Control biológico 55 (2010) 1–10

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Caracterización de una cepa bacteriana de biocontrol B106 y su eficacia en el control de la mancha

foliar del banano y las enfermedades de antracnosis poscosecha

Pandilla fu a, b, Siliang Huang C,*, Yunfeng Ye una, Yongguan Wu una, Zhenlu Cen si, Shanhai Lin una
una Colegio de Agricultura, Universidad de Guangxi, Nanning 530005, PR China
si Instituto de Investigación de Microbiología, Academia de Ciencias Agrícolas de Guangxi, Nanning 530007, PR China
C Facultad de Ciencias y Tecnología de la Vida, Universidad Normal de Nanyang, Nanyang 473061, PR China

información del artículo resumen

Historia del articulo: Se aisló una cepa bacteriana antagonista B106 del suelo rizosférico de una planta de banano en la ciudad de Nanning, Guangxi, China, y se
Recibido el 5 de agosto de 2009 Aceptado el 4 de
identificó como Bacillus subtilis basado en su homología de secuencia de ADNr 16S con las bacterias relacionadas de GenBank, así como con
mayo de 2010 Disponible en línea el 9 de mayo de
caracteres fisiológicos y bioquímicos. Las condiciones culturales se optimizaron para mejorar la eficacia del antagonista contra la mancha de la
2010
hoja de plátano causada por
Pseudocercospora musae ( teleomorfo: Mycosphaerella musicola) y antracnosis poscosecha por Colletotrichum musae. La condición cultural
Palabras clave: Bacillus
optimizada para la cepa B106 para expresar una mayor actividad antagonista contra P. musae fue la combinación de 31 C, pH 6,0, medio EM y
subtilis
5 días de incubación. Sin embargo, la condición cultural optimizada para que la bacteria produzca mayor biomasa fue la combinación de 31–34 C,
Caracter biologico
pH 6,5, medio EM y 3 días de incubación. Los resultados basados ​en pruebas de invernadero mostraron que
Musa
Mancha de hoja de plátano

Pseudocercospora musae Se obtuvo un 72,3% de eficacia del antagonista en el control de la enfermedad de la mancha foliar del plátano 10 días después de la inoculación del
Antracnosis de plátano patógeno. La eficacia de la cepa B106 (1 10 8 CFUml 1) el control de las enfermedades de las manchas foliares del banano en el campo y la enfermedad de
Colletotrichum musae antracnosis en la etapa posterior a la cosecha fue de 48.3% y 48.6%, respectivamente, bajo la condición cultural optimizada para que la cepa exprese una
mayor actividad antagonista. Los datos experimentales indicaron que la cepa antagonista era un prometedor agente de control biológico contra las
enfermedades del banano.

2010 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

1. Introducción Enfermedad de Sigatoka causada por Pseudocercospora musae ( teleomorfo:

El plátano es el cultivo de fruta más popular comercializado en muchos países tropicales y
subtropicales por su utilización como postre y como alimento básico. Es uno de los cultivos frutales
más importantes en el comercio internacional para obtener divisas en muchos países africanos. Las
enfermedades infecciosas causadas por microbios patógenos, como hongos, bacterias y virus, son el
principal factor limitante en la producción exitosa de calidad de este cultivo. Entre estos grupos de
patógenos, los hongos son los miembros más importantes involucrados en las enfermedades
infecciosas del banano antes y después de la cosecha. Las manchas de hojas de banano inducidas
por hongos son las enfermedades económicamente importantes en la producción de banano en todo
causales de las manchas foliares del banano en el campo. En la actualidad, la enfermedad de la
el mundo. Las manchas más graves de la hoja del plátano son causadas por tres especies de Mycosphaerella:
Mycosphaerella musicola, Mycosphaerella fi jiensis y Mycosphaerella eumusae ( Jones, 2003 ) Se ha
estimado que la Sigatoka negra (veta de hoja negra) causada por M. fi jiensis podría dar como
resultado una pérdida de rendimiento del 33–69% en plátano y plátano ( Bureau, 1990; Romero,
1986; Mobambo et al., 1993, 1996; Marín et al., 2003 ), que representa al menos el 27% del costo
total del control de la enfermedad ( Stover, 1980 ) Amarillo
M. musicola), se informó por primera vez en Java en 1902 ( Zimmerman, 1902 ), y ha estallado en
varios lugares en Asia, África y América Latina desde 1930 s ( Hayden et al., 2003 ) Además de los
tres
Mycosphaerella spp. descrito anteriormente, hay muchas otras especies de hongos que causan
manchas de hojas de plátano o plátano, como Deightoniella torulosa ( Koné et al., 2008 ), Bipolaris
sacchari ( Silva et al., 2008 ), Pestalotiopsis menezesiana ( Huang et al., 2007 ), Cladosporium musae
( Surridge et al., 2003 ), Cordana musae, Helminthosporium torulosa, Curvularia lunata y Alternaria
musae ( Jones, 2000 ) En China, se sabe que al menos 12 hongos patógenos son los agentes
Sigatoka amarilla se ha vuelto predominante entre las enfermedades de la mancha foliar del banano
en el sur de China (datos no publicados) desde que se registró por primera vez en 1936 ( Meredith,
1970 ) Por otro lado, aunque Colletotrichum musae ocasionalmente causa pequeñas manchas de
hojas de banano en el campo en el sur de China (datos no publicados), su daño económicamente
significativo al cultivo de banano ocurre principalmente en la etapa posterior a la cosecha. C. musae forma
infecciones inactivas en las frutas de plátano no maduras en el campo y causa la pudrición de la fruta
marrón (antracnosis) durante la maduración ( de Lapeyre de Bellaire et al., 2000 ), lo que lleva a una
pérdida del 10–86% de las frutas de banano durante el envío y el almacenamiento ( Krauss y
Johanson, 2000; Alvindia et al., 2000 )

** Autor correspondiente. Fax: +86377 63513461.

Dirección de correo electrónico: silianghuang@126.com (S. Huang).

