I.

INTRODUCCIÓN

La microbiología ha sido tradicionalmente una disciplina manual. A diferencia de

otras áreas del laboratorio, la automatización de ésta no ha sido fácil,
principalmente debido a la gran variabilidad en el tipo de muestras,
diversidad y número de microorganismos a identificar y un volumen
relativamente menor de exámenes (en comparación con el número de
exámenes químicos y hematológicos), que hace menos rentable la incorporación
de nuevas tecnologías.

Sin embargo y a pesar de estas consideraciones, hay evidencia científica

creciente que demuestra que el pronóstico de un paciente crítico infectado,
depende del inicio precoz con el antimicrobiano adecuado, para lo cual es
fundamental que el laboratorio sea capaz de proveer identificación microbiana
confiable y oportuna, así como reportes de susceptibilidad estandarizados y
reproducible.

Es así que durante muchos años, la identificación de microrganismos ha

dependido de la producción local de medios de cultivos para siembra y realización
de pruebas bioquímicas, con la consiguiente menor estandarización de estas
pruebas. Asimismo, el antibiograma ha sido realizado clásicamente por
técnicas de difusión manual, que si bien cada vez se han estandarizado mejor y
están en la actualidad adecuadamente validados, es una técnica laboriosa y
que requiere de más tiempo para obtener resultados que las técnicas
automatizadas disponibles actualmente.

En cuanto a la identificación bacteriana y los estudios de susceptibilidad,

se ha desarrollado un gran número de técnicas rápidas,
semiautomatizadas o automatizadas. Estos equipos aportan estandarización y
velocidad, pero no han logrado resolver toda la problemática que el estudio
microbiológico, por lo que aún es necesario complementar su uso con pruebas
manuales. En relación a la identificación, la incorporación del análisis
proteómico de las especies bacterianas o fúngicas aisladas, ha cambiado el
paradigma microbiológico en los últimos años.

Si bien el laboratorio de microbiología involucra además técnicas de

diagnóstico inmunológico (tanto para conocer el estado inmune de un
paciente, como determinar si hubo contacto reciente o antiguo con algún
patógeno específico), técnicas rápidas para detectar presencia de antígenos
virales o bacterianos en diversas secreciones o muestras, y técnicas de biología
molecular, que permiten detectar secuencias de ácidos nucleicos propias de cada
patógeno, así como factores de virulencia específicos, en el presente
documento no se abordará estas metodologías, que sin duda también han
sido objeto de grandes evoluciones hacia la automatización, circunscribiendo la
discusión solamente al ámbito de identificación y estudio de susceptibilidad
de microorganismos bacterianos y fúngicos por métodos fenotípicos.
 II. MARCO TEÓRICO

EQUIPOS AUTOMATIZADOS EN MICROBIOLOGIA

Identificación y Susceptibilidad
Sistemas Automatizados en Microbiología que permiten determinar la
Identificación de bacterias y levaduras así como la susceptibilidad antimicrobiana.
Equipos

 VITEX System
 MicroScan WalkAway
 Phoenix
 Sensitre ARIS
 Mini API

Métodos automatizados de estudio de susceptibilidad in vitro

VITEK System

El sistema VITEK es un sistema automatizado de identificación bacteriana y

estudio de sensibilidad antimicrobiana.
La identificación de las bacterias se basa en la inoculación de una suspensión de
microorganismos en tarjetas con determinados paneles de reacciones
bioquímicas.
La sensibilidad antimicrobiana se lleva a cabo en forma similar a través de tarjetas
que contienen diluciones estandarizadas de distintos antibióticos correspondientes
a los puntos de corte de sensibilidad establecidos por NCCLS.

