UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE AGRONOMIA

ESCUELA
PROFESIONAL DE
CIENCIAS
AGRARIAS

TRABAJO ENCARGADO

MECANISMO DE RESISTENCIA EN PLANTAS CON

(Trichoderma sp).

♣ CURSO:
FITOPATOLOGÍA TROPICAL
♣ ALUMNOS:
● BEDOYA GERONIMO, Mary
● IBARRA LAVERIANO, Renzo
● SIMON ORBEZO, Eddy
● ZUCCHETTI RUÍZ, Alexandra
♣ DOCENTE:
● Ing. CABEZAS HUAYLLAS, Oscar E.
♣ CICLO: 2019- II

TINGO MARIA – HUÁNUCO

PERÚ
 I. INTRODUCCIÓN
El género Trichoderma fue descrito por Persoon en 1794. Posteriormente,
Rifai hizo el primer agrupamiento en especies agregadas que se utiliza hasta el
momento. Son hongos saprofitos del suelo y la manera de crecimiento muy
rápido, Las especies de este género se encuentran ampliamente distribuidas por
todos los tipos de suelo con diferente topografia, poseen un amplio rango de
adaptación a climas extremos, y se presentan naturalmente en diferentes
ambientes, especialmente en aquellos que contienen materia orgánica o
desechos vegetales en descomposición.
Trichoderma es una de las especies de hongo más estudiado y aplicado
como control biológico, esto gracias a su control eficaz y además posee gran
capacidad reproductiva, plasticidad ecológica, efecto estimulante sobre los
cultivos y recientemente se detectó su acción como inductor de resistencia
sistémica en la planta a diferentes patógenos.
Su efecto como micoparasito natural fue descubierto por weindling en el
año 1932, y se utilizó en experimentos de control biológico a partir de 1970,
siendo usado en el cultivo de hortalizas y ornamentales. Sin embargo hasta la
actualidad su uso en la agricultura es limitado e insuficiente.
El presente trabajo tiene como objetivo principal dar a conocer la acción de
trichoderma como inductor de mecanismos de resistencia en plantas y como
antagonista de otros hongos parasitos.

OBJETIVOS

- Entender el mecanismo de acción de trichoderma sp como inductor de

resistencia en las plantas.

- Dar a conocer sobre los efectos de la aplicación de trichoderma en los

cultivos.

- Obtener información sobre el tipo de hongo y características de

trichoderma.
 II. REVISIÓN DE LITERATURA
II.1. Características generales de trichoderma sp.

Según los autores (INFANTE, MARTINEZ, GONSALEZ, & REYES,

2009)El género Trichoderma es un excelente modelo para ser estudiado debido
a su fácil aislamiento y cultivo, rápido desarrollo en varios sustratos y por su
condición de controlador biológico de una amplia gama de
fitopatógenos. Trichoderma se ubica taxonómicamente según Villegas en:

Reino: Fungi.
División: Mycota
Subdivisión: Eumycota
Clase: Hyphomycetes.
Orden: Moniliales.
Familia: Moniliaceae.
Género: Trichoderma.

La mayoría de las colonias de Trichoderma en su inicio tienen color

blanco, que se tornan a verde oscuro o amarillento, con esporulación densa. El
micelio es ralo en su mayoría, y visto al microscopio es fino, los conidióforos son
ramificados, parecen un árbol pequeño. Los mismos se presentan como
penachos compactados que forman anillos con un sistema de ramas irregular de
manera piramidal. Estos terminan en fiálides donde se forman las esporas
asexuales o conidios, de gran importancia para la identificación taxonómica a
nivel de especies. Los conidios aseguran las generaciones del hongo durante
gran parte del período vegetativo de las plantas. Son haploides y su pared está
compuesta por quitina y glucanos. Además de los conidióforos, estas se pueden
producir sobre fiálides que emergen directamente del micelio (INFANTE,
ARTINEZ, GONSALEZ, & REYES, 2009).
 Figura 1. Conidias y conidióforo de Trichoderma.

II.2. Mecanismos de acción de trichoderma

En la acción biocontroladora de Trichoderma se han descrito

diferentes mecanismos de acción que regulan el desarrollo de los hongos
fitopatógenos. Entre estos, los principales son la competencia por espacio y
nutrientes, el micoparasitismo y la antibiosis, los que tienen una acción directa
frente al hongo fitopatógeno. Estos mecanismos se ven favorecidos por la
habilidad de los aislamientos de Trichoderma para colonizar la rizosfera de las
plantas. Otros autores han sugerido distintos mecanismos responsables de su
actividad biocontroladora, que incluyen, además de los mencionados, la
secreción de enzimas y la producción de compuestos inhibidores (INFANTE,
MARTINEZ, GONSALEZ, & REYES, 2009).

Además, se conoce que Trichoderma presenta otros mecanismos,

cuya acción biorreguladora es de forma indirecta. Entre estos se pueden
mencionar los que elicitan o inducen mecanismos de defensa fisiológicos y
bioquímicos como es la activación en la planta de compuestos relacionados con
la resistencia (Inducción de Resistencia), con la detoxificación de toxinas
excretadas por patógenos y la desactivación de enzimas de estos durante el
proceso de infección; la solubilización de elementos nutritivos, que en su forma
original no son accesibles para las plantas. Tienen la capacidad además, de
crear un ambiente favorable al desarrollo radical lo que aumenta la tolerancia de
la planta al estrés (INFANTE, MARTINEZ, GONSALEZ, & REYES, 2009).

II.2.1. Trichoderma harzianum T-22 induce resistencia sistémica en

tomate infectado por el virus del mosaico del pepino (Cucumber
mosaic virus CMV)
El virus del mosaico del pepino (CMV, familia Bromoviridae ,
género Cucumovirus ), el virus vegetal con el mayor rango de hospedadores de
todos los virus ARN ( Edwardson y Christie, 1991 ), puede causar una amplia
gama de síntomas, como manchas amarillas, distorsión y atrofia de las plantas.
, causando serias pérdidas económicas ( Whitham et al., 2006 ). ).
Hasta la fecha, hay poca información disponible sobre los efectos
de Trichoderma spp. en la inducción de defensas vegetales contra virus ( Lo et
al., 2000 ; Luo et al., 2010 ; Elsharkawy et al., 2013 ). Además, hasta donde
sabemos, no hay estudios sobre cambios en la fisiología de las plantas bajo
tratamiento con Trichoderma spp. en el pathosystem del virus de la planta.