1049-9644 / $ - ver tema principal 2010 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados. doi: 10.1016 /
j.biocontrol.2010.05.001
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Los fungicidas son el medio principal para controlar las manchas de hojas de plátano y las Se necesita una alta actividad antagonista y producción de biomasa para mejorar su eficacia en la
enfermedades de antracnosis posteriores a la cosecha. Se han utilizado varios tipos de fungicidas utilización del campo. Los objetivos del estudio son: (1) caracterizar e identificar la cepa B106
para suprimir las enfermedades del banano, como los triazoles ( Romero y Sutton, 1997 ), utilizando métodos bacteriológicos y moleculares; (2) para optimizar las condiciones culturales de la
estrobilurinas ( Chin et al., 2001; Pérez et al., 2002 ), espiroketalaminas ( Khan et al., 2001 ) e cepa B106 para una mayor eficacia de control (CE); y (3) evaluar la eficacia de la cepa B106 en el
imidazoles ( Koné y otros, 2009; Washington, 1997; Washington et al., 1998; Krauss y Johanson, control de las enfermedades de las manchas foliares del banano en el campo y la antracnosis del
2000 ) En la actualidad, se ha detectado resistencia a los fungicidas para el benomilo ( Romero y banano en la etapa posterior a la cosecha.
Sutton, 1998 ), tiabendazol ( de Lapeyre de Bellaire y Dubois, 1997 ), azoxistrobina ( Amil et al., 2007 ),
tri fl oxistrobina ( Pérez et al., 2002 ), propiconazol ( Romero y Sutton, 1997 ) y tri fl oxistrobina ( Chin et
al., 2001 ) debido al uso extenso y frecuente de los productos químicos para el control de las
enfermedades del banano antes y / o después de la cosecha. Aunque los fungicidas desarrollados
2. Materiales y métodos
recientemente, como los triazoles y el procloraz, son altamente efectivos para suprimir estas
enfermedades, el uso excesivo de fungicidas puede dar como resultado residuos químicos en las
2.1. Materiales vegetales, patógenos y cepas de biocontrol
plantas de banano y sus entornos, lo que se convierte en una preocupación pública. Para el
desarrollo sostenible de la producción de banano, es necesario desarrollar métodos ecológicos para
2.1.1 Materiales vegetales y frutos utilizados
reducir el uso de fungicidas en el manejo de las enfermedades del banano.
Tanto las plantas de plátano como las frutas utilizadas fueron Williams (AAA, tipo Cavendish), un
cultivar de plátano popular en el sur de China. El cultivar era susceptible a la mancha foliar del
banano y a las enfermedades de antracnosis. Las plántulas de cultivo de tejidos (20 días de edad) se
obtuvieron del Instituto de Investigación de Biotecnología, Academia de Ciencias Agrícolas de
Guangxi, Nanning, China y se cultivaron en macetas de nutrición en un invernadero hasta su uso. Se
compraron racimos enteros de frutas de banano libres de fungicidas con aproximadamente un 80%
Durante muchos años, la reproducción de la resistencia a la Sigatoka se ha considerado como
de madurez de los productores de banano en el municipio de Jinling, ciudad de Nanning, y se usaron
una estrategia importante para controlar la enfermedad. Harelimana y col. (1997) utilizado las toxinas
para experimentos posteriores a la cosecha.
producidas por M. fi jiensis para el cribado de cultivares de banano resistentes a la Sigatoka amarilla
de plátanos. Twizeyimana y col. (2007) informó dos ensayos rápidos, utilizando plántulas en tubos y
hojas sueltas, para la detección de Musae

2.1.2. Preparación de patógenos

especie resistente a la Sigatoka negra. Además, se han utilizado algunos productos naturales para el
Cinco agentes patógenos que causan enfermedades de la hoja del plátano ( P. musae,
control de las enfermedades del banano. Vawdrey y col. (2004) evaluó la efectividad de cinco aceites
C. musae, H. torulosa, C. lunata y A. musae) fueron aislados de las hojas de banano afectadas en
minerales, cuatro aceites vegetales y una calcomanía derivada de la planta sobre la supresión de la
Guangxi, China, en 2005. C. musae y F. roseum se aislaron de las frutas de banano enfermas en
Sigatoka amarilla de los plátanos. En el caso de la antracnosis de plátano poscosecha, se
2006. Se recogieron muestras de hojas o frutas de banano afectadas (cultivar Williams) de las
desarrollaron varios aceites esenciales para controlar la enfermedad ( Ranasinghe et al., 2002, 2005;
plantaciones de banano en el municipio de Jinling en la ciudad de Nanning. Las muestras se lavaron
Demerutis et al., 2008; Anthony et al., 2004 ) Además, el tratamiento de agua caliente se ha
con agua corriente. Cortar tejidos (0.5 0,5 cm 2) se desinfectaron con hipocloruro de sodio al 0,1%
considerado como otra forma efectiva de controlar esta enfermedad ( Reyes et al., 1998; Win et al.,
durante 2-3 minutos, se enjuagaron con agua esterilizada dos veces y se colocaron en agar
2007 ) La aplicación de agentes de biocontrol que son seguros para el medio ambiente se ha
papa-dextrosa (PDA: 200 g de extracto hervido de patata, 200 ml; dextrosa, 20 g; agar, 15 g; agua
convertido en una estrategia importante en el manejo integrado de plagas para mejorar la
destilada, 800 ml; pH 7.0) placas. Después de 4 días de incubación a los 28 C, los micelios crecientes
productividad de las plantas y la seguridad de los productos agrícolas. Varios antagonistas como Trichoderma
de los tejidos de muestra se eliminaron y purificaron mediante aislamiento de esporas individuales ( Huang
harzianum
y Kohmoto, 1991 ) La patogenicidad de los hongos aislados a las hojas o frutos de banano se
confirmó mediante pruebas de inoculación.

( Alvindia y Natsuaki, 2008 ), Burkholderia cepacia ( De Costa y Erabadupitiya, 2005 ), Bacillus

amyloliquefaciens ( Alvindia y Natsuaki, 2009 ), Pseudomonas syringae ( Williamson et al., 2008 ),

Todos los patógenos de banano utilizados en el estudio se almacenaron en glicerol al 25% a 20 C.

Pichia anomala y Candida oleophila ( Lassois et al., 2008 ), Pantoea agglomerans y Flavobacterium sp.
Los cultivos de trabajo se almacenaron en sesgos PDA a 4 C. Suspensión conidial de P. musae se
( Niroshini Gunasinghe y Karunaratne, 2009 ) fueron seleccionados para controlar las enfermedades
preparó inundando las colonias de 14 días con agua destilada esterilizada y agitando con una varilla
poscosecha del banano. Se han informado algunos agentes de biocontrol para la supresión de la
de vidrio. La suspensión se filtró a través de un paño de muselina esterilizado. Los conidios se
Sigatoka negra de los plátanos en condiciones de invernadero, pero aún no se han aplicado en el
cosecharon en un matraz Erlenmeyer y se contaron con un hemacitómetro (Hausser, Horsham, PA,
campo ( Jiménez et al., 1987; González et al., 1996; Miranda Corrales, 1996 )
EE. UU.). La concentración de esporas se ajustó a 10 5 5 ml 1) P. musae

Una cepa bacteriana antagonista B106, aislada del suelo rizosférico de una planta de banano en
fue un miembro predominante de los agentes causales de las manchas foliares en las principales
la ciudad de Nanning, Guangxi, China, mostró una fuerte actividad antagonista contra múltiples
áreas productoras de banano en el sur de China, y se usó como el patógeno objetivo para el ensayo
hongos patógenos que causan enfermedades previas y posteriores a la cosecha del banano. in vitro
en invernadero.

( Fu et al., 2007 ) Se ha encontrado que las tasas de inhibición de la cepa son aproximadamente del
89% contra C. musae, y más del 70% contra cuatro patógenos de manchas de hojas de plátano ( 2.1.3. Aislamiento de agentes de biocontrol bacterianos.