El sistema Vitek es un sistema automatizado, fabricado por bioMerieux, Está

basado en el principio básico de fotometría.
Las bacterias utilizan un substrato que produce un cambio de color y densidad
óptica. Estos cambios son detectados por diodos emisores de luz y detectores
fototransistores.
Este sistema está compuesto por un módulo de filtro-sello, una incubadora con
lector, un módulo de computadora, una terminal de datos y una impresora. Este
sistema es capaz de identificar bacterias gram positivas y gram negativas,
anaerobios y levaduras. También realiza pruebas de susceptibilidad
antimicrobiana.
Es capaz de realizar “Tamizajes” de orina con enumeración e identificación.
El sistema identificará Enterobacteriaceae en 4-6 horas y bacilos que no
fermentan en 6 a 18 horas.
MicroScan WalkAway

Presenta base de datos con información que incluye: Lista de 470 especies
(Bacterias y levaduras) lista para controles de calidad con cepas ATCC y lista
amplia de antibióticos.
Utiliza un panel, que es una placa de 96 pocillos que contiene en forma
deshidratada de 20 a 32 pruebas bioquímicas para la Identificación (ID) y 17 a 33
antibióticos para MIC o BP.
Estos instrumentos están basados en un principio de fotometría- fluorometría.
Están disponibles tres sistemas:

 TouchSCAN-SR: Lector de panel semiautomatizado con sistema de manejo

de datos. El lector leerá el panel manualmente y el sistema proveerá
automáticamente una interpretación.
 AutoSCAN-4: Lector de panel automatizado con sistema de manejo de datos.
El usuario carga el panel y el sistema leerá e interpretará el panel
automáticamente
 AutoSCAN- WA: Sistema completamente automatizado con automatización
libre de supervisión y sistema de manejo de datos.

Tipos de paneles

 Cromogénicos Convencionales:(Gram positivos y Gram negativos. (ID 18 a

24hr).
Principio colorimétrico: Desarrolla colores en la serie bioquímica y turbidez en
el antibiograma.

 Cromogénicos rápidos: Permite la identificación en 04 horas, mide la

actividad enzimática formadas en el aislamiento primario: Haemophilus y
Neisseria, levaduras, anaerobios.
Rápidos: fluorométricas de 6 a 8 horas.
EQUIPOS - LINEA MICROSCAN

 AutoScan-4

Equipo semiautomatizado para identificación bacteriana y susceptibilidad

antimicrobiana, utiliza metodología colorimétrica.

Espectrofotómetro modificado con 6 longitudes de onda y sistema de fibras ópticas

para la lectura de los paneles en apenas 5 segundos

 Walk Away 40/96

Equipo automatizado para identificación bacteriana y susceptibilidad

antimicrobiana
Presenta dos metodologías: colorimétrica y fluorométrica, contiene incubadora,
pipeta de reactivos, lectora fotométrica e impresora.

Además lectora de código de barras que identifican al panel en cualquier posición.

Capacidad de procesar simultáneamente 40 paneles (Walkaway40) o 96 paneles
(Walkaway 96).
Los paneles conteniendo pocillos múltiples son inoculados manualmente con un
dispositivo especial y luego colocados en la incubadora, el sistema dispensa
reactivos y realiza lecturas periódicas

Los equipos vienen acompañados de un completo programa de Gerenciamiento

de datos denominado LabPro.

Sistema de gestión de datos

Realiza búsquedas multíparamétricas, informes epidemiológicos completos,

flexibilidad, supresión de antibióticos, finalización automática, copia de seguridad
en disco, Normas CLSI.
Phoenix

Sistema automatizado de identificación y sensibilidad, comunicación con el equipo

por iconos.
Capacidad de incubación de 100 paneles, sistema de fácil inoculación
Control y calibración interna, no requiere mantenimiento.
Lectura: convencional, fluoro génico y cromogénico.
Medidas cinéticas de las reacciones: cada 20 min.
Funcionamiento autónomo, incluyendo el sistema experto BDXper, conexión al
sistema Epicenter, conexión al Sistema de Gestión de Laboratorio.
Insumos
 Panel y sellador: bandeja de poliestireno, moldeada sellada y
autoinoculante. 136 pozos: 51 ID y 85 en AST.
 Caldo Phoenix ID y AST
 Indicador Azul de Alamar
 Estación de Inoculación
 Recipiente para paneles
 Nefelómetro Crystal Spec o BD Phoenix Spec.
 Pipeta 25 ul con micropuntas
Identificación: 45 substratos: convencionales, fluorogénicos y cromogénicos,
Carbohidratos, fuentes de carbón o Esculina.
Sin adición de reactivos
5 bases de datos
Resultados a 2, 3,4, 6 y 12 hrs.
Información de valores de confianza y reacciones de los substratos.
B-Lact en la parte ID para los paneles G+.