- Materiales y métodos
 Fuentes de Trichoderma y CMV
La cepa Trichoderma harzianum cepa T-22 (T22) se utilizó
como una formulación comercial de gránulos, y la cepa del virus del mosaico del
pepino Fny (CMV-Fny) se utilizó como purificada. La formulación comercial se
controló y caracterizó antes de comenzar los ensayos, de la siguiente manera:
se llevaron a cabo diluciones en serie de los gránulos de Trianum G (como tales
y también esterilizados en autoclave durante 20 minutos a 121 ° C) en agua
estéril; partes alícuotas de cada suspensión obtenida se distribuyeron en
sustrato sólido (PDA + Agar) y en dos sustratos líquidos (solución de PDA y
NaCl) y se dejaron incubar a 25 ° C durante 3-5 días. El aislamiento y la
caracterización mostraron la presencia de solo T22 exclusivamente por material
como tal, pero nada de eso autoclavado. Al mismo tiempo, las raíces de las
plántulas de tomate cultivadas en tres sustratos diferentes (medio nutriente de
agar, grava y suelo estéril) se colonizaron con T22 y la colonización se ha
verificado y detectado en todos los casos. Para estar lo más cerca posible de las
condiciones del campo, fue elegido para usar el suelo. Además, a lo largo del
estudio, también se verificó la colonización. Estas observaciones fueron
consideradas como un punto de partida del estudio.

 Material vegetal y diseño experimental

Después de la esterilización de la superficie (usando una
solución de hipoclorito de sodio al 1% durante 1 minuto), las semillas de Solanum
lycopersicum var. cerasiforme cv. Las cerezas se germinaron en papel de filtro
humedecido con agua en placas de Petri estériles a 26 ° C en una incubadora
durante 2-3 días. Un día después de la germinación, las plántulas se transfirieron
a macetas esterilizadas llenas de tierra, se mantuvieron en una cámara de
crecimiento con un fotoperíodo de 16 h, a 26/23 ° C (día / noche), y se regaron
con solución Hoagland de ¼ de resistencia, como anteriormente descrito ( Vitti
et al., 2015 ). Los tratamientos con T22 se realizaron incorporando gránulos de
Trianum G en el sustrato utilizado para plantar (750 gm -3), siguiendo la
aplicación y la dosis sugerida por el fabricante. CMV-Fny purificado se usó para
inocular mecánicamente plantas de tomate en la etapa de cuatro hojas (5 μg de
cotiledones -1) Las plantas se trataron con T22 y / o se inocularon con CMV, de
acuerdo con una de las siguientes seis condiciones (25 plantas para cada
condición): plantas de control (PA) no tratadas y sanas; plantas tratadas solo con
T22 (PB); plantas inoculadas solo con CMV (PC); plantas primero tratadas con
T22, y después de 7 días inoculadas con CMV (PD); plantas tratadas e
inoculadas simultáneamente con T22 y CMV (PE); y plantas inoculadas primero
con CMV, y después de 7 días tratadas con T22 (PF). Catorce días después de
la inoculación del CMV (es decir, cuando las plantas tenían 1 mes de edad) y
hasta que las plantas tenían 3 meses de edad, se recolectaron tejidos y se
usaron para los siguientes análisis

 Resultados:

1) Severidad y acumulación de infección por CMV

Catorce días después de la inoculación, PC siempre mostró mosaico severo y

deformación de las hojas, y, a menudo retraso en el crecimiento
( Figura 1A ). Estos síntomas se retuvieron en los 3 meses de edad plantas,
donde las hojas también mostró la necrosis típica inducida por CMV-Fny
( Figura 1B ). El tratamiento con T22 siempre condujo a una modulación
significativa de los síntomas, en las tres condiciones (PD, PE y PF), sobre todo
cuando las plantas tenían 3 meses de edad. Figura 1C muestra la gravedad de
la enfermedad. La interacción entre el tratamiento y el tiempo fue significativa,
así como los factores separados (de acuerdo con las medidas repetidas
ANOVA, P<0,001). PC tuvo una severidad de enfermedad significativamente
mayor que las plantas también tratadas con T22 en las diversas combinaciones,
especialmente en plantas más viejas (–74, –75 y –82%, en PD, PE y PF,
respectivamente), y también en el 1 -mes-viejas plantas PF (alrededor de 2 veces
menor que PC) ( Figure1C ).
FIGURA 1

Gravedad de la enfermedad (escala 0-10) inducida por el virus del mosaico del
pepino (CMV) y su acumulación en plantas de una (barras blancas) y de 3 meses
(barras grises) de Solanum lycopersicum var. cerasiforme tratado, o no,
con Trichoderma harzianum T-22. (A, B) Una planta u hoja representativa de tomates
de 1 o 3 meses de edad, respectivamente. (C) Valoración media de la gravedad de la
enfermedad ( n = 25) y (D) absorbancia media a OD 405 nm ( n = 4) obtenida por la
prueba ELISA. Las barras representan errores estándar de los medios. Letras
diferentes indican diferencias significativas ( P≤ 0.05) entre tratamientos y tiempos
evaluados por medidas repetidas (C) y ANOVA de dos vías (D) . PA, control
saludable; PB, plantas tratadas con T22; PC, plantas inoculadas con CMV; PD, plantas
tratadas con T22 y, una semana después, inoculadas con CMV; PE, plantas tratadas
simultáneamente e inoculadas con T22 y CMV; PF, plantas inoculadas con CMV y,
una semana después, tratadas con T22.

Cucumber mosaic virus acumulación en las hojas sistémicamente infectadas se

midió por ELISA ( Figure1D ). Según el ANOVA de dos vías, la interacción entre
el tratamiento y el tiempo fue significativa, así como factores separados
( P<0,001). Las plantas más jóvenes, las inoculadas con CMV y también tratadas
con T22 mostraron diferencias significativas en el valor medio de absorbancia
con respecto a PC, sobre todo en PE y PF (–24 y –29%,
respectivamente). Además, cuando las plantas se analizaron a los 3 meses de
edad, los valores medios de absorbancia para PD, PE y PF fueron
significativamente mucho más bajos que los de PC (15, 26 y 170 veces,
respectivamente). Sin embargo, no se observó diferencia significativa entre los
3 meses de edad plantas de PE y PF, ni entre las plantas PA y PB
( Figure1D ). Los controles sanos, así como las plantas expuestas solo a T22,
fueron sin síntomas y negativos para la detección de CMV por ELISA,
independientemente de la edad de la hoja.

2) Mediciones de clorofila

Como se muestra en la Figura 2 y el cuadro

complementario 1 , contenido total de clorofila, Chl una y Chl b mostraron los
valores más altos con T22 solo y los valores más bajos con CMV solo. Según el
ANOVA unidireccional ( P = 0,001), los tratamientos con T22 y CMV (PD, PE y
PF) combinados no parecían ser estadísticamente diferentes de la PA.
FIGURA 2
Contenido total de clorofila (Chl tot ) en plantas de 3 meses de edad de Solanum
lycopersicum var. cerasiforme infectado, o no, por CMV y tratado, o no,
con Trichoderma harzianum T-22. Las barras representan errores estándar de
los valores medios ( n = 3). Diferentes letras indican diferencias significativas
( P ≤ 0.05) entre los tratamientos evaluados por ANOVA unidireccional. PA,
control saludable; PB, plantas tratadas con T22; PC, plantas inoculadas con
CMV; PD, plantas tratadas con T22 y, una semana después, inoculadas con
CMV; PE, plantas tratadas simultáneamente e inoculadas con T22 y CMV; PF,
plantas inoculadas con CMV y, una semana después, tratadas con T22.