P. musae, C. musae, H. torul- Se aislaron agentes de biocontrol bacteriano del suelo rizosférico de las plantas de banano en la
osa y C. lunata). Además, también se ha encontrado que una tasa de inhibición superior al 50% ciudad de Nanning. La muestra de suelo (aproximadamente 10 g) se transfirió a un matraz

suprime otro patógeno de la mancha foliar del plátano ( A. musae) y uno de los patógenos de la Erlenmeyer de 50 ml que contenía 10 ml de agua esterilizada y se agitó a 200 rpm durante 20

pudrición de la corona del plátano ( Fusarium roseum) ( Fu et al., 2007 ) Nuestro anterior in vitro Las minutos. La suspensión del suelo se diluyó luego a 10 2, 10 3, 10 4, y 10 5 5

investigaciones sobre las actividades supresoras de la cepa B106 contra los principales patógenos
que causan manchas de hojas de plátano y antracnosis posterior a la cosecha sugirieron que la cepa
podría ser un agente de control biológico prometedor contra estas enfermedades. Sin embargo, la
posición de clasificación y los caracteres biológicos de la cepa antagonista no están claros. La
optimización de las condiciones culturales para la tensión antagonista a
veces, respectivamente. Se colocó una hebra de la suspensión del suelo sobre agar de carne de
res-peptona-levadura-dextrosa (BPYDA: extracto de carne de res, 3 g; peptona, 5 g; extracto de
levadura, 1 g; dextrosa, 10 g; agar, 15 g; agua destilada, Placas de 1000 ml; pH 7.0). Después de
incubarse a 28 ° C durante 24 h, una colonia bacteriana que se separaba bien de las otras se volvió a
colocar sobre una nueva placa BPYDA con un asa de inoculación.
 G. Fu y col. / Control biológico 55 (2010) 1–10
La colonia única final se transfirió luego en sesgos BPYDA y se almacenó a 4 C hasta su uso.
2.1.4. Detección y selección de agentes antagonistas.
Se evaluaron los aislamientos bacterianos. in vitro por su capacidad de suprimir el crecimiento
de P. musae, utilizando el método de doble incubación ( Fokkema, 1978 ) Bacterias que resultan en
más del 30% de inhibición del crecimiento (IG) de P. musae fueron probados para la antibiosis a C.
musae,
H. torulosa, C. lunata, A. musae, C. musae y F. roseum. Un bucle lleno de bacterias cultivadas en
BPYDA durante 24 h se inoculó por punción en tres puntos equidistantes a 1 cm de la periferia de la
placa (9 cm de diámetro), mientras que se colocó un tapón micelial de los patógenos de prueba en el
centro de las placas PDA. Se tomaron tapones miceliales, de 6 mm de diámetro, del borde de
colonias fúngicas de 7 días mantenidas en placas de PDA. Las placas inoculadas solo con los
patógenos puros sirvieron como control (CK). Todas las placas se incubaron a 28ºC. C. Cada
tratamiento consistió en tres repeticiones. El porcentaje de IG se determinó después de 10 días de
incubación utilizando la siguiente fórmula ( Korsten et al., 1995 ): K r
r 1 / K r 100 = GI, donde K r representa la distancia desde
el punto de inoculación al margen de la colonia en placas CK, r 1 la distancia del crecimiento fúngico
desde el punto de inoculación hasta el margen de la colonia en las placas tratadas en la dirección del
antagonista, y GI el porcentaje de inhibición del crecimiento. Las bacterias con más del 30% de IG
contra los siete patógenos probados se seleccionaron como agentes de biocontrol candidatos para
estudios posteriores. Luego se seleccionó la cepa B106 para estudios de laboratorio y campo
adicionales por su capacidad de inhibición estable y más alta contra los patógenos de prueba.
2.1.5. Preparación de bacteria antagonista
La cepa B106 se mantuvo en BPYDA a 28 C y almacenado a las 4 C. Cuando se necesitaba un
cultivo líquido, la cepa B106 se cultivó en BPYDB (BPYDA excepto agar) o medio Emerson (EM:
dextrosa, 10 g; extracto de carne de res, 4 g; NaCl, 2.5 g; extracto de levadura, 10 g; peptona, 4 g;
agua destilada, 1000 ml; pH 7.0) bajo una condición cultural deseada. Los valores de OD (densidad
óptica) de las suspensiones celulares resultantes a 625 nm se determinaron usando un
espectrofotómetro UV / Vis (UV-1600, Beijing Rayleigh, China). La concentración bacteriana se
ajustó a aproximadamente 10 8 –10 9 9 unidad formadora de colonias (UFC) ml 1 con agua esterilizada
2.2. Identificación de la cepa B106
La cepa B106 se caracterizó preliminarmente mediante métodos bacteriológicos convencionales
que incluyen caracteres morfológicos, fisiológicos y bioquímicos ( Buchanan y Gibbons, 1984 ) La
cepa B106 se cultivó en placas BPYDA durante 24 h. Las características morfológicas de la bacteria
se observaron con un microscopio electrónico de transmisión (HITACHI, H-500) según lo descrito por Williams
se incubó a temperaturas comprendidas entre 10 y 43 ° C con 3 C intervalos. La suspensión celular
y col. (1990) . Las descripciones morfológicas de la colonia se realizaron después de la incubación en
placas BPYDA a los 28 años. C por 24–48 h. Otras pruebas bacteriológicas que incluyen tinción de
Gram, formación de esporas bacterianas, reacción de catalasa, reacción de Voges-Proskauer,
tolerancia a la sal, producción de ácido (de RE- glucosa, L- arabinosa RE- xilosa y RE- manitol), hidrólisis de
glutina, hidrólisis de almidón, utilización de citrato de sodio, reducción de nitrato, peptonización de la
leche, hidrógeno sulfurado, rojo de metilo, indol, crecimiento sin oxígeno, producción de gas a partir
de
RE- glucosa, descomposición de tirosina, agar de yema de huevo y crecimiento a pH 5,7, pH 6,8, 50 C
se llevaron a cabo en base a los métodos generales de experimentación bacteriana ( Buchanan y
Gibbons, 1984; Williams et al., 1990; Ayyadurai et al., 2006 ) La cepa B106 se identificó
adicionalmente en base al análisis de secuencia comparativo de su gen de ADNr 16S como sigue.
La cepa se incubó en BPYDB a 28ºC. C durante 16 h antes de la extracción de su ADN
genómico. El ADN genómico total se extrajo usando el kit de extracción de ADN (Bioer Technology
Co., Ltd., China). La reacción de PCR (50 l l) la mezcla contenía 5 l l de 10 PCR
3
tampón, 1 l l de dNTPs (25 mM), 2 l l del cebador directo F27 (5 0- AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3 0) 2 l l
del cebador inverso R1492 (5 0- TACGGTTACCTTGTTACGACTT -3 0) 0.4 0.4 l l de ADN polimerasa
Taq (5 U l l 1) 4 4 l l de MgCl 2 ( 25 mM), 1 l l de plantilla de ADN y 34,6 l l de autoclavado Milli-Qwater. La
PCR se realizó en un dispositivo termociclador automático (TC-16 / H, Hangzhou ThermoMagnetics
Co., Ltd.) utilizando los siguientes parámetros: desnaturalización a 94 C durante 4 min seguido de 35
ciclos de desnaturalización a 94 C durante 40 s, recocido a 50 C por 50 s, alargándose a 72 C por 80
sy una extensión final a 72 C por 8 min.
Los productos de PCR se detectaron mediante electroforesis en gel y se purificaron con el Kit de
purificación de productos de PCR (Takara Biotechnology Co., Ltd.). Los productos purificados se
enviaron a Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Services Co., Ltd. para su
secuenciación (ambas secuencias secuenciadas). La secuencia de ADNr 16S de la cepa B106 se
analizó y alineó con las secuencias relacionadas recuperadas de la base de datos GenBank usando
la herramienta de búsqueda NCBI BLAST. Se construyó un árbol filogenético basado en secuencias
de ADNr 16S con el algoritmo de unión de vecinos en MEGA versión 2.1.
2.3. Capacidad inhibitoria in vitro de la cepa B106 contra P. musae
La cepa B106 se cultivó en BPYDB en un agitador rotativo (150 rpm) a 28ºC. C durante 3 días y
la suspensión celular resultante se ajustó a una concentración de 1 10 9 9 CFUml 1) Las actividades
inhibitorias de las suspensiones celulares contra P. musae fueron probados utilizando el método de
doble incubación ( Fokkema, 1978 ) La prueba antagonista se repitió tres veces en las mismas
condiciones. El GI fue investigado como la colonia de P. musae extendido hasta el margen de la placa
CK (90 mm de diámetro).
2.4. Efectos de las condiciones culturales sobre la biomasa y actividades inhibitorias de la cepa B106
contra P. musae
2.4.1 Tiempo de incubación
La cepa B106 se incubó en BPYDB en un agitador rotativo (150 rpm) a 28ºC. C para ocho
cursos de tiempo diferentes osciló entre 24 y 192 h. El OD Los valores de las suspensiones celulares
resultantes se midieron por separado en cada tiempo de incubación utilizando el espectrofotómetro.
Las actividades inhibitorias de las suspensiones celulares contra P. musae en cada tiempo de
incubación se examinaron por separado utilizando el método de incubación dual ( Fokkema, 1978 )
2.4.2 Temperatura de incubación
La suspensión celular de la cepa B106 (40 l l, 1 10 9 9 CFUml 1) se inoculó en 100 ml de BPYDB y
(5 de 100 ml) se extrajo en un banco super limpio y su valor de OD a 625 nm se midió 24 h después
de la inoculación. Los 95 ml restantes de la suspensión celular se incubaron posteriormente durante
otras 48 h antes del examen de su actividad inhibitoria contra
P. musae. El examen de la actividad inhibitoria se realizó utilizando el método de doble incubación ( Fokkema,
1978 )
