Cárdenas J, Pinzón J, Martínez L.

EVALUACION DE ACCION
BIOCONTROLADORA.

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

Facultad de Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales
Ingeniera Agroindustrial
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA
Evaluación de acción biocontroladora de microorganismos antagonistas

Juan Diego Cárdenas Duran1 Cód.: 117003704. Correo: juan.cardenas.duran@unillanos.edu.co, Gloria Jineth Pinzón 2 Cód.:
117003828 Correo: gloria.pinzon@unillanos.edu.co, Ludy Manuela Martinez 3 Cód.: 117003821. Correo:
ludy.martinez@unillanos.edu.co

Resumen
Para el desarrollo de la practica fue necesario esterilizar todos los materiales que se iban a utilizar (caja de
Petri) con el fin de evitar la inoculacion de microorganismos que estuviesen inicialmente en ellas. Dado
que el objetivo de la practica era observar que tipos de microorganismos son los que suelen habitar en el
aire de diferentes entornos de la universidad de los llanos. Para la preparacion de cultivos se utilizaron dos
tipos de medio, los cuales fueron Agar PDA y Agar nutritivo dado que estos poseen caractristicas diferentes
en su composicion y funcion, por consiguiente inocularan microorganismos de diferentes dominios.
Resultando que para el Agar nutritivo se observo una mayor presencia de actividad microbiana en las cajas
de petri ubicadas afuera del laboratorio con 38 UFC y en el meson del laboratorio A con 41 UFC. Y por el
contrario se presento la menor actividad microbiana en la caja de petri ubicada en el cuarto de vacio, lo que
hace inferir que los microorganismos no se pueden propagar con facilidad en un medio que carece de
corrientes de aire. Los resultados obtenidos para el Agar PDA fueron similares ya que tambien se presento
la mayor presencia microbiana en las cajas de petri ubicadas afuera del laboratorio y sobre el meson del
laboratorio A.
Palabras Claves: Agar PDA, Agar nutritivo, UFC, esterilización, actividad microbiana, inocular.
Abstract:
For the development of the practice it is necessary to sterilize all the materials that can be used (petri dish)
in order to avoid the inoculation of microorganisms that were initially in them. Since the objective of the
practice was to observe that the types of microorganisms are those that usually inhabit the air of different
environments of the University of the Plains. For the preparation of cultures were used the types of medium,
which were PDA agar and nutrient agar, since these have different characteristics in their composition and
function, by inoculating microorganisms from different domains. As a result, for the nutritive oil, a mayor
of the microbial activity is observed in the petri dishes located outside the laboratory with 38 CFU and in
the inn of laboratory A with 41 CFU. On the contrary, there is less microbial activity in the petri dish located
in the vacuum room, which means that microorganisms can’t be easily propagated in a medium that lacks
air currents. The results obtained for the PDA Agar were similar to those also presented to the mayor of the
microbial in the boxes of petri located outside the laboratory and on the inn of laboratory A.
Keywords: PDA agar, nutritive agar, UFC, sterilization, microbial activity, inoculate.

OBJETIVOS
1
 Cárdenas J, Pinzón J, Martínez L.
● Desarrollar competencias en el manejo
de conceptos sobre agentes
biocontroladores y su aprovechamiento
agroindustrial, en la prevención de
enfermedades o daños y su efecto
sinérgico en el crecimiento.
Objetivos específicos
● Identificar microorganismos u hongos
antagónicos según sea el caso en la
siembra en caja de Petri.
● Clasificar los biocontroladores y el
mecanismo con el que genera su
actividad biocontroladora.
● Reconocer métodos de caracterización y
selección de organismos de control
biológico.
● Identificar agentes de control biológico
en base a su mecanismo de acción y
eficiencia.
INTRODUCCIÓN
Los antagonistas contribuyen a la atenuación
de los daños que causan las enfermedades,
en los agros ecosistemas donde existan
condiciones para su desarrollo y
conservación. Para lograr este objetivo los
microorganismos beneficiosos presentan
diferentes modos de acción que les permitan
ejercer su efecto biorregulador. Estos
atributos, de conjunto con la capacidad de
multiplicarse abundantemente, se
encuentran entre los de mayor importancia
para su selección como agentes de control
biológico (Martínez, Infante, Gonzales, &
Reyes, 2009)
no es fácil determinar con precisión los
mecanismos que intervienen en las
interacciones entre los antagonistas y los
patógenos sobre la planta o en las heridas. en
general los antagonistas no tienen un único
Efecto del lactonfenol en la estructura
fungica
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EVALUACION DE ACCION
BIOCONTROLADORA.
modo de acción y la multiplicidad de modos
de acción es una característica a seleccionar
en un antagonista. se han descrito varios
mecanismos de acción de los antagonistas
para controlar el desarrollo de patógenos
sobre fruta. ellos son: antibiosis,
competencia por espacio o por nutrientes,
interacciones directas con el patógeno
(micoparasitismo, lisis enzimática), e
inducción de resistencia.
Competencia. Esta constituye un
mecanismo de acción antagónica muy
importante. Puede definirse como el
comportamiento desigual de dos o más
organismos ante un mismo requerimiento,
siempre y cuando la utilización del mismo
por uno de los organismos reduzca la
cantidad disponible para los demás. Un
factor esencial para que exista competencia
es la escasez o limitación de un elemento
porque si hay exceso no hay competencia.
Competencia por nutrimentos. La
competencia más común es por
nutrimentos, oxígeno o espacio. Botrytis
cinerea y Penicillium expansum son dos
hongos de poscosecha típicamente
dependientes de los nutrimentos, como
hongos necrotróficos sus esporas requieren
de estas sustancias para germinar y
comenzar el crecimiento de las hifas antes
de penetrar al sustrato.
Competencia por espacio. Este tipo de
competencia también ha sido evaluado. Las
levaduras son eficaces colonizadoras de la
superficie de plantas y se destaca la
producción de materiales extracelulares
(especialmente polisacáridos) que
restringen el espacio para la colonización
por otros microorganismos
La tinción con azul de lacto fenol es un
método utilizado en la realización de
preparaciones microscópicas para la
observación de hongos en muestras no
patológicas. El azul de algodón posee la
 Cárdenas J, Pinzón J, Martínez L. EVALUACION DE ACCION
BIOCONTROLADORA.