3) Crecimiento de la planta

ANOVA unidireccional ( P <0.001) destacó que el tratamiento con T22 siempre

condujo a un aumento significativo de lax altura con respecto a PA y PC, en las
tres condiciones (PD, PE y PF) (aproximadamente 1.2 veces mayor que PA), y
sobre todo cuando se inocularon primero con CMV y luego tratados con T22 (PF,
+ 11%), como se muestra en la Figura Figure3A . Por otro lado, epigea DM no
fue influenciada por el tratamiento T22 ( Figura Figure3B ). ANOVA
unidireccional ( P<0.001) mostró que en las plantas tratadas con T22 solo y
posteriormente, o simultáneamente, inoculadas con CMV, la DM no fue
estadísticamente diferente de las plantas PB. Las plantas inoculadas con CMV,
solas o antes del tratamiento con T22, mostraron valores de DM
significativamente más bajos que los de PD (PC vs. PD, –35%, y PF vs. PD, –
24%) y tratamientos de PE (PC vs. PE, - 52%, y PF vs. PE, –39%). En PC y PF,
se observó una media del 33% en la reducción de la acumulación de DM
epigenosa en comparación con PA.

FIGURA 3
Los parámetros de crecimiento medidos en plantas de 3 meses de edad
de Solanum lycopersicum var. cerasiforme infectado, o no, por CMV, y tratado,
o no, con Trichoderma harzianum T-22. (A) Altura de la planta y (B) materia seca
sobre el suelo ( n = 3). Diferentes letras indican diferencias significativas ( P ≤
0.05) entre los tratamientos evaluados por ANOVA unidireccional. Las barras
representan errores estándar de los medios. PA, control saludable; PB, plantas
tratadas con T22; PC, plantas inoculadas con CMV; PD, plantas tratadas con
T22 y, una semana después, inoculadas con CMV; PE, plantas tratadas
simultáneamente e inoculadas con T22 y CMV; PF, plantas inoculadas con CMV
y, una semana después, tratadas con T22.
Los resultados actuales confirman que T22 es capaz de proteger las plantas de
tomate contra el CMV no solo en términos de una modulación de los síntomas y,
por lo tanto, reduce la gravedad de la enfermedad, sino también en términos de
una reducción en el título viral foliar. La observación de los síntomas, así como
la gravedad de la enfermedad, demostró que el tratamiento con T22 redujo el
CMV en todas las plantas hasta su supresión, con un efecto más marcado en las
plantas de 3 meses.
Los datos de ELISA destacan que el efecto de T22 fue particularmente claro
cuando se aplicó después de la inoculación de CMV (PF). Contrarrestando la
propagación de los síntomas, T22 previene una reducción en los tejidos
fotosintéticos verdes y la degradación de los pigmentos, lo que se ha observado
en plantas infectadas por CMV (PC) y en otros patosistemas ( Silveira et al.,
2015 ).
Uno de los efectos de la aplicación de T22 es un aumento en el crecimiento de
las plantas, también en plantas bajo condiciones de estrés ( Harman,
2000 ; Shoresh et al., 2010 ), indirectamente debido a su fuerte actividad
antipatógena, y directamente a través de (i) inducción de la biosíntesis de
fitohormonas, (ii) solubilización mejorada y absorción de nutrientes del suelo, (iii)
endurecimiento y desarrollo de la raíz, (iv) mejora en la tasa de metabolismo de
carbohidratos y (v) aumento de la fotosíntesis ( Sofo et al., 2012 ; Stewart y Hill,
2014 ).

 Conclusión
Los datos descritos en este documento demuestran que el tratamiento temprano
con T. harzianum T-22 es capaz de inducir respuestas de defensa sistémicas
contra CMV-Fny en S. lycopersicum var. cerasiforme al interactuar con las
hormonas vegetales. Además, T22 puede mejorar el rendimiento fotosintético y
promover el crecimiento. En conclusión, nuestros datos indican que la estrategia
basada en T22 es una forma ampliamente practicable de perseguir el objetivo de
una medida efectiva contra el CMV.
 II.2.2. Inducción concomitante de resistencia sistémica a Pseudomonas
syringae pv. lachrymans en pepino por Trichoderma
asperellum (T-203) y acumulación de fitoalexinas

La mayoría de los estudios sobre la reducción de la

incidencia de enfermedades en el suelo tratado con Trichoderma asperellum
se han centrado en las interacciones microbianas más que en las respuestas de
las plantas. Este estudio presenta evidencia concluyente para la inducción de
una respuesta sistémica contra la mancha angular del pepino ( Pseudomonas
syringae pv. Lachrymans ) luego de la aplicación de T. asperellum al sistema
radicular. Para determinar que T. asperellum era el único microorganismo
presente en el medio de la raíz, las plantas se cultivaron en un sistema de
crecimiento hidropónico aséptico.

