UNIVERSIDAD INCCA DE COLOMBIA

PRIMER INFORME DE LABORATORIO DE INMUNOLOGIA

Daniela Botero Restrepo – Cód. 70837., Andrea Milena Guatibonza Carreño – Cód.
70871
Departamento de Biología, Universidad INCCA de Colombia, Bogotá – Colombia
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ORGANOS LINFOIDES Y SUSPENCIONES CELULARES

INTRODUCCIÓN

En la respuesta inmune participan células y moléculas distribuidas por todo el

organismo, tanto en la circulación como en los diversos tejidos del organismo. Sin
embargo, grupos de células inmunocompetentes conforman tejidos especializados
del sistema inmune, los que a su vez se integran como órganos linfoides. (Vega.
2009)

Los órganos linfoides primarios o centrales son aquellos en los que los linfocitos se
originan y maduran, a través del mecanismo de linfopoyesis y/o adquisición de las
características que los capacitan a responder ante un antígeno extraño. (Vega.2009)
Solo después de que los linfocitos maduran, la célula es capaz de generar una
respuesta inmunitaria. Un ejemplo de órganos linfoides primarios es el Timo el cual
es el sitio de desarrollo y maduración de células T y la medula ósea la cual es el sitio
de desarrollo y maduración de linfocitos B en los humanos. (Kindt.2007)

Los órganos linfoides secundarios o periféricos son estructuras especializadas en la

recolección de antígenos de distintos compartimentos anatómicos. En ellos se lleva
a cabo la activación de los linfocitos maduros, a través de la presentación o el
contacto con el antígeno, lo que da inicio a la respuesta inmune específica, con la
siguiente proliferación clonal y la generación de células de memoria. (Vega.2009)

Los ganglios linfáticos y el bazo son los órganos linfoides secundarios más
altamente organizados, no solo incluyen folículos linfoides sino también regiones
adicionales precisas de actividad de células T y B, además que están rodeados por
una capsula fibrosa. El tejido linfoide menos organizado, conocido en conjunto
como tejido linfoide asociado a mucosas MALT se encuentra en varios sitios del
cuerpo. El MALT incluye las placas de Peyer, las amígdalas y el apéndice así como
múltiples folículos linfoides dentro de la lámina propia de los intestinos y las
mucosas que recubren las vías respiratorias superiores, los bronquios y el aparato
genitourinario. (Kindt.2007)

OBJETIVOS

 Identificar los órganos linfoides en ratones.

  Preparar suspensiones celulares a partir de bazo, timo y ganglios linfáticos
de ratón.
 Aprender técnicas de manipulación de células para lograr obtener un buen
recuento celular con una alta viabilidad.

MATERIALES Y MÉTODOS

Inicialmente, se mató al ratón por dislocación cervical para fijarlo por las
extremidades con alfileres en posición dorsal, para que facilitara la observación de
los órganos linfoides: bazo, timo y ganglios linfáticos. Se realizó una incisión
grande, longitudinal y ventral, se haló la piel con pinzas para separarla del peritoneo
con las tijeras. Luego, se retiraron los ganglios linfáticos, el timo y el bazo, cada uno
se dejó sobre una caja de Petri pequeña la cual contenía 3mL de Medio Esencial
Mínimo (MEM). Posteriormente, para las suspensiones de los órganos linfoides, se
separaron en pequeños pedazos con ayuda de un par de alfileres, manteniendo
siempre la suspensión sobre baño de hielo. Éstas fueron filtradas y centrifugadas
durante 10 min a 1500 rpm. Se descartó el sobrenadante y se resuspendió el
precipitado con 5 mL de MEM; se dejó sobre baño de hielo por 10 min para
permitir la precipitación de las partículas grandes; se pasó el sobrenadante a otro
tubo para centrifugar por 10 min a 1500 rpm. Por último, se descarto el
sobrenadante y se resuspendió el precipitado en 1 mL de MEM.

Conteo de células

Se tomó 0.1 mL de la suspensión celular y se le adicionó 0.9 mL de ácido acético

0.3% cristal violeta (solución 1/10) y se mezcló suavemente. Se colocó una gota de
esta solución en la cámara de Neubauer para hacer el conteo de las células en dos
cuadrantes y calcular el número de células/mL, teniendo en cuenta la ecuación (1).