2.4.3 PH medio
La cepa B106 se inoculó en BPYDB con un pH inicial que varió de 3.0 a 11.0 (intervalo de 0.5) y
se incubó bajo agitación (150 rpm) a 28ºC. C. Los valores de OD de las suspensiones celulares de
24 h de edad se midieron con el espectrofotómetro. Las actividades inhibitorias de las suspensiones
celulares de 72 h de edad contra P. musae fueron examinados utilizando el método de doble
incubación ( Fokkema, 1978 )
2.4.4 Nutrición
La cepa B106 se inoculó por separado en los siguientes medios líquidos: caldo de
patata-dextrosa (PDB: PDA excepto agar), BPYDB, Gause's No. 1 (KNO 3, 1 g; K 2 HPO 4, 0,5 g; MgSO 4, 0,5
g; NaCl, 0,5 g;
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FeSO 4, 0,01 g; almidón soluble, 20 g; agua destilada, 1000 ml), Czapek (sacarosa, 30 g; NaNO 3, 2 g;
K 2 HPO 4, 1 g; MgSO 4, 0,5 g; KCl, 0,5 g; FeSO 4, 0,01 g; agua destilada, 1000 ml), Keshi No. 1 (K 2 HPO 4, 1
g; MgCO 3, 0,3 g; NaCl, 0,2 g; KNO 3, 1 g; FeSO 4, 0,01 g; CaCO 3, 0,5 g; dextrosa, 20 g; agua destilada,
1000 ml), EM, caldo de papa (PB: extracto de 200 g de papa hervida, 200 ml; agua destilada, 800
ml), solución de dextrosa (DS: dextrosa, 20 g; agua destilada, 1000 ml), solución de almidón ( SS:
almidón soluble, 30 g; agua destilada, 1000 ml), caldo de plátano-dextrosa (BDB: 50 g de extracto
hervido de hoja de plátano, 200 ml; dextrosa, 20 g; agua destilada, 1000 ml), asparagina-dextrosa
solución (ADS: aspartoyl, 0.5 g; dextrosa, 10 g; K 2 HPO 4, 0,5 g; agua destilada, 1000 ml), caldo de
levadura-dextrosa (YDB: extracto de levadura, 10 g; dextrosa, 20 g; agua destilada, 1000 ml), caldo
de soja (SB: harina de soja, 30 g; agua destilada, 1000 ml), avena caldo (OB: 30 g de extracto
hervido de avena, 200 ml, agua destilada, 800 ml), caldo de maíz (CB: 30 g de extracto hervido de
harina de maíz, 200 ml; agua destilada, 1000 ml) y almidón - sal solución [SSS: almidón soluble, 10
g; (NUEVA HAMPSHIRE 4) 2 ENTONCES 4, 2 g; K 2 HPO 4,
1 g; MgSO 4 4 1 g, NaCl, 1 g; CaCO 3, 3 g; agua destilada, 1000 ml] bajo agitación (150 rpm) a 28ºC C.
Los valores de OD de las suspensiones celulares de 24 h de edad se midieron con el
espectrofotómetro. Las actividades inhibitorias de las suspensiones celulares de 72 h de edad contra P.
musae se determinaron utilizando el método de incubación dual ( Fokkema, 1978 )
2.5. Eficacia de la cepa B106 en el control de la Sigatoka amarilla en invernadero
Las plántulas de cultivo de tejido de banano de 7 semanas de edad con una altura de planta de
aproximadamente 30 cm se trasplantaron en macetas de 26 cm de diámetro (una planta por maceta)
en un invernadero durante 14 días. P. musae fue utilizado como patógeno para la prueba de
invernadero. Las temperaturas fueron de 26 a 32 C y humedades relativas (HR) 76–82% en el
invernadero durante el período del experimento (del 3 al 18 de agosto de 2007). Cada tratamiento
consistió en 18 plantas con 3 réplicas (6 plantas por réplica). El experimento se realizó de la siguiente
manera. Tres hojas superiores completamente gastadas por planta fueron ligeramente heridas por
una picadura equitativa (4 puntos por cm 2) con agujas esterilizadas antes de la inoculación de
patógenos. La suspensión conidial (1 10 5 5 esporas ml 1) de P. musae se roció en ambos lados de las
hojas (2 ml por hoja), usando un aerógrafo de artista (Apoho 16B, Suzhou Plastic Electron Co., Ltd.,
China). La cepa B106 se cultivó en agitación EM (150 rpm) a 31 ° C durante 3 días y su suspensión
celular se ajustó a una concentración de 1 10 8
CFUml 1) La cepa B106 y el propiconazol se rociaron por separado sobre las hojas usando el mismo
método que en el tratamiento de P. musae.
Para evaluar el efecto del tiempo de pulverización en la eficacia de control de la cepa B106 contra la
enfermedad, los tratamientos se establecieron de la siguiente manera: SB, cepa B106 aplicada en las
hojas de plátano 2 días antes P. musae
inoculación; SA, cepa B106 aplicada en las hojas de plátano 2 días después P. musae inoculación;
PA, propiconazol (375 mgkg 1) Se aplicó un fungicida de alta eficacia comúnmente utilizado para
controlar las manchas de la hoja de plátano en el área experimental 2 días después P. musae
inoculación. Las plantas de banano inoculadas con la suspensión conidial de P. musae fueron
utilizados como CK. La gravedad de la enfermedad (DS), el índice de enfermedad (DI) y la eficacia
del control del invernadero (GCE) se investigaron por separado 10 y 14 días después P. musae inoculación.
El DS, expresado como un porcentaje del área infectada sobre el área total de la hoja, se dividió
en cinco clasificaciones: 0 = sin síntomas, 1 = menos del 5% del área de la hoja infectada, 3 = 5–15%
del área de la hoja infectada, 5 = 16 - 25% de área foliar infectada, 7 = 26–50% de área foliar
infectada, 9 = más del 50% de área foliar infectada.
La DI y la CME se calcularon utilizando las siguientes fórmulas: DI ¼ 100 X re No: de
h yo
hojas afectadas DS correspondiente Þ
= re No: del total de hojas 9 Þ
CME ð% Þ ¼ 100 re DI de CK DI de B106 o tratamiento fungicida Þ
= DI de CK
2.6. Pruebas de campo
2.6.1. Eficacia de la cepa B106 en el control de las manchas foliares del banano en el campo
Para evaluar la CE de la cepa B106 contra manchas de hojas de plátano, se llevaron a cabo dos
ensayos en el mismo campo (120 maboveMSL, pH del suelo: 6.7, tipo de suelo: franco arcilloso
arenoso, arcilla: 18.2%, limo: 32.4%, arena: 42.3%, orgánico materia: 5.8%) cultivadas con cultivo de
tejidos de plantas de banano cv. Williams (AAA) en el municipio de Jinling, ciudad de Nanning,
Guangxi, China.
El primer ensayo de campo se llevó a cabo del 23 de junio al 31 de julio en
2007. Las plantas de banano se cultivaron durante la prueba en condiciones climáticas: lluvia caída
489 mm; temperatura media 21.4 C y HR 78–91%. El diseño experimental fue un bloque aleatorio
completo con un espacio de siembra de 1,8 m. Cada tratamiento consistió en 20 plantas con 4
réplicas (5 plantas por réplica). La cepa B106 se hizo crecer en BPYDB bajo agitación (150 rpm) a 28
° C durante 2 días. Se establecieron dos tratamientos (cepa B106 y propiconazol) en el ensayo. La
suspensión celular (1 10 8 CFUml 1) de la cepa B106 y propiconazol (375 mg kg 1) se rociaron por
separado sobre las hojas de plátano. Se roció agua limpia sobre los bloques CK. Todos los
tratamientos se llevaron a cabo con un rociador de nebulizador de mochila (ARDLEX, HD-400, Brasil)
por la tarde. Se rociaron ambos lados de las hojas de plátano hasta el punto de escorrentía (500–700
ml de líquido por planta). La primera aplicación se realizó a las 28 semanas después del trasplante
cuando aparecieron por primera vez las enfermedades de las manchas foliares. La aplicación se
realizó tres veces a intervalos de 14 días. Se investigó el DS en las 13 hojas completamente
expandidas de la parte superior de una planta de banano y se calculó la DI. La investigación de DS
se realizó en cada momento de la solicitud y la investigación final se realizó 10 días después de la
última aplicación. El DI de la CK determinado en la primera aplicación se usó como el número base
(BN) para evaluar la eficacia del control de campo (FCE). ð% Þ ¼ ½ 1 re BN DI del bloque de
tratamiento en el 2 ° o 3 °
solicitud Þ = ð DI del bloque de tratamiento en la primera aplicación DI
del bloque CK en la segunda o tercera aplicación Þ? ?
100%
El segundo ensayo se realizó del 28 de junio al 5 de agosto de 2008 en el lugar donde se realizó
el primer ensayo. Las plantas de banano se cultivaron durante el ensayo en condiciones climáticas:
lluvia cayó 445 mm, temperatura media 20.7 C y HR 76-90%. El diseño experimental del segundo
ensayo fue el mismo que el primero, excepto por las condiciones culturales de la cepa B106. En este
ensayo, la cepa B106 se cultivó bajo agitación (150 rpm) y las condiciones culturales optimizadas,
incluido el medio de cultivo óptimo (EM), el valor de pH inicial (pH 6,5), la temperatura (31 C) y tiempo
de incubación (3 días).
2.6.2. Eficacia de la cepa B106 en el control de la antracnosis poscosecha del banano
La suspensión celular de la cepa B106 se preparó en las condiciones culturales optimizadas
descritas anteriormente. Las frutas de plátano no sintomáticas recién cosechadas se lavaron
suavemente con agua corriente y se secaron al aire. Se establecieron dos tratamientos y cada
tratamiento consistió en cuatro réplicas (5 ± 0.1 kg de frutos de banano por réplica). Las frutas de
banano se sumergieron por separado en una suspensión celular (1 10 8 CFUml 1) de la cepa B106
durante 10 min y en procloraz (375 mg kg 1) por 1 min. Las frutas sumergidas en agua corriente se
usaron como CK. Después de ser tratados con el antagonista, los frutos de cada réplica se
empacaron en una bolsa de polietileno y se mantuvieron a 28 ± 1 C y HR 78 ± 2% hasta que se
desarrollen los síntomas. El DS, DI y CE se investigaron por separado 14 y 17 días después de la
aplicación del antagonista.
 G. Fu y col. / Control biológico 55 (2010) 1–10 55

