CÓDIGO FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN 01 PÁGINA 1 DE 2

PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA 02/09/2016
FORMATO GUIA PARA PRACTICA DE LABORATORIO VIGENCIA:

CURSO DE BIOTECNOLOGIA
PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA Y CIENCIAS AGRICOLAS
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES

Laboratorio Nº 4.
Tema: Evaluación y aislamiento de Bacillus thuringiensis, como microrganismo con efecto
biocontrolador en insectos.

Objetivo general.

Identificar microorganismo con potencial biotecnológico, desarrollando procesos de aislamiento,

identificación metabólica y reproducción. Para establecer procesos estandarizados bajo las
necesidad productivas y aplicadas del medio agrícola.

Objetivos específicos

• Establecer el grado de relación entre la producción metabólica secundaria y las diferentes

fases de una curva de crecimiento microbiano.
• Asilar el microorganismo e identificar sus características microscópicas y macroscópicas.
• Identificar las necesidades nutricionales del microorganismo de interés y cómo influye está
en la expresión genética de su capacidad biocontroladora.
• Evaluar su capacidad biocontroladora

Palabras claves.

• Crecimiento: incremento en el número de células.

• Crecimiento Exponencial: crecimiento de un microorganismo cuyo número de células se
duplica en un período constante de tiempo.
• Cultivo Tipo Batch o Monofásico: cultivo microbiano que funciona como un sistema
cerrado de volumen constante.
• Fase Estacionaria: período que sigue al crecimiento exponencial cuando la velocidad de
crecimiento de la población es cero.
• Fase Lag. Período anterior a la fase de crecimiento exponencial cuando las células pueden
tener un metabolismo activo, pero aún no crecen.
• Proteasas: enzimas que degradan proteínas por hidrólisis.
• Bioreactor: Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente
biológicamente activo. En algunos casos, un biorreactor es un recipiente en el que se lleva
a cabo un proceso químico que involucra organismos o sustancias bioquímicamente activas
derivadas de dichos organismos

Marco contextual.

Bacillus thuringiensis (Bt), es una bacteria Gram positiva, aeróbica (Radnedge et al., 2003), se
caracteriza por la producción de una inclusión esporas de origen proteico o endotoxina durante la
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fase de esporulación, responsable del efecto insecticida que se produce cuando son ingeridas por
larvas de insectos de diferentes órdenes, tales como Lepidóptera (polillas y mariposas),
Díptera(moscas y mosquitos), Coleóptera (escarabajos) e Himenóptera (abejas y avispas), en menor
medida son afectados los órdenes Homóptera (cigarras, pulgones y cochinillas) y Mallophaga (piojos)
(Schnepf, et al.,1998), incluso afecta otros invertebrados como Platyhelminthes, Sarcomastigophora,
(Feitelson y Payne 1992) y Nematoda (Al-Banna y Khyami- Horani, 2004), mientras que en los
mamíferos no se ha comprobado efecto alguno (Cerón et al., 1995; Maduell et al., 2007). La actividad
tóxica, se extiende a protozoarios, trematodos, ácaros, colémbolos y lombrices de tierra, entre otros
de interés agrícola (Velasco, 2010).
El mecanismo de acción del Bt consiste en que el insecto ingiere
en su alimentación las esporas o PCI de Bt, las cuales se desintegran, producto del pH alcalino en
el intestino del insecto. Luego, el cristal paraesporal libera la toxina, la que se asocia a receptores
de la membrana intestinal formando poros que rompen la pared, produciéndose una alteración del
balance iónico, que finalmente conduce a la parálisis intestinal y el insecto deja de alimentarse.
Tiempo después se produce una infección por la multiplicación de las bacterias que conduce a la
muerte de las larvas (Fernández, 2002).

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REACTIVOS Y EQUIPOS

 Microorganismo Bacillus thuringiesis

 Cajas con agar nutritivo,
 agar Baird Parker con adición de yema de huevo y sin ella.

PROCEDIMIENTO.

1. En la clase anterior se evaluación una muestra y se sembró en caja con agar nutritivo.
2. La actividad consiste en selección de colonias para evaluación microscópicas y
macroscópicas
3. Seleccione la colonia y repique en agar. Por favor identificarlos.
4. Se tiene 4 patrones de comparación, descríbalos. No olvide tener en cuenta la curva de
crecimiento.
5. Realice preparación de medios para evaluación bioquímica
6. evalué la presencia de cristales. Recuerde hacer repique en cajas de agar nutritivo
7. Siembre en tubo para evaluación bioquímica.
8. Diseñe un bio reactor.
9. Confronte en gusanos a por lo menos tres concentraciones.

7. BIBLIOGRAFÍA
Jagnow, G., David, W. Bitecnología. Introducción con experimentos. 1991. Editorial Acribia.
Zaragoza, España. 251p.
Madigan, M., Martinko, J., Prker, J. 2004. Brock. Biología de los Microorganismos. Décima edición.
Pearson Education S.A.
Madrid. 1011p