Facultad de Ciencias Naturales

Laboratorio de Fisiología Vegetal

PRÁCTICA # 2

Evaluación del estatus hídrico de una muestra vegetal

1. OBJETIVOS GENERALES:

1. Identificar y evaluar las variables intrínsecas y extrínsecas que determinan el estatus hídrico
de un tejido vegetal.
2. Reconocer los distintos componentes o parámetros que contribuyen al potencial hídrico de
la planta y a su balance hídrico.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

1. Familiarizarse con el uso de la bomba de Scholander para determinar el potencial hídrico de

una planta.
2. Familiarizarse con el uso del osmómetro de presión de vapor para la medición de la Commented [JDRA1]: ¿Cómo calcular el potencial osmótico?
2. OBJETIVOS
concentración ESPECÍFICOS:
de solutos u osmolalidad de una muestra.
3. Calcular el potencial
1. Determinar el potencialosmótico
hídricodedeuntejidos
tejidode
a partir de los
muestras valores de
vegetales osmolalidad.
sometidas a condiciones de
4. Determinar el contenido
humedad contrastantes. relativo de agua de un tejido vegetal.
5.
2. Comparar el potencial
Establecer posibles hídrico, de
condiciones el estrés
potencial osmótico
o déficit y aelpartir
hídrico contenido relativode
de los valores depotencial
agua de
distintas especies en
hídrico obtenidos de plantas y discutir
las muestras su relación con el estatus hídrico.
analizadas.
6. Comparar el potencial hídrico de distintos tejidos de una planta y relacionar las diferencias
con las fuerzas físicas y químicas que determinan este parámetro.

Seguridad durante la práctica:

Normas de Seguridad: El estudiante debe referirse a la guía general sobre precauciones en el

laboratorio
 El manejo de la Bomba de Scholander debe ser muy cuidadoso, pues se trabaja con
elevadas presiones al interior del equipo. Deben tener presente que la cámara del
equipo debe estar sin gas antes al abrirla.

Elementos de protección personal:

Es INDISPENSABLE utilizar bata de laboratorio durante el desarrollo de la práctica
MATERIALES Y REACTIVOS POR GRUPO DE TRES PERSONAS (7 grupos):

Equipos Cantidad
Bomba de Scholander 1
Balanza analítica 1
Horno 1

Insumos Cantidad
Tejidos vegetales 1
Cuchilla de afeitar 1
Cinta para sellar cajas de petri de 1 rollo
5cm de ancho,

INTRODUCCION
El potencial químico del agua está relacionado con su energía libre, y por lo tanto con la capacidad que esta Commented [JDRA2]: Es la energía que aporta al sistema el
agua por los moles que haya de ésta.
sustancia tiene para realizar trabajo con respecto a una situación de referencia. El potencial hídrico se define como
el potencial químico del agua dividido por el volumen molar del agua, y se expresa en unidades de presión. La El valor del potencial químico del agua es 0.
referencia es el agua pura a temperatura y presión ambientales. El concepto de potencial hídrico permite predecir Commented [JDRA3R2]:
el movimiento de agua en el continuo suelo-planta- atmósfera. Formatted: Highlight
Formatted: Highlight
El potencial hídrico de un tejido vegetal está principalmente determinado por la concentración de solutos, la Formatted: Highlight
presión y la gravedad. La disminución en el potencial debida a la presencia de solutos se denomina potencial de
Formatted: Highlight
soluto o potencial osmótico (Ψs), y siempre es negativa ya que reduce la capacidad del agua de realizar trabajo.
Commented [JDRA4]: Ψ =(ɥ agua dada – ɥ H2O) / VH2O
La presión hidrostática o potencial de presión o de turgencia (Ψp) se genera por la resistencia que opone la pared
Formatted: Highlight
celular al incremento de volumen celular, y siempre es mayor a cero. El único tejido vegetal que puede tener
presión hidrostática negativa es el xilema, y en ese caso recibe el nombre de potencial de tensión (Ψt). Finalmente, Formatted: Highlight

el agua tiende a moverse hacia abajo debido a la gravedad, a menos que se ejerza una fuerza de igual magnitud Formatted: Highlight
pero de signo contrario. El potencial gravitatorio (Ψg) está definido por la altura sobre un punto de referencia, la
densidad del agua y la aceleración de la gravedad. Así, un incremento de 10 m de altura aumenta el potencial 0,1
MPa. El balance entre los componentes de potencial antes enunciados resulta en el potencial hídrico del tejido o
célula (Fig. 1).

