ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN........................................................................................................... 3

II. OBJETIVOS .................................................................................................................... 4

III. FUNDAMENTO TEÓRICO .......................................................................................... 4

IV. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 7

V. RESULTADOS ................................................................................................................ 8

VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS .................................................................................. 8

VII. CONCLUSIONES ........................................................................................................... 8

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................... 9

IX. ANEXOS ........................................................................................................................ 10

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SIEMBRA DE LA BACTERIA THIOBACILLUS FERROXIDANS EN MEDIO

9K

I. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos son los componentes mas importantes del suelo.

Constituyen su parte viva y son los responsables de la dinamica de transformcion

y desarrollo.

La mayor actividad de los microorganismos se realiza desde la superficie del

suelo hasta unos 20 centimetros de profundidad. Las colonias de

microorganismos permanecen adheridas a las particulas de arcilla y humus y a las

raices de las plantas que les suministran sustancias organicas que les sirven de

alimento y estimulan su reproduccion.

El drenaje ácido natural es uno de los focos de contaminación ambiental de las

cuencas nacionales y por ello es preciso buscar las tecnologías apropiadas para su

abatimiento a las condiciones ambientales convenientes.

Los drenajes ácidos de antiguos minados de carbón y minería metálica son una de

las principales fuentes de contaminación de las aguas superficiales y subterráneas

en el mundo. Debido a que este problema puede persistir durante décadas e incluso

cientos de años una vez finalizado el ciclo productivo, existe la necesidad de

prevenir su formación y aplicar el tratamiento más adecuado cuando se ha

formado.

Los drenajes ácidos de mina además de un bajo pH contienen una gran cantidad

de sólidos en suspensión con un alto contenido en sulfato y metales (Fe, Al, Mn,

Zn, Cu, Pb, Hg, Cd, Ni), del orden de varios cientos de miligramos por litro. Estos

elementos en altas concentraciones son nocivos para la actividad biológica,

contaminan los cursos de aguas y pueden llegar a causar daños a las estructuras

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 construidas por el hombre. Debido al elevado coste que representa el tratamiento

en depuradoras convencionales, es necesario buscar una solución a este problema.

El proceso de oxidación bacteriana de minerales sirve para el aislamiento de

bacterias, en este caso re requiere aislar la bacteria Acidithiobacillus ferroxidans.

II. OBJETIVOS

 Aislar la bacteria Thiobacillus Ferroxidans a partir de drenaje ácido de mina.

 Cultivo y siembra de bacterias Thiobacillus Ferroxidans en medio líquido.

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

El medio para realizar el aislamiento es 9K de Silverman ha sido el fundamento

para la preparación de los cultivos líquidos, bien utilizando las sales ferrosas del

9K, (J. L. Merino R. M.a Sáez)

A valores de pH entre 3,5 a 4,5 el ion férrico es catalizado por la bacteria

Metallogenium y a pH por debajo de 3,5 la reacción es catalizada por la bacteria

Thiobacillus ferrooxidans. (Osvaldo Aduvire,2006).

La bacteria Acidithiobacillus ferroxidans fue aislada por primera vez desde las

aguas de una mina de carbón cuyo descubrimiento se dio a conocer en 1947 (

Colmer, A.R y Hinkle , M.E, 1947) así fue como se encontró la primera bacteria

identificada capaz de lixiviar cobre (COCHILCO, 2009)

MEDIO DE CULTIVO

El medio 9K de Silverman es el fundamento para la preparación de los cultivos

líquidos, se utiliza las sales ferrosas del 9K, o bien se sustituye por otra fuente de

energía, como el azufre o pirita.

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 Cultivo en medio líquido: Las muestras bacteriales se cultivan en tubos de

ensayo conteniendo medio 9k y medio Leathem en proporción de 4mL de medio

por cada 500 microlitros de inóculo de muestra bacteriana.

