UNIVERSIDAD JUÁREZ AUTÓNOMA DE TABASCO

DIVISIÓN ACADÉMICA DE CIENCIAS BÁSICAS

Práctica 12. Aislamiento de parásitos en cucarachas.

Objetivo

▪ Identificar taxones de enteroparásitos (Blastocystis spp., Leptomonas spp.,

Cyclospora spp., Cystoisospora spp., Lophomonas blattarum, Ascaris spp. y
Enterobius vermicularis) en tegumentos e intestinos de cucarachas domésticas
(ninfas y adultos).

Fundamento.

Las cucarachas (Insecta: Dyctioptera, Blattodea) suelen alimentarse de una gran variedad de
sustratos, incluyendo alimentos, basura y/o excretas lo que incrementa su contacto y
exposición con microorganismos patógenos (virus, hongos, bacterias, protozoos y/o
helmintos) en su tegumento y/o intestinos. Las cucarachas poseen glándulas salivales, un
tracto gastrointestinal y un sistema excretor donde pueden permanecer viables una gran
variedad de microorganismos patógenos que pueden diseminarse a través de sus vómitos,
saliva y excrementos. Esta reportado que las cucarachas adultas pueden soportar ayunos muy
prolongados (semanas) y reproducirse durante todo el año en condiciones favorables.

Actividades previas

1. Esquematiza o dibuja las estructuras externas e internas de las cucarachas e

identifícalas con sus nombres.
2. ¿Cuál podría ser el impacto de las cucarachas en el área de la salud humana? Describe
su biología y epidemiología.
3. ¿Cuál es el nombre común que identifica a la cucaracha en tu comunidad y
dependiendo de las características morfológicas externas que aprecies entre los
organismos que capturaste, cuál podría ser su nombre científico?

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Materiales

▪ Guantes
▪ Estuche de disección (opcional)
▪ Pinzas y bisturí o navaja (cutter) obligatorio (uno por alumno)
▪ Envases de plástico y/o vidrio para almacenar los especímenes (1 frasco de 500 mL
al menos por equipo.
▪ Portaobjetos y cubreobjetos
▪ 6 a 8 tubos de centrifuga
▪ Alfileres (obligatorios)
▪ Un pedazo de unicel o cualquier soporte pequeño que les permita fijar al menos una
cucaracha por alumno.
▪ Embudos (los necesarios).
▪ Varillas de vidrio (una por alumno)
▪ Vidrios de reloj (los necesaios)
▪ 5 cucarachas (ninfas o adultas, de preferencia adultas) por alumno. Estos organismos
deberán estar vivos o muertos, pero en buenas condiciones, no deberán presentar
daños severos como aplastamientos o golpes y por ningún motivo deberán ser
atrapadas bajo el efecto de insecticidas o pesticidas. Deberás conservarlas en un
frasco amplio y con ventilación en todo momento para evitar muerte y
descomposición de los organismos capturados. Las bajas temperaturas (≈ 4° C)
favorecen la inmovilización de estos organismos, por lo que puedes conservarlas bajo
estas condiciones.

Reactivos

▪ Solución salina
▪ Aceite de inmersión
▪ Agua destilada
▪ Fucsina fenicada
▪ Azul de Metileno
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▪ Metanol
▪ Alcohol-ácido (Etanol-HCl) (3 ml de HCl en 97 mL alcohol etílico al 95%)

Equipos

▪ Centrifuga de tubos
▪ Microscopio óptico
▪ Microscopio estereoscópico

Metodología

a) Caracterización morfológica.
1. Identifica las diferentes etapas del desarrollo entre las cucarachas que recolectaste.
2. Cada alumno colocará, con ayuda de los alfileres, una de sus cucarachas sobre el
soporte, observara su morfología, documentará sus evidencias (las que considere
necesaria) y tratará de identificar si el organismo observado es macho o hembra.
3. Cada alumno deberá documentar la parte dorsal y la parte ventral de estos organismos
(guarda muy bien tus evidencias ya que deberás documentarlas en tu bitácora y en
formato electrónico como parte de tu reporte final).
4. Cada alumno deberá conservar su ejemplar y trabajarlo de forma individual en el
apartado c).

b) Aislamiento e identificación de parásitos en tegumentos.

1. Añade 20 mL de solución salina al frasco que contenga las cucarachas.
2. Agita vigorosamente durante 5 minutos de forma manual.
3. Dejar reposar el frasco de 20 min.
4. Transcurrido el tiempo, agita nuevamente el frasco por 10 segundos más y, con
cuidado de no derramar, decanta el sobrenadante en tubos de centrifuga (los que sean
necesarios, procurando el número par).
5. Centrifuga los tubos a 2500 x rpm durante 8 min.
6. Descarta el sobrenadante de los tubos.
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7. Resuspende el sedimento con el resto del residuo del sobrenadante que quedo en el
fondo del tubo y a partir de él, preparar 6 frotis: 1) dos frotis en fresco sin tinción, 2)
dos teñidos con Lugol y, 3) dos más teñidos con tinción de Kinyoun.
8. Observa las laminillas al microscopio óptico a los diferentes aumentos (4X, 10X, 40X
y 100X) y trata de identificar la presencia de posibles parásitos en las muestras.
9. Documenta las evidencias que consideres necesarias, procura que tus tomas estén
enfocadas y sean de la mejor calidad posible, recuerda que las tendrás que entregar
como archivo anexo a tu reporte final. Para tu reporte final genera una carpeta
electrónica con la clave TEG-LM2-G”X”-E”X” y guarda en archivo electrónico todas
las imágenes que documentes durante este proceso.
10. Todas las evidencias de este apartado podrán ser reportadas por equipo.

c) Aislamiento de parásitos en tracto digestivo.