El agua en el continuo suelo-planta-atmósfera se mueve a favor de un gradiente de potencial hídrico, de mayor a

menor potencial (Fig. 2). En ausencia de transpiración, el potencial hídrico de una planta tiende a equilibrarse
con el potencial hídrico del suelo. Si el suelo tiene buena disponibilidad de agua, la planta se estabilizará en un
potencial hídrico cercano a cero. Mientras que si el suelo tiene bajo contenido de agua, su potencial será más
negativo, y en consecuencia la planta se equilibrará en potenciales menores.
Figura 1. Fórmula del potencial hídrico. El potencial hídrico es la suma de los potenciales osmótico, de presión,
matricial y gravitatorio. Los potenciales matricial y gravitatorio tienen valores despreciables. Commented [JDRA5]: El potencial matricial sólo se manifiesta
cuando la célula se seca.

En todas las células vegetales hay una cantidad de agua suficiente

como para no considerar esta presión.

Figura 2. Valores de potencial hídrico en el continuo suelo-planta atmósfera.

Cuando existe transpiración, la pérdida de agua ocasiona la disminución del potencial hídrico de los tejidos,
principalmente por la disminución del Ψp. La capacidad de abastecer de agua a la parte aérea será crucial para
que la disminución del potencial no sea muy grande. Mantener Ψp positivos es indispensable para que ocurra la
expansión celular en tejidos en crecimiento y para el soporte mecánico en tejidos ya maduros. Cuando la demanda
atmosférica es mayor a la capacidad de abastecer agua, las células pierden agua y el Ψp desciende. Al llegar a
cero, la célula consecuentemente se encuentra en el punto de pérdida de turgencia o plasmólisis (Fig.3). Si la
pérdida de agua continúa, el tejido se marchita, por lo que la expansión celular en tejidos en crecimiento se afecta
de manera significativa. El potencial hídrico aumentará nuevamente si la transpiración disminuye (por ejemplo,
por cierre estomático). El lapso en que la planta se encuentre por debajo del punto de pérdida de turgencia es muy
importante para definir la magnitud de la disminución del crecimiento.

Las plantas tienen la capacidad de realizar ajustes en las variables hídricas para evitar la deshidratación y la
pérdida de turgencia. Las principales estrategias son el ajuste osmótico y cambios en la elasticidad de la pared
celular. El ajuste osmótico consiste en la acumulación de solutos osmóticamente activos, que disminuye el Ψs,
tanto a turgencia máxima como en el punto de pérdida de turgencia (TLP por su sigla en inglés (“turgor loss
point”). Esta disminución del potencial osmótico permite el ingreso de agua a la célula desde tejidos circundantes
a favor del gradiente de potencial, con el consecuente aumento del Ψp.
 Figura 3. Movimiento del agua a nivel celular. Se presentan tres condiciones de una célula en soluciones con
diversas concentraciones de soluto: (a) Célula con vacuola hipertónica, (b) Célula en una disolución isotónica y
(c) Célula en una disolución hipertónica.

La elasticidad de la pared celular está dada por el grado de hidratación, la estructura, y modificaciones de la misma
mediadas por enzimas. La pared celular está formada por un esqueleto cristalino de celulosa y una matriz amorfa
altamente hidratada de hemicelulosas, sustancias pécticas, glucoproteínas y lignina, entre otros, dependiendo la
proporción de cada sustancia, del tipo de pared (por ej. primaria o secundaria) y de la función celular. La
elasticidad de la pared puede cuantificarse mediante el “módulo de elasticidad” (ε), que puede aumentar, disminuir
o permanecer constante en respuesta al estrés hídrico. El módulo de elasticidad es una medida de la magnitud de
la pérdida de turgencia con respecto a la pérdida de un determinado volumen de agua. Una pared elástica (con
bajo ε) disminuye poco el Ψp por cada unidad de pérdida de contenido de agua. Contrariamente, un tejido poco
elástico, pierde mucha turgencia con una pequeña disminución del contenido de agua.

