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MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES,

COLIFORMES FECALES Y ESCHERICHIA COLI POR LA TÉCNICA DE
DILUCIONES EN TUBO MÚLTIPLE (NÚMERO MÁS PROBABLE O NMP)

AVELLANEDA JENNY, BRUGES PAULA, ROJAS JULIANA

Estudiantes de ingeniería ambiental
Facultad de ingenierías y arquitectura
Universidad de pamplona.
Km 1 Vía Bucaramanga Ciudad Universitaria
Pamplona – Norte de Santander
E-mail: avellanedaj567 @gmail.com
paulabp@outlook.es
Julianarojas96@gmail.com

RESUMEN horas, al trascurrir éste tiempo se realizó el

El crecimiento de un microorganismo
garantiza su existencia y su especie en el
medio ambiente con condiciones
favorables para su reproducción, con el fin
de estimar el NMP de coliformes de
origen fecal presentes en una muestra. Se
realizó en el laboratorio una prueba
presuntiva para la determinación de
coliformes en aguas potables y aguas
residuales, tomando una serie de tubos con
caldo lauryl triptosa en tres filas de tres
inoculando aguas poco contaminadas con
un volumen de 10ml, 1ml,0.1ml y aguas
muy contaminadas con un volumen de
0.1,0.001, luego en otros 3 tubos con 10ml
de caldo lauryl triptosa se inocularon 10ml
de aguas poco contaminadas, en otros 3
tubos con 10ml de caldo lactosado simple
se adicionó 1ml de aguas poco
contaminadas, en otros 3 tubos con 10ml
de caldo lactosado simple concentración
se adicionó 0.1ml de aguas poco
contaminadas, incuabadas a 37°C por 24
recuento por el método del NMP para la
determinación de coliformes de origen
fecal.
Palablas clave: ciliformes ,
microrganismos, NMP.
ABSTRACT
The growth of a microorganism
guarantees its existence and its species in
the environment with favorable conditions
for its reproduction, in order to estimate
the NMP of coliforms of fecal origin
present in a sample. A presumptive test for
the determination of coliforms in drinking
water and wastewater was carried out in
the laboratory, taking a series of tubes
with lauryl triptose broth in three rows of
three inoculating slightly polluted waters
with a volume of 10ml, 1ml, 0.1ml and
waters very contaminated with a volume
of 0.1.0.001, then in another 3 tubes with
10ml of lauryl triptose broth, 10ml of
poorly contaminated waters were

Formando líderes para la construcción de un nuevo 1

país en paz

inoculated, in another 3 tubes with 10ml
of simple lactosedium broth, 1ml of
slightly contaminated water was added, in
other 3 tubes with 10ml of lactose broth
simple concentration was added 0.1ml of
slightly contaminated water, incubated at
37 ° C for 24 hours, at the end of this time
the count was carried out by the NMP
method for the determination of fecal
coliforms.
Key words: cylindrical, microorganisms,
NMP.
1. INTRODUCCIÓN
Desde tiempos antiguos el agua ha
sido un tema fundamental para el
consumo y bienestar en general de
toda la población humana. A medida
que pasa el tiempo, el hombre se ha
encargado de utilizarla de forma
inescrupulosa limitando cada vez más
la calidad con la cual se encuentra el
agua en su estado natural, y
contaminando radicalmente el recurso
hídrico que nos brindan nuestros
paramos y corrientes superficiales que
se encuentran en un territorio, sin
ningún tratamiento o cuidado sin tener
en cuenta posibles consecuencias que
se puedan generar a la hora de arrojar
contaminantes que puedan alterar el
ecosistema acuático que se está
modificando. El vertido de agua de
desecho de origen doméstico e
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industrial, carga con altos porcentajes
de materia orgánica y
microorganismos de origen fecal a los
cuerpos de agua. El control de la
calidad microbiológica del agua tanto
de consumo como de vertimientos,
necesariamente requiere de un análisis
con el propósito de determinar la
presencia de microorganismos
patógenos. Gracias a la reglamentación
y tipificación de los distintos
procedimientos para la detección de
patógenos en el agua se ha logrado
determinar que los agentes
involucrados en la transmisión hídrica
son las bacterias, los virus y los
protozoos, que pueden causar
enfermedades con distintos niveles de
gravedad y llegando a causar la muerte
en algunos casos. El diagnóstico de
estos microorganismos, requiere
procedimientos, equipos y laboratorios
especializados que representan varios
días de análisis y costos elevados. A
pesar de esto y como alternativa a la
solución de estos problemas, se ha
propuesto el uso de indicadores
microbianos que se puedan identificar
mediante el uso de métodos sencillos,
rápidos y económicos. Es de gran
importancia hacer un debido
2
país en paz