 MATERIALES Y MÉTODOS
1. Material vegetal. En este experimento se utilizaron semillas de pepino
( Cucumis sativus L. cv. Delila) de Gedera Seeds Co. (Gedera, Israel). El
medio de crecimiento de la planta (PGM) se preparó y se ajustó diariamente
(Sistema de crecimiento aséptico. Las semillas se desinfectaron en superficie
en NaOCl al 2% durante 2 minutos y se lavaron a fondo con agua destilada
estéril. Luego se colocaron sobre una gasa estéril y se colocaron en
recipientes de crecimiento hidropónico aséptico Los recipientes de
crecimiento se airearon con aire filtrado a través de filtros de 0,45 μm de
tamaño de poro. Las plantas se cultivaron en un ambiente controlado: 26 ° C,
80% de humedad relativa, luz a 300 μ E / m 2 / s, y un ciclo circadiano de 14
h de luz y 10 h de oscuridad.
2. Material fúngico. La cepa T. asperellum T-203 ( C. P. Kubicek. 2001) se
cultivó en agar de dextrosa de papa (PDA) (Difco, Detroit, Mich.). El medio
sintético para T. asperellum se preparó de acuerdo con Okon et al. ( Okon,
Y., I. Chet ) El inóculo consistió en 1 ml (10 9 esporas, contadas por
hemocitómetro) de T. asperellum de 7 días cultivado en PDA agregado a un
matraz de 250 ml que contenía 100 ml de medio sintético. El matraz se agitó
a 150 rpm durante 24 ha 30 ° C para permitir la germinación de esporas. El
inóculo se separó luego del medio de crecimiento mediante centrifugación a
10.000 × ga 4 ° C y se lavó dos veces en 100 ml de agua destilada. T.
 asperellumSe añadió inóculo micelial en condiciones asépticas a la PGM de
plántulas de 7 días a una concentración final de aproximadamente
10 5 esporas germinadas / ml de PGM.
3. Inóculo bacteriano. P. syringae pv. Lachrymans se cultivó en caldo de soja
tríptico durante la noche a 30 ° C. Las células bacterianas se centrifugaron a
10.000 × g , y el sedimento se resuspendió en solución salina tamponada con
fosfato estéril (5 mM, pH 7,2). El desafío se realizó 48 h después de la
aplicación de T. asperellum a la PGM. P. syringae pv. lachrymansSe aplicó
suspensión bacteriana (densidad óptica a 600 nm = 0,1) que contenía 0,01%
(p / vol) de tensioactivo (Tween 20) a la superficie de la primera y segunda
hojas de plántulas de pepino. Las hojas se frotaron con una almohadilla de
gasa estéril saturada con suspensión bacteriana o se pipetearon sobre la hoja
con cuatro gotitas de 10 μl usando una pipeta repetidora. La inoculación se
realizó en condiciones asépticas.
4. Multiplicación de P. syringae pv. Lachrymans se evaluó en hojas desafiadas
en diferentes momentos después de la inoculación. Dos enjuagues de 1 g de
muestras seleccionadas al azar de 15 hojas tomadas de 15 plantas por
tratamiento se enjuagaron completamente en agua estéril y se
homogeneizaron en una solución estéril de solución salina tamponada con
fosfato 10 mM. Las diluciones se colocaron en placas en agar King's B
selectivo de Pseudomonas (King 1954 ) suplementado con una solución de 1
ml litro- 1 que contenía 9 mg de fucsina básica, 200 mg de cicloheximida, 10
mg de nitrofurantoína y 23 mg de ácido nalidíxico. Después de la incubación
a 28 ° C durante 24 a 36 h, el número de P. syringae pv. lachrymans Se
determinó la UFC por gramo de tejido foliar infectado.
5. Bioensayo microbiano. P. syringae pv. Lachrymans , Agrobacterium
tumefaciens , Bacillus megaterium y Micrococcus luteus (las cepas se
tomaron de una colección de laboratorio) se cultivaron en caldo de soja
tríptico (Difco). El extracto fenólico crudo se concentró mediante Speed-Vac
y se ajustó a 20 μl con metanol absoluto. Las muestras concentradas se
pipetearon sobre placas de agar de soja trípticas o placas PDA y se secaron
en una campana de flujo laminar. Las suspensiones bacterianas (200 μl) se
mezclaron en 3 ml de agar de soja tríptico suave y se superpusieron sobre
las placas secas. La actividad antimicrobiana del extracto se analizó 48 h
 después de la aplicación bacteriana y apareció como círculos líticos claros en
las placas.
6. Aislamiento de ARN. Para el análisis de ARN, las raíces, los cotiledones y
las hojas se cosecharon en diferentes momentos después de la inoculación
y se almacenaron a -70 ° C hasta su uso. El ARN total se extrajo usando un
kit de aislamiento de ARN total EZ-ARN (Biological Industries Co., Beit-
Haemek, Israel). El ARN se trató con DNasa I libre de ARNasa en una solución
que contenía Tris-HCl 40 mM (pH 7.9), NaCl 10 mM, MgCl 2 6 mM y CaCl 2 10
mM durante 30 minutos a 37 ° C (Roche, Penzberg, Alemania ), seguido de
extracción con fenol-cloroformo y cloroformo y posterior precipitación con
etanol.
7. RT. Después del tratamiento con DNasa, se usó 1 μg de ARN total para una
reacción de transcripción inversa (RT) utilizando la transcriptasa inversa
Expand (Roche) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

 RESULTADOS
Efecto de T. asperellum sobre ISR. Para analizar ISR
mediada por T. asperellum , mancha angular de pepino, P.
syringae pv. lachrymans , se usó para desafiar las hojas de plántulas de pepino
de 12 días de edad a las 48 h después de la aplicación de T. asperellum al
sistema radicular. Se utilizó un sistema de crecimiento hidropónico aséptico en
el que se verificó la separación espacial del agente inductor de la raíz del
patógeno foliar. Cuatro días después de la inoculación con P.
syringae pv. lachrymans , las plantas no inducidas (T − Psl +) mostraron lesiones
necróticas rodeadas de clorosis que se extendía ampliamente, mientras que las
plantas pretratadas con T. asperellum(T + Psl +) mostró síntomas
significativamente más bajos. Protección contra P. syringae pv. Lachrymans se
cuantificó evaluando el diámetro de necrosis y la proporción del área necrótica
total por hoja. Se observó una reducción del 50% en el diámetro promedio de
necrosis 5 días después del desafío, mientras que el área necrótica total se
redujo en un 80% en las plantas T + Psl + en relación con la de las plantas T −
Psl + (Fig. 1 ). La aplicación del inóculo micelial de T. asperellum en autoclave a
las raíces parecía tener solo un efecto menor en la reducción de la enfermedad
(Fig. 1B ). Proliferación de P. syringae pv. lachrymansen las hojas desafiadas se
evaluó y se encontró que era significativamente menor en las plantas T + Psl +
que en las plantas T − Psl +. Noventa y seis horas después del desafío, las
densidades de células bacterianas en el tratamiento con T-Psl + excedieron las
del tratamiento con T + Psl + en aproximadamente 200 veces. Por lo tanto, la
reducción en los síntomas de la enfermedad parece estar asociada con la
inhibición de la multiplicación bacteriana (Fig. 2 ).

ISR a P. syringae pv. lachrymans en hojas de pepino de 14 días de edad a las

48 a 120 h de la inoculación posterior al desafío, 96 h desde la aplicación de T.
asperellum al sistema radicular. La gravedad de la enfermedad se expresa como
el diámetro de necrosis (A) o la proporción del área necrótica con respecto al
área total de la hoja (B). Se muestran los resultados para plantas no inoculadas
(columnas blancas), plantas tratadas con inóculo autoclavado de T.
asperellum (AT) (columnas punteadas) y plantas tratadas con inóculo micelial
de T. asperellum.(T-203) (columnas rayadas). Las columnas encabezadas por la
misma letra no son significativamente diferentes (α ≤ 0.05, análisis de varianza
unidireccional). Las barras de error representan las desviaciones estándar (SD)
de los resultados para 20 plantas replicadas que recibieron el mismo tratamiento
HIGO. 2)

Multiplicación de P. syringae pv. lachrymans en hojas desafiadas evaluadas en los

puntos de tiempo indicados postinoculación. Las plantas de control (T − Psl +) se
trataron con agua destilada 48 h antes del desafío con P.
syringae pv. lachrymans (•); Las plantas tratadas con T. asperellum (T + Psl +) se
obtuvieron 48 h antes del desafío con P. syringae pv. lachrymans (▴ ). Los puntos de
datos son medias (UFC / gramo) ± errores estándar (SE) para dos conjuntos de 20
hojas seleccionadas al azar, y los valores son los promedios de dos experimentos
independientes.