capacidad de adherirse a la quitina presente

en las hifas y conidios de los hongos
microscópicos.
Cada uno de los componentes del colorante
azul de lactofenol cumple una función
determinada. El fenol actúa como fungicida
destruyendo la flora acompañante, el ácido
láctico conserva las estructuras fúngicas al
provocar un cambio de gradiente osmótico
con relación al interior del fúngico
generando una película.
Imagen2. Vista a ..X de geotricum spp.
Resultados
Tabla 2. Características macroscópicas y
Tabla 1. Características macroscópicas y microscópicas del microrganismo antagonista
microscópicas del microrganismo antagonista identificado en agar PC
identificado en agar YGC
Características Morfotipo
Características Morfotipo morfológica
morfológica forma Regular/irregular
forma Regular/irregular Elevación Plana
Elevación Si Margen Lobulado/Ondulado
Margen Lobulado/Ondulado Coloración Blanquecina/
Coloración Blanquecina/ Tonalidad Opaca/brillante
Tonalidad Opaca Consistencia Seca/Mucoide
Consistencia Seca/Mucoide

Imagen 3. Vista macrcoscopica del

microoganismo antagonista en agar YGC

Imagen 1. Vista macroscópica de la

colonia a evaluar tomada del crecimiento
en agar YGC

Imagen 4. Vista a ..X De como microoganismo

antagonista en contrado en agar YGC

3
 Cárdenas J, Pinzón J, Martínez L. EVALUACION DE ACCION
BIOCONTROLADORA.

DETERMINACION DE BACTERIAS
GRAM POSITIVAS Y GRAM
NEGATIVAS

Imagen 7. Vista macroscópica de colonias

presentando actividad antagonista de una
levadura sobre un hongo caja de prueba
N°1

imagen 5. Vista macroscopia de la colonia

usada para determinar bacterias gram (-)
o gram (+) tomada del crecimiento en
agar PC.

Imagen 8. Vista macroscópica de

Trichoderma en agar YGC ejerciendo
biocontrol caja de prueba N°2

Imagen 6. Vista a 100X de bacterias gram

positivas y levaduras encontradas en agar
PC

REPIQUE PARA IDENTIFICACIÓN Imagen 9. Vista macroscópica de

DE EFECTOS ANTAGÓNICOS microorganismos mostrando interacción
sinérgica caja de prueba N°3