tratamiento a las aguas transformadas
o alteradas por el ser humano en donde
priman intereses medioambientales
para beneficio de la humanidad. Por tal
motivo es importante crear procesos
que ayuden a normalizar, desinfectar el
agua manipulada por el hombre y
generar el menor daño al ecosistema
que están recibiendo las aguas
manipuladas por el ser humano.
Procesos tales como la coagulación,
filtración, decantación y desinfección
son patrones claves para normalizar y
estabilizar el ecosistema en una fuente
hídrica de la cual se está utilizando. La
forma en la cual se esté tratando el
agua varia fundamentalmente del tipo
de desecho o industria que se esté
manejando, por tal motivo los análisis
de laboratorio y las simulaciones de
plantas pilotos son factores
predominantes para determinar si una
planta de tratamiento está cumpliendo
con su objetivo de eliminar desechos y
agentes patógenos que pueda ser
perjudiciales para la salud humana y
animal y otros organismos.
MICROBIOLOGÍA Para estudiar la
relación que existe entre calidad de
agua y salud humana, es necesario
introducir el concepto de
microbiología, y a partir de ello valorar
la presencia de organismos
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microscópicos en el agua potable, los
efectos de las distintas especies y la
posibilidad de aplicar tecnologías de
desinfección a la hora de realizar los
diferentes procesos de potabilización
del agua .( Cartor José Luis. 2011)
El grupo coliforme constituyen un
grupo heterogéneo con hábitat
primordialmente intestinal para la
mayoría de las especies que involucra,
es constante, abundante y casi
exclusivo de la materia fecal, su
capacidad de sobrevivencia y
multiplicación fuera del intestino
también se observan en aguas potables,
por lo que este grupo se utiliza como
indicador de contaminación fecal en
agua; encontrandose que mientras
mayor sea el número de coliformes en
agua, mayor será la probabilidad de
estar frente a una contaminación
reciente.
Cuando los coliformes llegan a los
alimentos, no sólo sobreviven, sino
que se multiplican, por lo que en los
alimentos el grupo coliforme adquiere
un significado distinto al que recibe en
el agua. Cuando los productos
alimenticios han recibido un
tratamiento térmico (pasteurización,
horneado, cocción, etc.), estos
microorganismos se utilizan como
3
país en paz