El DS, expresado como un porcentaje del área de la lesión sobre el área de superficie total por 2.7. análisis estadístico
fruta, se dividió en cinco clasificaciones: 0 = sin síntomas, 1 = menos del 10% de área de superficie
de fruta infectada, 3 = 11–25% de área de superficie de fruta infectada , 5 = 26–50% de superficie de Los datos se sometieron a análisis de varianza (ANOVA) utilizando el software SAS (SAS
fruta infectada, 7 = 51–75% de superficie de fruta infectada, 9 = más de 75% de superficie de fruta Institute, versión 6.08, Cary, NC). La importancia estadística se evaluó mediante la prueba de rango
infectada. múltiple de Duncan en P = 0,05.

La DI y la CE se calcularon usando las siguientes fórmulas: DI ¼ 100 X re No: de

h yo 3. Resultados

frutas enfermas DS correspondiente Þ

3.1. Identificación de la cepa B106
= re No: del total de frutas 9 Þ

CE ð% Þ ¼ 100 re DI de CK DI de B106 o tratamiento fungicida Þ La cepa B106 creció en BPYDA con una colonia subterránea y de color amarillo paja. Era una
= DI de CK bacteria varilla formadora de esporas con flagelos peritricosos. La dimensión de la bacteria era
0.6-0.9 l metro 2.1–
3.5 l metro. Como se muestra en tabla 1 , los caracteres fisiológicos y bioquímicos del antagonista
tabla 1
estaban en completa correspondencia con Bacillus subtilis ( Buchanan y Gibbons, 1984 ) El ADNr 16S
Caracteres fisiológicos y bioquímicos de la cepa B106.
de la cepa B106 se amplificó con los cebadores F27 y R1492, y su secuencia se envió a la base de
Artículo probado Reacción una
datos GenBank (número de acceso: FJ598009). El análisis de la secuencia de ADNr 16S indicó que
Tinción de Gram + la cepa compartía una identidad máxima del 99% con B. subtilis. Además, la cepa B106 agrupada con
Catalasa +
dos B. subtilis cepas de GenBank en el árbol filogenético ( Figura 1 ), demostrando claramente que la
Voges – Proskauer +
cepa era miembro de B. subtilis a nivel de homología de secuencia de ADNr 16S.
Producción ácida de RE- glucosa +
Producción ácida de L- arabinosa +
Producción ácida de RE- xilosa +
Producción ácida de RE- manitol +
Hidrólisis de glutina +
Hidrolización de amilo +
Utilización de citrato de sodio. + 3.2. Actividad inhibitoria in vitro de la cepa B106 contra P. musae
Reducción de nitrato +
Peptonización de la leche +
Co-incubando la cepa B106 con P. musae en la misma placa PDA a los 28 C durante 7 días, el
Crecimiento a pH 6.8 +
primero inhibió fuertemente el crecimiento del segundo. La tasa de inhibición promedio del
Crecimiento a pH 5.7 +
Crecimiento a 50 C + antagonista contra
Crecimiento en NaCl al 7% + P. musae fue del 84,7%.
Hidrógeno sulfurado +
Rojo metilo +
Indole 3.3. Efectos de las condiciones culturales sobre la biomasa y la actividad inhibitoria de la cepa B106
Crecimiento sin oxígeno Producción de gas contra P. musae
desde RE- Descomposición de glucosa de tirosina
Agar de yema de huevo
La biomasa bacteriana expresada por los valores de OD a 625 nm (OD 625) y las tasas de
inhibición de la cepa B106 contra P. musae
una '' + ”Y '' "Representan reacciones positivas y negativas, respectivamente.
obviamente aumentó después de 3 días de incubación y posteriormente