La microscopía electrónica de transmisión (TEM) de

secciones ultrafinas del grupo de tratamiento T − Psl + reveló la proliferación
de P. syringae pv. lachrymans 96 h postchallenge. P. syringae pv. los
lachrymans invadieron los espacios intercelulares de las hojas (Fig. 3A ). Al
mismo tiempo, se observaron significativamente menos células bacterianas en
las plantas T + Psl + (Fig. 3B ). En las plantas no provocadas, P. syringae pv. los
lachrymans invadieron los vasos del xilema, que parecían estar densamente
colonizados con la bacteria (Fig. 4A ). En algunos casos, las paredes de la célula
huésped fueron interrumpidas y digeridas por el patógeno (Fig. 4B) Un examen
más detallado de las áreas invadidas reveló la aparición de reacciones del
huésped en los sitios de penetración bacteriana. Una matriz amorfa que muestra
varios grados de compacidad apareció en los espacios intercelulares de
las plantas prevenidas por T. asperellum (Fig. 4C ). Las células bacterianas
atrapadas en este material parecían incrustadas y presentaban alteraciones
morfológicas. Aparentemente, su desarrollo se detuvo (Fig. 4C y D ). Algunas
células contenían material osmofílico densamente teñido y se vieron gravemente
afectadas, como puede deducirse de la agregación de sus contenidos
(Fig. 4D ). Ninguno de estos fenómenos se detectó en las plantas no
provocadas, donde las células bacterianas aparecieron intactas y proliferaron en
todos los tejidos.

HIGO. 3)
Micrografías electrónicas de transmisión de secciones ultrafinas de hojas de pepino
desafiadas con P. syringae pv. lachrymans a las 96 h después del desafío. (A)
Colonización de células bacterianas de hojas muestreadas de plantas desafiadas no
provocadas (T − Psl +). P. syringae pv. Lachrymans progresa hacia los tejidos foliares
internos principalmente por el crecimiento intercelular (IS). (B) Colonización de
células bacterianas de espacios intercelulares en hojas de plantas preelicitadas
con T. asperellum 48 h antes del desafío (T + Psl +). Se observan considerablemente
menos células bacterianas. Barras, 2μ m.
HIGO. 4)
Micrografías electrónicas de transmisión de secciones ultrafinas de tejidos de hojas
de pepino. (A) Vasos de xilema (XV) fuertemente colonizados con P.
syringae pv. lachrymans en hojas de plantas no provocadas (T − Psl +) a las 96 h
después del desafío con P. syringae pv. Lachrymans . (B) Digestión de la pared
celular del huésped por P. syringae pv. lachrymans (flechas) en hojas de plantas no
provocadas (T − Psl +). (C) Espacios intercelulares (IS) de plantas prevenidas por T.
asperellum (T + Psl +) en las que se ha acumulado una matriz amorfa (AM). P.
syringae pv. Las células lachrymans atrapadas en este AM aparecen incrustadas, y
su desarrollo se detiene. (RE)P. syringae pv. Las células de lachrymans (flechas) en
las hojas de plantas prevenidas por T. asperellum (T + Psl +) parecen estar
severamente dañadas y su contenido está agregado. Algunas de estas células
acumulan material osmiófilo de tinción oscura. Barras, 2 μm (A y D) y 1 μm (B y C).

Intentos de explotar antagonistas fúngicos

como Trichoderma spp. Como los posibles agentes de control biológico han
llevado recientemente a la propuesta de que, además de sus propiedades
antifúngicas reconocidas, dichos organismos también podrían actuar como
inductores de reacciones de defensa de las plantas, promoviendo así la
expresión de genes relacionados con la defensa de las plantas ( Stipanovic,
and L. S. Puckhaber. 2000). Sin embargo, los mecanismos exactos que
subyacen a la inducción de la resistencia a las enfermedades de las plantas por
hongos antagonistas siguen siendo poco conocidos. Se han presentado varias
hipótesis, pero muy pocas han sido evaluadas de manera convincente a través
de investigaciones bioquímicas y citológicas de los tejidos vegetales desafiados
por estos agentes fúngicos.
Los resultados del presente estudio demuestran que las plantas de pepino
cultivadas en presencia de T. asperellum exhiben una mayor protección
contra P. syringae pv. infección por lachrymans . Estos resultados son de
particular relevancia ya que destacan las propiedades duales de T. asperellum ,
que también es capaz de inducir resistencia sistémica contra un patógeno foliar
(Fig. 1 ). Además, nuestros resultados citológicos y bioquímicos demuestran que
el efecto beneficioso de T. asperellum para reprimir el ingreso
de Pseudomonas en los tejidos de la hoja no depende de la actividad antifúngica
directa, como es el caso de una serie de rizobacterias que promueven el
crecimiento de las plantas ( Bakker, and C. M. J. Pieterse. 1998 ) El apoyo a
este concepto provino de las observaciones de que los propágulos
de Trichoderma no podían aislarse de los brotes y que la actividad antagonista
entre Trichoderma y Pseudomonas no se produjo in vitro (datos no mostrados).

 CONCLUSIÓN.
Se demostró que el pretratamiento de las raíces con T.
asperellum inhibe sistemáticamente la proliferación de P.
syringae pv. lachrymans en las hojas. Esta reducción parece estar asociada con
la acumulación de transcripción de genes relacionados con la defensa
biosintética y una acumulación prominente de compuestos fenólicos que
muestran una actividad antimicrobiana sustancial. Los esfuerzos futuros
deberían centrarse en caracterizar la naturaleza químicamente compleja de
estos compuestos y el estudio de su producción y acumulación en experimentos
de invernadero y de campo.
 II.2.3. Mecanismos de defensa inducidos por la combinación
de trichoderma harzianumy quitosano en nochebuena (Euphorbia
pulcherrima) contra Phytophthora drechsleri.

Con el surgimiento de nuevas estrategias y productos de

control, que incluyen la inducción de mecanismos de defensa vegetal, se hace
necesario conocer cuáles son estos mecanismos de defensa en nochebuena y
la estrategia de ataque de P. drechsleri. En este sentido, una alternativa para el
control de Phytophthora es el uso de microorganismos antagonistas como
Trichoderma harzianum y de inductores de mecanismos de defensa vegetal
como el quitosano. El uso combinado de los productos de control biológico se
considera como potenciador de su efecto protector. Sin embargo, en la mayoría
de los casos no se conoce cuál es la interacción entre ellos (GARCÍA, 2014).