indicadores de malas prácticas
sanitarias. Para su estudio, se dividen
en dos grupos.
EL GRUPO DE BACTERIAS
COLIFORMES TOTALES; el cual
comprende a todos los bacilos Gram-
negativos aerobios o anaerobios
facultativos, no esporulados, que
fermentan la lactosa con producción de
gas en un lapso máximo de 48 h. a
35°C ± 1ºC. Este grupo está
conformado por 4 géneros
principalmente: Enterobacter,
Escherichia, Citrobacter y Klebsiella.
EL GRUPO DE COLIFORMES
FECALES; está constituido por
bacterias Gram-negativas capaces de
fermentar la lactosa con producción de
gas a las 48 h de incubación a 44.5 ±
0.1°C. Este grupo no incluye una
especie determinada, sin embargo la
más prominente es Escherichia coli.
La demostración y el recuento de
organismos coliformes, puede
realizarse mediante el empleo de
medios de cultivo líquidos y sólidos
con características selectivas y
diferenciales.
Escherichia coli es un bacilo corto
Gram negativo que se encuentra
clasificado dentro de la familia
Enterobacteriaceae (bacterias entéricas),
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existe como comensal en el intestino
delgado de humanos y animales. Sin
embargo, existen algunas cepas de E.
coli patógenas que provocan
enfermedades diarreicas. Estas se
clasifican con base en las características
que presentan sus factores de virulencia
únicos,
cada grupo provoca enfermedad
mediante un mecanismo diferente. Se
sabe que sus propiedades de adherencia
a las células epiteliales de los intestinos
grueso y delgado son codificadas por
genes situados en plásmidos. De manera
similar las toxinas son mediadas por
plásmidos o fagos.( Kornacki J.L. &
Johnson J.L. 2001)
2. MATERIALES Y
METODOS
 27 tubos taparrosca com 9 ml
 3 pipetas estériles de 1ml
 3 pipetas estériles de 10 ml
 1 pipeteador
 1 gradilla
 Agua residual
 Agua potable
 Caldo de LMX- fluorocult
(simple concentración y doble
concentración
4
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 Caldo Lauryl triptosa o
lactosado de doble
concentración
 Caldo lactosado de simple
concentración
 Caldo lactosado bilis verde
brillante al 2%
 Lámpara UV
 Restivo de kovacs
 Incubadora
2.1 METODO
Determinación de coniformes en
agua
1. Prueba presuntiva
Se enumeraron los tubos en tres filas
de tres del calado lauryl triptosa en 10-1
10-2 10-3 para aguas poco contaminadas
Se le agregaron un volumen de 10 ml,
1 ml y 0,1 ml de la muestra de poco
contaminadas, la muestra muy
contaminada su volumen fue de 0.1 ml
, 0.001 ml o menos, se agito la muestra
con movimiento ascendente
descendente, se inocularon los tres
tubos con los volúmenes respetivos
usando pipetas estériles luego se
agitaron suavemente los tubos y se
incubaron a 37°C por 24 horas
Pasadas las 24 horas examinamos los
tubos para verificar su resultado, para
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eso se utilizó el reactivo de kovacs y la
lámpara UV
2. aguas poco contaminadas
pipeteamos 10 ml de la muestra a tres
tubos que contenían 10ml de caldo
lauryl triptosa con doble
concentración, pipeteamos 1ml de la
muestra a tres tubos que contenían
10ml de caldo lauryl triptosa simple
concentración, pipeteamos 0,1ml de la
muestra a tres tubos que contenían 10
ml de caldo lauryl triptosa simple
concentración, luego se incubo a 37°C
por 24 horas.
Pasadas las 24 horas examinamos los
tubos para verificar su resultado, para
eso se utilizó el reactivo de kovacs y la
lámpara UV
3. NMP coniformes de origen
fecal en agua envasada (test
Mac-kenzie)
Se tomaron los tubos que dieron
y positivos de la prueba para coniformes,
se transfirieron de cada tubo una asada
de cultivo en el caldo lactosado bilis
verde brillante al 2% con campana de
Durham. Luego se mezcló suavemente
los tubos y se incubaron a 37°C por 24
horas. se observó la prueba de mac-
kenzie de la siguiente forma: si tiene
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gas el caldo lactosado bilis verde (color del caldo verde-azulado,

brillante al 2% es positivo. Para la
formación de
indol se adicionaron 0,2 ml de reactivo
de kovacs obteniendo la formación de
un anillo color rojo cereza en la
superficie de tubo si se forma la
formación del anillo rojo cereza esto
fluorescencia a la luz UV y reacción de
indol positiva al adicionar el reactivo
de kovacs, utilizar la tabla de NMP
(CT y E.COLI/ 100 ML)
3. RELTADOS:

Si da positivo en indol y presenta gas COLIFORMES TOTALES DE

se considera como coniformes fecales AGUA:
y expresar en (gr.ml) Tabla de aguas envasada NMP de
coliformes y (test Mac-kenzie)
4. NMP coniformes totales y
Escherechia coli para agua
tratada, utilizando caldo LMX Muestras 10-1 10-2 10-3 NMP
agua residual Recuent
fluorocult o
1 2 3 1 2 3 1 2 3 333 >2400
Inoculamos 10 ml de la muestra a una Coliformes Bact/
Totales ml
serie de tres tubos con 10 ml de caldo + + + + + + + + +
LMX fluorocult doble concentración
Indol 1 2 3 1 2 3 1 2 3 333 >2400
(a cada tubo) para la 2 serie de tubos Luz UV Bact/
con 10ml de caldo simple + + + + + + + + + ml
concentración se adiciono 1 ml de la
muestra y para la 3 serie de tubos con Fecales 1 2 3 1 2 3 1 2 3 3 3 3 >2400
Campanas Bact/
10ml de caldo simple concentración se Durham + + + + + + + + +
ml
adiciono 0.1 ml de la muestra a cada G + gas
uno de ellos total (9 tubos ) se
incubaron a 37°c por 24 horas.se
procedió

hacer el recuento de los tubos para

coliformes totales (color del caldo
verde –azulado ) escherechia coli

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Tabla de aguas residual NMP de interobacterius como la

coliformes y (test Mac-kenzie) salmonella y escherechia coli.
2. Para la reacción de indol se
Muestras de 10-1 10-2 10-3 Recuent
NMP agregó a cada tubo 0,2ml del
agua potable
o reactivo de kovac’s y
1 2 3 1 2 3 1 2 3 333 >2400 fluorescencia a la luz UV
Coliformes Bact/
Totales siendo positivo para este.
+ + + + + + + + + ml