Figura 1. Árbol filogenético que se une al vecino basado en secuencias de ADNr 16S que muestran las relaciones entre la cepa B106 y las bacterias relacionadas de la base de datos GenBank. Los números entre paréntesis representan los
números de acceso de secuencia en GenBank. Los valores de 50 o más (de 1000 réplicas) se indican en los nodos de ramificación como los porcentajes admitidos por bootstrap. La secuencia de Agrobacterium rhizogenes ( FJ527681) se usó
como un grupo externo. La barra de escala representa 0.02 sustituciones por posición de nucleótido.
66 G. Fu y col. / Control biológico 55 (2010) 1–10

Figura 2. Efectos de las condiciones culturales (A, tiempo de incubación; B, temperatura de incubación; C, pH medio; D, nutrición) sobre la biomasa (OD 625) y actividad inhibitoria (tasa de inhibición) de la cepa B106 contra P. musae. En el
experimento de A, el OD Los valores y las tasas de inhibición se midieron por separado en cada tiempo de incubación (intervalo de 24 h). En los experimentos de B, C y D, el OD Los valores y las tasas de inhibición se midieron 24 y 72 h
después de la incubación, respectivamente.

mantenido a un nivel estable. La biomasa más alta (OD 625 = 2.18) y la tasa de inhibición máxima
(85.7%) ocurrieron en el tercer y quinto día de incubación, respectivamente ( Figura 2 UNA).

La cepa B106 podría crecer a temperaturas de 13 a 43 ° C y todas las suspensiones celulares

resultantes mostraron actividades inhibitorias contra P. musae a diferentes niveles La biomasa más
alta (OD 625 = 2.24) y la tasa de inhibición máxima (73.4%) se observó a los 31 C. El rango de
temperatura para que la cepa exprese biomasa más alta y actividades inhibitorias más fuertes fue
31-34 C. Dentro del rango de temperatura de 10–31 C, tanto la biomasa como la tasa de inhibición
aumentaron con el aumento de la temperatura. Como la temperatura excedió 31 C, tanto la biomasa
como la tasa de inhibición disminuyeron. Ni el crecimiento del antagonista ni la actividad inhibitoria
del medio inoculado contra P. musae se encontró a 10 C ( Figura 2 SI).

Los pH para que la cepa B106 crezca y exprese actividades inhibitorias fueron 3.0-11.0. La
biomasa más alta (OD 625 = 2.04) y la tasa de inhibición máxima (85.1%) se observaron a pH 6.5 y pH
6.0, respectivamente. pH 5.0–8.0 fue un rango adecuado para que la cepa exprese actividades
inhibitorias más altas ( Figura 2 C).

El crecimiento de la cepa B106 y su actividad inhibitoria contra

P. musae fueron detectados en todos los medios probados. La biomasa más alta (OD 625 = 2.21) y la
tasa de inhibición (87.8%) se observaron en EM. Además, las tasas de biomasa e inhibición de la Fig. 3. Comparación del índice de enfermedad (A) y la eficacia de control (B) entre los diferentes tratamientos para

cepa B106 cultivadas en PDB, BPYDB, los medios No. 1 e YDB de Gause fueron más altas que las
de los otros medios excepto EM. Por otro lado, se descubrió que siete medios, incluidos Czapek,
Keshi No.1, PB, SS, ADS y SB, son adecuados para que la cepa exprese una actividad inhibidora
más fuerte contra P. musae en el que las tasas de inhibición fueron superiores al 60%, pero no para
su crecimiento ( Figura 2 RE).
3.4. Eficacia de la cepa B106 en el control de la Sigatoka amarilla en invernadero
suprimir las manchas de la hoja de plátano causadas por P. musae en invernadero Las investigaciones se llevaron a
cabo 10 y 14 días después de los tratamientos, respectivamente. El índice de enfermedad (DI) y la eficacia del control
del invernadero (GCE) se calcularon utilizando las siguientes fórmulas: DI ¼ 100 PAGS re No: de hojas afectadas
½
DS correspondiente Þ? = Ð No: del total de hojas 9 Þ; CME ð% Þ ¼ 100 re DI de CK-DI de B106 o tratamiento fungicida Þ
= DI de CK. La gravedad de la enfermedad (DS), expresada como un porcentaje del área infectada sobre el área total
de la hoja, se dividió en cinco clasificaciones. Los valores son las medias de tres réplicas. Las medias con las mismas
letras no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de rango múltiple de Duncan en P = 0,05. SA: cepa
B106 aplicada en las hojas de plátano 2 días después P. musae inoculación; SB: cepa B106 aplicada en las hojas de
plátano 2 días antes P. musae inoculación; PA: propiconazol aplicado 2 días después P. musae inoculación.

Los cambios de DI en el ensayo de invernadero se muestran en Fig. 3 A. de aplicación, y aumentó a 21.9 después de 14 días de aplicación, que fueron más bajos que los del
La DI del tratamiento SB (cepa B106 aplicada en las hojas de plátano 2 días antes P. musae inoculación) tratamiento SA (cepa B106 aplicada en las hojas de plátano 2 días después P. musae inoculación)
fue 12.4 después de 10 días
 G. Fu y col. / Control biológico 55 (2010) 1–10 77

Tabla 2
Desarrollo de enfermedades de la mancha foliar del banano representadas por un índice de enfermedad (DI) y afectadas por aplicaciones de la cepa de control biológico B106 o propiconazol en los senderos de campo de 2007 y 2008.

Año Tratamiento Índice de enfermedad (DI) una

0 dias 14 dias 28 dias 38 días

2007 Cepa B106 3.8a si 5.9ab 9.8b 17.8bc

Propiconazol 4.1a 4.6c 6.4c 10.7cd
CK 3.4a 6.1b 12.5b 28.1a

2008 Cepa B106 3.1a 7.2a 11.8b 20,2b

Propiconazol 2.6a 3.9c 5.6c 9.3d
CK 2.9a 7.8a 16.2a 36,6a

una Las aplicaciones de la cepa B106 / propiconazol se realizaron tres veces a intervalos de 14 días. Las investigaciones del índice de enfermedad (DI) se llevaron a cabo 14, 28 y 38 días después de la primera aplicación, respectivamente. La

DI se calculó utilizando la fórmula: DI ¼ 100 PAGS re No: de hojas afectadas DS correspondiente Þ ½ = re No: del total de hojas 9 Þ.