LA CÁMARA DE PRESIÓN O BOMBA DE SCHOLANDER COMO HERRAMIENTA PARA LA

DETERMINACIÓN DEL POTENCIAL HÍDRICO VEGETAL.
La cámara de presión o bomba de Scholander es uno de los aparatos más usados en el estudio de las relaciones
hídricas de las plantas ya que permite medir, de manera sencilla e ingeniosa, el potencial hídrico de un tejido.
Consiste en una cámara cilíndrica de metal, construida de manera tal que soporta altas presiones, dentro de la cual
se coloca una rama u hoja, con el pecíolo o base de la rama saliendo hacia el exterior a través de un pequeño
orificio en su tapa. Se inyecta aire comprimido o nitrógeno gaseoso en la cámara hasta que se visualiza la salida
de agua en los vasos de xilema expuestos. La presión dentro de la cámara a la que el menisco de agua llega a la
superficie de corte se denomina presión de equilibrio. La presión de equilibrio tiene la misma magnitud pero signo
contrario al Ψ del tejido colocado dentro de la cámara. Por lo tanto, si el menisco de agua en el xilema emergió a
la superficie del corte cuando se aplicó 1 MPa de presión, la ramita tiene un Ψ= -1 MPa. La inyección del gas en
la cámara debe realizarse lentamente (0,01 MPa/seg), para evitar daños en los tejidos. La misma precaución hay
que tomar para liberar el gas de la cámara. Este punto es muy importante, ya que permitirá que el material llegue
en buenas condiciones a los últimos puntos de medición, sin que se produzcan embolismos. Cuanto más tierno
sea el material, más importante será tener esta precaución.
PRECAUCIONES Y NORMAS DE SEGURIDAD PARA EL USO DE LA BOMBA O CÁMARA DE
SCHOLANDER
Antes de empezar a trabajar:
 Verificar que la prueba hidráulica del cilindro que contiene el gas con que se va a presurizar la cámara no
esté vencida.

 Verificar que la carga de gas disponible sea suficiente para realizar todas las mediciones planeadas.

 Al armar el equipo, verificar que los conectores de las mangueras estén correctamente acoplados.

 Verificar que el manómetro de salida tenga una presión de salida suficiente, pero no en exceso, de acuerdo a
la máxima capacidad de la cámara de presión.

Durante el trabajo:
 Opcional: Colocar el material dentro del cámara cubierto con una bolsa de polietileno para evitar que se
deseque por la corriente de aire seco.

 Inyectar gas lentamente, para preservar el material y para realizar correctamente las mediciones.

 Liberar el gas lentamente, para que el material no se deteriore y poder llegar a puntos de bajos potenciales
correctamente.

PROTOCOLO PARA LA MEDICIÓN DEL POTENCIAL HÍDRICO USANDO LA BOMBA DE

SCHOLANDER
1) Cerrar la válvula medidora, girándola en el sentido de las manecillas del reloj.

2) Colocar la válvula en posición “OFF”.

3) Abrir la válvula del cilindro de gas comprimido girándola en sentido contrario a las manecillas del reloj.

4) Remover el sujetador de la muestra del cilindro de presión y colocarlo sobre el tablero de preparación de
la muestra.
5) Seleccionar la muestra a analizar y la arandela metálica respectiva que empate en el sujetador de la
muestra. Después, seleccionar el “taquito” de goma que encaje mejor con el tallo de la muestra a analizar.

6) Colocar el tallo de la muestra en el taco de goma e insertarlos en el sujetador de la muestra. Girar la perilla
del sujetador siguiendo el sentido de las manecillas del reloj hasta que el taco comprima la muestra vegetal
y lo sujete.

7) Insertar la muestra dentro del cilindro de presión y después presionar y cerrar el sujetador de la muestra.

8) Ajustar la perilla del sujetador, si es necesario, para asegurarse que el taco de goma está sosteniendo
fijamente al tallo de la muestra.
9) Girar la válvula de control a la posición presurizar “PRESSURIZE”.