NMP de coliformes totales y

Indol 1 2 3 1 2 3 1 2 3 333
Luz UV
+ + + + + + + + +
Fecales 1 2 3 1 2 3 1 2 3 3 3 3 >2400
Campanas
+ + + + + + + + + Bact/
Durham
G + gas
3.1 . ANALISIS DE
RESULTADOS
NMP de coliformes totales y fecales
en agua.
De los tubos de la muestra de agua
envasada se incubaron 9 tubos con
simple concentración y 3 tubos de
doble concentración obteniendo
resultados:
1. Se observo una turbidez con un
color amarillo-traslucido para el
caldo de lauryl triptosa o
lactosado de doble concentración
y el caldo lactosado de simple
concentración lo que se pudo
definir positivo para cada tubo
para coliformes y asi pudiendo
recuperar los microorganismo
>2400
Bact/
escherechia coli para agua.
ml
De los tubos de la muestra de agua
residual se incubaron 9 tubos con
simple concentración y 3 tubos de
ml doble concentración obteniendo
resultados:
1. El viraje en el caldo de LMX-
fluorocult es verde-azulado
para coliformes totales
verificando que cada tubo es
positivo.
2. Para la reacción de indol se
agregó a cada tubo 0,2ml del
reactivo de kovac’s y se
observó un anillo color rojo
cereza en la superficie del
tubo y fluorescencia a la luz
UV siendo positivo para este.
NMP de coliformes de origen en
agua (test de Mac-kenzie)
De los tubos positivos el caldo lauryl
triptosa o lactosado de simple
concentración y el caldo de LMX-
fluorocult se tomaron 3 de cada caldo
1. Los tubos 10-1, 10-2 10-3 de
caldo lauryl triptosa se
transfirieron a un caldo

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lactosado bilis verde brillante
al 2% de campana de Durham
una asada a cada tubo después
de la incubación 37°C a 24
horas se observó por el
reactivo de kovac’s a 0,2ml a
cada tubo dando una
formación de un anillo rojo
cereza en la superficie del
tubo y en la campana de
Durham presencia de gas son
coliformes fecales y de documentos de política, con los
demuestra positivos para
indol.
2. Los tubos 10-1, 10-2 10-3 de
caldo LMX-fluoroculf se
transfirieron a un caldo
lactosado bilis verde brillante
al 2% de campana de Durham
una asada a cada tubo después
de la incubación 37°C a 24
horas se observó por el
reactivo de kovac’s a 0,2ml a
cada tubo dando una
formación de un anillo rojo
cereza en la superficie del
tubo y en la campana de
Durham presencia de gas son
coliformes fecales y aplicable
demuestra positivos para
indol.
La política y el marco normativo
vigente que se relacionan con la
gestión de aguas residuales ha sido
expedido por los sectores de salud,
agua potable y saneamiento básico, y
medio ambiente (ver Cuadro 1 y anexo
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1). El Gobierno ha dirigido sus
esfuerzos hacia la expedición de
documentos de política que orienten y
articulen la gestión ambiental de las
diferentes entidades hacia el logro de
objetivos comunes, respetando las
competencias asignadas a cada una, y
con el fin de utilizar en forma eficiente
los escasos recursos disponibles. Para
el tema de manejo de aguas residuales,
el país cuenta con un amplio desarrollo
cuales se ha logrado la articulación de
las acciones e impulsado procesos en
las entidades con injerencia en el tema.
No obstante, algunos documentos han
tenido problemas en su aplicación,
debido principalmente a: fallas en la
metodología y el desarrollo de
procesos de concertación durante su
formulación; falta de precisión en la
definición de programas de
seguimiento; falta de recursos
financieros; significativas
implicaciones económicas y tarifarias
para la población; e insuficientes
recursos técnicos disponibles para su
ejecución. El marco de política
al tema comprende
documentos relacionados con el
manejo del recurso hídrico, espacios
oceánicos y zonas costeras, y
prevención y atención de desastres. En
cuanto al manejo del recurso hídrico,
el país cuenta con los lineamientos de
política para el manejo integral del
8
país en paz