● Trichoderma harzianum

Es un hongo antagonista de patógenos vegetales, y se

encuentra presente en la mayoría de los suelos. Su crecimiento se ve favorecido
por la presencia de raíces de plantas, a las cuales coloniza rápidamente. Algunas
cepas, son capaces de colonizar y crecer en las raíces a medida que éstas se
desarrollan. Su aplicación, una vez formulado el producto es fácil, pues puede
añadirse directamente a las semillas o al suelo, semilleros, trasplantes, bandejas
y plantas de maceta, empleando cualquier método convencional. Trichoderma
harzianum como un controlador biológico y antagonista natural de fitopatógenos,
muestra una amplia gama de hospedantes y dentro de ellos están los hongos y
oomicetos fitopatógenos de importancia (GARCÍA, 2014).

● Material biológico en el experimento.

Se utilizó la cepa patogénica de Phytophthora drechsleri

(PHD) aislada de plantas con síntomas de enfermedad de nochebuena. Este
aislamiento fue mantenido como cultivo “padre” en tubos con medio de cultivo
V8 clarificado. También se utilizó una cepa comercial de Trichoderma harzianum
(T 22), aislada a partir del producto PHC T 22®. Este aislamiento fue mantenido
como cultivo “padre” en tubos con medio de cultivo agar V8 (GARCÍA, 2014).
 ● Evaluación de mecanismos de defensa relacionados
con la resistencia contra Phytophthora drechsleri.

Se utilizaron las condiciones de la evaluación del grado de

protección contra P. drechsleri (PHD) en plántulas de nochebuena con la
aplicación de quitosano y T. harzianum. Las lecturas se realizaron el día del
trasplante (D0) y los días 1 (D1), 10 (D10) y 15 (D15) después de la inoculación
con PHD. Se tomaron 5 plántulas por cada tratamiento para realizar extractos de
raíz para cada una de las evaluaciones relacionadas con la resistencia a
Phytophthora. Los mecanismos de defensa vegetal evaluados fueron aquellos
inducidos por quitosano y Trichoderma como la producción de componentes
fenólicos totales, la actividad de las proteínas relacionadas con la patogenicidad
(PR) con actividad de quitinasas, β-1,3-glucanasa y la actividad de la
peroxidasas. (GARCÍA, 2014).

Como resultado se dio seguimiento al efecto protector de

Trichoderma harzianum (TH) y la aplicación del quitosano (QT) en plantas
infectadas con Phytophthora drechsleri (PHD). Por otra parte, se ha reportado
que este polímero además de su efecto como protector presenta actividad
antimicrobiana contra algunas cepas de Phytophthora (GARCÍA, 2014).

Efecto del quitosano: El efecto protector del quitosano es

evidente a nivel foliar en las plántulas después de 24h de la inoculación con
PHD.Las plantas presentaron signos de marchitez y hojas con pérdida de
turgencia. Sin embargo, no se observó un daño a nivel de la raíz o en el tejido
vascular, aunque si la presencia de un oscurecimiento de las raíces en
comparación con el testigo (Ø) y PHD.En los resultados observados a los 10 días
después de la inoculación de PHD, se mostró que las plántulas presentaron un
efecto protector menor a nivel foliar, donde se encontraron plántulas sin síntomas
evidentes de marchitez, en contraste con las no inoculadas con PHD.Las raíces
presentaron oscurecimiento, aunque no se observó una pérdida de estás.
Finalmente, a los 15 días después de la inoculación con PHD, las plántulas
presentaron síntomas de enfermedad a nivel foliar aunque a menor proporción
que con solo PHD.Con respecto a los síntomas observados en raíces y tejido
vascular, se observó que habían plántulas que presentaban síntomas avanzados
de enfermedad, pero también plántulas que los síntomas eran ligeros (GARCÍA,
2014).

Efecto de Trichoderma.-La inoculación con Trichoderma

harzianum (TH) tuvo un efecto a nivel foliar después de las 24h de inocular PHD.
Las plantas presentaron signos de déficit hídrico en las hojas, aunque estos
síntomas fueron menos severos a los observados en QT. Sin embargo, no se
observó un daño a nivel de la raíz o en el tejido vascular en contraste a PHD e
incluso que QT. El efecto observado a los 10 días después de la inoculación de
PHD, mostró que las plántulas presentaron un daño importante a nivel foliar. Se
observaron síntomas marcados de marchitez y la pérdida de hojas, siendo
mucho mayor que incluso en PHD. Sin embargo, de nueva cuenta no se observó
daño en el tejido vascular y las raíces no presentaron un oscurecimiento
marcado, en contraste a lo que se observó en las plántulas inoculadas con PHD
y QT. Finalmente, a los 15 días después de la inoculación con PHD, las plántulas
presentaron una recuperación marcada a nivel foliar. De manera general, la
inoculación con T. harzianum presentó una protección contra la infección de
PHD, al disminuir de manera significativa los síntomas de la enfermedad a nivel
de raíz y tejido vascular. Sin embargo, a nivel foliar se observó una respuesta
negativa por parte de las plántulas, que podría estar relacionado con el grado de
la respuesta en la planta (GARCÍA, 2014).
Figura 2. Efecto protector por la aplicación de quitosano y Trichoderma
harzianum en plantas de nochebuena inoculadas con el patógeno. Se
observaron los síntomas en las plantas de nochebuena ante la infección de
Phytophthora drechsleri, en la planta completa. Donde TESTIGO: Plántulas
inoculadas con agua estéril. D1: Día 1 después de la inoculación de PHD; D10:
Día 10 después de la inoculación de PHD; D15: Día 15 después de la inoculación
de PHD
Figura 3.PHD: plantas inoculadas con la cepa patogénica P. drechsleri con una
concentración de 1x105 zoosporas/ml.

Figura 4. QT: plantas con la aplicación de quitosano al 0.1%.

Figura 5. TH: plantas inoculadas con Trichoderma harzianum a concentración
de 1x106 esporas/ml.. Las flechas indican el daño por la infeccion de
Phytophthora drechsleri.

Figura 6. Mecanismos de defensa relacionados con la respuesta hipersensible

inducidos tempranamente por la aplicación de quitosano y Trichoderma
harzianum en la infección de Phytophthora drechsleri en raíces de nochebuena.
Se tomaron segmentos de raíces de nochebuena 24 y 48 horas después de la
inoculación con Phytophthora drechsleri y se observaron al microscopio.
TESTIGO: Plántulas inoculadas con agua estéril; PHD: Plántulas inoculadas con
P. drechsleri. QT: Plántulas inoculadas con quitosano; TH: Plántulas inoculadas
con Trichoderma harzianum. ROS: Acumulación de especies reactivas de
oxígeno en raíces de nochebuena; PCD: Presencia de muerte celular
programada en raíces. La barra equivale a 50 μm. Las flechas indican la
presencia de la respuesta de cada una de las evaluaciones.

