metros de longitud y 2,5 cm de
diámetro. La mayor parte de la digestión, y casi toda
la absorción, se realizan en este órgano. La longitud
del intestino está correlacionada con el tipo de dieta:
los animales herbívoros poseen un intestino delgado
largo, los carnívoros cortos, y en los omnívoros, como

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TRASVERSAL DE INTESTINO DELGADO DE ANIMAL TEÑIDO CON H/E
El intestino está constituido por:
-Mucosa, compuesta por un epitelio simple, lámina
basal bajo la cara basal del epitelio, tejido conectivo y
en ciertas zonas se puede observar una delgada capa
externa de músculo liso.
-Submucosa, constituida por el tejido conectivo,
glándulas, fibras nerviosas, vasos sanguíneos y
linfáticos.
-Capa muscular externa, está conformada por dos
capas de músculo liso. Una interna de orientación
radial y otra externa de orientación longitudinal.
-Por último, se encuentra la serosa, constituida por
una cubierta externa de tejido conectivo y epitelio
escamoso estratificado.
La motilidad gastrointestinal está dada por las
contracciones musculares. Estos movimientos pueden
ser peristálticos, similares a ondas de contracción que
se propagan a lo largo del tubo digestivo, que se
encargan de mezclar y promover el movimiento del
contenido alimenticio hacia la región distal. Y
movimientos de segmentación (no propulsivos), cuya
función principal es la mezcla adecuada del quimo con
jugos digestivos, de manera que, al ser expuesto a la
mucosa, promueva una absorción adecuada de
nutrimentos, agua y electrólitos.
Estos movimientos son controlados por el sistema
nervioso entérico (SNE).
El SNE tiene dos componentes principales. Uno de
ellos, el plexo submucoso (Meissner), situada entre la
capa interna de la capa muscular circular y la
submucosa. Su función principal es la regulación de
funciones de digestión y absorción a nivel de la
mucosa y de los vasos sanguíneos, de acuerdo con la
estimulación producida por los nutrientes. El
segundo, es el plexo mientérico (Auerbach), situado
entre las capas musculares, circular y longitudinal, a
lo largo de todo el tubo digestivo. Su función
principal es la coordinación de la actividad de las
capas musculares.
Para la observación de este complejo órgano a través
de un microscopio óptico, se necesitan realizar una
serie de pasos para la preparación correcta de la
muestra.
Se obtiene la muestra, se fija, se incluye para poder
realizar cortes del material. Luego se coloca sobre un
portaobjetos y es coloreada para permitir la
observación en MO. Esta coloración puede ser de
diferentes formas, según lo que se desee ver. En esta
oportunidad nos centraremos en coloraciones
topográficas, las cuales permiten observar detalles
estructurales de la muestra, principalmente la
coloración Hematoxilina/Eosina (H/E). Posterior a la
coloración se colocará un cubreobjetos (adherido con
una gota de liquido de montaje) y la muestra estará
lista para ser observada.
El objetivo del presente trabajo es indagar y
profundizar sobre la morfología y función de los
diferentes tejidos que componen el intestino de una
rata a partir de la observación de una muestra teñida
con hematoxilina/eosina.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizó un preparado histológico de intestino de
rata que fue preparado de la siguiente manera:
Obtención del material: Es el primer paso de la
técnica, presenta una gran importancia. La muestra se
obtuvo a través de una autopsia.
Fijación: El material se fija para detener los procesos
vitales de las células y evitar que se inicien los
cambios autolíticos post-mortem que llevarían a la
alteración del material. En este caso el material fue
fijado con formol.
Inclusión: Generalmente la muestra no es lo
suficientemente delgada para poder ser observada al
microscopio, y es necesario cortarla en secciones
finas. Para poder realizar los cortes se lo debe
endurecer previamente mediante inclusión o
congelamiento para evitar daños que arruinen la
muestra. Para los materiales biológicos que serán
observadas con MO, uno de los materiales más
utilizados para la inclusión es la parafina.
Para la inclusión en parafina, el material después de
fijado debe ser deshidratado, colocándolo
sucesivamente en soluciones alcohólicas de
concentración creciente: 70, 90,95 y 98 %. Luego de la