4 Estocolmo 1972, Mar del Plata 1977,
Río 1992, Noordwijk 1994, y la 19
Sesión Extraordinaria de la Asamblea
General de la ONU (1997) , así como
la cumbre de Johannesburgo (2002)
entre otras. 5 UNEP- Global
Programme of Action. 6 Convenio de
Cartagena 7 Convenio de Lima 8 El
protocolo para el Convenio de
Cartagena se encuentra pendiente de
ratificación. 9 Panamá, Ecuador, Perú,
Brasil y Venezuela. Colombia cuenta
con gobernabilidad sobre 1.392 Km de
costas sobre el océano Pacífico y 1.608
Km de costas sobre el mar Caribe
Sistemas de tratamiento de aguas
residuales construidos
La construcción de STAR en Colombia
es una práctica relativamente reciente,
existen actualmente 237 STAR
construidas en 235 municipios, lo que
representa el 21.7% de los municipios
del país. El número de sistemas
construidos por departamento varía
considerablemente; por ejemplo, en
Arauca todos los municipios (7)
disponen de STAR, en la Guajira 11 de
14 municipios tienen STAR (78.6%),
mientras que no existen STAR
registrados en los sistemas de
información de los departamentos de
Caquetá, Chocó, Risaralda, Putumayo,
San Andrés y Providencia y Vichada.
La población urbana de estos 235
municipios con acceso a tratamiento de
aguas residuales agrupa
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aproximadamente al 64% del total
nacional, incluyendo a Bogotá, pero
sólo el 44% excluyendo a la capital.
Sin embargo, si se tiene en cuenta que
los STAR construidos en varios
municipios no tratan la totalidad del
agua residual producida, y que se
desconoce el estado real de
funcionamiento y operación de la
mayoría de las PTAR's, el estimativo
de cobertura de población con
tratamiento de aguas residuales puede
llegar a ser considerablemente inferior.
Como referencia se menciona un
cubrimiento aproximado del 25% de la
población con tratamientos primarios
en Bogotá, Cali y Medellín. La
cobertura estimada en Barranquilla es
del 20%. De otra parte, se desconoce la
mayoría de la información relevante de
los STAR, tal como el porcentaje de
remoción real de DBO5 y SST, el nivel
de operación y la cobertura del sistema
de alcantarillado que llega al sistema;
así mismo, no se conocen los caudales
de aguas residuales industriales
vertidos a la red o a los cuerpos de
agua. Se estima que solo un 10 % de
los STAR construidos tienen un
adecuado funcionamiento. En los
STAR existentes se observa la
tendencia a construir lagunas de
estabilización (44%) y en segundo
nivel sistemas de aireación extendida
(9.4%), y filtros biológicos (7%). En lo
que se refiere a la aplicación de
esquemas tarifarios para el servicio, el
77% de los casos no ha elaborado un
9
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estudio de impacto tarifario y en el o https://repository.unimil

80% de los casos no se han utilizado itar.edu.co/bitstream/ha
las metodologías establecidas por la ndle/10654/9344/Torres
Comisión de Regulación de Agua
MartinezDarwinLeandr
Potable y Saneamiento Básico
(CRA)17. Esta situación implica que o2012.pdf?
los STAR construidos no tienen sequence=2&isAllowed
garantizada su sostenibilidad =y

4 CONLUSIONES  (KORNACKI J.L. &

JOHNSON J.L. 2001)
 Se manejó condiciones
http://depa.fquim.unam.mx/am
adecuadas de limpieza y
yd/archivero/Analisis_Agua_N
desinfección ya que se
MP_22309.pdf
evidencio baja presencia de
microrganismos presentes en
 M.T. MADIGAN, J.M.
el ambiente
MARTINKO y PARKER J.
 El agua analizada en el
Brock, Biología de los
laboratorio por medio de
Microorganismos, Prentice
filtración por membrana no es
Hall, Madrid, 2004.
apta para consumo humano ya
que no solo presenta capas de
 MASKEW FAIR, Gordon.
escherechia coli sino que
Ingeniería sanitaria y de aguas
también otros coliformes
residuales. México. Editorial
 comparación y análisis de los
Limusa, 1990.
resultados con normas
vigentes para aguas
 ORGANIZACIÓN DE LAS
establecidas pose el ministerio
NACIONES UNIDAS (ONU),
de protección social (MPS)
Departamento de Economía y
Asuntos Sociales: División
para el Desarrollo Sostenible.
5 TRABAJOS CITADOS
1992. Agenda 21. .En:
http://www.un.org/esa/sustdev/
 ( CARTOR JOSÉ LUIS.
2011)

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documents/agenda21/spanish/a
genda21spc hapter18.htm

 EL MINISTERIO DE
PROTECCIÓN SOCIAL (MPS)
http://www.minvivienda.gov.co/
Documents/ViceministerioAgua/p
lan_nacional_de_manejo_de_agu
as_residuales_municipales_en_co
lombia.pdf

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