Figura 7. Mecanismos de defensa relacionados con el fortalecimiento de la

pared celular inducidos por la aplicación de quitosano y Trichoderma harzianum
en la infección de Phytophthora drechsleri en raíces de nochebuena. Se tomaron
segmentos de raíces de nochebuena 24 y 48 horas después de la inoculación
con Phytophthora drechsleri y se observaron al microscopio. TESTIGO:
Plántulas inoculados con agua estéril; PHD: Plántulas inoculadas con P.
drechsleri. QT: Plántulas inoculadas con quitosano; TH: Plántulas inoculadas
con Trichoderma harzianum; CALOSA: Acumulación de calosa en raíces;
LIGNINA: Producción de lignina en raíces. La barra equivale a 50 μm. Las
flechas indican la presencia de la respuesta de cada una de las evaluaciones.
 ● Logros de la aplicación de microorganismo
antagonista (Trichoderma harzianum) y un polímero inductor de
mecanismos de defensa vegetal (quitosano).

La principal consideración en esta evaluación fue que

se buscó limitar la protección a la inducción de defensa vegetal, para esto se
buscó que T. harzianum colonizara las raíces de nochebuena al aplicarse
previamente, y el sustrato en el cual se inoculó el hongo fue sustituido por
sustrato estéril para evitar que el inoculo aplicado pudiera proteger por
antagonismo directo contra la infección contra P. drechsleri (GARCÍA, 2014).

A partir de los resultados obtenidos se observó que la

aplicación tanto de quitosano como de T. harzianum inducen una protección
contra la infección de P. drechsleri en nochebuena. Sin embargo, el grado de
protección inducido por cada producto es diferente entre sí (GARCÍA, 2014).

En el caso del quitosano, se observó un grado de

protección equiparable a un retraso en la aparición de los síntomas de la
enfermedad, pero si se presentaron síntomas con el paso del tiempo. Esto fue
evidente con el avance del daño en raíces y tejido vascular que era equivalente
a las plantas infectadas con P. drechsler (GARCÍA, 2014)i.

En el caso de Trichoderma harzianum, se observó un

buen grado de protección al reducir de manera considerable los síntomas de la
enfermedad. Es a nivel foliar donde se observó una respuesta de la planta, sin
embargo, a nivel de las raíces y tejidos vasculares, los síntomas no estuvieron
presentes o se presentaron con menor intensidad. Destacó que a los 15 días
después de la inoculación de P. drechsleri, no se observan síntomas de
enfermedad en raíz y tejido vascular en contraste con el tratamiento con
quitosano y de las plantas infectadas con P. drechsleri (GARCÍA, 2014).
 ● Conclusión sobre de la aplicación de
microorganismo antagonista (Trichoderma harzianum) y un polímero
inductor de mecanismos de defensa vegetal (quitosano).

La aplicación de Trichoderma harzianum bajo las

condiciones evaluadas provocó la inducción de diferentes mecanismos de
defensa vegetal en nochebuena, además de una protección efectiva contra
la infección de P. drechsleri. Esta protección se relacionó con la inducción de
los mecanismos de defensa por parte de T. harzianum.Se observó que los
mecanismos de defensa vegetal inducidos por quitosano y T. harzianum son
diferentes entre sí. Siendo más efectiva la respuesta inducida por T.
harzianum (GARCÍA, 2014).

II.3. Inducción de resistencia

Estudios recientes a niveles celular y molecular explican la

diversidad de vías y mecanismos de acción de este hongo. Según este autor, se
descubrió, que algunas cepas de Trichoderma pueden activar un mecanismo
nativo de defensa en las plantas, conocido como Inducción de Resistencia
Sistémica (por sus siglas en inglés IRS). Esto supone que puedan controlar a
patógenos distantes del lugar donde se encuentra físicamente el antagonista.
Prueba de ello, fue que la colonización de las raíces de pepino con T. asperellum,
indujo resistencia a Pseudomonas syringae pv. lachrymans en el follaje.
También existen evidencias de este modo de acción frente a nematodos.
Diversas clases de compuestos pueden ser liberados por Trichoderma en la zona
de la rizosfera y estar relacionados con la IRS en las plantas. La primera clase
son proteínas con actividad enzimática o de otro tipo. Algunas de las proteínas
secretadas por Trichoderma al parecer inducen solo respuestas locales y
necrosis, otras activan mecanismos de defensa en plantas como los productos
de los genes de avirulencia (INFANTE, MARTINEZ, GONSALEZ, & REYES,
2009).

Otra clase de elicitores de defensa en las plantas incluye

oligosacáridos y compuestos de bajo peso molecular, liberados por la acción de
enzimas de Trichodema. Dos grupos independientes de investigadores
describieron un gen que codifica para una proteína elicitora en dos especies de
Trichoderma, SM1 en T. virens y Epl1 en Trichoderma atroviride Bissett; con
estos genes se transformaron protoplastos de aislamientos de dichas especies
y posteriormente se aplicaron en plantas de tomate, las que a su vez fueron
inoculadas con Alternaria solani Sor. Las plantas tratadas con las cepas
transformadas sufrieron menos daño por la presencia del patógeno, y
presentaron mayor crecimiento que las plantas controles. Adicionalmente, se
observó que los genes de defensa en tomate (chitinasa, 3-hydroxy-3-
methylglutaryl CoA reductasa y -1,3 glucanasa) durante la interacción con las
cepas de Trichoderma, se indujeron en mayor grado en las plantas tratadas con
las cepas transformadas, que en aquellas que recibieron la cepa silvestre, y en
menor grado en las plantas sin inocular. Aún se esclarecen y amplían los
conocimientos acerca de Trichoderma como inductor de resistencia, pero es
indiscutible su función en la defensa de las plantas (INFANTE, MARTINEZ,
GONSALEZ, & REYES, 2009).

II.4. Papel de Trichoderma en los sistemas agroforestalescacaotal

como un agente antagónico.

Los sistemas agrícolas y agroforestales cacaotales son

importantes para la producción de alimentos y conservación de la biodiversidad.
Entre esta diversidad existe un grupo de hongos del género Trichoderma que
presentan efectos antagónicos contra los fitopatógenos y esta acción puede ser
aprovechada como una forma de control biológico de patógenos vegetales. En
el sistema agroforestal-cacaotal las enfermedades con mayor frecuencia y con
mayor impacto en la producción de cacao (Theobroma cacao) es la pudrición
negra (Phytophthora spp.,), la escoba de bruja (Moniliophthora perniciosa) y la
moniliasis (Moniliophthora roreri) (BRITO, LÓPEZ, SALAYA, GÓMEZ, & LÓPEZ,
2017).