4
 Cárdenas J, Pinzón J, Martínez L.
Imagen 10. Vista macroscópica de
Trichoderma en agar YGC ejerciendo
actividad antagonista. Caja de prueba
N°4
Análisis de resultados
La evaluación de organismos patógenos o
benéficos presentes en las semillas, se
identificaron gracias al uso de una muestra
de rizosfera catalogada como una
interacción dinámica entre raíces de plantas
y microorganismos del suelo. Esta región
especializada, está caracterizada por el
aumento de la biomasa microbiana y de su
actividad, esta fue tomada proveniente del
suelo de la universidad de los llanos,
dispuestos en un montaje en una placa de
agar YGC para evidenciar los mecanismos y
las colonias bacterianas que podrían ejercer
un actividad antagonista, como lo demuestra
la imagen 1° y 2°, gracias la identificación
microscópica y macroscópica de las colonias
tomadas para hacer un aislamiento y una
siguiente evaluación de actividad
controladora; microscópicamente se logro
evidencias que la colonia tomada en la
imagen °1, 2° y 5° que a diferencia de la
imagen 5° estaba presente en una placa con
agar PC, donde las colonias elegidas
presentaban unas características
macroscópicas demostradas en las tablas
N°1 y N°2 y microscópicas mediante una
evaluación por tinción de GRAM que la
colonia aislada en la imagen 1° era un hongo,
en la imagen 2° una levadura y 5° una
levadura. Para identificación de su actividad
biocontroladora se puso en evaluación en
identificar la capacidad de reducir el
crecimiento de un microorganismo
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EVALUACION DE ACCION
BIOCONTROLADORA.
previamente aislado, con uno ya conocido y
proporcionado por el laboratorio de
Microbiología, el cual era Trichoderma spp.
Para esto se demostró el efecto
biocontroladora de la colonia 1° demostrada
en la imagen en agar YGC utilizo el
mecanismo y la interacción que tuvo con los
demás agentes aislados y dispuestos como
evaluación de biocontrolador dependiendo
del número de caja de prueba:
En la imagen N°7 que fue la caja de prueba
N°1: Se pudo evidenciar en la muestra que la
actividad antagonista, es decir las
interacciones negativas entre
microorganismo fue efectiva , se logra
apreciar el crecimiento de un hongo pero a
su vez se vio inhibido por acción de las
levaduras, la interacciónque se vio generada
fue competencia por parte de los dos
microoranimos se logra apreciar un halo de
separación.
En la imagen N°8 se evidencio que el
mecanismo biocontrolador de esta caja de
prueba la cual fue la N°2 fue; comensalismo
ya que ambos microrganismos consumieron
y se alimentaron del medio de cultivo
ninguno se vio inhibido por ningún otro
microorganismo
En la imagen N°9, la cual fue la caja de
prueba N°3 se pudo evidenciar que la
interacion y el mecanismo del
microrganismo fue una depredación
completa con Trichoderma spp., el hongo
inhibido el crecimiento total del
microrganismo selecciona de las placas
anteriores,aun asi se aprecia un mecanismo
de defensa por el microorganismo que se
esta viendo afectado.
En la Imagen N°10, la cual fue la caja de
preba N°4, demostró que su actividad
biocontroladora por parte de los
microorganismos y la interacción existente
fue amensalismo, con una respuesta de
competencia porque se evidencia que
Trichoderma spp. Genero un impedimento
cotra el microorganismo para poder crecer y
desarrollarse, el otro agente que se aisló de
la colonia seleccionada no pudo crecer, pero
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BIOCONTROLADORA.

Trichoderma spp. no logro depredación total en cuenta el mecánismo de acción

sobre este. que ejercerá el agente
biocontrolador para evitar el
Conclusiones
desecadenamiento de alteraciones
● Se puede evidenciar que no deseadas, así mismo el
Trichoderma spp. por parte presento microorganismos que ejercerá la
en todos los casos una alta velocidad acción antagonista de debe elegir
de crecimiento, alta competencia con características espaciales
por espacio, demostrando ser un dependido el control que se desee
biocontroladora efectivo para la realizar.
mayoría de agentes patógenos
presentes en la rizosfera.

● Los microorganimsos presentes en

la rizofera presentan actividad
biocontroladora, evidenciando Bibliografía
antagonismo , colonias que ejercían 1. Delgado, A. Polanco, A. Amich, S.
control sobre otras en los diferenes Prieto, S. Salve, M. Manual de
medios de cultivo entre ellas laboratorio clínico básico
levaduras y geotricum spp. "Microbiología". España. Mc Graw
Hill Interamericana. 2001. p 76, 77,
● Se lograron evidenciar 80, 91, 92.
interacciónes de sinergismo y 2 Introducción a la microbiología
antagonismo en el aislamiento de Escrito por Gerard J.Tortora,Berdell
las colonias, entre las R. Funke,Christine L. Case
interacciondes de sinergismo se 3 Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M.
logró evidenciar el comensalismo, 1992. Microbiología. Manual de
las interacciones antagónicas Métodos Generales (2da edición).
evidenciadas fueron depredación, Facultad de Farmacia. Universidad
competencia y amensalismo Central de Venezuela.
especialmente en la interacción de 4 Difco y BBL. 2003. Manual de
los microorganismo con Medios de Cultivo Microbiológicos.
Trichoderma spp. 5 Merck. 2002. Microbiology Manual
● Los diferentes mecanismos de 6 Ortega, Y; Quevedo F. 1991.
biocontroo son utilizados para Garantía de la Calidad de los
control del plagas, insectos y Laboratorios de Microbiología
hongos en cultivos y post cosecha Alimentaria. Organizgeotación
de frutas, hortalizas y demás María Panamericana de la Salud. Harla
prima, sin embargo se debe tener S.A. México D.F.