No . c é lulas No . de celulas en 2cuadrantes

mL
=( 2 )
∗10∗10 mm3 (1)

Determinación de la viabilidad

Se tomó 0,1 mL de la suspensión celular y se le añadió 0.9 mL de MEM (solución

1/10), se mezcló suavemente. Posteriormente, de la solución 1/10 se tomó 0,1mL y
se le añadió 0,1mL de azul de Trypan y se mezcló. Este procedimiento fue llevado a
cabo justamente antes de hacer el conteo debido a que el colorante es tóxico. Por
último, se colocó una gota de la mezcla sobre un portaobjetos y se cubrió con una
laminilla de 22 x 22. La lectura fue realizada en un aumento de 40X.

DATOS

En la Tabla 1. Se muestra el número de células contadas por cuadrante en la cámara

de Neubauer y el promedio respectivo para cada órgano (para ganglios linfáticos no
se realizó esta prueba).
 Tabla 1. Conteo de células .
ÓRGANO No. células No. células X́
cuadrante 1 cuadrante 2
Bazo 165 223 194
Timo 56 36 46
Ganglios linfáticos - - -

En la Tabla 2. Se muestra el número de células vivas y células muertas para llevar a

cabo el cálculo del porcentaje de viabilidad de las células en cada órgano (para el
timo no se realizó conteo).

Tabla 2. Conteo de células para determinar el porcentaje de viabilidad.

ÓRGANO No. células vivas No. células
muertas
Bazo 100 6
Timo - -
Ganglios linfáticos 16 3

RESULTADOS

Conteo de células

El conteo celular para la determinación del número de células por mililitro (mL) se
llevó a cabo sustituyendo en Ec. 1 los valores obtenidos en el conteo de células
(tabla 1).

No . c é lulas de bazo
=( 194 c é lulas )∗10∗10 mm 3
mL
No . c é lulas de bazo
=1.940 .000 celulas de bazo /mL
mL

Tabla 3. Número de células de cada órgano por mL.

ORGANO No. de células / mL

Bazo 1.940.000
Timo 460.000

Determinación de la viabilidad

Tabla 4. Porcentaje de viabilidad celular

ORGANO % Viabilidad
Bazo 94,34
Ganglios linfáticos 84,21
DISCUSION

Durante el conteo de células en la cámara de Neubauer, se pudo observar que las

células del bazo presentaron un mayor número de células por ml a comparación que
las células del timo, esto se debe a cabo de que para el bazo al realizarse un
procedimiento igual que para el timo y los ganglios linfáticos en la extracción de
células, pudo haber desprendido mayor cantidad de estas, las cuales no eran
específicamente de bazo, sino que también podría llevar otro tipo de tejidos
incluidos, ya que el bazo extraído era de un tamaño superior al normal, esto pudo
haber causado el incremento de las células que presentaba el bazo.

En la viabilidad se observó que el bazo presentaba un mayor porcentaje de células

vivas y en segundo lugar se encuentran los ganglios linfáticos, para timo no se
observó viabilidad, debido a que se obtuvo una cantidad de precipitado de células
muy pequeño, lo cual al realizarle todo el procedimiento de tinción para viabilidad
esta no se lograron observar.

Para ganglios linfáticos se obtuvo un porcentaje mayor de células muertas, lo cual

pudo deberse a que en el procedimiento no se tuvieron las condiciones necesarias en
cuanto a la temperatura y el tiempo, lo que pudo ocasionar la muerte de estas.

BIBLIOGRAFIA
Murphy K., Travers P., Walport M. 2009. “Inmunología de Janeway”. Séptima
edición. McGraw-Hill Interamericana Editores S.A. de C.V. México. Pp. 34.

Kindt T., Goldsby R., Osborne B. 2007. “Inmunología de Kuby”. Sexta edición.
McGraw-Hill Interamericana Editores S.A. de C.V. México. Pp. 63 – 72.

Vega G. 2009. “Órganos linfoides”. Departamento de Medicina Experimental,

Facultad de Medicina, UNAM. Rev. FacMed UNAM Vol 52 No.5 [Recurso
Internet] Disponible: http://www.ejournal.unam.mx/rfm/no52-
5/RFM052000510.pdf