1. Cada estudiante deberá trabajar su propia cucaracha y reportar sus hallazgos de forma
personal en su bitácora.
2. Coloca el ejemplar sobre una superficie plana (tabla, papel aluminio, vidrio, tapa o
base de caja Petri, vidrio de reloj, etc.) y disecciona el tracto digestivo. Si lo requieres
apóyate del microscopio estereoscópico.
3. Macera el tejido que recuperes en un tubo de centrifuga (apóyate de una varilla de
vidrio) y adiciona de 5mL de solución salina para facilitar la disgregación y
disolución del contenido, mezcla muy bien. Procura eliminar de este proceso las
estructuras de mayor tamaño o que estén rígidas.
4. Centrifuga los tubos a 2500 x rpm durante 8 minutos.
5. Descarta el sobrenadante de los tubos.
6. Resuspende el sedimento con el resto del residuo del sobrenadante que quedo en el
fondo del tubo y a partir de él, preparar 3 frotis por cada tubo: 1) uno en fresco, sin
tinción, 2) uno teñido con Lugol y, 3) uno más teñidos con tinción de Kinyoun.
7. Observa las laminillas al microscopio óptico a los diferentes aumentos (4X, 10X, 40X
y 100X) y trata de identificar la presencia de posibles parásitos en las muestras.

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8. Documenta las evidencias que consideres necesarias, procura que tus tomas estén
enfocadas y sean de la mejor calidad posible, recuerda que las tendrás que entregar
como archivo anexo a tu reporte final. Para tu reporte final genera una carpeta
electrónica con la clave TD-LM2-G”X”-E”X” y guarda en archivo electrónico todas
las imágenes que documentes durante este proceso.

Tinción de Kinyoun

1. Tomar una muestra del sedimento correspondiente, haz una extensión fina y déjala
secar a temperatura ambiente, o bien, fíjala con metanol o bien aplicando calor con
ayuda de un mechero (pasar el portaobjeto 2-3 veces sobre la flama, evita que se
queme), déjala enfriar.
2. Cubre la preparación con fucsina fenicada durante 5 minutos (la muestra quedara
teñida de color rojo intenso).
3. Transcurrido el tiempo, enjuaga la laminilla con un poco de agua, procura hacerlo
con mucho cuidado y muy suavemente.
4. Adiciona a la laminilla con mucho cuidado la Solución de Alcohol-Ácido durante 20-
30 segundos (si hay presencia de quistes de coccidios, estos no se decoloraran,
permanecerán color rojo-fucsia), realiza este proceso poco a poco y muy suavemente.
5. Vuelve a enjuagar la laminilla con un poco de agua, hazlo muy suavemente.
6. Cubre la preparación con el colorante azul de metileno durante 30 segundos
7. Lava nuevamente con agua, recuerda hacerlo con mucho cuidado y suavemente.
8. Deja secar la preparación, limpia el exceso de líquidos y observa al microscopio
óptico con el objetivo 100X (aceite de inmersión).
9. Documenta las evidencias que consideres necesarias, procura que tus tomas estén
enfocadas y sean de la mejor calidad posible, recuerda que las tendrás que entregar
como archivo anexo a tu reporte final.

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Tu reporte final deberá incluir la posible identificación taxonómica de los parásitos

identificados, la cual deberás de fundamentar de acuerdo a su morfología externa.
Fundamenta tus resultados y conclusiones con la consulta de libros, manuales, atlas, artículos
académicos, etc. No olvides documentar tus referencias.

Recomendaciones

▪ Evitar al máximo la contaminación de los microscopios. Si esto ocurre avisar al

profesor para realizar la limpieza correspondiente con soluciones especializadas.

Bibliografía consultada

1. EHAS. (2012). PROCESAMIENTO DE MUESTRAS PARA DIAGNÓSTICO DE

PARÁSITOS INTESTINALES. Recuperado el 12 de Enero de 2018, de
DIAGNÓSTICO DE PARÁSITOS INTESTINALES:
http://www.telemicroscopia.ehas.org/assets/diagnostico-parasitos-intestinales.pdf

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Taxones parasitarios aislados en la cucaracha americana (Periplaneta americana). A).

Promastigotes de Leptomonas spp.; B). Trofozoito de Lophomonas blattarum; C) Trofozoito
de Lophomonas striata; D) Trofozoito de Entamoeba blattae; E) Trofozoito de Nyctotherus
ovalis; F) Ooquiste de Cystoisospora spp.; G) Huevo de Enterobius vermicularis; H)
Ooquiste de Cyclospora spp. I) y J) Larva y huevo de Thelastoma spp.; K) y L) Huevos y
macho de Hammerschmidtiella spp. (10X); M) Forma quística de Blastocystis spp. Tinción
lugol, 40X.

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