La gravedad de la enfermedad (DS), expresada como un porcentaje del área infectada sobre el área total de la hoja, se dividió en cinco clasificaciones.
si Los valores son las medias de tres réplicas. Las medias en una columna seguidas de las mismas letras no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de rango múltiple de Duncan en P = 0,05.

Tabla 3
Eficacia de control de campo (FCE) de aplicaciones de la cepa de biocontrol B106 o propiconazol contra enfermedades de manchas de hojas de banano en ensayos de 2007 y 2008.

Año Tratamiento Eficacia de control de campo (FCE) una

14 dias 28 dias 38 días

2007 Cepa B106 11,2 b si 29.5b 41,2b

Propiconazol 38,7b 58.4b 74,6a

2008 Cepa B106 15,6b 33,2b 48,3b

Propiconazol 40.2a 55,3a 76.2a

una Las aplicaciones de la cepa B106 / propiconazol se realizaron tres veces a intervalos de 14 días. Las investigaciones de eficacia de control de campo (FCE) se llevaron a cabo 14, 28 y 38 días después de la primera aplicación,
respectivamente. El FCE se calculó utilizando la fórmula: FCE (%) = [1 (BN DI del bloque de tratamiento en la segunda o tercera aplicación) / (DI del bloque de tratamiento en la primera aplicación DI del bloque CK en la segunda o tercera
aplicación)] 100% El índice de enfermedad (DI) de la CK determinado en la primera aplicación se utilizó como el número base (BN).

si Los valores son las medias de tres réplicas. Las medias en una columna seguidas de las mismas letras no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de rango múltiple de Duncan en P = 0,05.

y la CK, pero superior a la del tratamiento con AP (propiconazol aplicado 2 días después P. musae inoculación).

La prueba de invernadero mostró que el 72.3% de eficacia de la cepa B106 en el control de la

Sigatoka amarilla causada por P. musae se observó 10 días después de la aplicación del
antagonista. Se descubrió que el tratamiento SB es más efectivo para suprimir la infección posterior
por P. musae en comparación con el tratamiento SA en el que la aplicación del antagonista se realizó
2 días después de la inoculación con P. musae.

La eficacia de la cepa B106 en el control de la Sigatoka amarilla fue menor que la de la aplicación de
propiconazol. Existieron diferencias significativas en la CE entre la cepa 106 y los tratamientos con
propiconazol o entre cada uno de los tratamientos y la CK. La eficacia del antagonista y el
propiconazol para controlar la enfermedad disminuyó después de 14 días de incubación ( Fig. 3 SI).

3.5. Eficacia de la cepa B106 en el control de las manchas de la hoja de plátano infectadas
naturalmente por múltiples patógenos en el campo

Los cambios en las DI de las manchas de la hoja de plátano infectadas naturalmente por
múltiples patógenos en el campo después de la cepa B106 y las aplicaciones de propiconazol en
2007 y 2008 se muestran en Tabla 2 . Al comienzo de los ensayos, las DI de la cepa B106,
propiconazol y CK fueron 3.4–4.1 para 2007 y 2.6–3.1 para 2008, respectivamente. No se observó
una diferencia significativa en las DI entre las parcelas experimentales, lo que indica una distribución
uniforme de las enfermedades de las manchas foliares en el campo antes de rociar la cepa
antagonista en las plantas de banano. Después de la tercera aplicación en 2007, la DI promedio del
tratamiento de la cepa B106 fue de 17.8, que fue significativamente menor que CK (28.1), pero
Fig.4. Comparación del índice de enfermedad (A) y la eficacia de control (B) entre la cepa B106 y los tratamientos con
procloraz contra la enfermedad de antracnosis poscosecha del banano. Las investigaciones se llevaron a cabo 14 y 17
días después de los tratamientos, respectivamente. El índice de enfermedad (DI) y la eficacia de control (CE) se
calcularon utilizando las siguientes fórmulas: DI ¼ 100 PAGS re No: de frutas enfermas DS correspondiente Þ
½ = re No: del total
frutas 9 9 Þ; CE ð% Þ ¼ 100 re DI de CK DI de B106 o tratamiento fungicida Þ = DI de CK. Los valores son las medias de
tres réplicas. Las medias con las mismas letras no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de rango

mayor que la aplicación de propiconazol (10.7). Se observaron resultados similares en el segundo múltiple de Duncan en P = 0,05.

ensayo de campo en 2008.