10) Abrir lentamente la válvula medidora girándola en sentido contrario a las manecillas del reloj y observar
cómo va aumentando la presión en el indicador de presión. Ajustar la válvula hasta que la tasa de
 incremento de presión esté en el rango de 5-10 psi (pound per square inch) por segundo o a la tasa deseada
por el operador.

11) Para parar el incremento de la presión dentro del cilindro simplemente girar la válvula de control a la
posición “OFF”. Para reactivar el aumento de presión, girar lentamente la válvula de control a la posición
“PRESSURIZE”.
Nota: si la válvula de control se gira rápidamente a la posición “PRESSURIZE” después de una
interrupción en el incremento de la temperatura, habrá un aumento súbito en la presión dentro del cilindro
de presión. Esto se debe por la alta presión del gas que se va formando en el tubo que conecta la válvula
medidora y la válvula de control mientras esta última se encuentra en la posición “OFF”. Cuando se abre
rápidamente la válvula de presión, este volumen pequeño de gas presurizado (600 psi) se descargar
inmediatamente dentro del cilindro de presión. Posteriormente la válvula medidora es capaz de limitar el
flujo.

12) El incremento de la temperatura dentro del cilindro de presión también puede detenerse en cualquier
momento al girar la válvula medidora en el sentido de las manecillas del reloj. Una vez se sepa el valor
aproximado de la presión de equilibrio para la muestra vegetal analizada, es generalmente necesario
reducir la presión de equilibrio para que este valor sea determinado con presión.
13) A medida que la presión se incrementa en el cilindro, observar cuidadosamente el corte de la muestra
analizada que sobresale del cilindro.
Si se escucha que el aire se está escapando a través del taco de goma que sujeta a la muestra, o se nota que
el tallo se está “tambaleando”, simplemente de debe ajustar la perilla del sujetador de la muestra para
sellar esta fuga.
Precaución: NUNCA poner los ojos directamente sobre el centro del cilindro de presión durante el
transcurso de un experimento. Siempre se debe observar la muestra vegetal desde un lado del cilindro.
Recordar que se está trabajando con altas presiones y es posible que la muestra salga despedida del
sujetador. Es recomendable observar el corte de la muestra con un lente de bajo aumento como una lupa.
Este lente provee una mejor visibilidad y a la vez ofrece protección para los ojos del operario.

14) La presión de equilibrio para la muestra individual se alcanza cuando la savia empieza a fluir a través del
corte expuesto de la muestra.

Después de que se haya colocado la muestra en el cilindro y durante las etapas iniciales en el proceso de
incremento de la temperatura dentro del cilindro, el corte de la muestra vegetal aparecerá relativamente
 seco. Sin embargo, cuando se alcanza el equilibrio de presión, este corte tomará un brillo y se volverá de
apariencia húmeda a medida que la savia empieza a fluir de él. Si se aumenta adicionalmente la
temperatura, se pueden formar pequeñas burbujas en la savia expedida.

El incremento de la presión se debe detener inmediatamente cuando el corte de la muestra vegetal empieza
a volverse brilloso o liso en apariencia debido a la salida de la savia. La lectura de presión en este punto
es el equivalente a la fuerza negativa con la cual el agua de la planta es sostenida dentro de una muestra
particular. Una vez se haya alcanzado la presión de equilibrio su puede verificar inmediatamente la presión
reduciendo la presión dentro del cilindro por debajo del valor de equilibrio. Posteriormente, se observará
que la savia deja de fluir instantáneamente, devolviéndose al interior del tallo de la muestra, y la superficie
del corte adquiere la apariencia seca relativa inicial. Se puede activar el incremento de la presión una vez
más a una tasa lenta hasta que la savia empiece a fluir nuevamente. Se observará que el segundo valor de
presión de equilibrio obtenido es casi idéntico al valor de la primera lectura.

15) Después de determinar el valor de equilibro, a veces denominado como el potencial hídrico de la planta
o el estrés hídrico de la planta, la presión del cilindro es liberada a través de la válvula de control al
colocarla en la posición escape “EXHAUST”.