deshidratación se coloca la muestra en xilol y
posteriormente se podrá utilizar la parafina.
Corte: Este procedimiento se lleva a cabo con
aparatos denominados micrótomos, que realizan
cortes de un grosor controlado con cuchillas
metálicas. Una vez que se consigue la muestra con el
RESULTADOS
La aplicación de coloraciones topográficas nos
permitió evidenciar fácilmente la morfología, y las
regiones básicas y acidas de las células que conforman
los tejidos presentes dentro del preparado
permanente del intestino delgado de la rata, siendo
estos; tejido epitelial, tejido conectivo, tejido
grosor adecuado esta es colocada en un portaobjeto
(montaje inicial) y se procederá con la tinción del
corte de intestino delgado.
Coloración: El método de coloración puede variar
según lo que se desea observar; existe una amplia
variedad de colorantes que tiñen ciertas partes del
material. En este caso nos centraremos en
coloraciones topográficas, las cuales permiten
distinguir detalles estructurales de células y tejidos
(detalles morfológicos). Para proporcionar un
adecuado contraste a las estructuras, se utiliza un
colorante ácido y uno básico. Algunas coloraciones
topográficas son: Azul de Metileno, Azul de Toluidina,
Hematoxilina/ Eosina, entre otras. En esta ocasión la
muestra fue teñida con H/E. La eosina es un colorante
ácido, tiñe color rosa particularmente las proteínas
(estructuras anfóteras) que se encuentran en el
citoplasma y matriz extracelular, la hematoxilina es un
colorante básico y tiñe de azul o violeta soluciones
ácidas (núcleos y regiones del citoplasma con
abundante RER).
Finalmente, una vez que la muestra se encuentra
teñida se coloca un cubreobjetos sobre ella,
adhiriéndolo con una gota de Bálsamo de Canadá o
sustancia similar, para protegerla.
Para observar la muestra se utilizó un microscopio
óptico con doble ocular que tenia objetivos de 4X,
10X, 40X y 100X. Este último es un objetivo de
inmersión, necesita de un aceite de inmersión para
poder ser utilizado, de lo contrario la refracción de la
luz impedirá la observación correcta de la muestra. En
esta ocasión utilizamos los tres primeros objetivos.
muscular y tejido nervioso. Los principales
componentes que se destacan a través de estas
coloraciones son el núcleo, citoplasma de la célula y la
matriz extracelular del tejido. El núcleo de las células
tiene una afinidad tintórea basófila y se teñirá de azul
(se observa violeta) con la hematoxilina (colorante
básico) ya que las cargas positivas de este colorante se
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atraerán con las cargas negativas de la sustancia acida permite desplazar la comida del intestino y también
(núcleo). Tanto citoplasma como la matriz extracelular poder absorber los nutrientes que esta contenga.
se teñirán de rosa con la eosina (colorante ácido)
Finalmente observamos el tejido nervioso presente
debido a sus afinidades acidófilas al ser sustancias
entre el tejido muscular interno y externo. Logramos
bases formadas por proteínas, las cuales tienen cargas
ver un plexo nervioso mientérico (Auerbach). La
positivas que son atraídas por las cargas negativas del
morfología de este tejido era totalmente distinta a los
colorante acido.
demás, los núcleos de las células se encontraban muy
Se debe destacar la importancia de los diferentes juntos, por lo que al observar esta zona con el
aumentos utilizables en el microscopio para apreciar aumento 40X parecía que dichas estructuras basófilas
las diferenciaciones de coloración en el preparado. tuvieran un tamaño mucho mayor en comparación
Primero, en un aumento de 40 veces (4X), con los núcleos de los otros tejidos.
observamos la generalidad de este, diferenciando los
tejidos (la forma en la que se ordenan en el intestino),
vellosidades y la luz intestinal. En el aumento de 100
veces (10X) se reconocieron parámetros semejantes,
pero con un nivel de detalle mayor, ya no se
observaba la muestra completa si no partes de la
misma con mayor zoom. Al utilizar un aumento de 400
veces (40X) se logró apreciar tipo de células, color con
que se tiñen sus estructuras, tamaño y cantidad de
cada tejido antes mencionado, la disposición en la que
se presentaban las células que formaban cada tejido y
hasta llegamos a observar zonas que presentaban
vasos sanguíneos.