VENTAJAS

 Para el Paciente

 Resultados rápidos: Esencial para pacientes de enfermedades críticas,

terapias más precisas, reducir el tiempo de estadía.
 Alternativas de antibióticos.
 Reducir combinación de terapias.
 Reducir la Infecciones Intrahospitalarias.

DESVENTAJAS

 Se debe todavía aislar las bacterias y preparar una suspensión bacteriana para
el inóculo.
 Puede ser más caro el uso de insumos descartables.
 Utiliza baterías de sensibilidad con antimicrobianos fijos, debiendo
obligadamente adoptarse algunos de los paneles.
 Incapacidad de testar todos los grupos bacterianos clínicamente importantes.
 Sobre los resultados de las pruebas de susceptibilidad se han reportado
diversos problemas, los fabricantes deben incluir sus limitaciones para algunas
combinaciones droga - microorganismo.
 El control de calidad es dependiente del uso de cepas ATCC especificadas por
el fabricante, además NCCL no provee estándares al respecto.

METODOS DE HEMOCULTIVOS

MM AA NN UU AA LL EE SS LL EE CC TT UU RR AA DD EE CC OO 22 PP RR EE SS IOIO NN DD EE GG AA SS EE SS

SS IMIM PP LL EE SS CC OO NN CC EE NN TT RR AA CC IOIO NN RR AA DD IOIO MM EE TT RR ICIC OO SS NN OO RR AA DD IOIO MM EE TT RR ICIC OO SS

MM EE DD IOIO LL IQIQ UU II DD OO LL ISIS ISIS CC OO NN CC EE NN TT RR AA CC IOIO NN ININ TT EE RR MM ITIT EE NN TT EE SS CC OO NN TT II NN UU OO SS

MM EE DD IOIO BB IFIF AA SS ICIC OO SS LL ISIS II SS CC EE NN TT RR IFIF UU GG AA CC II OO NN

ININ DD II CC AA DD OO RR EE SS DD EE GG AA SS

SISTEMAS AUTOMATIZADOS PARA HEMOCULTIVOS

Aparecieron en USA hace tres décadas.

BACTEC 460 (Becton Dickinson Biosciences), el medio contenía CH con C14, al
desarrollar el mcog, los substratos eran utilizados con el C14 y liberado como
CO2, que se detectaba.

Bactec 460®

 Bactec 460® (Becton Dickinson) radiométrico fue el primer sistema comercial

de Hemocultivos automático. Utiliza substratos marcados con 14C que al ser
metabolizado por los microrganismos libera 14CO2al medio, que difunde a la
atmósfera del frasco. En esta atmósfera se mide periódicamente el nivel de
 14CO2 y se expresa como un índice de crecimiento cuando se compara con
los niveles de CO2 en frascos de control.

 La lectura está totalmente automatizada y se realiza por medio de una cabeza

móvil provista de dos agujas que perforan los tapones de goma de los frascos.
Su principal inconveniente es el manejo y posterior eliminación de los residuos
radiactivos. En la actualidad ha sido superado por otros sistemas y sólo se
utiliza para el cultivo de micobacterias.

SIISTEMAS AUTOMATIZADOS PARA HEMOCULTIVOS

PRIMERA GENERACION

Detección de c02 por método radiométrico y no radiométrico, Lecturas diarias por

7 días, subcultivos en negativos innecesarios, detección precoz.

Sistemas de Monitoreo Continuo de Hemocultivos

Monitoreo “continuo”, agitación e incubación continuas, automatizado, protocolos

de 4-5 días, menor mano de obra, recuperación mas rápida.

A partir de 1990 aparecen los Sistemas de Monitoreo Continuo de Hemocultivos.