Una de las características microscópicas morfológicas en la

delimitación del género, especialmente por la presencia de estructuras llamadas
fiálides. Los mecanismos antagónicos que utiliza Trichoderma spp., se describen
como competencia, antibiosis y micoparasitismo. El micoparasitismo está
teniendo una relevancia sobre las implicaciones de las enzimas extracelulares
como quitinasas, celulasas, β-1-3-glucanasas y proteasas que lisan o digieren
las paredes de los hongos en su caso la enfermedad Moniliophthora roreri. Este
hongo puede inhibir el crecimiento de otros hongos y bacterias mediante la
producción de varios metabolitos secundarios volátiles y no volátiles. Por otra
parte, participa en la producción de reguladores de crecimiento y estimulación
de la división, diferenciación y crecimiento celular en la planta por el agente
elicitor (BRITO, LÓPEZ, SALAYA, GÓMEZ, & LÓPEZ, 2017).
II.5. Inducción de resistencia sistémica contra Fusarium
oxysporum en tomate por Trichoderma koningiopsis Th003

II.5.1. Evaluación de la actividad biocontroladora de t.

koningiopsis.
Se utilizó la formulación WG a base de Th003, aplicada a las
semillas de tomate mediante la técnica de pregerminación controlada en matriz
sólida.Posteriormente las semillas se sembraron en bandejas de germinación de
127 celdas, utilizando como sustrato turba (Sunshine®). En el invernadero el
suelo se solarizó después de la labranza, cubriéndolo con polietileno durante 20
días antes del transplante de las plántulas de cuatro semanas de edad. La
formulación a base de Th003 se aplicó de forma directa en el fondo del sitio de
transplante a razón de 0,5 g/planta; siete días después del transplante se realizó
una segunda aplicación en drench de la formulación reconstituida en agua (50
cm3.planta-1) en dosis de 1g.L (YEIRME, MORENO, COTES, & ALBA, 2009).
II.5.2. Prueba de patogenicidad
Los aislamientos Fu040 y Fu041 de F. oxysporum infectaron
las plantas de tomate, ya que 15 días después de la inoculación se evidenció
colonización del sistema vascular de la planta, desde el cuello hasta 3 cm por
encima de éste. La colonización del tallo no mostró diferencias significativas (p
> 0,05) entre los dos aislamientos. Las plantas en los tratamientos testigo no
presentaron infección. Se observó que ambos aislamientos colonizaron el 100%
de la longitud del tallo de las plantas inoculadas 28 días después de la
inoculación (YEIRME, MORENO, COTES, & ALBA, 2009).
Figura 8. Colonización de F. oxysporum en los segmentos de tallo muestreados
15 días después de la inoculación. a. Fu040; b. Fu041; c. Testigo relativo y d.
Testigo absoluto.

En la prueba de patogenicidad no se encontraron diferencias

en el ascenso del patógeno por el xilema de las plantas inoculadas. La presencia
de Fu040 y Fu041 en los haces vasculares demostró que estos tienen la
capacidad de penetrar las raíces y colonizar el xilema, en contraste con las cepas
no patogénicas de F. oxysporum las cuales, se limitan a colonizar la corteza de
las raíces y no alcanzan el sistema vascular de las plantas (Fravel et ál., 2003).
Esto permitió confirmar la capacidad patogénica de los aislamientos Fu040 y
Fu041 de F. oxysporum (YEIRME, MORENO, COTES, & ALBA, 2009).
II.5.3. Bioensayo de inducción de resistencia
Los dos aislamientos de F. oxysporum infectaron las plantas
de tomate y colonizaron los haces vasculares de forma similar. Después de 15
días de la inoculación de F. oxysporum en una porción de la raíz, se presentó un
retraso significativo (p < 0,05) de la colonización del aislamiento Fu040 en los
haces vasculares de las plantas tratadas con T. koningiopsis Th003, en
comparación con las plantas inoculadas solamente con el fitopatógeno, en donde
su ascenso ocurrió hasta 3 cm por encima del cuello del tallo en todas las plantas
muestreadas (YEIRME, MORENO, COTES, & ALBA, 2009).
Figura 9. Efecto de Th003 sobre la colonización del tallo de tomate por los
aislamientos Fu040 (A) y Fu041 (B) 15 días después de la inoculación del
fitopatógeno. El antagonista se aplicó en concentración de 107 conidios.mL-1
(Th107), 106 conidios.mL-1 (Th106) o 105 conidios.mL-1 (Th105). Las columnas
con la misma letra, para un mismo segmento de tallo, no son diferentes
significativamente de acuerdo con la prueba de Tukey (α=0,05).

En el bioensayo de inducción de resistencia sistémica, las

plantas de tomate tratadas en una porción de la raíz con T. koningiopsis Th003,
presentaron un retraso considerable en la colonización del tallo por los
aislamientos Fu040 y Fu041. A pesar de las diferencias numéricas entre los
tratamientos, el ANDEVA no detectó significancia en la mayoría de los casos,
debido posiblemente al alto coeficiente de variación, por lo cual se recomienda
aumentar el tamaño de muestra en el experimento. En los segmentos de tallo
indexados, no se observó crecimiento de Th003. Esto indicó que el antagonista
y el patógeno permanecieron separados espacialmente en el hospedero,
condición indispensable para la evaluación del efecto de inducción de resistencia
sistémica en la planta y se puede afirmar que el sistema de división de raíces
utilizado en este estudio permitió mantener esta condición de separación
(YEIRME, MORENO, COTES, & ALBA, 2009).
II.5.4. Eficacia del prototipo granulado a base de t.
koningiopsis sobre f. oxysporum en invernadero.
Los primeros días después del transplante, las plantas de
tomate afectadas por F. oxysporum mostraron síntomas de adelgazamiento del
cuello, pudrición de la raíz y volcamiento. Durante 28 días posteriores al
transplante, en los tres tratamientos evaluados la incidencia de la enfermedad
tuvo un comportamiento similar, siendo inferior al 10% .Sin embargo, después
de este tiempo se presentó un incremento considerable de plantas que
mostraron la sintomatología de la enfermedad, llegando a ser de 30 a 32% a los
37 días después del transplante, en las unidades experimentales tratadas con
Tolclofos metil y las correspondientes al testigo no tratado respectivamente. En
las unidades experimentales tratadas con la formulación a base de Th003 se
observó la reducción de la enfermedad del 35% al 40% al finalizar la evaluación
(YEIRME, MORENO, COTES, & ALBA, 2009).
Figura 10. Efecto del bioplaguicida granulado a base de Trichoderma
koningiopsis Th003 sobre la muerte de plantas de tomate causada por F.
oxysporum. El asterisco indica diferencias significativas en comparación con los
demás tratamientos para este tiempo de evaluación de acuerdo con la prueba
de Tukey (α=0,05).

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