En el tejido epitelial observamos células contiguas

unidas entre sí, sin presencia de matriz extracelular
entre ellas. Las células epiteliales poseen sus dominios
apicales hacia la luz del intestino y sus núcleos
desplazados hacia los dominios basales de las mismas.
También logramos observar células calciformes
especializadas en la secreción. Las cuales se
reconocen por la presencia de sus vesículas de
secreción bajo la cara apical de la célula. Los
colorantes no tiñen estas vesículas por lo que se
observan pequeñas “burbujas” dentro de la célula.

En el tejido conectivo se aprecian células (se observan

sus núcleos teñidos de violeta) rodeadas por una gran
cantidad de matriz extracelular con una tinción rosa
debido a la gran cantidad de proteínas secretadas por
las células de este (los fibroblastos, por ejemplo, son
células que se encuentran en el tejido conectivo y se
encargan de secretar fibras de colágeno).

En este preparado permanente de intestino delgado

se aprecian dos capas de tejido muscular liso, una en
forma longitudinal (núcleos violetas alargados) y otra
en forma transversal (núcleos violetas circulares).
Destacamos la morfología alargada de la célula
muscular que le otorga su carácter contráctil y le
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I FOTOGRAFÍAS: PREPARADO HISTOLÓGICO DE INTESTINO DE RATA H/E (10X)

IIFOTOGRAFÍA PREPARADO
HISTOLÓGICO INTESTINO: TEJIDO
EPITELIAL Y CONECTIVO (40X)

IVPREPARADO HISTOLÓGICO: TEJIDO IIIPREPARADO HISTOLÓGICO

NERVIOSO "PLEXO NERVIOSO INTESTINO: TEJIDO MUSCULAR (40X)
MIENTÉRICO" (40X)
Estructuras Afinidad Colorante con Fundamentación de la afinidad tintórea
celulares Tintórea que se tiñe
Núcleo de una Basófila Hematoxilina El núcleo es una sustancia ácida, posee cargas
célula epitelial (Colorante negativas, que se atraen con las cargas
básico) positivas de un colorante básico.

Fibras de la Acidófila Eosina Las fibras proteicas que forman la matriz

matriz (Colorante extracelular son anfóteras, ante un colorante
extracelular del ácido) ácido actuaran como sustancias básicas y
tejido conectivo viceversa. En este caso actúan como básicas.
Núcleo de una Basófila Hematoxilina Sustancia ácida con cargas negativas. Se teñirá
célula muscular (Colorante con un colorante básico que posee cargas
básico) positivas.

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Citoplasma de Acidófila Eosina En el citoplasma se encuentran proteínas,

una célula (Colorante estas son anfóteras. Ante un colorante ácido
muscular ácido) actuarán como sustancias básicas.
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CONCLUSIONES

El microscopio óptico ha sido y es de gran utilidad en

el campo de la biología, ya que permite analizar en
detalle las distintas estructuras de la materia viva.
Este instrumento nos permitió observar las
estructuras de las células y la disposición de los cuatro
tejidos que componen un intestino delgado de rata,
logrando reconocer las distintas funciones y
morfología de cada uno de ellos.

Poder observar con un amplio nivel de detalle dichas

estructuras fue posible gracias a la presencia de las
coloraciones topográficas y los distintos aumentos
disponibles en el microscopio óptico. Los colorantes
utilizados fueron hematoxilina/eosina que nos
permitieron reconocer y diferenciar los núcleos y
citoplasmas. Y con la ayuda de los distintos aumentos,
se logró observar con mayor detalle, las células y los
tejidos que conforman dicho órgano.

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BIBLIOGRAFÍA 5. DIANA GALLEGO, NOEMÍ MAÑÉ, VÍCTOR GIL,

MIRIAM MARTÍNEZ-CUTILLAS Y MARCEL
1. ALBERTS B, BRAY D, HOPKIN K, JOHNSON A,
JIMÉNEZ. Mecanismos responsables de la
LEWIS J, RAFF M, ROBERTS K, WALTER P.
relajación neuromuscular en el tracto
Introducción a la Biología Celular. 3era ed.
gastrointestinal. Rev. Esp. Enferm. Dig. 2016,
Madrid: Médica Panamericana S.A.; 2011
Vol. 108, N.º 11, pp. 721-731.
2. CORNEJO LS, ARRIAGA A, CAMBIASSO MJ,
6. DR. JORGE OSWALDO ROMERO-TRUJILLO,
MARTÍNEZ, LD. Cuadernos de Biología. 5ta ed.
DRA. NADINE FRANK-MÁRQUEZ, DR.
Córdoba; Facultad de Odontología, UNC;
ROBERTO CERVANTES-BUSTAMANTE, DR.
2005.
JOSÉ FRANCISCO CADENA-LEÓN, DRA. ERICKA
3. CURTIS H, BARNES NS, SCHNEK A, MASSARINI
MONTIJO-BARRIOS, DRA. FLORA ZÁRATE-
A. Biología. 7ta ed. Buenos Aires: Médica
MONDRAGÓN, DRA. JOSEFINA MONSERRAT
Panamericana S.A.; 2008.
CÁZARES-MÉNDEZ, DR. JAIME RAMÍREZ-
4. CLAUDE A. VILLEE. Biología 7ta ed. Editorial
MAYANS. Sistema nervioso entérico y
Universitaria de Buenos Aires
motilidad gastrointestinal. Acta Pediatr. Mex.
2012;33(4):207-214