El sistema Bact/Alert (bio Mériux) con capacidad para 240 frascos y detecta CO2
de manera colorimétrica.
El sistema ESP (Trek Diagnostic Systems), monitorea los cambios de presión en
el frasco para gases como: O2, H2, N y CO2, producidos o consumidos por los
microorganismos.

SISTEMA BACTEC 9000

Presenta tres formatos el: 9240 (240 fcos), 9120 (120 fcos) y 9050 (50fcos).
En la base de cada frasco existe un sensor de CO2 y mediante un mecanismo de
sensibilidad fluorescente detecta el crecimiento del microorganismo al generar
CO2.

Tiene varios medios:

 Aeróbico y Anaeróbico: caldo de caseína soya con resinas removedoras de
antibióticos

SISTEMA BACTEC

 Medios pediátricos con resinas removedoras de antibióticos.

 Medio Myco/F-lytic diseñado para mejorar la detección de hongos y
mycobacterias pero también soporta el desarrollo de bacterias patógenas.
 El sistema realiza lecturas cada 10 min.
 Alarmas de positividad luminosa y sonora

Bactec 9240

Fundamento: Presenta 240 fcos.

Cuando los microorganismos están presentes, metabolizan los nutrientes del
medio de cultivo, produciendo CO2. Un tinte en el sensor reacciona con el CO2.
Este mide la cantidad de luz que es absorbida por un material fluorescente en el
sensor. El fotodetector del instrumento mide el nivel de fluorescencia, lo cual
corresponde a la cantidad de CO2 producido. Esta medición es interpretada por el
sistema de acuerdo a los parámetros positivos preprogramados.
Sistema computarizado Bactec

a) Falso Positivo: Se refiere a las botellas que el instrumento llama positivas,

pero que no muestran microorganismos en el frotis ni en el subcultivo.
b) Falso Negativo: Ocurre cuando el instrumento no detecta crecimiento, pero el
organismo crece en el subcultivo.

Bac/alert

Fundamento: El sistema utiliza un sensor colorimétrico y una luz reflejada para

monitorear la presencia y producción de CO2 disuelto en el medio de cultivo. Si
existen microorganismos en la muestra, se genera CO2 producto de que los
microorganismos metabolizan los substratos del medio de cultivo. Debido a esto,
el sensor gas-permeable instalado en el fondo de cada frasco de cultivo cambia de
verde a amarillo, indicando que está positivo. Esta positividad es captada por el
sensor del instrumento, que activa una alarma y se enciende una luz en la celda
del frasco respectivo.

Sistemas Automáticos de Hemocultivos

.

Características de los sistemas automáticos de monitorización continua de

Hemocultivos
Procedimientos de Hemocultivos

Positivos
Se realiza el frotis por Gram y transplante a Agar sangre y agar chocolate.
Si el frotis del frasco de hemocultivo revela la presencia de microorganismo se
hace un informe escrito en el que se indica la morfología y reacción al Gram del
microorganismo, anotando que se continuará con la identificacion etiológica y el
antibiograma.

Negativos

El formulario de hemocultivo se reporta y envía a la sala como “Negativo en 96” o

“No hubo crecimiento en 96h”, si se cumple ésta condición. 

VENTAJAS

 Mayor sensibilidad que los métodos convencionales.

  Rapidez en el diagnóstico ( 5 días)
 Disminución de riesgo biológico para el operador.
 Disminución de la contaminación
 Ahorro de trabajo (código de barras)

DESVENTAJAS

 Costo mayor que las botellas convencionales.

 Pueden suceder falsas alarmas, como positivos.
 Gérmenes especiales, a determinadas temperaturas.
 III. CONCLUSIONES

 Los sistemas automatizados acortan los tiempos porque mejoran la

sensibilidad analítica de los métodos.

 Capaces de detectar el desarrollo bacteriano en una suspensión con y sin

antimicrobianos antes que el TM detecte turbidez (fundamento de los sistemas
automatizados).

 Menor morbi-mortalidad

 Menor tiempo de internación

 Menor toxicidad

 Reducción de costos