La eficacia de la cepa B106 en el control de las manchas de la hoja de plátano en el campo se
muestra en Tabla 3 . En el primer ensayo de campo en 2007, el CE aumentó con el mayor número de
aplicaciones de antagonistas.
y alcanzó el 41,2% 10 días después de la última aplicación de antagonista. En el segundo ensayo de
campo en 2008, la cepa B106 cultivada en condiciones optimizadas mostró una CE más alta en
comparación con la primera. La eficacia del antagonista en el control de las manchas foliares
aumentó con el mayor número de la aplicación del antagonista, y alcanzó el 48,3% 10 días después
de su última aplicación. La eficacia de
8 G. Fu y col. / Control biológico 55 (2010) 1–10
El propiconazol en el control de las manchas de la hoja de plátano fue mayor que el del antagonista
en ambos ensayos. Existía una diferencia significativa en CE entre el fungicida y los tratamientos
antagonistas.
3.6. Eficacia de la cepa B106 en el control de la antracnosis poscosecha del banano
La eficacia de la cepa B106 en el control de la antracnosis poscosecha del banano se muestra
en Fig. 4 . Después de 14 días de la aplicación del antagonista, el DI promedio del tratamiento con la
cepa B106 fue de 13.4 ( Fig. 4 A), que fue significativamente más bajo que el de CK (26.5), pero más
alto que el del tratamiento con procloraz (4.9). El CE promedio del antagonista fue 48.6%, que fue
significativamente menor que el del tratamiento con procloraz (81.4%) a un nivel significativo de
P = 0,05 ( Fig. 4 SI). Después de 17 días de almacenamiento, el DI promedio del tratamiento de la
cepa B106 aumentó a 28.7 ( Fig. 4 A), que fue sustancialmente más bajo que el de CK (56.5), pero
más alto que el del tratamiento con procloraz (12.9). El CE promedio del antagonista fue del 41,2%,
que fue significativamente menor que el del tratamiento con procloraz (78,8%) a un nivel de
significación de P = 0,05 ( Fig. 4 SI).
4. Discusión
En este trabajo, la cepa de biocontrol B106 se identificó utilizando métodos bacteriológicos y
moleculares. Los caracteres morfológicos, fisiológicos y bioquímicos de la cepa antagonista
coincidieron con los de B. subtilis ( Buchanan y Gibbons, 1984 ) La secuencia de ADNr 16S, una
secuencia de bacterias conservada evolutivamente, se ha utilizado intensamente como referencia
clave para la identificación bacteriana ( Alvindia y Natsuaki, 2009; Ayyadurai et al., 2006; Zheng et al.,
2008; Stackebrandt y Goebel, 1994 ), haciendo que la identificación de una cepa bacteriana sea más
rápida y precisa. Los resultados basados ​en ambas propiedades bacteriológicas ( tabla 1 ) y análisis
de secuencia de ADNr 16S ( Figura 1 ) demostró claramente que el antagonista era miembro de B.
subtilis.
Como agente de biocontrol, Bacilo spp. se ha informado para el control de enfermedades del
banano inducidas por una sola plaga, como el marchitamiento del banano (enfermedad de Panamá),
antracnosis del banano, nematodo del nudo de la raíz del banano y el virus de la parte superior del
racimo del banano ( Severn-Ellis, 2001; Chen y col., 2004; He et al., 2002; Janisiewicz y Korsten,
2002; Jonathan y Umamaheswari, 2006; Harish et al., 2009 ) Jiménez y col. (1987) reportado Pseudomonas
sp. como agente de biocontrol de Sigatoka negra de plátanos. Sin embargo, la CE de Pseudomonas sp.
se confirmó solo en condiciones de invernadero y se descubrió que su capacidad de colonización era
débil en la superficie de las hojas de plátano. Dos cepas de Serratia marcescens También se informó
sobre el control de la Sigatoka negra de plátanos en el campo con la misma eficacia que los
fungicidas convencionales ( González et al., 1996 ) Sin embargo, la tensión de
Serratia marcescens aislado por Miranda no pudo controlar esta mancha foliar de manera efectiva ( Mirandaaplicaciones antagónicas de antagonistas en los ensayos de invernadero y poscosecha sugirió que la
Corrales, 1996 ) Este es el primer informe de
B. subtilis como agente de biocontrol contra las manchas de la hoja del plátano causadas por múltiples
hongos patógenos en el campo.
La existencia de una zona de inhibición que rodea a una colonia de la cepa B106 indicó la
producción de sustancias antibióticas desconocidas por el antagonista (datos no mostrados).
Inducción de proteínas relacionadas con la defensa mediante mezclas de bacterias endofíticas
promotoras del crecimiento de las plantas, incluyendo Bacilo spp. contra el virus superior del racimo
de plátano se ha informado ( Harish et al., 2009 ) Los posibles mecanismos para la cepa B106 para
suprimir las enfermedades de la mancha foliar del plátano podrían considerarse de la siguiente
manera: (1) la producción de la (s) sustancia (s) antibiótica (s) no identificada (s) por el antagonista
condujo a la supresión de las manchas foliares del banano y (2) La resistencia adquirida sistémica de
las plantas de banano podría ser inducida por el antagonista.
Es un requisito previo importante obtener un agente de biocontrol con una mayor tolerancia al
estrés ambiental y un amplio antagonismo.
espectro contra múltiples patógenos que causan manchas de hojas de banano para un campo de
biocontrol exitoso de las enfermedades. La capacidad de tolerancia al estrés de B. subtilis Se
descubrió que era más fuerte que otras bacterias que carecían de esporas en sus ciclos de vida. La
cepa B106 tenía un amplio espectro antagónico contra todos los patógenos fúngicos prevalentes que
causan las manchas de hojas de plátano en el municipio de Jinling, ciudad de Nanning, donde se
realizaron los ensayos de campo ( Fu et al., 2007 ) Los datos experimentales en el presente estudio
sugirieron que la cepa bacteriana podría considerarse como un agente de control biológico
prometedor para suprimir las enfermedades de la mancha foliar del banano, independientemente de
que su FCE no fuera tan alto como el propiconazol, que fue reconocido como el fungicida más eficaz
para controlar el manchas de hoja de plátano en el campo.
Se ha informado que el nivel de inóculo inicial afecta el crecimiento de bacterias en los medios ( Chen
y otros, 1998 ) En el presente estudio, las concentraciones iniciales de la cepa B106 en todos los
medios utilizados para la optimización de las condiciones culturales estaban en el mismo nivel, lo que
permitió una comparación de la biomasa entre varios tratamientos. Los resultados experimentales
indicaron que la condición cultural optimizada para que la cepa B106 exprese una mayor actividad
antagonista contra
P. musae, El patógeno más frecuente que causó manchas en la hoja de plátano en el campo, fue la
combinación de 31 C, pH 6,0, EMmedio y 5 días de incubación. Sin embargo, la condición cultural
optimizada para que el antagonista produzca mayor biomasa fue la combinación de 31–34 C, pH 6,5,
medio EM y 3 días de incubación. La cepa B106 se cultivó en condiciones culturales optimizadas en
el segundo campo de prueba. La cepa antagonista mostró una CE más alta en el segundo ensayo
comparado con el primero en el que la bacteria se cultivó en condiciones no optimizadas ( Tabla 3 )
Los resultados sugirieron que la optimización de las condiciones culturales podría considerarse como
un punto clave para la mejora del FCE del antagonista contra las enfermedades de la mancha foliar
del banano. En este trabajo, solo se utilizaron 16 tipos de medios líquidos para la optimización de las
condiciones culturales. El potencial para una mayor optimización de las condiciones culturales
todavía existe a medida que se expande el número de diferentes medios probados. Además, las
mejoras en las condiciones aplicadas en el campo también pueden ser otra forma efectiva. Por otro
lado, la mutagénesis del antagonista y el cribado de mutantes con mayor productividad de la (s)
sustancia (s) antibiótica (s) podría conducir a una mayor mejora de su CE contra las enfermedades
del banano.
En los ensayos de campo, los CE del antagonista y el propiconazol aumentaron con el mayor
número de aplicaciones ( Tabla 3 ) Sin embargo, en el invernadero ( Fig. 3 B) y poscosecha ( Fig. 4 B)
ensayos, tanto los CE de los tratamientos con antagonistas como los fungicidas disminuyeron a
medida que transcurrió el tiempo. Los resultados indicaron que las aplicaciones sucesivas del
antagonista o fungicida condujeron a una escalada de CE. La disminución de la CE en las
bacteria no podía mantener su población en las hojas o frutos a un nivel alto durante un período más
largo. Las razones de la disminución de la CE pueden deberse a la deficiencia nutricional en la
superficie de las hojas o frutos de plátano.
Por otro lado, la supresión de la enfermedad por la cepa B106 en el campo no fue tan marcada
como las observadas en el invernadero. Las razones de la diferencia entre GCE y FCE podrían
considerarse de la siguiente manera: (1) El agente causal de las manchas de la hoja de banano en el
ensayo de invernadero fue un solo patógeno ( P. musae), mientras que varios patógenos incluyen P.
musae, C. musae, H. torulosa, A. musae,
C. lunata, estuvieron involucrados en las manchas de hojas de banano en los ensayos de campo. Las
sensibilidades de estos patógenos al antagonista diferían entre sí ( Fu et al., 2007). (2) Las
condiciones ambientales del campo podrían ser más severas que las del invernadero para la
supervivencia.
 G. Fu y col. / Control biológico 55 (2010) 1–10
y reproducción del antagonista. El estrés ambiental, como la luz solar intensa, la sequedad, las altas
temperaturas y la competencia con los microorganismos autóctonos de las hojas, probablemente
reducirían la capacidad de colonización y biocontrol de la cepa B106 en condiciones de campo. Por
lo tanto, podrían ser necesarias más investigaciones sobre la dinámica de la población del
antagonista y otros eventos ecológicos relacionados en / en una planta de banano para la
optimización de las condiciones aplicadas en el campo en el futuro.
Expresiones de gratitud
Esta investigación ha sido financiada en parte por subvenciones del Departamento de Ciencia y
Tecnología de la Región Autónoma Zhuang de Guangxi (Proyectos Nos. 0728071 y 0991056), la
Oficina de Ciencia y Tecnología de la ciudad de Nanning (Proyecto No. 20060142B) y la beca de
investigación especial de Guangxi Academia de Ciencias Agrícolas (Proyecto No. 200925).
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