 Cultivo en medio sólido: Las muestras bacteriales se cultivan en cajas Petri con

medio 9k gelificado con agar – agar por los métodos de: siembra masiva y estría

simple y compuesta.

BACTERIA THIOBACILLUS FERROOXIDANS

Este microorganismo tiene la capacidad de oxidar especies reducidas de azufre a

a sulfato y para oxidar el ion ferroso a ion férrico. A este método se le conoce

como biolixviación y es especialmente importante en minería ya que a bajos pH

los metales son solubilizados y pueden eventualmente recuperarse como un

producto final. Esta es una bacteria gran negativa de forma bacilar, que se

encuentra en depósitos de azufre y sulfurosos.

Fua aislada por primera ves a comienzos de los años 50, en el drenaje de unas

minas de carbón, por Colmer y Hinkle. Debido a a su capacidad de oxidar el azufre

y el hierro es una bac6eria muy estudiada en procesos de biolixiviación. Es de

naturaleza autótrofa y aeróbica estricta, y solo puede exidar el hierro a pH menos

de 3 por lo tanto es asidofila con resultados óptimos a pH 1,5-2,5 y 45-50°C, por

lo que es termófila, posee flagelos polares que la dota de motilidad, no produce

endoesporas y su capacidad oxidativa se da gracias a la encima hierro oxidasa.

Condiciones específicas para el desarrollo Thiobacillus ferrooxidans

 PH: 1.5-2.5, normalmente se desarrollan en PH ácidos, sin embargo, para que

puedan desarrollarse sobre Fe+2 es necesario que el Ph sea mas bajo que 3

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 O2: Debido a que es un microorganismo aeróbico estricto, se requiere la presencia

de oxigeno, además de que se desconoce otros agentes oxidantes con los que la

bacteria pueda trabajar.

 CO2: Esta bacteria utiliza el CO2como fuente de carbono, debido a que es

organismo autótrofo.

 Otros nutrientes: Se requiere de fuentes de nitrógeno, fosforo, azufre inorgánico.

 Fuente de energía: Se utilizan como fuente de energía los iones ferroso y azufre

inorgánico.

 Luz: Al ser organismos quimioautotrofos, la luz no suele ser necesaria, al

contrario algunos rayos visibles suelen inhibir algunas especies de Thiobacillus,

pero el ion férrico ofrece una protección contra los rayos visibles.

 Temperatura: Como la mayoría de las bacterias, suele crecer entre 25-35°C

BORNITA

La bornita o erubescita es un mineral del grupo de los sulfuros, siendo un sulfuro

de hierro y cobre, de un llamativo color cobre manchado con iridiscencias

púrpuras, por lo que se le da el apodo de pavo real mineral. Desde 1725 ha sido

mencionado en estudios de minería, pero no fue hasta 1845 cuando se le puso el

nombre del mineralogista austriaco Ignaz von Born (1742-1791). Raramente se la

encuentra en forma de cristales más o menos cúbicos, siendo normal encontrarla

de forma masiva y recubierta por una pátina púrpura o azulada muy llamativa. Se

la emplea como mena secundaria para la extracción de cobre.

Fórmula: Cu5FeS4

Sistema de cristalización: Ortorrómbico

Lustre: Metálico

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 Color: En superficie reciente es de color bronce pardo, pero al ser expuesta al aire

se cubre rápidamente con una pátina jaspeada, púrpura y azulada (por eso se llama

también mineral de pavo), y finalmente casi negra.

Dureza: 3

Rareza: común

IV. PROCEDIMIENTO

1. Colocamos el medio 9k en el autoclave para esterilizarlo, a una temperatura

de 121 °C por un tiempo de 20 minutos.

2. Chancamos el musgo (parte de la risósfera) que fue traído de la minería de

Hualgayoc, hasta que esté bien triturado.

