UNIVERSIDAD DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
Y BIOQUÍMICA I

GLÚCIDOS

El propósito de esta práctica es el reconocimiento de algunas de las propiedades

químicas de los glúcidos. Estas propiedades dependen de la presencia de grupos
funcionales hidroxilos alcohólicos y carbonilos de aldehídos y cetonas en la estructura
molecular de los glúcidos.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Espectrofotómetro Ácido sulfúrico concentrado

Tubos para espectrofotometría HCl 3.2 N
Baño de agua a 37°C NaOH 3.2 N
Baño de agua en ebullición Saliva al 10%
Baño de agua fría Soluciones al 1% de glucosa, fructuosa, arabinosa,
Tubos de ensayo Lactosa, sacarosa, maltosa y almidón.
Gradillas Reactivos de Molish, Benedict, Barfoed, Bial,
Pipetas de 1 y 5 ml Seliwanoff y de antrona.
Gotero Agua destilada

PROCEDIMIENTOS:

1. Reacción de Molish
En sendos tubos de ensayo coloque 1 ml de la solución al 1% de glucosa,
fructuosa, arabinosa, lactosa, sacarosa, maltosa y almidón. En otro tubo coloque 1
ml de agua destilada (blanco).
Agregue a cada tubo 5 gotas del reactivo de Molish. Mezcle bien.
Luego, inclinando el tubo, deje resbalar en cada tubo 1 ml de ácido sulfúrico
concentrado.
Deje reposar por unos 3 minutos y observe los resultados. La formación de un
anillo de color violeta en la interfase entre el ácido y la solución con el glúcido, se
considera un resultado positivo.
Agite cada tubo y observe lo que ocurre.

2. Reacción de Benedict
En sendos tubos de ensayo coloque 1 ml de la solución al 1% de glucosa,
fructuosa, arabinosa, lactosa, sacarosa, maltosa y almidón. En otro tubo coloque 1
ml de agua destilada (blanco).
Agregue a cada tubo 1 ml del reactivo de Benedict.
Lleve los tubos a un baño de agua en ebullición y déjelos por unos 3 minutos.
 Observe los resultados. La formación de un precipitado de color rojo ladrillo se
considera un resultado positivo.

3. Reacción de Barfoed
En sendos tubos de ensayo coloque 1 ml de la solución al 1% de glucosa,
fructuosa, arabinosa, lactosa, sacarosa, maltosa y almidón. En otro tubo coloque 1
ml de agua destilada (blanco).
Agregue a cada tubo 1 ml del reactivo de Barfoed.
Lleve los tubos a un baño de agua en ebullición y déjelos por unos 3 minutos.
Observe los resultados. La formación de un precipitado de color rojo oscuro se
considera un resultado positivo.

4. Reacción de Bial
En sendos tubos de ensayo coloque 1 ml de la solución al 1% de glucosa,
fructuosa, arabinosa, lactosa, sacarosa, maltosa y almidón. En otro tubo coloque 1
ml de agua destilada (blanco).
Agregue a cada tubo 1 ml del reactivo de Bial.
Lleve los tubos a un baño de agua en ebullición y déjelos por unos 5 minutos.
Observe los resultados. La aparición de un color verde indica que la reacción fue
positiva.

5. Reacción de Seliwanoff
En sendos tubos de ensayo coloque 0.5 ml de la solución al 1% de glucosa,
fructuosa, arabinosa, lactosa, sacarosa, maltosa y almidón. En otro tubo coloque 1
ml de agua destilada (blanco).
Agregue a cada tubo 3 ml del reactivo de Seliwanoff.
Lleve los tubos a un baño de agua en ebullición y déjelos por unos 2 minutos.
Observe los resultados. La aparición de un color rojo intenso indica que la reacción
fue positiva.

6. Hidrólisis de la sacarosa y el almidón

Prepare seis tubos de ensayo con las mezclas siguientes:

Tubo No. Contenido

1 3 ml de almidón al 1% + 3 ml de HCl 3.2 N
2 3 ml de almidón al 1% + 3 ml de NaOH 3.2 N
3 3 ml de almidón al 1% + 3 ml de saliva al 10%
4 3 ml de almidón al 1% + 3 ml de HCl 3.2 N
5 3 ml de almidón al 1% + 3 ml de NaOH 3.2 N
6 3 ml de almidón al 1% + 3 ml de saliva al 10%

Atención! Tenga cuidado de no utilizar la misma pipeta para la saliva y el almidón.