El gas liberado hará un ruido considerable dependiendo de la presión contenida en el cilindro. El puerto
de escape “exhaust port” se localiza debajo del panel de control. El gas de escape que se produce no
representa ningún riesgo para el operario.

16) Retirar la muestra del cilindro desajustando la perilla del sujetador cuando éste aún se encuentre ajustado
al cilindro. Después, desajustar la tapa del sujetador girándola (45o) en sentido contrario a las manecillas
del reloj. Remover el sujetador con la muestra aún sujeta. Liberar la presión de sellado sobre la muestra
desajustando la perilla del sujetador hasta que la muestra y el taco de goma sean removidos. Se puede
dejar instalada la arandela metálica en el sujetador si se va a analizar otra muestra.
17) Si no se van a analizar muestras adicionales, cerrar la válvula del cilindro de gas comprimido. El
remanente del gas de alta presión dentro del sistema se puede liberar (si se desea) girando la válvula de
control a la posición “PRESSURIZE” con la válvula medidora un poco abierta. En estas condiciones, el
remanente del gas se escapará a través del cilindro de presión. Después de liberar toda la presión, girar
nuevamente la válvula de control a la posición “OFF”.

OSMÓMETRO DE PRESIÓN DE VAPOR PARA CUANTIFICAR LA OSMOLALIDAD.

El osmómetro de presión de vapor permite determinar la osmolalidad de una solución mediante la depresión de
temperatura del punto de rocío de una muestra, es decir, la temperatura a la que el vapor de agua contenido en el
aire se empieza a condensar, para lo cual emplea una termocupla. El equipo permite medir muestras que se
encuentren entre 20 y 3200 mmol/kg, con una resolución de 1mmol/kg y una repetitividad de ±2mmol/kg si la
lectura se encuentra entre 20 y 1000mmol/kg y de ±0,5% el valor de la lectura si se encuentra entre 1000 y
3200mmol/kg. El tiempo de medición es normalmente de 90 segundos. La calibración del instrumento se lleva a
cabo con tres soluciones estándar Opti-mole de 290, 1000 y 100mmol/kg que deben ser usadas en ese orden y si
el equipo se encuentra calibrado debe reportar valores con un máximo de desviación de ±3, ±5 y ±2mmol/kg
respectivamente, de lo contrario se debe presionar la tecla calibrar después de cada medición que se salga del
intervalo permitido (ELITechGroup WESCOR, 2011).

ACTIVIDADES PRÁCTICAS
DETERMINACIÓN DEL POTENCIAL HIDRICO DE LA PLANTA
Material Vegetal. Las mediciones se realizarán en diferentes especies de plantas cultivadas en el campus de la
universidad Icesi. La identidad y clasificación taxonómica de estas serán indicadas al inicio de la práctica.

Medición del Potencial hídrico. Utilizando la bomba de Scholander medir el potencial hídrico de hojas de cada
una de las especies de plantas seleccionadas, siguiendo las indicaciones sobre el uso de la bomba, detalladas en
las secciones anteriores.

CONSULTAS PRELIMINARES A LA PRÁCTICA

1. Revisar la página web del equipo a usarse en la práctica (Plant Water Status Console, Model 3005):
http://www.soilmoisture.com/operating.html y descargar y revisar el manual de operación.
2. Estudiar los conceptos relacionados con relaciones hídricas y potencial hídrico.
3. Proponer el tipo de comparaciones y análisis estadísticos a realizar con base en el diseño experimental usado
en la práctica.

REFERENCIAS
1) El Agua en las Plantas. Nutrición y Transporte de Elementos Minerales. Nutrición Mineral.:
2) Villalobos E. Umañan C.H., Sterling F. 1990.Determinación del contenido de agua en progenies de palma
aceitera (Elaeis guineensis), durante la época seca en Querpos, Costa rica. Agronomía Costarricense 14(1):73-78.
3) http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_12.htm#cavitación y embolia
4) (Villalobos y colaboradores 2009).

IMÁGENES
2) http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_12.htm#cavitación y embolia
3) Adaptado de :
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_12.htm#cavitación y embolia