3. Una vez el musgo triturado, se pesó 60 gr.

4. Pesamos 30 gramos de Bornita.

5. Sacamos el medio 9k del autoclave.

6. Pipeteamos de 100 ml de drenaje acido de mina a un matraz y luego se colocó

en el agitador magnético, para homogenizar la muestra.

Añadimos 120 ml del medio 9k y agitamos durante 20 minutos nuevamente

para homogenizar y finalmente ubicamos a filtrar.

7. Los 30 gramos de bornita lo introducimos en un matraz y se le añadió 120 ml

del medio 9k se lo llevo al agitador magnético por un tiempo de 20 minutos

y finalmente se dispuso a filtrar.

8. Los 60 gr del musgo triturado se lo introdujo en un matraz conjuntamente

con 120 ml de medio 9k, después se lo llevo al agitador magnético durante

20 minutos y por último se lo filtró.

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 9. Preparamos agua destilada ácida, en un vaso de precipitado se añadió un

poco de agua destilada, después se introdujo un cinta de pH y se iba

añadiendo ácido muriático hasta que el pH sea 2.

10. Una vez obtenido los filtrados de las 3 muestras (musgo triturado, drenaje

acido de mina y la bornita), se lavó con 5 ml de agua destilada ácida, por

separado.

11. En 3 matraces se añadió 75 ml de medio 9k y se añadió los 5 ml del lavado

de las 3 muestras anteriores, y para finalizar se lo llevo a la incubadora a 37

°C en el cual permanecerá por 7 días.

V. RESULTADOS

Lo que se obtuvo al finalizar esta práctica fue la siembra de la bacteria

Thiobacillus Ferroxidans en medio 9k.

VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Aunque muchos de los procesos de biolixiviación se llevan a cabo utilizando

consorcios bacterianos, existe la posibilidad de que uno solo de los

microorganismos sea el responsable de la mayor actividad oxidativa, y que la

presencia del resto pueda disminuir su capacidad. Esto hace importante el

identificar cual o cuales son realmente los microorganismos involucrados en el

proceso de lixiviación. Debido a lo anterior, en este trabajo nosotros procedimos

al aislamiento e identificación de los microorganismos presentes en las tres

muestras.

VII. CONCLUSIONES

Se logró la bacteria Thiobacillus Ferroxidans a partir de drenaje ácido de mina.

Se cultivó y sembró las bacterias Thiobacillus Ferroxidans en medio líquido.

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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Mac Gregor R.A. 1o9ó6. "Recovery of U3O8 by underground leaching".

CIM Bulletin, Vol. 59, He 649, 58^-587; CIK Trans. Vol. LXIX, 162- 166.

 Napier E., Wood R.6. and Chamberí L.A. 19&7» "Bacterial o: tidation of

pyrite and production of solutions for ore leaching". Inst. Min. Metall, paper

39, pago 1-160.

 Kac Gregor R.A., 1?6? "Uranium dividens from bacterial leachint;'^ líin.

Eng-. 21 (3), pags. 54-5Z.

 Silverman K.P. and Lundgren D.G. 1959» "Studies on the chemeauto

trophic iron bacterium Ferrobacillus ferrooxidans. I Am improved mediun

and a harveating procedure for securing high cell yields". J. Bacteriol. Vol.

77, págs. 642-647.

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IX. ANEXOS

MATERIALES:

Figura 1: papel de aluminio, agua acida Figura 2: autoclave

de drenaje, bornita.

Figura 4: pipetas, matraces, espátula.

Figura 3: balanza

Figura 6: cintas de pH
Figura 5: musgo
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PROCEDIMIENTO:

Figura 1: poniendo el Figura 2: parte de la risosfera triturado

medio en el autoclave

Figura 3: pesando la risosfera obtenido Figura 4: pesando la bornita

Figura 5: seleccionando parte de la risosfera Figura 6: preparando el agua destilada

ácida

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Figura 7: agitación de las Figura 8: proceso de filtración
soluciones preparadas

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