Coloque los tubos 1, 2, 4 y 5 en un baño de agua en ebullición por 10 minutos.
Ponga los tubos 3 y 6 en el baño de agua a 37°C, por 10 minutos.
 Deje enfriar los tubos. Neutralice el contenido de los tubos 1 y 4 con 3 ml de NaOH
3.2 N y el de los tubos 2 y 5 con 3 ml de HCl 3.2 N.
Saque 1 ml de cada uno de los 6 tubos y realice la reacción de Benedict, tal como
se indicó en el punto 2 de la guía.
Observe los resultados.

7. Cuantificación de glúcidos por medio de la reacción con antrona.

Realice una dilución de la solución de glucosa al 1%, añadiendo 0.1 ml de la
solución a 9.9 ml de agua destilada. Mezcle bien. Utilice esta nueva solución (al
0.01%) para la preparación de las mezclas siguientes:

Contenido / Tubo No. 1 2 3 4 5 Blanco

Solución de glucosa al 0.01%, ml 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.0
Agua destilada, ml 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.5
Reactivo de antrona, ml 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
Concentración en µg/ml

Atención! Todos los tubos deben ponerse en un baño de agua fría y estando allí,
se añade el reactivo de antrona.
Prepare otro tubo que contenga 0.25 ml de la solución problema, 0.25 ml de agua
destilada y 2.5 ml del reactivo de antrona.
Mezcle bien el contenido de todos los tubos y llévelos a un baño de agua en
ebullición por 10 minutos, agitándolos de vez en cuando.
Una vez terminada la incubación, lleve los tubos al baño de agua fría y una vez
fríos, lea la absorbancia a 625 nm.
Realice la gráfica de absorbancia a 625 nm vs concentración de glucosa en µg/ml.
Utilice la curva de calibración para determinar la concentración de la solución
problema.

En la discusión de los resultados explique el fundamento de las reacciones

observadas.

Bibliografía:

Plummer, D.T. 1978. Introducción a la Bioquímica Práctica. McGraw-Hill. Bogotá.

Rendina, G. 1974. Técnicas de Bioquímica Aplicada. Interamericana. México.

Alemany, M y Font, S. 1983. Prácticas de Bioquímica. Alhambra. Madrid.

Seguramente usted necesitará la consulta de textos de Bioquímica y de Química

orgánica para averiguar los fundamentos de las diversas reacciones.
Preparación de reactivos:

- El reactivo de Molish se prepara con α-naftol al 1% en etanol.

- El reactivo de Benedict se prepara disolviendo 9 g de carbonato de sodio en 60 ml de agua destilada

caliente; todavía en caliente se disuelven en esta disolución 17.4 g de citrato sódico; la disolución se
lleva a 85 ml con agua destilada y se filtra. Por otro lado se disuelven 1.7 g de sulfato cúprico
cristalizado en 10 ml de agua destilada; una vez disuelto, se lleva a 15 ml con agua y se añade
lentamente a la disolución de citrato-carbonato, agitando constantemente.

- El reactivo de Barfoed se prepara disolviendo 6.7 g de acetato cúprico y 0.9 ml de ácido acético
glacial en agua destilada, enrasando a 100 ml.

- El reactivo de Bial debe prepararse inmediatamente antes de su uso: 0.1 g de orcinol en 50 ml de HCl
concentrado al que se añaden 5 gotas de FeCl3 al 30%

- El reactivo de Seliwanoff se prepara haciendo una mezcla 1:10 de resorcinol al 0.5% y HCl
concentrado.

- El reactivo de antrona se prepara al 0.1% en ácido sulfúrico al 84 % (peso/volumen). Puede ser

necesario calentar ligeramente para permitir la disolución de la antrona, pero el reactivo debe estar
a la temperatura ambiente antes de su uso y debe estar preparado recientemente.

Las cantidades de los componentes de los reactivos se podrán ajustar proporcionalmente de acuerdo a las
necesidades de utilización.
UNIVERSIDAD DEL VALLE
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
Y BIOQUÍMICA I
Prof. Nelson Toro-Perea.

Reporte de GLÚCIDOS

Asistentes a la práctica: Fecha: ______________

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1. Llene la tabla siguiente con el resultado de cada una de las reacciones:

Glúcido/Reacción Molish Benedict Barfoed Bial Seliwanoff

Glucosa
Fructuosa
Arabinosa
Lactosa
Sacarosa
Maltosa
Almidón

Puede indicar el resultado con las palabras positivo o negativo.

2. Hidrólisis de la sacarosa y del almidón:

Tubo No. Resultado

1
2
3
4
5
6
 3. Cuantificación de glúcidos por medio del reactivo de antrona:

Tubo No. Absorbancia a 625 nm Concentración µg/ml

1
2
3
4
5
Blanco
Problema

Pegue aquí la gráfica de Absorbancia a 625 nm vs. Concentración en µg/ml, realizada en

papel milimetrado: